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染氟成骨细胞差异表达基因的cDNA克隆
目的探讨过量氟对成骨细胞基因表达的影响.方法采用mRNA差异显示聚合酶链反应(DD-PCR)技术,对染氟2周(氟化钠2.0 mmol/L)的成骨细胞与正常成骨细胞之间基因的差异表达进行比较分析.结果在已克隆到的6个差异表达的基因片段中,大鼠核糖体蛋白L5基因、大鼠Na+-K+-ATP酶β3基因、大鼠细胞核定位信号蛋白质受体α2基因和大鼠高尔基体p28基因在染氟成骨细胞中低表达,小鼠遍在蛋白缀合酶基因及我们发现的1个新基因片段在染氟成骨细胞中表达上调.结论成骨细胞染氟后基因表达发生改变,这些基因多与蛋白质的合成、转运及加工有关,提示过量氟可通过改变这些基因的表达而影响成骨细胞的蛋白质合成.另发现1个与过量氟相关的新基因.
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微囊藻粗毒素染毒大鼠肝脏细胞的凋亡及相关基因的表达
目的研究亚急性微囊藻毒素染毒后,大鼠肝细胞凋亡及Bcl-2和p53基因在肝细胞凋亡过程中的作用,进而探讨微囊藻毒素肝毒性机制.方法将SD大鼠随机分为4组,每组雌雄各10只,经35 d腹腔染毒后,剖杀、立即取肝脏,应用原位末端标记法观察亚急性染毒大鼠肝细胞凋亡,ABC免疫组化技术检测Bcl-2和P53蛋白表达.结果发现在4 μg*kg-1*d-1剂量下,微囊藻毒素引起肝细胞凋亡与对照组相比无明显改变;但在8 μg*kg-1*d-1和12 μg*kg-1*d-1的染毒剂量下,微囊藻毒素可明显引起大鼠肝细胞凋亡,凋亡率分别为(2.90±0.81)%和(3.00±0.40)%;剂量12 μg*kg-1*d-1时,肝细胞Bcl-2蛋白表达较对照组减弱;各染毒组P53蛋白的表达随着染毒剂量的增高较对照组增强.结论微囊藻粗毒素在较低剂量下主要引起肝细胞凋亡,Bcl-2和p53基因在其引起凋亡的过程中可能起着一定的作用.
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硒对镉诱导的大鼠肝细胞原癌基因表达的影响
目的研究亚硒酸钠对氯化镉诱导的在体大鼠肝细胞原癌基因c-myc、c-fos、c-jun表达增强的影响.方法选用雄性SD大鼠,每组5只,腹腔注射染毒,用Northern斑点杂交方法观察.用5 μmol/kg Na2SeO3分别与5 μmol/kg、10 μmol/kg、20 μmol/kg CdCl2联合作用.结果观察到Na2SeO3对CdCl2所致大鼠肝细胞c-myc、c-fos、c-jun表达增强的拮抗效应.结论一定剂量的亚硒酸钠能抑制一定剂量的氯化镉引起的大鼠肝细胞原癌基因c-myc、c-fos、c-jun表达增强.
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氟化钠对肾小管上皮细胞骨桥蛋白与bax、bcl-2基因表达的影响
目的研究氟化钠对肾小管上皮细胞骨桥蛋白与bax、bcl-2基因表达的影响,以探讨氟对肾损害的发生机制.方法采用原代肾小管上皮细胞的培养技术,利用逆转录-聚合酶链式反应测定bax、bcl-2基因和骨桥蛋白在氟处理的情况下细胞的mRNA表达水平的变化.结果氟处理48 h后7.5、12.5 mg/L组的肾小管上皮细胞bax的mRNA水平(吸光度比值分别为2.37±0.18和2.64±0.19)比对照组(吸光度比值为1.26±0.16)有升高;在5、7.5 mg/L组的bcl-2的mRNA表达水平(吸光度比值分别为0.80±0.22和0.71±0.22)比对照组(1.19±0.03)下降.与对照组(骨桥蛋白吸光度比值1.49)比较,氟处理48 h后肾小管上皮细胞的骨桥蛋白mRNA水平随着染氟量(≤7.5 mg/L)的增加而逐渐升高,在7.5 mg/L染氟量处理下,骨桥蛋白mRNA水平(吸光度比值2.01±0.40)与对照组比较,差异有统计学意义.结论氟化钠可促进bax和抑制bcl-2的表达使细胞凋亡,随着氟浓度的升高,凋亡率逐渐升高;在一定的氟剂量下骨桥蛋白表达增多,发挥保护肾脏作用.
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1800 MHz射频电磁场对人乳腺癌细胞基因表达的影响
目的了解GSM 1800 MHz射频电磁场对人乳腺癌细胞株MCF-7细胞基因表达谱的影响,筛选射频电磁场的可能反应基因,判断射频电磁场对细胞功能的影响.方法体外传代培养的MCF-7细胞分为2组,分别接受GSM 1800 MHz射频电磁场辐照和假辐照24 h,辐照组细胞受比吸收率为2.0 W/kg或3.5 W/kg的射频电磁场间断辐照(5 min开、10 min关),辐照结束后,立即抽提细胞总RNA,用基因芯片进行全基因转录组水平分析,芯片实验数据采用MAS 5.0软件和DMT 3.0软件进行分析.采用定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)验证基因芯片分析筛选到的候选差异表达基因.结果 MAS软件分析结果表明,MCF-7细胞受辐照后,有少量基因的表达水平发生变化.用DMT软件进行重复性和一致性分析后,在比吸收率为2.0 W/kg的射频电磁场辐照组,未找到100%一致变化的差异基因;在比吸收率为3.5 W/kg的射频电磁场辐照组,找到5个100%一致变化的候选差异基因,但定量RT-PCR结果未能验证基因芯片分析筛选到的差异基因.结论在本实验条件下,未能检测到GSM 1800 MHz射频电磁场明显影响MCF-7细胞的基因表达谱,提示所用的射频电磁场辐照不影响本研究中所用的MCF-7 细胞功能,或该MCF-7细胞对射频电磁场辐照反应性低.
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饮食诱导肥胖有抵抗性的大鼠解偶联蛋白-2基因的表达
目的探讨高脂饮食诱导肥胖抵抗大鼠褐色脂肪组织(BAT)、白色脂肪组织(WAT)和骨骼肌解偶联蛋白-2(UCP2)基因的表达.方法采用50只健康雄性SD大鼠,随机分为对照组和高脂组,分别用基础饲料和高脂饲料喂养13周,然后根据体重筛选出DIO-R和DIO组观察饮食诱导肥胖抵抗(DIO-R)大鼠体重与能量摄入量的变化,应用RT-PCR方法测定大鼠褐色脂肪组织、白色脂肪组织和骨骼肌UCP2 mRNA表达水平.结果饮食诱导肥胖(DIO)大鼠体重与总能量摄入量(489.7±20.5)g、(34 363±1 465)kJl明显高于DIO-R大鼠(425.1±27.1)g,(31 693±946)kJ.白色脂肪组织中,DIO-R大鼠UCP2mRNA的峰面积为(352±30)mm2,DIO大鼠UCP2mRNA的峰面积为(101±12)mm2;DIO及DIO-R大鼠骨骼肌UCP2mRNA的峰面积分别为(130±15)mm2、(170±12)mm2; DIO-R大鼠和DIO大鼠褐色脂肪组织UCP2mRNA的峰面积为(124±14)mm2、(147±19)mm2.结论 DIO-R大鼠白色脂肪组织UCP2 mRNA表达明显增加,提示肥胖抵抗与组织特异增加UCP2的表达相关.
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维生素A和锌营养水平与小鼠胚胎HOX基因表达的相关性
目的研究不同维生素A、锌营养水平与小鼠胚胎HOX C4(3.5)基因表达的相关关系.方法昆明种雌鼠随机均分为3组:缺乏组喂饲无维生素A和低锌饲料;补充组:开始时饲料同缺乏组,母鼠受孕第7天改为富含维生素A和锌的饲料;正常组自始至终喂饲正常饲料.动物喂养至出现明显维生素A、锌缺乏症状后进行交配.受孕第12天取出相应数量孕鼠处死,取样测生化指标;取胚胎测定HOX C4(3.5)基因mRNA表达量.结果缺乏组、补充组和正常组母鼠血清维生素A水平均值分别为0.44 μmol/L、1.03 μmol/L和1.40 μm ol/ L,股骨锌含量均值分别为124.3 mg/kg、152.1 mg/kg和193.8 mg/kg,差异有显著性. 胚胎HOX C4(3.5)基因表达也显著升高.结论小鼠机体维生素A 和锌营养水平与胎鼠HOX C4(3.5)基因表达呈高度正相关,各项指标相关系数为0.78～0 .99.
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高渗应激早期伤寒沙门菌RpoE调节因子对基因表达的影响
伤寒沙门菌是一种革兰阴性肠道致病菌,常通过污染的食物进入体内,可造成严重全身性感染[1-2].作为食源性致病菌,必须遭遇人体消化道的高渗环境,但目前对其克服高渗应激的具体机制尚不清楚.RpoE调节因子由rpoE基因编码,是肠杆菌科细菌中一个重要的σ因子,在大肠杆菌响应高渗应激时发挥着重要的作用[3],在伤寒沙门菌中也应当十分重要.
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职业接触抗肿瘤药物对外周血细胞凋亡的影响
为了解抗肿瘤药物(antineoplastic drugs,AD)的职业危害,笔者研究了AD对职业接触护士外周血粒细胞、单核细胞凋亡及fas、bcl-2基因表达的影响.
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组蛋白ADP-核糖基化及其生物学效应
与原核生物不同，绝大多数真核生物DNA以结构复杂、高度折叠的染色质为载体，这使得两者在基因表达上具有很大的差异。染色质以核小体为基本组成单位，每个核小体包括一个八聚体的组蛋白（两分子的H2 A-H2 B二聚体，两分子的H3和两分子的H4）以及缠绕其上1.75圈的长约146 bp的DNA，核小体之间以40～60 bp的DNA连接，组蛋白H1与之结合。八聚体的三维结构为球状，而组蛋白亚基的氨基端则游离出来，称为氨基端尾巴（或组蛋白尾巴）。氨基端尾巴上的许多残基可以被共价修饰，不同位点上的不同修饰可形成大量特殊信号。组蛋白的翻译后修饰不仅与染色体的重塑和功能状态紧密相关，而且在决定细胞命运、细胞生长以及致癌作用的过程中发挥着重要的作用，如组蛋白磷酸化就在有丝分裂、细胞死亡、DNA 损伤修复、DNA 复制和重组过程中发挥着直接的作用。
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基因芯片技术及其在食品检测中的应用
1996年,Schena等[1]首次制出世界上第一块基因芯片,并证实了基因芯片的实用价值和应用潜力;基因芯片一出现即引起科研学术界的广泛关注,并日益成为遗传作图、DNA测序、基因表达、突变检测、基因诊断等基因分析重要的技术平台.
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利用基因芯片检测二异氰酸甲苯酯所致小鼠基因表达
接触二异氰酸甲苯酯(TDI)可引起过敏反应,包括接触性皮炎、哮喘、刺激和咳嗽等,但TDI及其他许多化学物诱导过敏反应的分子机制尚不十分清楚.我们采用基因芯片技术研究了二异氰酸甲苯酯诱导的过敏反应的基因表达情况.
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多重基因表达遗传分析系统在转基因食品检测中的应用
目前,国内外对转基因食品检测技术种类较多[1-2],常用的PCR大多是针对单个基因的,费时且成本较高.笔者基于多重基因表达(gene expression profiler,GEXP)遗传分析系统,建立了一种新型多重PCR技术,可同时检测转基因食品中常见的6种外源基因(nos、Camv35s、epsps、pat、Fmv35s、bar).
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大剂量维生素A对HOX C4基因表达的影响
摄入维生素A过多可在人体内蓄积而引起中毒.妊娠早期大剂量维生素A进入人体,可通过胎盘屏障作用于胎盘或胎儿,使胎儿的生长发育延缓或使畸胎率明显增加.动物实验表明,大剂量维生素A可使孕鼠流产.为此,我们研究了大剂量维生素A对HOX C4(3.5)基因表达的影响.
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滋肾活血解毒方对慢性肾功衰竭大鼠肾TGF-β1、ET-1mRNA的影响
转化生长因子-β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1)和内皮素(Endothelin et)均为多功能的细胞生长因子,可刺激细胞外基质增生,是肾小球硬化的重要调节因子,在肾脏疾病的发生发展中发挥重要作用.我们的前期研究表明,滋肾活血解毒方具有调节CRF患者血中ET水平及改善肾功能的作用[1,2]
关键词： 滋肾活血解毒方 慢性肾功能衰竭 转化生长因子-β1内皮素-1 基因表达 -
一效膏治疗糖尿病小鼠皮肤溃疡及其机制的研究
目的 探讨一效膏对糖尿病小鼠皮肤溃疡的治疗作用及机制.方法 84只雄性SPF清洁级小鼠随机分成实验组、阳性对照组和模型对照组,每组28只.经腹腔注射链脲佐菌素(STZ)并切取其背部皮肤制备糖尿病小鼠溃疡模型,于治疗后第1、2、3、4周评估各组小鼠的创面愈合率及CD31、VEGF和HIF-1的基因表达.结果 实验结束时三组创面愈合率分别为:100%,91.8%,86.8%(P<0.05),实验组CD31、VEGF和HIF-1表达强于阳性对照组,且两组均强于模型对照组(P<0.01).结论 一效膏能够促进糖尿病小鼠皮肤溃疡愈合,主要机制为增强组织中基因表达水平,促进肉芽组织增生和血管新生.
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基于脑缺血动物模型的针刺作用机制及选穴规律的挖掘研究
目的 运用数据挖掘方法 分析针刺实验文献中针刺对脑缺血动物模型的分子生物学作用机制的选穴规律.方法检索1978年1月-2015年12月中国期刊全文数据库(CNKI)、中国生物医学文献数据库(SinoMed)、万方科技数据库有关针刺动物实验的文献,筛选出与针刺对脑缺血动物模型基因蛋白表达影响相关的文献,人工提取文献中的穴位和基因蛋白指标,规范化处理后进行频次统计、关联规则及复杂网络计算分析并可视化展示.结果 获得符合研究范围的文献350篇;获得穴位79个,频次高为百会;获得基因蛋白180个,频次高为BCL2;关联规则计算得常用组穴为足三里、曲池;复杂网络计算得与脑缺血损伤或康复机制关系较密切的基因/蛋白为热休克蛋白70、BCL2、CASP3、BCL2相关X蛋白.结论 针刺穴位可通过多条途径治疗缺血性脑血管疾病,穴位选择主要以督脉和阳明经的穴位为主.
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首乌益智胶囊对脑缺血再灌注大鼠学习记忆和海马β淀粉样前体蛋白、早老素1 mRNA表达的影响
目的：探讨首乌益智胶囊对脑缺血再灌注大鼠学习记忆和早老素1（PS1）、β淀粉样前体蛋白(APP)mRNA表达的影响。方法80只大鼠按体质量随机分为假手术组、模型组、首乌益智胶囊组、脑复康组，每组20只。采用大脑中动脉闭塞法制作脑缺血再灌模型。造模后7 d，首乌益智胶囊组和脑复康组分别给予首乌益智胶囊溶液(52 mg/ml)、脑复康溶液(28 mg/ml)灌胃，均为1 ml/(100 g?d)，共28 d，模型组和假手术组等体积生理盐水灌胃。采用Morris水迷宫评价学习和记忆；采用实时荧光定量PCR检测大鼠海马PS1和APP mRNA表达。结果水迷宫实验显示，模型组大鼠逃避潜伏期较假手术组[(12.98±0.70)s比(9.43±0.78)s]显著延长，穿越平台次数较假手术组[(5.08±0.39)次比(7.62±0.43)次]显著减少，首乌益智胶囊组逃避潜伏期较模型组[(9.77±0.58)s比(12.98±0.70)s]显著缩短(P均＜0.01)，穿越平台次数较模型组[(7.40±0.44)次比(5.08±0.39)次]显著增加(P均＜0.01)。首乌益智胶囊组海马PS1和APP mRNA 表达[(0.99±0.01)比(1.08±0.03)]均较模型组[(1.06±0.03)比(1.12±0.04)]显著降低(P＜0.05或0.01)。结论首乌益智胶囊可抑制脑缺血再灌大鼠海马PS1和APP mRNA表达，改善学习和记忆。
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同病异证H22肝癌小鼠甲状腺AC-cAMP信号通路基因差异表达的特征
目的 观察同病异证H22肝癌小鼠甲状腺AC-cAMP信号通路基因差异表达的特征.方法 采用小鼠计量化四诊和辨证方法及GeneChip Mouse Exon 1.0 ST Array等技术,观察肿瘤邪毒证、气虚证甲状腺激素生成和释放相关AC-cAMP信号通路及相关基因表达特征.结果 ①一些基因相对关键,Tg和转录因子Pax8等在肿瘤发生早期已下调,TSHr在邪毒证下调、气虚证略上调.②多数基因表现为气虚证表达量略大于邪毒证,包括甲状腺主要标志性基因Nis和Tpo、腺苷酸环化酶AC、转录因子Ttf1和Ttf2,PKA催化亚基Prkaca等;③其他基因在气虚证、邪毒证互有高低.结论 同病异证H22肝癌小鼠甲状腺AC-cAMP途径,TSHr、AC、Pax8、Ttfl、Titf2、Tg、Nis、Tpo等重要基因转录特征具有一致性,提示邪毒壅盛证者甲状腺功能处于抑制状态.
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黄芪对梗阻性黄疸幼鼠肝损伤和TGF-β1表达的影响
目的 建立幼鼠梗阻性黄疸模型,对模型鼠应用黄芪干预,观察胆道梗阻后肝功能、肝细胞组织学和TGF-β1 mRNA表达的改变,探讨黄芪对上述指标的影响.方法 将40只Wistar幼鼠随机分为正常对照组、假手术组、OJ组和OJ+A组,各10只.OJ组鼠于近肝门处游离并结扎胆总管,假手术组仅做游离不结扎胆总管.OJ+A组术后1 d开始腹腔注射黄芪注射液(250mg/100g体重)共7 d,其余组相同时间腹腔注射生理盐水0.5 ml.检测实验鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆汁酸(TCA)及肝组织病理形态学,应用RT-PCR技术检测肝组织TGF-β1 mRNA表达,对所得数据进行统计学处理.结果 ①OJ组、OJ+A组AST、ALT、TCA均显著高于正常对照组和假手术组,P＜0.01.②对照组和假手术组肝小叶结构正常,肝细胞索排列规则有序,未见变性、坏死,肝窦与汇管区成纤维细胞少见;OJ组肝细胞淤胆变性,糖原蓄积,脂肪变性.肝细胞胞浆疏松化,气球样变.易见枯否细胞,汇管区纤维组织增生,可见纤维母细胞.OJ+A组肝细胞胞浆红染,嗜酸性变,肝细胞变性减轻.③OJ组肝组织TGF-β1 mRNA基因表达显著高于对照组和OJ+A组,均P＜0.05.结论难度梗阻性黄疸幼鼠模型肝脏 结构和功能指标显著改变.幼鼠胆管结扎8 d,TGF-β1 mRNA表达增强.应用黄芪对梗阻性黄疸诱发的肝脏损害有保护作用.
关键词： 梗阻性黄疸 黄芪 肝损伤 基因表达 TGF-βI mRNA
