首页 > 文献资料
-
RAPD-PCR技术筛选间日疟原虫基因标记
目的 建立并优化间日疟原虫RAPD-PCR方法 ,筛选间日疟基因标志.方法 采集5例间日疟病人、4例非间日疟病人和5名健康者血样并提取DNA,用随机引物进行RAPD-PCR扩增、改变各项反应条件进行RAPDPCR方法的优化,10条不同的随机引物(S60-S69)检测各种血样并筛选间日疟特异性扩增条带.结果 在MgCl2浓度为2.0 mmol/L、dNTP浓度为150 μmol/L、引物浓度为0.2 μmol/L、TaqDNA聚合酶为1 U和36℃的退火温度时进行RAPD-PCR扩增效果好.所用10条随机引物中的S62、S65、S69在检测血样中分别筛选出3、1、1条间日疟所仅有的扩增条带.结论 在优化的反应条件下,RAPD-PCR方法的稳定性、重复性好.筛选出3条随机引物获得5条间日疟仅有的RAPD-PCR扩增条带.
-
增强型绿色荧光蛋白基因标记人骨髓间充质干细胞的实验研究
髓间充质干细胞(hMSC)因为其独特的生物学特性和优势已广泛应用地实验和临床研究.
-
增强型绿色荧光蛋白基因标记结肠癌LoVo细胞的实验研究
目的建立增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因标记的结肠癌细胞系.方法构建含EGFP单基因的逆转录病毒载体G1FP,用脂质体转染结合交互感染的方法获得高滴度的双嗜型EGFP病毒,并转导人结肠癌细胞系LoVo;EGFP基因的转移与表达分别以聚合酶链反应(PCR)和流式细胞术(FCM)分析.结果将G1FP载体转染的GP+E-86和GP+envAm12细胞共培养2周后,取单嗜型EGFP病毒感染双嗜型包装细胞获得病毒生产细胞Am12/G1FP,所有细胞均表达高水平的EGFP,其滴度为1.1×105感染性颗粒/ml.双嗜型EGFP转导的LoVo细胞可稳定发出明亮的绿色荧光信号.PCR分析显示,LoVo/GFP细胞内整合有EGFP原病毒.结论 LoVo/GFP细胞可长期表达荧光,可为体内研究结肠癌微转移提供有效模型.
-
中国耐力运动员线粒体DNA高变区I单核苷酸多态性分析
为了探讨人类运动能力相关的基因标记与分子机制,对线粒体基因(mtDNA)高变区Ⅰ作了序列多态性分析.研究选取汉族耐力运动员94人,相应汉人对照92人,对其mtDNA高变区Ⅰ特异性片段进行扩增、测序,分析其单核苷酸多态性(SNPs)改变,并对不同人群mtDNA高度区Ⅰ的基因多态性特点作了比较.结果显示:中国汉族耐力运动员mtDNA高变区Ⅰ同质性SNPs频率大于10%的位点有13个,大于20%的位点有5个,属常见SNPs.C16223T和T16362C两个位点发生明显的同质性多态,其多态性频率明显高于其他SNP位点(80.30%,47.62%).中国汉族耐力运动员mtDNA高变区Ⅰ异质性SNPs频率大于10%的位点有4个,所有异质性多态频率均小于20%,属稀有SNPs.位点C16167A和C16085G为运动员特有,位点T16124A多态频率分布在汉族耐力运动员显著高于汉人对照(P<0.01).结果提示,mtDNA高变区Ⅰ SNPs位点C16167A、C16085G及T16124A可能成为人类运动能力相关的基因标记.不同人群间mtDNA高变区Ⅰ SNP存在明显差异,相关的基因标记可能也存有差异.
-
中国皮划艇运动员线粒体高变区Ⅱ序列多态性位点与有氧耐力的关系
为了探讨人类有氧耐力相关的基因标记与分子机制,本研究对线粒体基因(mtDNA)高变区Ⅱ(HVR-Ⅱ)作了序列多态性分析.所有受试者均为汉人,分为3组:耐力组123人,选自国家皮划艇集训队;力量组70人,选自国家举重集训队,作为项目对照;对照组132人选自年龄、地域相当的大学生,作为常人对照.通过特异性扩增mtDNA HVR-Ⅱ片段、测序,分析多态性,寻找不同基因型在三组人群中的分布差异.结果显示:在受试者的HVR-Ⅱ片段中,共检测到81个变异位点,平均每3.9个碱基就有一个变异位点.在一些重要功能区也不乏多态性位点分布,其中的部分位点多态性频率在10%以上.耐力组在np303-np309(携带C9)、np310(缺失T)、np320(携带T)和np332(携带A)位点多态性显著高于对照组和力量组(P<0.05).结果提示:mtDNA HVR-Ⅱ功能区序列并非十分保守,部分位点多态性频率相当高.np303-np309(携带C9)、np310(缺失T)、np320(携带T)和np332(携带A)位点多态性有可能成为人类有氧耐力的相关基因标记.
-
运动能力相关基因研究进展
早年研究表明,杰出的运动能力很大程度上受控于基因,在人类存有对运动训练敏感的高反应群体(high responder,HR)和对训练不敏感的低反应群体(low responder,LR),其遗传特征可能存有母系遗传.近年,随着分子遗传学的进展及其对运动医学领域的渗透,国内外学者尝试着探讨与运动能力相关的基因.目前发现,有氧能力有关基因有ACE、CKMM、ADRA2A及mtDNA的D-loop和MTND5等;家系研究还提示,1p、2p、4q、6p、8q、11p、14q染色体区域可能有运动能力相关基因;与肌肉力量有关的基因主要涉及GDF8、CNTF等,人们试图探明这些表型的基因标记或定位,以解决优秀运动员的早期选材问题,并从分子水平揭示人类运动能力的遗传生物学机制.目前,在这一研究领域,诸学者已展开相当规模的实验研究,取得了一些令人鼓舞的研究成果.本文旨在通过有关文献的综述,展示杰出运动能力相关基因的研究进展和有关方法,以促进我国在该研究领域工作的广泛开展.
-
运动能力相关基因标记的研究策略及方法
优秀运动员选材是体育科研界一直很重视的工作,其不仅可以帮助教练员尽早发现、挖掘具有特殊竞技能力的人才,而且可以在运动员的培养上节省大量的人力和物力.目前
-
高效绿色荧光蛋白基因标记系统的建立及其初步应用
逆转录病毒载体编码的众多报告分子被广泛用于分析基因转导率、分选或示踪基因修饰靶细胞,特别在改进基因转导条件、阐明造血干细胞(HSC)生物学特性和判定白血病复发的细胞来源等方面发挥了重要作用[1,2].作为新一代的报告分子,增强型绿色荧光蛋白(EGFP)近已被用于造血细胞的基因转移和示踪肿瘤转移与血管形成等研究[3].我们曾建立双启动子逆转录病毒载体介导的EGFP基因转移系统,但发现转导靶细胞后荧光强度较低[4].为提高靶细胞EGFP的表达,我们构建了仅携带EGFP单基因的逆转录病毒载体GIFP,并在不同类型靶细胞获得高效表达,为在体内进行基因标记研究提供了一种有效的工具.
-
胃癌基因水平研究进展
恶性肿瘤已成为威胁人类健康的常见病、多发病.胃癌在我国已占各部位恶性肿瘤死因的第一位[1].人们希望寻找胃癌发生发展过中改变的癌基因标记,建立简便可行的诊断和预后指标,发现癌基因激活和抑癌基因失活与胃癌形成的关系.
-
免疫组化三阴乳腺癌患者的临床病理特征及预后分析
三阴乳腺癌(triple-negative byeast carcinoma,TNBC)指雌激素受体(estrogen receptor,ER)、孕激素受体(pvogesterone receptor,PR)和HER-2/neu 均无表达的乳腺癌,被认为是一种独立的临床类型,以侵袭性强预后差为主要特征.本文对三阴乳腺癌的临床病理特征、复发及生存情况进行文献复习及分析,旨在提高对三阴乳腺癌的预后预测和治疗效果.基因标记(gene signature)在乳腺癌研究中的应用成为该领域发展的又一个里程碑,根据基因标记的差异将乳腺癌分为不同的分子亚型,包括basal 型、luminal型和HER-2 /neu阳性型,不同亚型乳腺癌对治疗的反应和预后存在明显差异[1-3].Basal-like型乳腺癌显著的特征就是缺乏雌激素受体(estrogen receptor,ER)、孕激素受体(progesteronereceptor, PR)和HER-2 /neu的表达.三阴乳腺癌指ER、PR和HER-2 /neu均无表达的乳腺癌,80%~90%的三阴乳腺癌属于Basal-like型乳腺癌[4].
-
绿色荧光蛋白基因标记骨髓间充质干细胞的研究进展
骨髓间充质干细胞(mesenehymal stem cells,MSCs)是具有自我复制、多向分化潜能的成体干细胞.其体外分离培养易取,细胞免疫原性低,易于被外源基因转染且表达稳定,已成为组织工程、基因治疗和再生医学研究中理想的种子细胞.且近年研究发现MSCs具有免疫调节和组织修复作用,故其在风湿病领域的研究渐受到重视.然而,干细胞移植后在体内的迁移、定植、分布、分化等有赖于对干细胞的示踪和定量技术.因此,寻找一种稳定、高效、持续的标记分子成为MSCs的研究热点.
-
基质金属蛋白酶-1单核苷酸多态性在宫颈癌中的表达及临床意义
基质金属蛋白酶-1(MMP-1)基因启动子单核苷酸多态性(SNP)功能被认为是多种癌症包括宫颈癌的预后基因标记.我们在我省进行MMP-1 SNP与宫颈癌关系的病例对照研究以进一步阐述MMP-1 SNP对中国北方人口宫颈癌发生、发展、转移可能的影响,进而从基因水平探讨宫颈癌的发生机制;探讨通过检测高危人群的MMP-1的基因类型来推断其发生宫颈癌的可能性,或对宫颈癌患者的基因型进行检测来推测其发生淋巴结转移的可能性进而推断预后的可行性.
-
新的乳癌基因标记可预测患者存活期(8)
-
LuxAB标记的N2106-L在小麦根圈的定植动态
目的 研究小麦PGPR(植物根际促生菌)菌株的个体生态学及其在小麦根圈的定植动态.方法 采用三亲本杂交法将发光酶基因luxAB转入具有固氮能力的小麦根际促生菌Azotobacter N2106菌株中,获得标记菌株N2106-L,将标记菌株接种到灭菌和非灭菌的黄褐土、红壤和黄潮土中研究其存活状况,采用根盒试验追踪标记菌株在小麦根圈的定植动态.结果 标记菌株N2106-L具有发光活性和对km、str、tet三种抗生素的抗性,且具有较好的遗传稳定性.N2106-L在灭菌土壤中的数量稍高于非灭菌土壤;在3种土壤中的数量依次为:黄褐土>黄潮土>红壤.N2106-L在小麦根表定植密度大于根际定植密度;在小麦根际,小麦播种10 d时标记菌株在0~2 cm深度根际土壤定植达到大值(2.17±0.25)×106CFU/g土,20 d时在2~4 cm深度的根际土壤中达到高定植水平(3.92±0.47)×105CFU/g土;在小麦根表,标记菌株在小麦播种10 d时在所有深度的根段均达到高定植水平,0~2 cm根段定植密度为(3.60±0.60)×106CFU/g鲜根,12 cm以下根段达到(2.78±0.56)×104CFU/g鲜根.结论 标记菌株随着根的伸长不断向根尖方向扩散,且较为稳定地在小麦根圈定植,研究结果为小麦PGPR菌株的应用提供了可靠实验数据.
-
基因治疗及其在眼科的基础研究
一、基因治疗随着对遗传性疾病致病机理的深入研究,人们自然就想到如果能够使变异基因和异常表达基因变为正常基因和正常表达基因,那么就可从根本上治愈遗传性疾病,这就是基因治疗的基本思想.20世纪80年代初,安德森博士首先阐明了基因治疗的前景及发展方向.之后的几年内大批科学家在动物身上进行了大量的基因转移(gene transfer)和基因标记(gene marking)实验.1990年9月美国政府批准实施世界上第一例基因治疗临床方案,美国国立卫生研究院的Blase R M[1]等人用腺苷酸脱氢酶(ADA),对一名患有重度联合免疫缺陷症(SCID)的4岁女孩进行基因治疗并获得了成功.目前基因治疗已从单基因疾病扩展到多基因疾病,从遗传性疾病扩展到获得性疾病如恶性肿瘤、心血管疾病和神经性疾病等.
-
缺血性心脏病基因治疗的进展及启示
近年来,随着对缺血性心脏病的分子病理生理机制的深入了解及分子生物学技术的迅速发展,开创了-分子治疗(靶基因,分子和多肽)的新时代.自从1989年首次进行人类基因标记 ,1990年首例患者接受基因治疗以来,到1998年5月共计2557名患者接受基因治疗.同样, 基因治疗心肌梗塞和心衰已被认为将成为这类严重心血管疾病处理策略[1].
-
基因芯片分析急性心肌梗死患者外周血差异基因表达谱
冠状动脉疾病、心肌梗死是由多种遗传和环境因素,以及它们之间的相互作用引起的[1]。2007年的全基因组关联研究(GWA)揭示了遗传与急性心肌梗死的关系。目前已经有11个染色体片段(chromosome segments )确定与心肌梗死相关。有研究表明染色体9p21与冠心病相关性强[2,3]。这些异常基因将来可能作为急性心肌梗死诊断及治疗的新靶点。当前的热点基因 PSCK9被证实与脂代谢相关,人们发现通过调节 PCSK9可以影响低密度脂蛋白胆固醇的水平。而抑制 PCSK9的表达作为一种有效的降脂治疗新方法,已证明可以降低血脂并提高他汀类药物的疗效[4]。本研究拟采用基因芯片方法寻找与急性心肌梗死相关的差异基因,发现急性心肌梗死诊断的基因标记,并探索能用于急性心肌梗死治疗的靶基因。
-
计算法鉴定寄生虫基因
许多寄生虫基因组计划已经启动并正在执行中,需对大量有关核苷酸序列的数据进行分析.当前急需一种理论性工具来进行基因组数据的分析,包括蛋白质编码序列的鉴定,为此已建立了多种计算方法.常用的基因鉴定法有序列相似性研究、基因标记(GeneMark)、GLIMMER、GeneId、GRAIL、GENEFINDER和TESTCODE等,它们运用了一系列的数学技术,如神经网络、马尔科夫链分析、隐藏性马尔可夫模型、动态性程序和语言分析等.
-
血吸虫基因组研究进展
血吸虫寄生于人体引起血吸虫病,是一种历史悠久、分布广泛的寄生虫病.随着科学技术的进步和有关机构的重视,血吸虫病的防治已经取得了相当的成就,然而在有些发展中国家血吸虫感染的病例却未见减少.近年来一些大规模的水利资源发展计划尤其可能为血吸虫的中间宿主提供理想的繁殖场所,引起血吸虫病的扩散和爆发.为了有效地控制血吸虫病,人们需要了解血吸虫的生物学特征、免疫学效应以及它的致病机理、抗药机制等.而开展血吸虫基因组的研究可以帮助阐明有关基因编码序列的特征,鉴定新的基因,提供有用的基因标记,比较基因序列的同源性,探讨表达蛋白的功能,从而为血吸虫病的疾病诊断、药物设计和疫苗的研制提供新的思路.现对这方面的工作进展加以综述.
-
逆转录病毒载体介导β-gal基因在原代大鼠肝细胞的表达
逆转录病毒载体被广泛用于移植肝细胞的基因标记和肝病的体外基因治疗.但重组逆转录病毒的感染需要靶细胞处于分裂增殖状态,而原代大鼠肝细胞增殖能力弱,逆转录病毒感染效率低,近年来采用生长因子刺激肝细胞增殖,取得了较好效果[1].本实验观察了含表皮生长因子(EGF)的培养条件下,双顺反子逆转录病毒载体介导β-gal基因表达于肝细胞的效率.