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正常与异常子宫内膜中Bc1-2、Bax mRNA表达
为了解正常和异常子宫内膜中Bc1-2和Bax mRNA的表达及与凋亡的关系.应用原位杂交方法检测了27例正常子宫内膜,12例子宫内膜增殖症和10例癌变子宫内膜Bc1-2和Bax mRNA的表达情况.结果:正常子宫内膜组织腺细胞Bc1-2与Bax mRNA表达的比例与子宫内膜的周期性变化密切相关,Bc1-2 mRNA表达在增殖期增强,分泌期减弱,Bax mRNA表达则相反.增殖症和癌变子宫内膜组织中,Bc1-2和Bax mRNA表达呈正相关(rs＝0.886,P<0.05),随着子宫内膜由良性增生到恶性增生,Bc1-2 mRNA表达逐渐减弱至丧失表达;Bax mRNA在增殖症子宫内膜中,随着增生的异型化,表达逐渐增强,而在癌变子宫内膜中,随着病理分级的降低,表达逐渐降低.结论:Bc1-2和Bax基因对于维持正常子宫内膜周期性变化的平衡起着重要作用,在增殖症和癌变子宫内膜中表达的异常变化可能与子宫内膜癌生物学行为和预后相关.
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胚胎基因组的形成和激活
早期胚胎缺乏转录活性,由母源性的转录产物所调控,随着胚胎的发育,胚胎的基因组逐渐形成并被激活.胚胎基因组的形成和激活在早期胚胎的发育中起关键作用,主要包括胚胎细胞核的形成和胚胎细胞质由转录抑制状态向激活状态转变.本文对胚胎基因组的形成和激活的基本特点和分子机制进行综述.
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miR-128真核表达载体的构建及功能的初步研究
目的 构建miR-128真核表达载体,研究其在神经胶质瘤细胞株U343表达及对U343细胞增殖的影响.方法 以人神经胶质瘤细胞株U343的DNA为模板扩增miR-128-1和miR-128-2的前体序列,将人miR-128-1(has-miR128-1)和人miR-128-2(has-miR128-2)基因克隆到真核表达载体pCR3.1,将pCR3.1-miR-128-1(p-128-1)和pCR3.1-miR-128-2(p-128-2)表达载体瞬时转染U343细胞,采用Northern印迹检测成熟的miR-128表达.将U343细胞接种96孔板,MTT法检测过表达miR-128对细胞增殖的影响.结果 p-128-1和p-128-2表达载体经酶切及测序鉴定正确;二者转染细胞后,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增结果显示,其能有效表达miR-128的前体;Northern印迹结果均能产生成熟态的miR-128.MTT检测结果在无血清培养和维甲酸处理的情况下,细胞的增殖能力明显下降.结论 成功构建了p-128-1和p-128-2的真核表达载体,转染神经胶质瘤细胞后能有效表达,miR-128基因过表达能抑制U343细胞的增殖.
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实验性多囊卵巢综合征大鼠脂肪组织中抵抗素基因的表达及其意义
目的研究脱氢表雄酮(DHEA)诱导SD幼年雌性大鼠多囊卵巢综合征(PCOS)动物模型的脂肪组织中抵抗素(resistin)mRNA的表达与其性激素变化及胰岛素抵抗(IR)的关系.方法以DHEA皮下注射21 d龄SD雌性大鼠,观察卵巢重量及光镜(HE染色)、透视电镜下形态学改变,测定糖耐量、血清胰岛素、雌二醇(E2)、睾酮(T)、孕酮(P)、泌乳素(PRL)水平,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测脂肪组织resistin mRNA的表达.结果实验组卵巢重量显著高于对照组(P＜0.05),实验组卵巢呈多囊样改变而黄体形成比例减少;实验组血清T、E2和空腹血糖、胰岛素水平明显高于对照组(分别为P＜0.001、＜0.05、＜0.001、＜0.05),空腹血胰岛素与空腹血糖乘积的倒数(1/FINS×FGC)显著高于对照组(P＜0.05);PCOS大鼠白色脂肪组织resistin mRNA表达显著高于对照组(P＜0.05). 结论DHEA诱导的PCOS大鼠动物模型与PCOS患者相似,伴有IR现象;由白色脂肪组织分泌的resistin在PCOS发生机制中起部分调节的作用,并使PCOS的IR进一步加重.
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白血病抑制因子对人早孕绒毛滋养层细胞c-jun、c-fos基因表达的调节
目的探讨重组人白血病抑制因子(LIF)对人早孕滋养层细胞着床相关分子原癌基因c-jun、c-fos表达的影响及其作用环节.方法将人早孕滋养层细胞培养于DMEM培养液中,加入不同浓度LIF(1、10和100ng)作用1 h后,分别提取总RNA;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测原癌基因c-jun和c-fos的表达. 结果正常培养的人早孕滋养层细胞有一定水平的c-jun、c-fos基因表达;LIF对人早孕滋养层细胞c-jun、c-fos的表达均有上调作用,c-jun、c-fos mRNA水平增加1.5～3倍,并且调节呈剂量依赖性.结论UF可能通过调节滋养层细胞原癌基因c-jun和c-fos表达而影响胚胎的植入
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体外应用抑制性消减杂交技术克隆和筛选大气细颗粒物(PM2.5)污染相关基因
大气细颗粒物(Fine Particular Matter,PM2.5)是指空气动力学直径小于2.5μm的分散在大气中的固态或液态颗粒物物质.国外大量流行病学研究资料提示,颗粒物浓度的上升与疾病的发病率、死亡率关系密切,尤其是呼吸系统疾病及心血管疾病[1-2].
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对氨基水杨酸钠对染锰大鼠学习记忆能力及海马某些基因表达的影响
目的 探讨对氨基水杨酸钠(PAS-Na)对亚急性染锰大鼠学习记忆能力、海马细胞凋亡、线粒体功能和神经胶质细胞生长分化基因表达的影响.方法 雄性大鼠每日腹腔注射(ip) MnCl2 ·4H2O,15 mg/kg,每周5d,连续4周.然后,每日背部皮下注射PAS-Na 100(低-PAS)或200(高-PAS)mg/kg,连续3周或6周.采用Morris水迷宫检测大鼠学习记忆能力,Real-Time PCR (RT-PCR)方法检测海马Bax、CoxⅡ、CoxⅣ、GFAP基因的mRNA原始表达量.结果 观察期7周时,测试第5天染锰组逃避潜伏期、游泳路程比对照组长,低-PAS组逃避潜伏期、游泳路程较染锰组短(P＜0.05).染锰组Bax、CoxⅡ、GFAP基因表达比对照组增强,CoxⅣ基因表达比对照组减弱(P＜0.05);低、高-PAS组CoxⅡ基因表达比染锰组降低(P＜0.01).观察期10周时,测试第4天染锰组逃避潜伏期、游泳路程比对照组长,低、高-PAS组逃避潜伏期、游泳路程较染锰组短(P＜0.05).染锰组Bax、CoxⅡ、GFAP基因表达比对照组增强,CoxⅣ基因表达比对照组减弱;低、高-PAS组Bax、CoxⅡ和高-PAS组GFAP基因表达均明显比染锰组降低(P＜0.05);低、高-PAS组CoxⅣ基因表达比染锰组增强(P＜0.05).结论 PAS-Na对锰致大鼠学习记忆能力降低、海马细胞凋亡、线粒体功能紊乱和神经胶质细胞生长分化增多的基因表达异常有拮抗作用.
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口腔黏膜白斑(OLK)癌变驱动基因研究
目的 筛查与口腔黏膜白斑( Oral leukoplakia,OLK)癌变相关的表达阳性基因,为探究口腔鳞状上皮细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)的发生机制奠定基础.方法 采用美国SuperArray公司的肿瘤基因芯片(OHS802)检测OLK组织和OSCC组织的440个肿瘤相关基因表达差异,进一步使用RT-PCR法对部分阳性基因进行验证,寻找OLK恶变发生、发展相关的基因.基因芯片实验参考文献方法进行.RT-PCR电泳结果采用Kodak凝胶成像分析系统对部分基因的表达水平进行定量,然后将其与芯片分析的数据结果进行相似性分析.结果 经Kodak凝胶成像分析系统定量后,证实OLK组织和OSCC组织间CLK-3、CTNNB-1、GDF-15、FKBP-8、SOCS-3、NF-1、BCL-2、XRCC-1、ACP-2 9个SupperArray阳性基因的RT-PCR结果,在表达水平上和SupperArray芯片检测方法获得的结果差别均有统计学意义(P＜0.05).结论 OLK癌变的分子机制较为复杂,特别是与细胞周期调控基因、生长因子基因和细胞增殖分化基因关系密切.
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毒死蜱对大鼠脑区GST同工酶和微粒体GST活力的影响
目的探讨毒死蜱(CPF)对大鼠不同脑区中GST-α,GST-μ和GSTms活力和mRNA表达的影响,了解其作用的脑区选择性和同工酶特异性,并初步探讨氧化应激是否参与其作用.方法将大鼠分成对照组和16.3 mg/kgCPF处理组,经口染毒5 d,采用分光光度法,利用特异性的底物测定大鼠不同脑区中GST-α,GST-μ和GSTms的活力及脑突触体丙二醛(MDA)量;RT-PCR分析CPF对不同脑区中GST-α,GST-μ和GSTms的mRNA表达的影响.结果CPF抑制大脑皮层中GST-μ的活力,诱导脑干中GST-α活力和小脑细胞浆中的GST的总酶活力,与对照组比差异均有显著性(P＜0.05).在这个剂量下CPF未引起脑突触体膜MDA量的显著变化.RT-PCR结果显示,CPF主要选择作用于小脑,诱导小脑的GST Ya2,GST Yb的mRNA表达,而对GSTms、mRNA则起抑制作用.结论CPF对脑组织中GST的影响表现为脑区的选择性和同工酶种类的选择性,主要作用于小脑中的GST.
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非小细胞肺癌p21ras和FHIT蛋白表达与吸烟的关系
目的 探讨吸烟与非小细胞肺癌(NSCLC)p21ras蛋白和FHIT蛋白表达异常的关系,揭示吸烟致肺癌作用机制及靶点.方法 应用免疫组化SP法检测80例NSCLC癌组织及20例正常肺组织中p21ras蛋白和FHIT蛋白表达情况,分析患者吸烟因素对p21ras蛋白和FHIT蛋白表达的影响.结果 80例NSCLC标本中p21ras蛋白高表达和FHIT蛋白低表达,而正常肺组织则相反,两组比较差异均有统计学意义(P＜0.01).NSCLC息者中吸烟组的p21ras蛋白表达明显高于不吸烟组,FHIT蛋白表达则明显低于不吸烟组,分别二组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).并且随着NSCLC患者的吸烟指数(B1)的升高p21ras蛋白表达渐增强和FHIT蛋白表达渐减弱,不同BI组之间的两者异常表达均有统计学意义(P＜0.01).肺腺癌和大细胞肺癌中吸烟与p21ras蛋白高表达关系密切,而肺鳞癌中吸烟与FHIT蛋白异常表达关系密切,均有统计学意义(P＜0.01).NSCLC患者p21ras蛋白和FHIT蛋白异常表达无明显的相关性,但二者在NSCLC组织的异常变化存在差异(P＜0.01).结论 p21ras蛋白和FHIT蛋白异常表达与NSCLC发生密切相关,在吸烟致肺癌发病中起重要作用,且可能为烟草致癌的关键步骤及分子靶点,吸烟是肺腺癌、大细胞肺癌p21ras蛋白高表达和肺鳞癌中FHIT蛋白低表达的一个重要因素.
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双酚S在T47D乳腺癌细胞中雌激素活性的研究
目的 评价双酚S(Bisphenol S,BPS)在T47D乳腺癌细胞中的雌激素活性,探讨雌激素受体α(ERα)在BPS诱导的雌激素效应中的作用.方法 以不同浓度的BPS刺激T47D乳腺癌细胞,通过新型四唑盐WST-8方法检测BPS诱导的细胞增殖,观察其增殖情况;通过Real-time PCR检测BPS对ERα下游基因(CTSD、GREB1、TFF1)mRNA表达的影响;利用ER抑制剂ICI182780研究ER在BPS诱导雌激素活性中的作用.结果 细胞增殖实验显示当BPS达到1 μmol/L时能显著刺激细胞增殖(P＜0.05),并且随着剂量的升高呈现出剂量-效应关系.1～ 10 μmol/L BPS能够显著诱导ERα下游基因mRNA的表达(P＜0.01).然而,雌激素受体抑制剂ICI182780能够显著抑制BPS诱导的细胞增殖和基因表达(P＜0.01).结论 在1～10 μmol/L剂量下,双酚S能够在T47D细胞中具有明显的雌激素活性,并且该活性与ER的激活有关.
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黑加仑提取物抗疲劳作用与GAT-2、Scd-2基因的关系
目的 探讨黑加仑提取物对疲劳小鼠脑组织中γ-氨基丁酸转运体2(GAT-2)、硬脂酰基-辅酶A去饱和酶2(stearoyl-CoA desaturas-2,Scd-2)基因表达的影响.方法 选择健康BALB/c雄性小鼠随机分为运动+服药组、运动组、安静对照组,建立运动性疲劳模型后,运用RT-PCR技术对小鼠脑组织中的基因表达进行分析.结果 运动+服药组脑组织中GAT-2、Scd-2基因的光亮度较运动组和安静对照组高(P<0.05).结论 在本试验条件下,黑加仑提取物可消除大强度训练过程中γ-氨基丁酸(GABA)诱发的疲劳作用,其作用亦与脑组织中的Scd-2基因表达有关联.
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三氯乙烯对3种细胞色素P450酶基因表达的影响
目的探讨三氯乙烯( Trichloroethylene, TCE )对人体淋巴细胞瘤细胞株(MCL-5)中3种细胞色素P450酶基因(CYP1A1、CYP2E1、CYP3A4)表达的影响,并研究剂量反应关系和时间反应关系.方法用常规的细胞培养方法,0.5、1.0、1.5、2.0 mmol/L TCE处理细胞12、24、48、72 h.利用提纯RNA和合成cDNA的药盒,合成cDNA,然后逆转录聚合酶反应(RT-PCR)表达3种CYP450基因,以β-Actin作为内对照,分析不同处理剂量和时间时基因表达的强度.结果在MCL-5细胞株中都有基本的表达,CYP1A1表达在用1.0、1.5、2.0 mmol/LTCE处理48 h后有被上调的趋势,而且上调趋势随处理时间延长而加强;CYP2E1、CYP3A4表达不受TCE处理时间长短的影响.3种CYP450酶基因的表达受TCE剂量的影响,3随0.5 mmol/L,1.0、1.5、2.0 mmol/L剂量的增加有上调的趋势.结论 TCE对CYP450酶系统中的CYP2E1、CYP1A1、CYP3A4基因有明显的诱导作用,这些基因被诱导后的结果,可能会导致相对应酶活性的增加,同时加强对TCE的代谢,使TCE的代谢产物增加.
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E2F转录因子在细胞周期调控中作用的研究进展
目前研究表明多种细胞因子参与细胞周期调控,其中E2F转录因子家族已被证明是重要的调控环节之一[1].它们通过调节控制细胞DNA合成及与细胞增殖有关的基因表达而起作用,同时其本身的活性又受另一些在细胞周期进程中有重要作用的蛋白所调控.这样调节E2F家族的蛋白,E2F转录因子及它们的靶基因就形成了一条对细胞增殖有调节作用的途径.现对E2F转录因子在细胞周期调控中的作用及E2F家族与细胞凋亡及肿瘤的关系进行综述.
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DNA甲基化与重金属中毒
DNA甲基化(DNA methylation)是哺乳类动物体内极为重要的自然化学修饰方式,能调控体内基因的表达,影响细胞的增殖和分化,与动植物生长发育关系密切,是目前表遗传学研究的热点[1].环境中的哪些因素能影响DNA甲基化,目前还有待进一步研究,其中重金属与DNA甲基化有关.研究发现,重金属中毒能影响DNA总甲基化水平、甲基转移酶的活力和某些抑癌基因的表达,现就重金属中毒对DNA甲基化的影响做一综述.
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2-Cys peroxiredoxins的生物学功能以及化学物质对其的影响
过氧化还原酶(Peroxiredoxins,Prxs)是十几年前才发现的一类重要的抗氧化酶,它们分布广泛,几乎存在于所有植物、酵母、细菌、寄生虫、哺乳动物等多种生物体内.哺乳动物中至少存在6种Prxs亚型(PrxⅠ～Ⅵ),根据各成员间的同源性和Cys残基的数目,它们可分为3个亚类:①2-Cys Prxs(Prx Ⅰ～Ⅳ);②不典型2-Cys Prx(PrxⅤV);③1-Cys Prx[(PrxⅥ).氨基酸
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DMSO对贫铀损伤的防治作用
目的观察难溶性贫铀(DU)颗粒染毒对细胞的生物学效应及DMSO的保护作用.以期对其可能机制进行探索,为DU的危害及其防治提供有益的线索.
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微囊藻毒素促肝癌过程中对Bcl-2、Bax基因表达的影响
目的探讨微囊藻毒素(MC)促肝癌的分子机制.方法采用二阶段致癌理论建立中期试验动物模型,γ-GT染色检验MC的促癌作用,并用半定量RT-PCR检测Bcl-2和Bax基因mRNA水平上的改变,同时利用免疫组化法结合图像分析技术精确测定大鼠肝脏Bcl-2和Bax基因蛋白的表达情况.
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针对Pleiotrophin基因的siRNAs的设计及其稳定表达载体的构建
目的设计Pleiotrophin基因特异性的siRNAs,并构建一系列能在哺乳动物细胞内稳定表达这siRNAs的表达质粒,以便为在体外研究Pleiotrophin基因的功能打下基础.
关键词： 小分子干涉RNA Pleiotrophin基因 基因表达 -
2-02 镉接触的易感性标志物的研究
目的建立测定外周血淋巴细胞(PBL)中MT基因表达的方法,在职业和环境接触镉的人群中检测其变化,初步探讨作为镉接触的生物标志物的可行性.方法与结果用密度梯度离心法分离淋巴细胞,抽提核酸后进行差示逆转录多聚酶链反应(dRT-PCR),优化反应条件.本法可检测低至1×10-6μg总RNA中的MT基因表达.RT-PCR操作内和操作间的结果差异无显著性,具应有的稳定性.体外接触镉可迅速诱导PBL的MT基因表达,具有良好的剂量反应关系.表明PBL是分析MT基因表达的合适组织,并初步提示PBL中MT基因表达作为镉接触的生物标志物的可能性.职业接触人群的研究发现,电解车间工人的基础和诱导的MT表达水平显著高于其他两组(P＜0.05),但MT诱导能力在接触组和对照之间差异无显著性.随尿镉、血镉和镉摄入量水平上升,MT基础表达和诱导表达都增高.MT诱导能力在各种分组法中组间差异均未见显著性.MT基础表达水平反映血镉水平的敏感度和特异度都较反映尿镉要好.MT基础和诱导表达与血镉水平显著相关,同时与尿镉也显著相关.环境接触镉的人群研究发现,血镉水平升高,MT基础和诱导表达水平均显著增高.尿镉升高,MT基础表达和诱导表达水平虽有增高,但差异无显著性.高摄入量组MT基础表达和诱导表达水平高于低摄入量组,其中高摄入量组的诱导MT表达水平显著高于低摄入组.MT诱导能力水平差异均未见显著.相关分析可见MT基础表达与血镉、尿镉的对数显著相关,MT诱导表达与血镉、尿镉和镉摄入量的对数显著相关.结论提示外周血淋巴细胞金属硫蛋白基因表达作为镉接触的易感性标志物的可能性.
