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Fas蛋白在直肠癌中表达的临床意义
为观察Fas蛋白在直肠癌中表达规律及其与预后的关系,应用免疫组织化学S-P法,对62例有随访结果的直肠癌组织进行Fas蛋白检测.临床Ⅲ、Ⅳ期直肠癌Fas蛋白阳性率(41.0%)显著低于临床Ⅰ、Ⅱ期(69.6%)(P＜0.05);有淋巴结转移组Fas蛋白阳性率(40.5%)显著低于无淋巴结转移组(68.0%)(P＜0.05)Fas蛋白阳性组直肠癌患者术后5年生存率(68.7%)显著高于Fas蛋白阴性组(43.3%)(P＜0.05).结果显示,Fas蛋白表达状况可作为临床判断直肠癌生物学行为、转移潜能及患者预后的一项重要指标.
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转移性相关基因CD44v6在结直肠癌中的表达意义
为探讨CD44v6表达与结直肠浸润、转移和预后的关系,对165例结直肠癌标本切片,采用CD44v6鼠单克隆抗体进行免疫组化染色(S-P).结果76例(46.06%)CD44v6阳性,其阳性表达与年龄、性别、肿物大小、部位、组织学类型无关,而与肿瘤是否侵出浆膜层、淋巴结转移、血行转移及3年死亡率呈正相关(P＜0.005);Dukes C期患者3年死亡率57.33%,略高于CD44v6阳性表达组的51.32%(P＞0.05).表明对结直肠癌标本进行CD44v6检测,有助于对结直肠癌患者的淋巴结转移、血行转移情况及预后做出预测.
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基因标志物与大肠癌预后
大肠癌在我国的发病率和死亡率呈逐年上升趋势,提高大肠癌长期生存率的关键是早期诊断,并准确地判断预后.本文就基因标志物在大肠癌预后监测中的应用概述如下.
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激活的激酶C受体1的研究进展
激活的蛋白激酶C受体1(RACK1)蛋白是一种高度保守的细胞内接头蛋白,RACK1参与了多种肿瘤的调节,且与细胞内一些具有特定结构的蛋白相互作用,引发信号分子形成复合物,调控基因表达.该文献根据近年来国内外的各项研究成果,对RACK1在基因水平方面做一综述.
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基于RNA-seq研究扩张型心肌病的mRNA基因差异性表达
目的 通过构建扩张型心肌病患者外周血浆的mRNA差异性表达谱,并对差异表达的mRNA进行功能分析,为阐明扩张型心肌病的发生发展机制提供依据.方法 应用转录组测序技术(RNA-seq)构建扩张型心肌病组(6例)和正常对照组(9例)的mRNA表达文库,获得基因水平的mRNA FPKM值,作为mRNA的表达谱,计算两组样品间差异并获得差异mRNA表达谱,利用差异mRNA进行基因本体(GO)功能分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路分析,进一步研究差异mRNA的功能.随机挑选3个显著上调和3个显著下调的差异表达mRNA,选取10例扩张型心肌病患者和10例健康对照,进行定量即时聚合酶链锁反应验证.结果 共筛选出1418条差异表达的mRNA,其中上调的有800条,下调的有618条,通过GO和KEGG生物学功能分析,发现差异性表达的mRNA参与到能量代谢、肌肉组织器官发育、细胞离子稳态失衡等生物学过程,显著富集在Wnt信号通路,并进一步筛选出可能与扩张型心肌病有关的目标基因GSK3β和SFRP2.应用定量即时聚合酶链锁反应在扩大样本中进行验证,结果差异均有显著统计学意义(P<0.05或P<0.01).结论 本研究应用RNA-seq技术获得扩张型心肌病mRNA差异性表达谱,筛选出可能与扩张型心肌病有关的目标基因,为进一步研究扩张型心肌病的发病机制和药物治疗靶点提供依据.
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中国人脑胶质瘤中表皮生长因子受体的表达
目的研究中国人脑胶质瘤中表皮生长因子受体(EGFR)的表达及其在脑胶质瘤靶向性基因治疗中的意义.方法应用免疫组化法检测人脑胶质瘤组织及瘤周组织EGFR的表达水平,检测人脑胶质瘤细胞株U87MG、U251MG和大鼠胶质瘤细胞株C6表面EGFR的表达,筛选EGFR高表达胶质瘤细胞株作为靶向性非病毒载体基因转移系统的靶细胞.结果肿瘤组织与瘤周组织的EGFR表达水平有显著区别,肿瘤组织EGFR表达水平明显高于瘤周组织(P＜0.01);肿瘤组织EGFR表达水平与肿瘤级别有显著相关性,肿瘤级别越高,EGFR表达水平越高(P＜0.05);人脑胶质瘤细胞株U251MG为EGFR相对高表达细胞株,其平均表达水平明显高于U87 MG和C6细胞株.结论中国人脑胶质瘤中存在表皮生长因子受体的过度表达,不同胶质瘤细胞株表皮生长因子受体的表达相差悬殊,EGFR可作为靶受体应用于脑胶质瘤的靶向性基因治疗.
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人肺癌组织单羧酸转运蛋白-1基因的表达及其意义
目的研究人肺癌组织中单羧酸转运蛋白-1(MCT1)基因的表达水平,探索肿瘤治疗新策略.方法以寡聚脱氧核苷酸为探针,用原位分子杂交法探测人肺癌组织和人正常肺组织MCT1 mRNA的表达水平.结果人肺癌组织的MCT1 mRNA的表达显著强于正常肺组织,呈过表达.结论 MCT1基因的过表达可能是肺癌组织细胞的分子生物学特征之一.
关键词： 肿瘤 酸碱平衡 基因表达 单羧酸转运蛋白-1(MCT1)基因 原位分子杂交 -
大鼠肝脏3 Alpha-羟类固醇脱氢酶cDNA的克隆与表达
目的克隆大鼠肝脏3 Alpha-羟类固醇脱氢酶(3α-HSD)cDNA,构建大肠杆菌表达质粒pET-30a/3α-HSD,并诱导表达含6个组氨酸标记的pET-30a/3α-HSD融合蛋白.方法从大鼠肝脏组织中提取总RNA,利用RT-PCR技术扩增出大鼠3α-HSD cDNA,克隆于pGEM-T载体中,测序筛选后,将正确序列的3α-HSD基因Bam H Ⅰ/Xho Ⅰ片段定向插入融合基因表达载体pET-30a的相应克隆位点上,构建重组质粒pET-30a/3α-HSD,并转化大肠杆菌BL21-Gold(DE3)pLysS.结果和结论 pGEM-T/3α-HSD序列分析发现,获得的大鼠肝脏3α-HSD cDNA在起始密码后的第814位碱基由T突变为C,与文献报道的仅一个碱基差别.构建的表达载体pET-30a/3α-HSD在大肠杆菌BL21-Gold (DE3)pLysS中能表达出融合蛋白,为进一步实验研究和临床应用创造了条件.
关键词： 3 Alpha-羟类固醇脱氢酶 克隆 序列分析 基因表达 -
基因芯片可预知肿瘤的发生
基因芯片技术作为近期发展起来的一项新技术,不仅能够研究细胞内所有基因的表达谱,同时还具有多样品并行处理能力、分析速度快、所需样品量少、污染少等优点,为研究肿瘤发生发展过程中的基因表达情况提供了强有力的工具.
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大鼠神经营养因子3的体外表达与分析
目的:为了有效地解决脊髓损伤后轴突再生不良的问题,作者构建大鼠源性神经营养因子(neurotrophin-3,NT3)真核表达载体,并探讨其在真核细胞中的表达.方法:以大鼠肝细胞染色体为模板,采用PCR方法扩增出NT3的编码基因,将所得的基因重组于PcDNA3.1(+)真核表达载体,筛选正确的克隆,转染COS7细胞.结果:重组克隆酶切鉴定正确,序列测定与文献报道完全一致.转染COS7细胞后可检测到NT3mRNA的表达,Western Blot在COS7细胞裂解液中检测到13.6KD的蛋白表达.结论:基因重组的PcDNA3.1(+)-NT3载体能有效地将目的基因带入真核细胞并表达,为进一步进行脊髓损伤的修复实验作了准备.
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抑凋亡基因bcl-2表达在子宫内膜早期癌变中的意义
目的探讨抑凋亡基因bocl-2与子宫内膜早期癌变的关系.方法应用免疫组化SP法,原位检测65例子宫内膜不典型增生和30例子宫内膜癌中bocl-2基因的表达.结果子宫内膜不典型增生bcl-2基因高表达,子宫内膜癌bcl-2基因低表达(P＜0.05),且在子宫内膜不典型增生中,随病理分级的增加,bcl-2因阳性表达强度升高.结论抑凋亡基因bcl-2参与了细胞增殖与凋亡的调控,与细胞的异常增殖有关,且主要在子宫内膜恶变的早期起作用.
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胃癌、癌旁组织中p73基因表达及杂合缺失研究
目的探讨p73基因转录表达及杂合缺失与胃癌发生、发展的关系.方法采用反转录多聚酶链反应技术(RT-PCR)及多聚酶链反应单链长度多态性分析法,检测45例胃癌、癌旁及正常组织中p73 mRNA的表达及杂合缺失.结果正常胃粘膜组织中未见p73 mRNA表达.癌旁肠化组织,异型增生及胃癌组织p73 mRNA高表达率分别为38.5%(10/26),20%(2/10),55.6%(20/36),杂合缺失率分别为14.8%(4/27),11.1%(2/18),26.7%(12/45).胃癌、癌旁肠化生组织中p73 mRNA表达显著高于正常组织(P＜0.05).而胃癌及癌旁肠化及异型增生间无显著差别.胃癌及癌旁组织中杂合缺失率无显著差别.p73 mRNA高表达及杂合缺失与肿瘤组织学类型、分化程度、大小、部位、年龄及性别无关(P＞0.05).p73基因高表达与杂合缺失无关.结论 p73基因高表达及杂合缺失可能参与了胃癌的发生发展过程,p73基因高表达及基因的杂合缺失可能是该基因的两种不同失活方式.
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基因表达在第二原发性肺癌鉴别诊断中的临床价值
目的探讨基因检测应用于第二原发性肺癌鉴别诊断的临床价值.方法重新复查1985年1月～1999年12月间疑诊为第二原发性肺癌病例的临床资料和病理切片,对病理类型相同的第二原发性肺癌的病理蜡块进行P53、P16、nm23、Bcl-2四项基因产物检测,并对所有病人进行跟踪随访.结果2223例肺癌手术中发现24例第二原发性肺癌,同期发病者11例,非同期发病者13例.其中病理类型相同者12例,不同者12例.病理类型相同的12例中,2次肺癌标本的四项基因产物检测均有1～3种不完全相同.同期发病者术后5年生存率29%,非同期发病者23%.结论第二原发性肺癌的诊断上建议应用基因诊断.其临床特征与原发性肺癌相同.
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抗坏血酸与基因表达研究新进展
体细胞通过设定的因素可以重新编程为诱导多能干细胞.然而,低效率和缓慢的重编程过程阻碍了这项技术进步.这里我们介绍一种天然化合物-抗坏血酸(抗坏血酸),可以促进小鼠和人类体细胞诱导多能干细胞增殖.抗坏血酸在一定程度上可以减轻细胞衰老,一种新的定义为重组障碍.另外,抗坏血酸加可以加速基因表达变化并促进前体-诱导多能干细胞过渡为一个完全重新编程状态.
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慢性肾脏病中Cyr61加权基因共表达网络分析
目的 使用加权基因共表达分析(WGCNA)构建慢性肾脏病(Chroic Kidney Disease,CKD)基因共表达网络,研究富含半胱氨酸蛋白61(Cyr61)基因在CKD肾小球及肾间质中表达情况,并探讨Cyr61基因是否为CKD枢纽基因.方法 在公共基因芯片数据库NCBI GEO中搜集CKD相关样本,获得2个基因芯片平台共373个样本,其中包含正常对照和7种CKD,并按照样本的来源分为肾小球组及肾间质组.使用WGCNA包对表达差异基因进行基因共表达分析,识别与CKD发生相关性高的枢纽基因,并获得Cyr61与其他枢纽基因的相关程度.结果 与正常肾组织相比,Cyr61基因在高血压肾病、微小病变性肾病、膜性肾病、狼疮性肾炎、局灶阶段性肾小球硬化肾小球及肾间质中表达均降低,差异具有统计学意义;而在IgA肾病中只有肾间质中表达降低,差异具有统计学意义.基因共表达分析结果显示,Cyr61基因为CKD发生的枢纽基因.相关分析结果显示,Cyr61基因与MAFF、JUN、KLF6基因间拓扑重叠系数＞0.10,与ATF3、JUNB基因间拓扑重叠系数＞0.09,与EGR1、MYC、GDF 15、HBEGF、GEM、CCL2、RHOB、TRIB1基因间拓扑重叠系数＞0.06.结论 Cyr61基因在CKD中表达普遍下降;基因共表达分析结果显示,Cyr61基因为CKD发生的枢纽基因,并且MAFF、JUN、KLF6、ATF3、JUNB与Cyr61基因高度相关.
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应用实时荧光定量PCR技术检测外周血白细胞分子标志物评估胰岛素敏感性的研究
[目的] 通过建立实时荧光定量PCR技术检测外周白细胞中mRNA基因表达差异的方法来评定或预测胰岛素抵抗的发生,以期了解其在2型糖尿病发生中所发挥的作用.[方法] 应用实时荧光定量PCR技术检测中国北方居民,年龄、性别相匹配的胰岛素抵抗者和胰岛素敏感者外周血白细胞mRNA基因表达水平,根据候选基因(未知序列)的mRNA表达浓度差异,了解胰岛素抵抗的发生情况.[结果] (1)建立由外周血提取RNA,并逆转录为cDNA的方法;(2)应用实时荧光定量PCR技术检测候选基因;(3)初步了解两组人群外周白细胞mRNA特异性表达的差异.[结论] 应用β-actin作为管家基因建立较稳定的实时定量PCR方法能够应用于分子流行病学分析.候选基因在不同人群的表达差异表明可能做为早期预测胰岛素抵抗的一种基因.
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干细胞标志物CD133和Nestin在不同恶性程度胶质瘤组织中的表达及其与预后的关系
背景与目的:近来研究表明,胶质瘤中-小群表达干细胞标志的细胞是胶质瘤发生及发展的根源.本文探讨干细胞标志物CD133和Nestin在不同恶性程度人脑胶质瘤组织中的表达情况及其与预后的关系.方法:应用实时荧光定量PCR方法定量检测77例不同恶性程度胶质瘤组织中CD133和Nestin基因的表达情况,并与肿瘤的恶性程度进行相关分析;探讨肿瘤组织中上述基因的表达水平与患者预后的关系.结果:在不同恶性程度胶质瘤组织中,CD133及Nestin的表达存在显著性差异(P<0.05),CD133和Nestin的表达情况与肿瘤的恶性程度呈正性相关(P<0.05);单因素预后分析显示CD133和Nestin的表达水平与预后相关(P<0.05),CD133和Nestin基因的高表达预示一个较短的生存时间;多因素Cox比例风险回归模型分析显示,CD133是独立于病理级别及其他临床变量的预后因子.结论:检测胶质瘤组织中CD133和Nestin的表达水平有助于评价肿瘤的生物学行为和患者的预后.
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胶质瘤促血管生存素2基因表达与血管生成的关系
背景与目的:血管生成与肿瘤的生物学行为密切相关,本研究探讨胶质瘤促血管生存素2(angiopoietin2,Ang2)表达与血管生成的关系.方法:采用RT-PCR检测52例人脑胶质瘤和8例正常脑组织中Ang2基因表达;CD34单克隆抗体组织化学染色显示微血管,用微血管计数(micro-vessel-counting,MVC)测定肿瘤血管生成.结果:50例脑胶质瘤和8例正常脑组织均可表达Ang2 mRNA片段.Ang2 mRNA表达与脑胶质瘤的血管生成呈显著正相关(r=0.821,P＜0.01);高度恶性胶质瘤Ang2 mRNA表达、MVC分别显著高于低度恶性胶质瘤(P＜0.01);低度恶性胶质瘤Ang2mRNA表达、MVC均显著高于正常脑组织(P＜0.05).结论:Ang2可能通过参与胶质瘤血管生成,对胶质瘤的恶性演进起促进作用.
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P53突变或缺失与肿瘤代谢重编程
P53是一种分子量为53kDa的抑癌蛋白质,故命名为P53.曾经错误地把P53基因视为癌基因,因当初从肿瘤细胞分离得到的P53基因如同myc基因一样,能和ras基因协同转化胚胎成纤维细胞,又依据癌基因为细胞显性表型原则而被定为癌基因,后发现实为其突变型P53,1989年才确认为“抑癌基因”[1].P53是一个重要的明星分子,主要通过调节包括周期调控、DNA损伤修复、细胞衰老和细胞凋亡等而发挥抑癌作用.多种应激因素包括DNA损伤、癌基因激活,以及放疗和化疗等通过不同信号通路激活P53,并以四聚体活性转录因子方式调节数百种靶基因表达并发挥抑癌作用[2](图1).
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针刺涌泉穴对D-半乳糖致衰老模型大鼠p53和bcl-2基因表达的影响
目的:应用RT-PCR观察针刺涌泉穴对D-半乳糖衰老造模大鼠p53与bcl-2基因表达的影响,初步探讨针刺延缓衰老的基因表达机理.方法:将32只成年健康雄性SD大鼠按每组8只随机分为正常组、模型组、针刺组与针刺对照组.模型组每日皮下注射10%D-半乳糖0.5ml,正常对照组注射相同体积的生理盐水,针刺组与针刺对照组在注射D-半乳糖造模的同时分别予以针刺"涌泉穴"与非穴位,进行延缓衰老治疗.7周后同时处死动物,摘取肝脏提取mRNA,应用RT-PCR观察p53与bcl-2两条基因表达的改变情况.结果:针刺涌泉穴可显著降低p53在衰老模型大鼠肝组织的表达,针刺非穴位组则无明显变化.结论:针刺涌泉穴通过调节机体p53与bcl-2表达间的平衡,调节衰老机体细胞周期与损伤修复机制,达到延缓衰老的作用.
