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结核分枝杆菌Rv0867c基因的克隆表达及其纯化
目的 构建结核分枝杆菌Rv0867c基因的原核表达质粒,获得结核分枝杆菌Rv0867c基因的表达蛋白.方法 制备结核分枝杆菌基因组DNA,采用聚合酶链反应(PCR)技术扩增目的 基因片段;通过克隆载体pUC19构建质粒载体pUC19-Rv0867c,经序列测定证实正确,双酶切后连接于表达载体pPRO-EXHT,转化入大肠杆菌DH5α中,再经IPTG诱导表达带His标签的Rv0867c融合蛋白;用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析重组蛋白的相对分子质量大小及表达形式.结果 成功扩增出了结核分枝杆菌Rv0867c基因,构建了具有正确基因序列的表达载体pPRO-EXHT-Rv0867c,转化入大肠杆菌DH5α中,经诱导产生高水平的表达产物.经SDS分析,在80kD处出现新生蛋白带,凝胶薄层扫描检测表达量约占菌体蛋白的23.7%.该融合蛋白以包涵体的形式存在,用Ni2+-NTA纯化柱在变性条件下进行纯化.结论 成功克隆了结核分枝杆菌Rv0867c基因并得到了其大肠杆菌表达产物,为进一步研究Rv0867c基因蛋白的活性及其功能,以及结核分枝杆菌快速促生长作用奠定了基础.
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结核分枝杆菌CFP10-ESAT6融合蛋白在大肠杆菌中的高效表达
目的在大肠杆菌中高效融合表达结核分枝杆菌分泌蛋白ESAT-6和CFP-10,获得纯化的重组ESAT6-CFP10(rCFP10-ESAT6)融合蛋白抗原.方法通过聚合酶链反应(polymerase chain reaction ,PCR)扩增CFP10-ESAT6融合基因;以质粒pET-28a为表达载体,构建重组质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3);以异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达目的蛋白,通过SDS-PAGE电泳和蛋白免疫印迹法 (Western blotting) 鉴定rCFP10-ESAT6在大肠杆菌中的表达,确定rCFP10-ESAT6蛋白抗原在大肠杆菌中的表达形式;采用Chelating Sepharose Fast Flow蛋白纯化试剂纯化重组蛋白.Western blotting及酶联免疫吸附试验(ELISA)分析重组蛋白的免疫原性.结果重组质粒pET28a-CFP10-ESAT6中目的基因测序结果与报道序列相同;在大肠杆菌中以可溶性形式表达;分子量约28kDa,表达量约占菌体总蛋白的46%,纯化后的rCFP10-ESAT6样品经SDS-PAGE和激光密度扫描分析表明其纯度为90%左右,每100 ml培养菌可获得16 mg左右的重组蛋白;Western印迹结果证实重组蛋白与His·tag单克隆抗体及确诊的肺结核病患者血清发生特异免疫反应.ELISA结果分析表明,该重组抗原能区分肺结核患者血清及正常人血清.结论成功地表达和纯化了结核分枝杆菌CFP10-ESAT6融合蛋白,该重组蛋白具有特异的免疫原性.
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初治结核病患者自噬相关基因表达水平的研究
目的 研究初治结核病患者自噬相关基因表达水平.方法 选取2013年12月至2016年3月在首都医科大学附属北京胸科医院就诊的12例初治肺结核病患者作为病例组;选取首都医科大学附属北京胸科医院体检健康的新入职职工和在读学生12名作为对照组.收集研究对象外周血,提取RNA,将RNA逆转录为cDNA,进行实时定量PCR.使用H37Rv标准株感染人外周血单核细胞(THP-1细胞)作为感染组,而未感染H37Rv标准株的THP-1细胞作为未感染组,分别在感染4h和6h使用Trizol法提取RNA,将RNA逆转录为cDNA,进行实时定量PCR检测.实时定量PCR检测使用β-肌动蛋白(β-actin)作为内参基因,测量各个基因的循环阈值(cyclethreshold,Ct),并计算各个基因的△Ct值.不同样品同一基因的检测通过计算两者之间的△Ct值差值,使用2△△Ct比较基因之间的表达水平.结果 病例组Ras蛋白脑组织同源类似物(Rheb)基因△Ct值为8.71±0.58,对照组△Ct值为7.83±0.58,两组相比差异有统计学意义(t=3.74,P-0.001);病例组Rheb基因表达下调.病例组哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)基因△Ct值为11.88±0.97,对照组△Ct值为10.81±1.04,两组相比差异有统计学意义(t=2.60,P=0.016);病例组mTOR基因表达下调.使用2△△ct法比较两组间自噬相关基因表达倍数关系,对照组Rheb基因表达水平是病例组的(1.85±0.91)倍;对照组mTOR基因表达水平是病例组的(2.76±1.56)倍.H37Rv标准株感染THP-1细胞6h后,感染组自噬相关蛋白LC3B基因△Ct值为6.41±0.15,未感染组△Ct值为7.04±0.05,两组相比差异有统计学意义(t=4.50,P=0.046);感染组表达上调.感染组mTOR基因△Ct值为8.73±0.16,对照组△Ct值为10.10±0.20,两组相比差异有统计学意义(t=4.79,P=0.041),感染组表达上调.结论 初治结核病患者患病后Rheb和mTOR基因表达下调,调节细胞的自噬;而H37Rv标准株感染THP-1细胞6h后LC3B和mTOR基因表达上调,调节细胞自噬水平.
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结核分枝杆菌MPT64蛋白的表达、纯化及初步应用
目的获得重组MPT64蛋白，研究其免疫学特性，评价其在结核病血清学诊断中的价值。方法应用基因工程技术表达、纯化MPT64蛋白，通过Western blotting分析其抗原性。分别以结核分枝杆菌PPD或纯化的rMPT64蛋白为抗原，通过ELISA方法及结核病一步法检测血清中抗结核抗体。结果重组质粒pET 15b-MPT64测序表达除83位密码子由CCA突变为CCG外，其余密码子均与报道的相同，但其氨基酸序列无变化。它在大肠杆菌BL21(DE3)细胞内以包涵体形式存在，表达量占菌体总蛋白的20～30%，分子量约26kDa，Western blotting分析它与抗结核分枝杆菌多克隆抗体具有良好的免疫反应性。纯化后的rMPT64样品经SDS-PAGE和光密度扫描分析表明其纯度约为80%左右，每100ml培养菌可获得10mg左右的重组蛋白。以33例正常人血清的OD值+2S为正常界限值，PDD的特异性和敏感性分别为94%(31/33)、63.7%(21/33)、66.7%；rMPT64纯化蛋白分别为 94%(31/33)、30.3(10/33)；一步法分别为88%(29/33)、66.7%(22/23)。结论 pET15b-MPT64大肠杆菌工程菌能以包涵体形式高效表达重组MPT64蛋白，该蛋白具有较高的抗原特异性和免疫反应性。rMPT64纯化蛋白有可能成为结核病血清学诊断的组合抗原之一。
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萎蔫酸铜离子络合物、镉离子络合物的抗结核活性及对结核分枝杆菌基因表达的影响
目的 研究海洋微生物代谢产物萎蔫酸金属铜离子络合物与镉离子络合物体外抗结核活性,以及对Mtb H37Rv基因表达的影响.方法 应用纸片扩散法(Kind-Bauer,K-B法)初步鉴定萎蔫酸铜离子络合物、萎蔫酸镉离子络合物的抗结核活性,重复实验3次；绝对浓度间接法测定萎蔫酸铜离子络合物、萎蔫酸镉离子络合物的低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC),重复实验确定更准确的MIC; Mtb cDNA芯片检测萎蔫酸铜离子络合物、萎蔫酸镉离子络合物处理Mtb组与溶剂对照处理Mtb组表达差异的基因,重复实验一次.结果 萎蔫酸铜离子络合物、萎蔫酸镉离子络合物在卡介苗(BCG)平板抑菌圈直径分别为(30.4±0.6) mm、(30.0±0.8) mm.萎蔫酸铜离子络合物抗Mtb H37Rv的MIC为10μg/ml;对耐多药结核分枝杆菌,萎蔫酸镉离子络合物MIC为7.5μtg/ml,低于S(MIC=25 μg/rnl)和RFP(MIC=25 μtg/ml)；对Mtb临床分离株(0907961,耐S和EMB),萎蔫酸铜离子络合物的MIC(10 μg/ml)低于S(S的MIC为20 μg/ml),萎蔫酸镉离子络合物的MIC(5 μg/ml)均低于S(MIC=20μg/ml)、EMB(MIC=6.4 μg/ml).Mtb cDNA芯片检测发现萎蔫酸铜离子络合物处理组与溶剂对照组比较,有差异表达的基因总数为23条,其中已知功能基因有10条；萎蔫酸镉离子络合物处理组与溶剂对照组比较,有差异表达的基因总数为28条,其中已知功能基因有11条.这些存在差异的基因功能涉及核苷酸、脂质、能量、辅酶、氨基酸代谢,DNA的复制、转录、翻译、翻译后修饰以及细胞膜的生物合成等.结论 萎蔫酸铜离子络合物与萎蔫酸镉离子络合物具有较好的体外抗结核活性,尤其对部分耐药菌株的抑制作用甚至优于抗结核一线用药,可作为抗结核药物的前导化合物；运用基因芯片所探究出的差异表达的基因为进一步深入研究其抗菌作用机制提供了一定的实验依据.
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结核病患者血清中Small RNAs表达谱分析
目的 了解结核病患者血清中Small RNA(sRNA)表达谱的特征,为从Small RNA角度探讨结核病发生、发展的调控机制奠定基础.方法 采用Solexa深度测序技术得到包括miRNA、siRNA、piRNA、rRNA、tRNA、snRNA、snoRNA、repeat associate sRNA、exon或intron降解片段等在内的所有Small RNA.通过与已知数据库进行比对、寻找样品与数据库之间在基因组位置上的overlap等方法,对sRNA进行注释,同时选取没有被注释上的sRNA,使用华大自主开发的软件Mireap预测novel miRNA.结果 非结核病组血清中发现109 630种、2 759 795条Small RNA,其中候选miRNA种数为84、候选miRNA总表达量为1 433;结核病组血清中发现97 614种、1 452 119条Small RNA,其中候选miRNA种数为65、候选miRNA总表达量为755.结论 结核病人与非结核病人血清中的Small RNA表达谱存在种类与数量上的差异.
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不同毒性Mtb菌株对Ⅰ型干扰素基因的诱导作用及其在结核病患者外周血中的表达
目的 研究不同Mtb菌株对Ⅰ型干扰素基因的诱导作用及其在结核病患者外周血中的表达.方法 从2012年2月至2012年8月在深圳市第三人民医院健康体检者中利用随机数字表法抽取30名健康人外周血标本,并提取单个核细胞中分选出CD14+细胞,用重组人巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony stimulating factor,M CSF)刺激,诱导分化为人巨噬细胞,并分别感染Mtb减毒株H37Ra和Mtb标准株H37Rv,应用实时定量PCR(real-time PCR)检测2种菌株感染后Ⅰ型干扰素基因IFNB和IFNA的相对表达量2△△Ct值.此外使用上述方法对同期选取的结核病组(15例)、健康对照组(15例)、Mtb潜伏感染组(15例)的Ⅰ型十扰素基因的相对表达量进行检测.采用GraphPad 4.0软件对数据进行统计处理,两组均数间比较采用t检验,三组均数间比较采用方差分析,以P＜0.05为差异有统计学意义.结果 经H37Rv感染的健康人巨噬细胞的IFNB基因相对表达量2△△Ct值(10.38±2.24)显著高于空白对照组(6.26±3.42),差异有统计学意义(t=2.47,P=0.026);经H37Ra感染的巨噬细胞的IFNB基因相对表达量2△△Ct值(8.92±0.85)与空白对照组(6.26±3.42)比较差异无统计学意义(t=1.84,P=0.09);IFNA相对基因表达量2△△Ct值在H37Rv感染组(5.11±2.31)、H37Ra感染组(5.17±3.40)及空白对照组(4.41±1.69)之间差异无统计学意义(F=0.16,P=0.85).结核病组IFNB基因表达(4.32±1.22)显著高于健康对照组(2.73±1.23),差异有统计学意义(t=3.55,P=0.0014);IFNA基因在健康对照组(3.91±0.75)、Mtb潜伏感染组(4.25±1.03)、结核病组(4.73±1.44)之间表达差异无统计学意义(F=1.93,P=0.064).结论 Mtb的感染可以诱导Ⅰ型干扰素基因的表达,在结核病患者中IFNB基因表达上调显著.
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淫羊藿通过调控多基因表达促进血管平滑肌细胞的凋亡
目的:研究淫羊藿影响血管平滑肌细胞(VSMC)凋亡的机理.方法:取家兔主动脉平滑肌进行细胞培养,培养基中加入不同浓度的淫羊藿后72小时收集细胞,流式细胞仪测定淫羊藿组和对照组的细胞凋亡率,荧光显微镜观察两组凋亡细胞形态变化,基因差示分析系统检测两组细胞多基因表达水平的改变.结果:各浓度的淫羊藿均引起细胞凋亡率高于对照组,并呈现剂量依赖关系;荧光显微镜观察到了典型的凋亡细胞核形态学改变;多基因差示分析显示,淫羊藿正调与人类原粒细胞系的KG-1基因的cDNA序列、人类DNA的CpG岛基因序列同源的基因表达;结论:淫羊藿通过影响多基因表达水平而促进血管平滑肌细胞的凋亡过程.
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bcl-2,p27基因在乳腺癌中的表达及意义
目的探讨bc1-2,p27基因的表达与乳腺癌患者预后的关系及两者的相关性.方法应用免疫组织化学染色的方法,对85例随访5年以上乳腺癌标本进行bcl-2和p27蛋白表达检测.结果bc1-2蛋白表达与乳腺癌患者的腋窝淋巴结转移、组织学分级呈负相关,与生存期、无复发呈正相关.p27的表达与乳腺癌病理组织学分级呈负相关,两者在乳腺癌中的表达无相关性.结论bc1-2蛋白表达与乳腺癌患者的预后关系密切,临床上可用于判断乳腺癌患者的预后.p27蛋白表达与乳腺癌患者预后的关系尚需进一步的研究.
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11β-羟基类固醇脱氢酶2基因表达作为葡萄籽提取物预防乳腺癌靶点的探讨
目的 研究11β-羟基类固醇脱氢酶2型基因(11β-HSD 2)表达在癌症发生及预防过程中的变化,探讨该基因作为葡萄籽提取物(GSE)抑制乳腺上皮细胞慢性癌变过程中靶点的可能性.方法 建立低浓度致癌物NNK和B[a]P刺激乳腺上皮细胞MCF 10A癌变及GSE抑制乳腺上皮细胞癌变过程的细胞模型,研究瞬时转染了靶向11β-HSD 2基因的小RNA后的癌变细胞的生物学特性改变,并用Western blot分析11β-HSD 2基因在癌变细胞和经GSE抑制后细胞中的表达情况.结果 使用靶向11β-HSD 2基因的小RNA抑制后的癌变细胞,在低生长因子培养基中形成细胞集落的能力降低,与正常乳腺上皮细胞相当.11β-HSD 2基因在致癌物慢性刺激的细胞中呈现高表达,而在正常乳腺上皮细胞和经GSE与致癌物联合处理的细胞中基本不表达或表达水平很低.结论 抑制癌变细胞中11β-HSD 2基因的表达可使细胞的生物学表现趋于正常,GSE抑制细胞癌变的机制可能是通过抑制11β-HSD 2基因的表达实现,11β-HSD 2基因可能是GSE抑制乳腺上皮细胞癌变的分子靶点.
关键词： 11β-羟基类固醇脱氢酶2型基因 基因表达 乳腺细胞 癌变 癌症预防 -
DEHP暴露对子代大鼠空间学习记忆能力和海马突触可塑性相关蛋白基因表达的影响
目的 通过哺乳期暴露邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(di-2-ethylhexyl phthalate,DEHP),研究DEHP对子代SD雄性大鼠空间学习记忆能力和突触可塑性相关蛋白基因表达的影响,初步探讨其机制.方法 成熟SD大鼠妊娠后随机分为溶剂对照组(橄榄油)、DEHP低剂量组(5 mg/kg BW)、中剂量组(50 mg/kg BW)和高剂量组(500mg/kg BW).分娩后第1天至断乳,母鼠经口连续灌胃染毒21 d.待子代大鼠出生后第65～ 70天,进行Morris水迷宫测试;Real-Time PCR法检测海马突触可塑性相关蛋白基因mRNA的表达情况.结果 Morris水迷宫定位航行试验中,500 mg/kg BW剂量组潜伏期比对照组长,差异有统计学意义(P＜0.05);在空间探索试验中,500 mg/kgBW剂量组在目标象限路程百分比、目标象限停留时间百分比、穿越平台次数方面,与对照组相比有所降低,差异均有统计学意义(P＜0.05).Real-Time PCR结果显示,暴露于50、500 mg/kg BW组雄性子代大鼠海马内突触可塑性相关蛋白基因PSD95、CREB、PKA、CAMKII mRNA表达水平下调(P＜0.05);500 mg/kg BW剂量组海马内突触可塑性相关蛋白基因BDNF mRNA表达水平下调(P＜0.05).结论 一定剂量DEHP哺乳期暴露,可影响子代大鼠的神经系统发育,对空间学习记忆能力造成损害.海马内突触可塑性相关蛋白基因PSD95、CREB、PKA、CAMKII、BDNF mRNA表达受到抑制,可能是其发生作用机制之一.
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富含黄酮类物质果蔬汁对大鼠肝脏中氧化损伤相关Ⅱ相代谢酶基因mRNA表达的影响
目的 探讨富含黄酮类物质的果蔬汁对大鼠肝脏内氧化损伤相关Ⅱ相代谢酶基因表达的影响.方法 SPF级雄性成年大鼠54只按体重随机分为对照组、低剂量果蔬汁干预组和高剂量果蔬汁干预组,对照组每日给予生理盐水灌胃、干预组给予低剂量和高剂量果蔬汁灌胃.干预5周后,腹主动脉采血用于生化指标检测;取肝脏组织检测基因表达情况.RT-PCR方法检测肝脏中氧化损伤相关Ⅱ相代谢酶mRNA的表达情况;试剂盒法测定血清总抗氧化能力(T-AOC)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)含量.结果 与对照组相比,低、高剂量果蔬汁饮食干预组大鼠的血清抗氧化能力增强,同时上调肝脏中药物代谢Ⅱ相酶人醌NADH脱氢酶(NQO1)和谷氨酰-半胱氨酸连接酶催化亚基(GCLC) mRNA的表达(P＜0.05),但对GSTP1、GCLM、GSTM2、GSTA2Ⅱ相代谢酶基因mRNA表达无影响.结论 富含黄酮类物质果蔬汁可以增强大鼠血清抗氧化能力,同时诱导肝脏中抗氧化Ⅱ相代谢酶NQO1及GCLC基因mRNA的表达.
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染料木黄酮对β淀粉样肽25-35介导的PC12细胞凋亡过程相关基因表达的影响
目的 研究不同剂量的染料木黄酮(Gen)对β淀粉样肽25-35(Aβ25-35)介导的PC12细胞凋亡的保护作用,并探讨了可能的分子调控机制.方法 PC12细胞传代培养48 h后,选取生长良好的同批次细胞,随机分为5组,即对照组、Aβ模型组(20 μmol/L),Gen干预组(25,50和100 μmol/L),Gen预处理2h后,经Aβ25-35染毒,建立细胞损伤模型;24 h后,收集细胞,用逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)法检测PC12细胞caspase-3,caspase-9,bcl-xl,bad和LRP5基因的表达.结果 与对照组相比,Aβ组细胞caspase-3,caspase-9和bad mRNA表达上调,其差异具有统计学意义(P <0.05),bcl-xl,LRP5 mRNA表达下调,差异具有统计学意义(P<0.05);与Aβ组相比,Gen高剂量组可显著下调PC12细胞caspase-3,caspase-9和bad mRNA表达(P <0.05);Gen高剂量组可显著上调bcl-xl,LRP5 mRNA,差异有统计学意义(P<0.01).结论 Gen可能是通过下调细胞凋亡促进基因caspase-3,caspase-9和bad mRNA表达,上调细胞凋亡抑制基因bcl-xl,LRP5 mRNA表达,拮抗Aβ诱导的神经细胞凋亡,从而发挥神经细胞保护作用.
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转基因WRI1稻米的脂肪酸基因表达效果
目的 分析比较5种WRI1转基因稻米粗脂肪表达效果.方法 将椰子中的调节脂肪酸合成基因-WRI1基因导入粳稻品种中花11中,获得再生植株ZZWR1、ZZWR2、ZZWR3、ZZWR4和ZZWR5,用索氏提取法提取转基因稻米及其对照稻米中的脂肪,再将粗脂肪进行脂肪酸甲酯化,并用气相色谱法-质谱联用法(GC-MS)对其进行定性定量测定.结果 与对照组的粗脂肪含量2.59％相比,ZZWR1、ZZWR2、ZZWR4的粗脂肪含量范围为2.62％ ～2.77％,其中ZZWR4的粗脂肪含量高(2.77％),RSD=0.96％,与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.01).GC-MS测定棕榈酸甲酯、硬脂酸甲酯和油酸甲酯含量,其中油酸甲酯的含量高.结论 椰子中的WRI1基因的导入可提高稻米脂肪含量,但不同WRI1基因的插入位点可能会影响原有脂肪酸的表达,ZZWR4植株插入基因位点比较得当,具有良好的基因表达效果.
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染料木黄酮对星形胶质细胞氧化损伤中Nrf2/ARE通路相关因子表达的调节作用
目的 研究染料木黄酮(Gen)对β淀粉样肽25-35(Aβ25-35)介导的星形胶质细胞氧化损伤中Nrf2/ARE通路相关因子的调节作用.方法 以星形胶质细胞(C6细胞系)作为研究对象,用Aβ25-35染毒制备氧化损伤模型.实验共分4组:对照组、Aβ组(Aβ模型组)、Gen干预组(Gen+ AB组)及Gen组(Gen单独处理组)；采用RT-PCR方法和Western Blot方法检测星形胶质细胞核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶(HO-1)、γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶催化亚单位(GCLC)及锰超氧化物歧化酶(MnSOD)基因和蛋白的表达.结果 与Aβ组比较,Gen干预组和Gen组星形胶质细胞Nrf2、HO-1、GCLC及MnSOD基因和蛋白表达水平显著上调(P＜0.05).结论 染料木黄酮可能通过调控Nrf2/ARE通路来拮抗Aβ325-35介导的星形胶质细胞氧化损伤作用.
关键词： 染料木黄酮 β淀粉样肽25-35 Nrf2/ARE通路 星形胶质细胞 基因表达 调节 -
MiR-145在胶质瘤中的表达及其与患者临床病理特征的关系
目的:探究MiR-145在胶质瘤中的表达及其与患者临床病理特征的关系.方法:从我院2010年1月至2012年12月收治的胶质瘤手术患者中选取其中的51例进行研究,同期选取25例正常脑组织标本,检测MiR-145的表达水平,同时检测患者的累积生存率.结果:MiR-145在胶质瘤中表达水平明显低于在正常脑组织中的表达水平(P＜0.05),有统计学意义.MiR-145表达与性别、年龄、肿瘤大小等基本临床特征无相关性(P＞0.05),无统计学意义;MiR-145表达与肿瘤分级、KPS评分、生存累积时间等存在明显关系(P＜0.05),有统计学意义.MiR-145低表达胶质瘤患者死亡风险比(HR)明显高于MiR-145高表达胶质瘤患者(P＜0.05),有统计学意义.结论:MiR-145在胶质瘤中有着很强的抑制肿瘤的作用,胶质瘤中的MiR-145的表达水平异常低,其与患者的生存时间相关性明显.
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明胶酶A mRNA表达对胃癌侵袭和转移的影响
目的探讨明胶酶A mRNA表达与胃癌侵袭和转移的关系.方法采用Northernblot技术检测32例胃癌组织中明胶酶A mRNA表达.结果正常胃、癌旁和胃癌组织明胶酶A mRNA表达阳性率分别为10.0%、28.6%和84.4%.早期胃癌不表达,进展期胃癌高表达.有浆膜侵袭和淋巴结转移的胃癌组织,明胶酶A mRNA显著高表达.结论明胶酶A mRNA高表达促进胃癌的侵袭和转移,检测明胶酶A mRNA表达可作为判断胃癌侵袭和转移指标.
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胃癌组织中膜型1-基质金属蛋白酶的基因表达
目的在基因水平探讨膜型1-基质金属蛋白酶(MT1-MMP)与胃癌侵袭和转移的关系.方法采用Northern blot和原位杂交技术检测了42例胃癌组织中MT1-MMP mRNA的表达.结果正常胃组织几乎不表达MT1-MMP mRNA,胃癌组织高表达.早期胃癌低表达,而进展期胃癌显著高表达(P＜0.01).浆膜侵袭者较非浆膜侵袭者的表达显著,二者差异有非常显著性意义(P＜0.01),淋巴结转移者较非淋巴结转移者的表达显著,二者差异有非常显著性意义.结论MT1-MMPmRNA表达参与了胃癌侵袭和转移过程,检测MT1-MMP mRNA表达可作为判断胃癌恶性表型程度的有用指标.
关键词： 胃肿瘤 金属蛋白酶/膜型1-基质金属蛋白酶 基因表达 -
胃病变中幽门螺杆菌感染与癌基因蛋白表达及凋亡研究
目的:研究幽门螺杆菌(Hp)感染的胃癌(GC)发展中c-met蛋白表达及细胞凋亡的关系和对胃癌预后意义.方法:145例经病理证实,不同胃黏膜病变采用免疫组化检测c-met基因表达及Warthin-starry法检测Hp感染.采用原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡.结果:在浅表性胃炎(CSG)、萎缩肠化生胃炎(CAG+IM)、异型增生(DYS)、早期GC和进展期GC中,c-met基因表达率分别为25.53%、51.28%、61.54%、66.67%和68.42%,CAG+IM、DYS、GC均显著高于CSG(P＜0.05).凋亡指数(AI)分别为(4.55±2.33)%、(6.43±5.60)%、(6.45±5.12)%、(6.55±4.80)%、(8.84±5.63)%,进展期GC显著高于CSG(P＜0.05).胃黏膜凋亡指数与c-met表达强度有密切相关(P＜0.05).c-met阳性表达与胃癌组织类型、浆膜浸润和淋巴结转移密切相关,而且BorrmannⅣ明显高于早期胃癌和Borrmann Ⅰ、Ⅱ(P＜0.05).c-met阳性表达与肠型胃癌Hp感染有关.CAG+IM、DYS和GC组c-met阳性表达中Hp感染者明显高于阴性者.Hp阳性者5年存期显著短于Hp阴性者.结论:Hp感染和c-met表达与胃黏膜增殖和恶化有关,且与凋亡有相关性.Hp感染与胃癌预后有关.
关键词： 胃肿瘤 螺杆菌感染 原癌基因蛋白质c-met 凋亡 基因表达 -
颈髓损伤后GAP-43及内皮素mRNA表达与血脊髓屏障损害的研究
目的:为了探讨颈髓损伤后生长相关蛋白(GAP-43)mRNA及内皮素-1(ET-1)mRNA与血脊髓屏障损害的关系.方法:应用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测颈髓损伤后颈髓组织GAP-43mRNA及ET-1mRNA表达.结果:伤后6～72h颈髓组织GAP-43 mRNA及ET-1 mRNA均较对照组明显增高(P＜0.01).结论:颈髓损伤后GAP-43 mRNA及ET-1 mRNA表达水平增加与伤后血脊髓屏障损害的发生、发展密切相关,生长相关蛋白、内皮素在颈髓损伤后血脊髓屏障损害的病理生理过程中起重要作用.
