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雌激素对去卵巢大鼠记忆功能、脑海马部位Aβ1-40及PKC表达的影响
目的探讨雌激素对去卵巢大鼠记忆功能、海马部位β淀粉样蛋白1-40(Aβ1-40)及蛋白激酶C(PKC)表达的影响.方法大鼠去卵巢建立动物模型,17w行水迷宫试验,18 w取脑组织做Aβ1-40及PKC的免疫组化染色.结果去卵巢大鼠的雌激素(E2)水平明显降低(P＜0.01);去卵巢组的记忆功能下降;脑海马部位的Aβ1-40表达比假手术组和雌激素替代组增加(P＜0.01),而PKC表达则减少(P＜0.01).结论雌激素可能是通过提高PKC的表达水平,使淀粉样前体的代谢生成Aβ1-40减少来保护海马部位胆碱能神经元,从而改善记忆功能.雌激素可能是影响记忆功能重要因素之一.
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褪黑素对Aβ25-35诱发PC12细胞损伤的保护作用
目的 研究褪黑素(MT)对β淀粉样蛋白片段(Aβ25-35)诱发PC12细胞损伤的神经保护作用.方法 将培养的PC12细胞分为三组:正常对照组,Aβ损伤组和MT保护组.Aβ损伤组用Aβ25-35处理细胞,MT保护组在用Aβ25-35处理前2 h加入褪黑素.使用细胞形态学方法、LDH法、MTT法及Western印迹法观察MT的神经保护作用.结果 形态学观察发现MT保护组细胞数显著比Aβ损伤组多,受损变圆的细胞数较少.MT保护组LDH活性显著低于损伤组(P＜0.01);OD值显著高于损伤组(P＜0.01).Western印迹结果表明Aβ25-35损伤组中Bcl-2的表达比正常对照组低;MT保护组Bcl-2的表达比Aβ25-35损伤组升高.结论 褪黑素对Aβ25-35诱发PC12细胞损伤有保护作用.
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TAT-XIAP融合蛋白对Aβ(25～35)诱导的阿尔茨海默病大鼠行为学的影响
目的 研究TAT-XIAP融合蛋白对阿尔茨海默病(AD)大鼠空间学习记忆能力的影响.方法 将SD大鼠随机分成三组,对照组海马区注射生理盐水,模型组海马区注射Aβ (25 ～35),给药组尾静脉注射TAT-MAP融合蛋白10 mg/kg.采用Morris水迷宫法检测AD大鼠的空间学习记忆能力.结果 与模型组比较,给药组AD大鼠的Morris水迷宫实验逃避潜伏期缩短(P＜0.05)；游泳轨迹路线多在平台所在象限附近,呈趋向型.结论 TAT-XIAP融合蛋白能够改善AD大鼠空间学习记忆能力.
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万拉法辛对Aβ25-35诱发PC12细胞损伤及Bcl-2表达下降作用的研究
目的 研究抗抑郁药万拉法辛对β淀粉样蛋白片段(Aβ25-35)诱发 PC12细胞损伤的作用.方法 将培养的PC12细胞分为三组:正常对照组、Aβ损伤组和药物保护组.Aβ损伤组用Aβ25-35处理细胞,药物保护组在用Aβ25-35处理前2 h加入万拉法辛.采用细胞形态学方法、LDH法、MTT法、免疫组化法及Western印迹法观察万拉法辛的保护作用.结果 药物保护组与Aβ损伤组相比细胞数显著增多,受损变圆的细胞数较少;LDH释放量较少(P＜0.01);OD490值显著升高(P＜0.01).Aβ损伤组中Bcl-2的表达比正常对照组低,药物保护组Bcl-2的表达比Aβ25-35损伤组升高;药物保护组、Aβ损伤组与对照组相比细胞内Bax蛋白表达均无明显变化.结论 万拉法辛对Aβ25-35诱发PC12细胞损伤有保护作用,其机制可能和万拉法辛升高Bcl-2蛋白水平有关.
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洛伐他汀对PC12神经细胞中α7尼古丁受体的上调作用及其神经保护作用
目的 研究洛伐他汀(Lovastatin)对PC12神经细胞中α7尼古丁受体的调节作用.方法 体外培养用PC12神经细胞,加入不同浓度的洛伐他汀培养48 h,或与β淀粉样蛋白、自由基诱导剂同时处理,然后测定细胞MTT水平、α7尼古丁受体密度及mRNA水平、细胞脂质过氧化水平.结果 适量浓度的洛伐他汀(100 nmol/L以下)使细胞中[125I]标记α金蛇环毒素配体与α7尼古丁受体结合密度升高,并使α7尼古丁受体mRNA表达水平增强;洛伐他汀可对抗β淀粉样蛋白或自由基诱导剂引起的脂质过氧化.结论 洛伐他汀可增强α7尼古丁受体与配体的结合和上调该受体的基因表水平达,并有一定的神经保护作用.
关键词： 洛伐他汀 尼古丁受体 嗜铬细胞瘤株(PC12) β淀粉样蛋白 脂质过氧化 -
广东海风藤多糖对M146L细胞分泌的β淀粉样蛋白生成的抑制作用
目的 探讨广东海风藤多糖对M146L细胞分泌的β淀粉样蛋白的影响.方法 体外培养稳定转染人类阿尔茨海默病(AD)β淀粉样前体蛋白(APP)基因及突变型早老素1(PS1)基因的CHO细胞系M146L,使之高效产生β淀粉样蛋白42(Aβ_42),建立Aβ_42过度表达的细胞模型.加入待筛选的药物广东海风藤多糖,用四唑盐(MTT)比色法检测不同浓度的广东海风藤多糖(0.312 5、0.625、1.25 μg/ml)对M146L细胞的毒性作用,应用酶联免疫法(ELISA)观察细胞分泌的Aβ_42的变化.结果 不同浓度的广东海风藤多糖对M146L存活率没有影响,不具有细胞毒作用.0.625、1.25 μg/ml的广东海风藤多糖对M146L细胞分泌Aβ_42有抑制作用,呈剂量依赖性.结论 一定剂量的广东海风藤多糖对M146L细胞分泌的Aβ_42有明显的抑制作用,其机制有待进一步研究.
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神经甾体化合物对PC12细胞损伤的保护作用
目的 研究神经甾体化合物(CPU 03-03)对H2O2和Aβ25～35所诱导的PC12细胞损伤的保护作用.方法 用H2O2和Aβ25～35造成PC12细胞损伤模型,采用MTT比色法检测细胞存活率,同时检测乳酸脱氢酶(LDH)活力和丙二醛(MDA).结果 CPU 03-03能显著减少细胞死亡,降低LDH漏出量及MDA生成.结论 CPU 03-03对PC12细胞损伤具有保护作用.
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雷公藤内酯醇对阿尔茨海默病模型大鼠海马iNOS表达和突触超微结构的影响
目的：观察应用β淀粉样蛋白（ Aβ）后大鼠海马诱导型一氧化氮合酶（ iNOS）的表达和突触超微结构的变化及雷公藤内酯醇对其的影响。方法21只SD雄性大鼠等分成对照组、模型组、用药组。在大鼠左侧海马定向注射凝聚态 Aβ1～40作为模型组，注射等量生理盐水设为对照组，大鼠在海马注射凝聚态Aβ1～40后腹腔注射雷公藤内酯醇为用药组。应用免疫组织化学方法检测各组大鼠海马 iNOS的表达；应用透射电镜观察各组大鼠海马突触超微结构的变化。结果免疫组织化学染色显示，模型组大鼠海马iNOS阳性细胞数和平均光密度明显高于对照组（P＜0．01），用药组大鼠海马iNOS阳性细胞平均光密度较模型组明显降低（P＜0．05）。透射电镜结果显示，模型组大鼠海马神经毡内突触和突触小泡数量较对照组减少，突触后致密物厚度变薄；用药组大鼠海马神经毡内突触和突触小泡数量较模型组增多，突触后致密物增厚。结论雷公藤内酯醇可以抑制Aβ诱导的大鼠海马iNOS的表达，对突触超微结构的损伤有一定的改善作用。
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p38MAPK在阿尔茨海默病患者中的表达及作用机制
目的 探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)在阿尔茨海默病(AD)患者中的表达及作用机制.方法 收集82例AD患者及20例健康志愿者外周血,采用Western印迹检测p38 MAPK表达及激活情况;将PC12细胞随机分为正常组、模型组、SB203580组、模型组及SB203580组采用20 μmol/L的β淀粉样蛋白(Aβ25～35)构建PC12细胞损伤模型.四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞活力,Annexin V-FITC/PI流式双染法检测细胞凋亡,紫外分光光度法检测细胞中天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)3活性,Western印迹检测B淋巴细胞瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、p53、酶切Caspase 3蛋白表达.结果 p38MAPK在AD患者及健康志愿者外周血淋巴细胞中的表达量差异无统计学意义(P＞0.05);而pp38 MAPK在AD患者外周血淋巴细胞中的表达量显著高于健康志愿者(P＜0.01).与正常组比较,模型组细胞活力降低,细胞早期凋亡率、晚期凋亡率、Caspase3活性均显著提高,Bax、p53、酶切Caspase3表达量上调,Bcl-2表达量下调(均P＜0.01).与模型组比较,SB203580组细胞活力上升,细胞早期凋亡率、晚期凋亡率、Caspase3活性均显著降低,Bax、p53、酶切Caspase3表达量上调,Bcl-2表达量下调(均P＜0.01).结论 pp38 MAPK在AD患者外周血中高表达,pp38 MAPK抑制剂SB203580能通过调控细胞凋亡相关蛋白表达抵抗Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡.
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DNA疫苗p(Aβ3～10)10-mIL-4构建及免疫BALB/c鼠的效果
目的 探讨DNA疫苗p〔β淀粉样蛋白(Aβ)3～10〕10-m白细胞介素(IL)-4的构建及鼠免疫效果.方法 构建表达重复10次的Aβ3～10和鼠IL-4融合蛋白的DNA疫苗p(Aβ3～10)10-mIL-4,免疫BALB/c小鼠,Aβ42肽及pcDNA3.1(+)作为对照组.酶联免疫吸附试验(ELISA)检测免疫前、后BALB/c鼠血清中抗Aβ抗体滴度,免疫组化染色检测抗Aβ抗体对淀粉样前体蛋白(APP)/早老素(PS)1转基因鼠脑组织老年斑.结果 成功构建DNA疫苗p(Aβ3～10)10-mIL-4.与对照组pcDNA3.1(+)相比,免疫的BALB/c鼠产生了较高滴度的抗Aβ抗体〔(32.58±3.98)μg/ml,P<0.01〕,产生的抗Aβ抗体可以与APP/PS1转基因小鼠脑内的老年斑相结合.结论 成功构建DNA疫苗p(Aβ3～10)10-mIL-4,免疫BALB/c鼠后,产生了有效的免疫反应,p(Aβ3～10)10-mIL-4可以作为阿尔茨海默病的候选疫苗进一步进行研究.
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葛根素对Aβ25-35诱导的PC-12细胞损伤的保护作用
目的 研究葛根素对阿尔茨海默病(AD)的保护作用.方法 实验分正常组、模型组、葛根素保护组.体外培养大鼠嗜铬细胞瘤细胞(PC-12),以不同浓度诱导PC-12细胞建立AD的细胞模型,观察葛根素对细胞活力、凋亡、异常磷酸化的tau蛋白的影响.结果 不同浓度的β淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)作用于PC-12细胞后,选用10 μmol/L的Aβ25-35作用于PC-12细胞24 h建立AD细胞模型,MTT法检测细胞存活率发现葛根素保护组较模型组明显升高,TUNEL法检测凋亡发现阳性细胞葛根素保护组明显少于模型组,P-tau抗体检测异常磷酸化的tau蛋白发现阳性细胞葛根素保护组明显少于模型组,均具有统计学意义.结论 葛根素对AD具有保护作用.
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JNK通路在氯通道阻断剂抑制Aβ25～35诱导细胞凋亡中的作用
目的 探讨JNK通路在氯通道阻断剂4,4'-diisothioeyano-2,2'-disulfonic acid stilbene(DIDS)及Phloretin在β淀粉样蛋白活性片段(Aβ,Aβ25～35)诱导PC12细胞凋亡过程中作用.方法 采用MTT比色法、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogen,LDH)活力检测、琼脂糖凝胶电泳法,比较正常对照组、Aβ25～35损伤组和Aβ25～35+Phloretin组、Aβ25～35+DIDS组的PC12细胞存活与凋亡;Western印迹法检测4组的JNK、P4NK蛋白表达.结果 10 μmol/L Phloretin和50 μmol/L DIDS均能抑制Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡,提高细胞存活率,减少LDH释放,降低PJNK蛋白的水平.结论 JNK的磷酸化水平下调,参与了氯通道阻断剂抑制的Aβ25～35诱导的PC12细胞凋亡.
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雷公藤多甙对Alzheimer病大鼠学习记忆和小胶质细胞的影响
目的探讨Alzheimer病(AD)大鼠学习记忆和小胶质细胞的变化及雷公藤多甙(TWP)对其的影响.方法在大鼠左侧大脑皮质定向注射Aβ1-40建立AD局部病理模型.分为Aβ组、TWP组(术后第2天腹腔注射TWP 50 mg/kg,连续15 d).用Morris水迷宫测试各组大鼠学习记忆能力,免疫组化方法观察大脑皮质小胶质细胞对CD68的表达.结果与Aβ组比较,TWP组大鼠在定位航行试验中逃避潜伏期明显缩短,在空间探索试验中跨越原平台位置的次数明显增多;大脑皮质CD68阳性细胞数明显减少、细胞截面积显著缩小.结论 TWP能抑制Aβ诱导的小胶质细胞增生,改善Aβ所致的大鼠学习记忆障碍.
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独活对痴呆大鼠脑中p38MAPK信号转导通路的影响
目的 探讨祛风除湿中药独活对Aβ脑内注射所致大鼠痴呆模型的脑保护作用.方法 30只雄性Wistar大鼠行颅内Aβ蛋白海马CA1区内注射,随机分为丹参组、独活组、西药组、假手术组和模型组,每组6只,分别给予丹参、独活、吲哚美辛及生理盐水灌胃.实验4 w末处死动物,检测p38 MAPK,在大鼠脑中表达情况.结果 实验后各组除假手术组外,其水迷宫实验数值均有不同程度的改变,p38 MAPK在不同组别大鼠脑中的表达有所不同,中药独活可抑制p38 MAPK 在大鼠脑中的表达(P<0.05).结论 独活可以改善痴呆模型大鼠的学习记忆能力,并可抑制p38 MAPK在痴呆模型大鼠脑中的表达.
关键词： 阿尔茨海默病 β淀粉样蛋白 p38 MAPK通路 -
槲皮素对Cu2+诱导的β淀粉样蛋白聚集和细胞毒性的影响
目的 研究槲皮素对Cu2+诱导的β淀粉样蛋白片段(Aβ1～40)聚集和细胞毒性的影响.方法 采用硫磺素T荧光标记研究槲发素对Cu2+诱导的Aβ1～40聚集的影响,利用MTT法测定细胞活力.结果 槲皮素可有效抑制Cu2+诱导的Aβ1～40聚集,对已形成的Cu2+ -Aβ1-40聚集物有明显的解聚作用,能有效防止Cu2+和Aβ1-40共同诱导的SH -SY5Y细胞活力下降.结论 槲皮素对老年痴呆具有潜在的防治作用.
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丁基苯酞对老化果蝇作用的实验研究
目的 观察丁基苯酞对实验果蝇的生存时间、行为及脑组织ATP含量的影响.方法 野生及AD果蝇随机分为溶剂对照及丁基苯酞0.3、1.0、3.0、10.0 mmol/L组,给药喂养至果蝇死亡.记录生存时间,测试行为,荧光-荧光素法测定脑组织ATP含量.结果 野生及AD果蝇各组间寿命分布差别无统计学意义(P=0.116,P=0.922).野生及AD果蝇各组行为评分随时间而下降(P＜0.01),时间和各组交互作用有统计学意义(P＜0.01),随药物浓度增加行为能力下降有延缓趋势.AD果蝇丁基苯酞3.0 mmol/L组ATP量较对照组明显增加(P＜0.05).结论 丁基苯酞能改善野生及AD果蝇的行为,增加AD果蝇脑组织ATP含量,对老化果蝇具有一定的保护作用.
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抗Aβ42单链抗体对阿尔茨海默病小鼠脑中淀粉样沉积的改善作用
目的 探讨以β淀粉样蛋白(Aβ)42为靶抗原筛选人源天然单链抗体(scFv)噬菌体抗体库中的特异性抗体对阿尔茨海默病(AD)模型鼠中淀粉样沉积的影响.方法 以Aβ42抗原包被免疫管,对人源天然scFv噬菌体抗体库进行筛选,经过3轮吸附-洗脱-扩增淘选富集,制备单克隆噬菌体抗体颗粒,用酶联免疫吸附(ELISA)法检测scFv的结合活性,得到一株阳性克隆scFv23.采用Western印迹和免疫组化的方法检测了scFv23与Aβ42单体、寡聚体、纤维和鼠脑中Aβ沉积的结合能力.并通过甲氮甲唑蓝(MTT)法检测scFv23对Aβ42寡聚体引起细胞毒性的影响,同时采用硫黄素-T荧光法(ThT-F)测定scFv23对Aβ42聚集形成纤维的影响.后,通过体内实验检测了scFv23对AD鼠模型脑中Aβ42沉积的影响.结果 通过对人源天然scFv噬菌体抗体库进行筛选得到一株与Aβ42具有高亲和力的克隆scFv23.实验发现scFv23可以特异性识别Aβ42寡聚体,纤维聚集体和鼠脑中Aβ42沉积,但是不能与Aβ42单体特异性结合.根据体外实验结果,scFv23可以有效抑制Aβ42寡聚体所诱导的细胞死亡,并且scFv23可以抑制Aβ42纤维聚集体的形成.体内实验结果发现,scFv23可以有效清除AD鼠模型中Aβ42沉积.结论 通过噬菌体文库筛选得到的scFv23能够特异性识别脑组织中的淀粉样沉积,并且有效抑制转基因鼠中淀粉样沉积的形成.体外实验表明scFv23可以有效抑制Aβ42寡聚体所诱导的细胞毒性.特异性识别Aβ42的scFv可能会成为治疗AD的一种有效策略.
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还脑益聪方对老年认知障碍大鼠学习记忆及脑组织β淀粉样蛋白和Tau蛋白表达的影响
目的：探讨补肾益气、活血解毒中药-还脑益聪方颗粒剂对认知功能障碍的自然衰老大鼠学习记忆功能及脑组织β淀粉样蛋白及Tau蛋白等表达的影响。方法以Morris水迷宫试验检测SD老年大鼠的空间学习记忆能力，将学习记忆减退的50只老年大鼠结合体质量，分层随机方法分成为模型（老年认知障碍）对照组、阳性对照药（盐酸多奈哌齐片，0.49 mg／kg）组、还脑益聪颗粒剂小剂量（3.78 g 生药／kg）组、中剂量（7.56 g生药／kg）组、大剂量（18.90 g生药／kg）组，每组10只，学习记忆能力正常老年大鼠10只为老年正常对照组给予等量水，连续灌胃14 w。给药结束后，行Morris水迷宫试验，测试老年大鼠空间学习记忆能力，免疫组织化学方法观察海马组织CA1区早老蛋白-1（ PS-1）、β淀粉样肽和 Tau蛋白激酶（TTBK1）的表达，积分光密度值（IOD）。结果与正常组比较，模型组老年大鼠穿台次数显著减少（P＜0.05），第四象限游泳路程显著缩短（P＜0.01）。给药14 w后，还脑益聪方各剂量组第四象限游泳路程显著延长（P＜0.01），还脑益聪方大剂量组第四象限游泳时间显著延长（P＜0.05）。模型组老年大鼠海马CA1区TTBK1阳性表达明显增多，PS-1表达水平增强，β淀粉样沉积增多。经治疗后，TTBK1、PS-1和β淀粉样肽的阳性表达明显减少，和模型组比较差异均具有统计学意义（P＜0.05，P＜0.01）。结论还脑益聪方可抑制脑组织β淀粉样蛋白和Tau蛋白的沉积，保护脑组织海马形态的完整性，从而改善老年认知障碍大鼠空间学习记忆能力。
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银杏叶提取物对Aβ25-35诱导的PC12细胞损伤的保护作用
目的研究银杏叶提取物(Extracts of ginkgo biloba leaves,EGB)对β淀粉样蛋白(Aβ25-35)诱导的PC12细胞损伤的保护作用.方法用Aβ25-35处理诱导体外培养的PC12细胞损伤,并用EGB进行保护,显微观察细胞形态的改变,LDHH法和MTT法检测细胞膜的损伤情况.结果EGB处理组细胞数比损伤组显著增多,受损变圆的细胞数较少,细胞形态明显改善,EGB处理组上清液LDH活性显著低于Aβ25-35处理组(P＜0.01),MTT值显著高于Aβ25-35处理组(P＜0.01).结论EGB对Aβ25-35诱导的PC12细胞损伤具有显著的保护作用.
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喂饲绞股蓝皂苷对Aβ1～40注射海马后大鼠脑内COX活性和线粒体超微结构变化的影响
目的探讨β淀粉样蛋白(Aβ1～40)海马注射后大鼠脑内细胞色素氧化酶(cytochrome oxidase,COX)活性和线粒体超微结构变化及绞股蓝(GP)对其影响.方法动物随机分为GP组、模型组、对照组.运用Aβ双侧海马注射,模拟阿尔茨海默病(AD)脑内Aβ对神经系统的损害.Y型迷宫测试大鼠学习记忆能力,组织化学、原位杂交法结合图像分析检测海马CA1区线粒体COX活性及细胞色素氧化酶Ⅱ型亚基(COⅡ)mRNA表达,电镜观察CA1区神经细胞线粒体超微结构.并对AD模型大鼠给予GP灌胃,观察其对AD模型大鼠上述各项指标变化的影响.结果与对照组比较,AD模型大鼠空间学习记忆能力、海马CA1区线粒体COX活性及COⅡmRNA表达明显降低,线粒体数量减少,结构不清、肿胀、空泡样变、嵴断裂;GP对上述各项指标有不同程度的改善.结论 GP具有改善AD模型大鼠学习记忆能力、海马COX活性和COⅡmRNA表达及线粒体超微结构的作用,对AD模型大鼠有一定治疗和保护作用.
