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乙型肝炎DNA疫苗研究进展
DNA疫苗也有基因疫苗、核酸疫苗、DNA免疫、基因免疫等各种名称和相关概念.有人将DNA疫苗称为第三代疫苗.第一代疫苗以Jenner用牛痘预防天花为代表,人类从此开始摆脱许多疾病的困扰.第二代疫苗是运用基因重组技术,以特定的基因表达产生的抗原作为疫苗,重组乙型肝炎疫苗就是典型例子.DNA疫苗则是将编码目的抗原的基因与载体重组以后,经不同途径将基因直接转入机体细胞内,利用宿主细胞内的表达加工机构合成抗原,从而激发体液免疫和细胞免疫.近年来,DNA疫苗在打破HBV慢性感染的免疫耐受方面取得了一定的进展,对乙型肝炎及HBV无症状携带状态的临床治疗提供了值得探索的新途径.
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采用集合转化的方法构建HIV-1蛋白酶区和反转录酶区T-A克隆载体
DNA重组技术是将两个或多个单独的DNA片段连接起来产生一个能在特定宿主中自主复制的DNA分子。重组DNA分子简单的构建方法是将基因片段克隆到质粒或噬菌体等克隆载体上。常用的质粒载体有pBR322、pUC和pGEM等。这些载体含有不同的多克隆位点,适于将含有不同酶切位点的DNA片段连接起来[1]。
获得性免疫缺陷综合征(acquired immune defi-ciency syndrome, AIDS)又称艾滋病,是由人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus, HIV)引起的一种严重危害人类健康的致死性传染病。在HIV感染的所有阶段,都有持续高水平的HIV复制[2]。这种病毒的持续复制与耐药的发生和发展密切相关。HIV-1为单链RNA病毒,基因组全长约9.8 kb,中央编码区由3个结构基因gag、pol、env组成,其中pol基因片断覆盖 HIV 蛋白酶和反转录酶的编码区,目的片段长度为1865 bp[3,4]。我们采用集合转化方法对HIV-1反转录酶区进行T-A克隆,以得到重组质粒,为表型耐药下游实验摸索一套较为成熟的方法,报告如下。 -
原发性肝癌免疫及基因治疗现状
近年来,由于分子生物学的迅猛发展,以及基因重组技术的进步,使得肿瘤的生物治疗成为继手术、放疗、化疗之后的第四种肿瘤治疗模式.肿瘤免疫治疗与基因治疗作为生物治疗的方式更充满了生机和活力.本文就国内外有关肝癌免疫治疗与基因治疗研究的热点作一综述.
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人钙调素基因表达研究及应用
主要获得以下成果:1.用基因重组技术在大肠杆菌DH5α中高效表达并纯化重组人钙调素(rhCaM)蛋白.
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新型防龋疫苗——变形链球菌基因疫苗防龋应用基础研究
1.主要研究内容:(1)基因疫苗的构建;通过基因重组技术成功地构建了含主要致龋菌变形链球菌毒力因子基因的重组质粒pcDNA3-pac、pcDNA3-gtfB、pcDNA3-pacA和pcDNA3-pacP.(2)基因疫苗的鉴定:经双酶切、测序等分析证实目的基因片段插入相位正确,未改变其阅读框架.
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基因工程技术在大环内酯抗生素及硫霉素改造中的应用
1.内容简介:本成果涉及利用基因重组技术研制新抗生素-丙酰螺旋霉素及对其他抗生素结构改造的探讨.本研究的总体思路是在大环内酯类抗生素生物合成途径的基础上,对其结构进行改造以提高其体内活性,并简化生产工艺.具体目标是利用基因重组技术使螺旋霉素4"-OH丙酰基化.根据报道,螺旋霉素4"酰基碳链延长可以提高螺旋霉素的脂溶性,并增强其在体内的活性.为此,我们利用与螺旋霉素生物合成途径相似的16元环大环内酯抗生素-麦迪霉素,将其4"丙酰基转移酶基因克隆,然后转入螺旋霉素产生菌中使之表达.经发酵、提取、纯化及多种光谱(紫外、红外、质谱、高压液相、1H、13C核磁共振等)鉴别,确证其主要产物为4"-丙酰螺旋霉素Ⅲ,Ⅱ.现已证明丙酰螺旋霉素为新的有效抗生素.
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酶的职业性致敏效应
酶是由生物体(细菌、真菌等)所产生的大分子蛋白,相对分子质量通常在20 000~483 000之间.酶作为催化剂,可以高度特异地增加化学反应的速率,而DNA重组技术和发酵技术的发展大大增强了工业酶在生产中的作用,同时可减少生产成本.因而,广泛应用于生产中.据估计,2000年全球工业酶销售额达15亿美元[1].按其用途,工业酶可分为三类:第一类主要用于洗涤剂、淀粉、纺织品、皮革、纸张等的生产,其消耗量约占生产总量的65%;第二类用于食品生产,约占25%;第三类用于饲料生产,约占10%[2].按其作用底物,又可分为蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、纤维素酶、乳糖酶、糖化酶等.其存在形式有粉末、颗粒、液态等.
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重组人胰岛素中的脱酰胺胰岛素的检验
20世纪80年代前药用胰岛素多用猪、牛、羊胰腺提取、纯化制得.随着科学的进步,目前已成功地用DNA重组技术进行大规模生产[1,2].
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胰岛素类似物的研究进展
随着社会的发展,人类生存环境、生活方式的改变,糖尿病的发病率逐年攀升,糖尿病已成为21世纪人类健康的主要威胁之一.而胰岛素是糖尿病患者(不管是1型或是2型)终生依赖的药物.但胰岛素不能口服,如果能找到非肽类胰岛素类似物,可以通过口服降血糖,同时又安全无毒,这类小分子物质无疑将会给糖尿病患者带来福音.因此世界各国的科学家都在致力于寻找能替代目前胰岛素的药物,尤其是上世纪80年代后期,应用DNA重组技术合成长效胰岛素类似物开创了糖尿病治疗的新时代.
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种植前遗传学诊断
在实施人类基因组计划以前,人类从来没有像现在这样可以从根本上改变人类本身.特别是在成千上万的基因的功能明确以后,人类对基因的知识结合DNA重组技术,使临床诊断能力、预见能力,都得到革命性的进步.这在种植前遗传学领域表现为突出.
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低剂量CT平扫曲面重组技术在输尿管结石中的应用
输尿管结石是引起急腹症的常见病因之一,及时准确诊断对临床治疗具有重要意义。输尿管是一对细长肌性管道,走行迂曲跨度大,一旦发生病变即可引起梗阻,由于其走行特殊,更容易造成诊断上的困难。传统的检查方法主要是尿路平片(KUB)、静脉尿路造影(IVP)或逆行尿路造影、B超等,由于结石微小、肠道气体干扰或与血管、骨骼重叠等因素,很多病例不能明确结石的部位、大小与数量,对诊断输尿管结石的敏感性均低于CT[1]。近年来,CT横断面图像和曲面重组技术相结合,能更好地显示输尿管结石部位、形态以及与周围组织结构关系,其图像清晰、定位准确、无需造影剂等优点日趋显现,为临床提供了一个安全无创、快速高效的检查手段。通过对我院2014年1月至2014年12月34例输尿管结石进行MSCT低剂量扫描分析发现,CT曲面重组(CPR)图像对结石诊断的准确率又明显高于CT轴位图像,并且曲面重组图像能更准确定位结石的位置、数量,是目前诊断输尿管结石更简单、更有效的检查方法之一。
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抗体药物研究状况分析
目前,抗体药物临床应用时间已经超过三十年,现阶段很多用于治疗目的的抗体药物广泛应用在临床实践工作中,其在临床药代动力学相关分析和研究中也取得一定成效。随着DNA重组技术的不断发展与进步,加之人源化抗体的出现,一定程度上解决了临床使用难题。抗体药物研究不仅在方法上存在较大困难,在实践中也会受到多种因素的制约。针对具备显著靶向的抗体药物,对其靶向的主要分布情况进行研究,是药动学研究及分析的关键。
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惠尔血治疗化疗药物所致骨髓抑制的Ⅲ期临床观察
惠尔血(gram)是日本麒麟鲲鹏生物药业研制的重组人粒细胞集落刺激因子.采用DNA重组技术而生产.我科于2001年10月至2002年5月对其在肿瘤化疗中的应用进行了Ⅲ期临床研究,现总结如下.
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乙状结肠扭转的多层螺旋CT征象分析
乙状结肠扭转是指乙状结肠以其系膜为轴发生扭转,造成结肠梗阻,是绞窄性结肠梗阻中多见的一种[1],且并发症多、病死率高。目前检查方法首选腹部X线片,然而腹部X线片仅能明确有无肠梗阻或典型病例,对于梗阻病因、早期及不典型病例诊断比较困难。近年来,随着CT技术的快速发展,多层螺旋CT(MSCT)及三维多平面重组技术(MPR)越来越多用于消化道病变的诊断,因此对乙状结肠扭转的具体部位、程度及并发症能做出较全面的分析。现收集经手术病理证实的11例乙状结肠扭转患者临床及影像资料,分析如下。
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多层螺旋CT三维重组在齿状突骨折诊断中的应用
颈椎齿状突骨折是一种严重的颈椎损伤,占全部颈椎损伤的8%~15%[1],由于齿状突在解剖形态及结构上的特性,其骨折常引起较严重的后果,所以快速、准确诊断对及时治疗和患者恢复具有重要意义。普通X线片对齿状突骨折显示效果较差,多层螺旋CT(multilayer spiral computed tomography, MSCT)三维重组技术在特殊部位骨折的诊断和治疗中与传统X线相比显示了无可比拟的优越性。本研究对20例齿状突骨折进行回顾性分析,探讨MSCT对齿状突骨折的诊断价值。
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CT多平面重组技术对脊椎骨折的诊断
我科自2003年至2004年近2 a的时间,对选定的53例脊椎骨折病例,使用了CT多平面重组技术处理图像方法的临床应用,给诊断、治疗,特别是为脊椎骨折手术病例提供了较多的病变部位的图像信息,现对此方法的应用总结分析,旨在认识用此方法在临床诊断、治疗中的价值.
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多层螺旋CT结合重组技术对输尿管结石诊断价值分析
目的:探讨多层螺旋CT结合重组技术对输尿管结石的诊断价值.方法:选择2016年4月~2017年3月本院输尿管结石患者44例,本组患者均先采取螺旋CT检查,之后联合重组技术.观察对比常规螺旋CT与螺旋CT联合重组技术对输尿管结石的诊断效果.以及本组患者的结石部位、大小与CT征象.结果:螺旋CT联合重组技术对输尿管结石诊断的符合率为97.73%,高于常规螺旋CT的79.55%(P<0.05).本组44例患者共发现结石50个,结石直径2~16mm,表现为输尿管内多发或单发点状、结节状致密影,肾盂与输尿管伴有程度不一的扩张,内呈水样密度影.结论:多层螺旋CT结合重组技术在输尿管结石患者中具有显著的应用价值,适于临床推广.
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假狂犬病毒标记研究神经传导通路的新进展
假狂犬病毒能在感染后寄生于周围神经系统,并跨突触感染相连的神经元或器官.由于能自我繁殖使信号放大,因此很早就被用作标记物研究神经传导通路.假狂犬病毒的结构决定了它的功能,特别是膜蛋白与病毒的侵袭,跨神经元传播密切相关.近年来,研究人员通过反复传代筛选或基因重组技术剔除了某些膜蛋白或加入了新的荧光蛋白,创造出一批新的病毒,使假狂犬病毒能够研究更多级神经元,直接通过荧光显微镜观察,通过多重标记来观察各神经通路间的相互作用.此外,特定的转基因动物和新型假狂犬病毒合用也显示出了广阔的应用前景.繁多的病毒种类和使用方法给研究带来极大便利的同时也对实验设计提出了更高的要求.合理选择,使用假狂犬病毒必然能够对神经传导通路研究起极大的推动作用.
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降钙素基因相关肽与脑血管病
降钙素基因相关肽(CGRP)是人类利用基因重组技术发现的第一个活性多肽,具有多种生理功能,其药理作用已受到广泛重视.本文就CGRP在神经系统的分布、扩血管作用、神经保护作用及其与部分脑血管病的关系方面进行了综述.
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神经生长因子在糖尿病神经病变中的作用
自1952年神经生长因子(nerve growth factor,NGF)被发现,随神经细胞培养及DNA重组技术的建立,发现了众多神经营养因子(neurotrophie factors,NTFS),它们对健康及受损神经元的存活、再生有重要意义.神经系统中某些NTFS的代谢改变或缺乏构成……