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重组人前列腺特异性抗原的原核表达、纯化与鉴定
目的:用分子克隆技术体外制备人前列腺特异性抗原(PSA)重组蛋白,并对其活性进行鉴定.方法:用分子克隆技术从前列腺癌cDNA文库中扩增PSA cDNA,再将cDNA和准备插入的质粒载体PET-12α分别用限制性内切酶Nde Ⅰ和BamH Ⅰ消化,然后用T4连接酶将两者连接,序列正确的阳性克隆转染BL21(DE3)大肠埃希菌,诱导表达重组人PSA蛋白,从细菌包涵体中纯化PSA蛋白,再用小剂量胰岛素激活PSA活性,观察活化的PSA是否分解其变色底物S-2586和天然底物精囊蛋白Semenogelin(Sg).结果:利用原核表达技术得到了重组人PSA,在胰岛素作用下PSA被激活,活性PSA水解其天然底物Sg和变色底物S-2586.结论:用基因克隆方法体外获得的重组人PSA蛋白可表现与天然PSA同样的丝氨酸蛋白酶活性和功能.
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精囊蛋白Semenogelin抑制精子活动的活性片段分析
目的:制备重组Semenogelin(Sg)及其不同的氨基酸片段,研究其对精子活动的影响.方法:设计特异性的引物,用分子克隆技术从精囊cDNA文库中扩增精囊蛋白Sg及其N端和C端片段的DNA,再将DNA插入质粒载体PETl00,筛选序列正确的阳性克隆,转染BL21(DE3)大肠埃希菌,诱导表达重组人类Sg蛋白及其N端和C端片段,用50%Ni-NTA纯化重组蛋白,用上游法筛选出的正常生育男性活动精子行抑制分析,研究重组Sg及其两片段在4种不同浓度(0、1、5、10)ng/μl下对精子活动的影响.结果:重组Sg及其N端片段在5、10 ng/μl浓度下明显抑制精子的运动(P<0.001),C端片段对精子运动无抑制作用(P>0.05).结论:Sg分子中明显抑制精子运动的活性片段在氨基端,精液液化过程中,必须清除这端抑制片段,精子才能前向运动.
关键词: 精子活动 前列腺特异性抗原 重组技术 Semenogelin -
梅毒螺旋体Gpd重组蛋白的表达
随着基因工程技术的迅速发展和梅毒螺旋体(Tp)全基因序列的解析[1],通过重组技术已制备多种重组TD抗原,并被广泛应用于梅毒血清学检测的研究和试剂盒的开发[2-5],但对于哪一种Tp蛋白抗原在临床各期梅毒的血清学诊断中具有更高的特异性和敏感性尚无一致观点.
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生长激素激发实验的观察与护理
生长激素缺乏症主要是由于垂体或下丘脑缺陷,垂体生长激素分泌不足,导致患儿生长速度低于正常[1],常表现为出生1岁后生长速度减慢,身高落后,年龄越大,落后越明显.自从国内脱氧核糖核酸(DNA)重组技术的开展,人工合成重组人工生长激素已得到广泛应用,不仅使生长激素(growth hormone,GH)缺乏性矮小患儿能得到正规治疗,对GH无明显缺乏性矮小儿童也可进行探索治疗.2003年8月至2004年10月,本院对29例矮小患儿应用胰岛素和精氨酸做生长激素激发实验,取得满意的效果.现将该实验的观察与护理总结如下.
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螺旋CT三维冠状静脉成像在心脏介入治疗中的应用价值研究
应用多层螺旋CT(MSCT)三维重组技术研究冠状动脉病变的价值已得到临床广泛认可,尤其是16层以上螺旋CT,为临床提供了一种精确的评价冠状动脉病变的方法[1].而应用MSCT进行心脏静脉系统的研究刚刚起步.冠状静脉窦(CS)系统是心脏静脉系统的重要组成部分.
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猪囊尾蚴病免疫诊断研究与进展
猪带绦虫病和猪囊尾蚴病呈世界性分布,在我国有29个省、市、自治区流行,其中东北、华北、中原及西北、西南地区为主要流行区[1].人体患猪囊尾蚴病是由于食入猪带绦虫卵所致,而猪带绦虫病则是因患者生食或食入未熟的猪肉中猪绦虫的幼虫囊尾蚴所致.猪囊尾蚴病对人类健康危害极大[2],该病的诊断除病原学、流行病学、影像学诊断外,免疫学检测是主要的检查方法.近年来国内外学者对猪囊尾蚴病的免疫诊断进行了大量的研究,包括抗原分析,检测物的研究,检测技术上亦从简单的凝集试验发展到免疫标记、酶联免疫印渍、单克隆抗体制备、DNA重组技术等领域.现将国内外有关免疫诊断方面的研究近况综述如下.
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CYP450s体外重组技术及在药物代谢和安全性评价中的应用
药物代谢是在代谢酶催化下完成的,它决定着药物的药理学和毒理学特性.根据动物实验来预测人体的药物代谢时,代谢酶的种属差异性会使这项研究工作变得非常困难.本文对含有人体代谢酶系的重组技术模型的应用进行了介绍和评价.从而有助于预测新药在人体中的代谢机制.
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缺血性心脏病基因治疗的研究进展
目前,临床上对缺血性心脏病的治疗方法主要有溶栓治疗,经皮腔内冠状动脉成型术,冠状动脉内支架植入术,冠脉旁路移植术等技术,这些技术的广泛应用,使冠心病患者的病死率已呈下降趋势,但由于相当一部分冠心病不适宜冠状动脉搭桥术、血管内成形术及心肌内激光打孔等治疗,例如广泛冠状动脉弥漫性狭窄病变,以及术后高达25%~50%的再狭窄率目前尚无解决办法.近年来,随着基因重组技术的发展,一种从分子水平治疗缺血性心脏病的新方法即分子搭桥术逐渐受到了人们的重视.
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骨形态发生蛋白成骨机理及应用研究现状
在涉及骨和软骨发生的众多生长因子中,骨形态发生蛋白(Bone Morphogenetic Protein,BMP)是唯一能单独诱导间充质细胞向骨组织方向分化的生长因子,是骨组织形成过程中关键的调节因子.自1971年Urist首次将脱钙骨基质(DBM)中存在的具有诱骨活性的非特异性物质命名为BMP以来,人们对BMP的研究已有三十多年的历史,陆续有十多种BMP被鉴定和克隆并通过DNA重组技术实现重组表达.目前美国食品及药物管理局(FDA)已批准rhBMP-2进入先期l临床试用.近年来骨形态发生蛋白的许多研究成果为骨缺损的治疗带来深刻变革并已成为该研究领域的焦点,本文主要就BMP的成骨机理及其在骨缺损修复应用中涉及到的载体、使用剂量、基因治疗等的研究现状综述如下.
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肿瘤活化前药的研究与应用进展
全身性细胞毒抗肿瘤药前药的活化仅在肿瘤组织发生(tumour-activated prodrugs TAP),而不在正常组织发生,借助其在正常细胞和肿瘤细胞药物代谢动力学性质的差异,抗肿瘤药前药可提高肿瘤细胞的选择性,从而降低毒副作用.提高抗肿瘤药前药选择性的方法主要有:利用肿瘤独特的生理学性质,如选择性酶表达,组织缺氧,较低的细胞外pH值;利用肿瘤特异性传输技术,如外源性酶活化前药利用单克隆抗体输送前药到达肿瘤部位(antibody-directed enzyme-prodrug therapy ADEPT),或利用基因重组技术在肿瘤细胞DNA上构建含相应酶的基因(gene-directed enzyme prodrug therapy GDEPT).
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16层CT重组技术在急性阑尾炎诊断中的应用
目的 探讨16层螺旋CT重组技术在诊断急性阑尾炎中的应用价值.方法 回顾性分析50例临床拟诊为急性阑尾炎而行16层螺旋CT检查和重组技术多平面重组(MPR)及曲面重组(CPR)的病例资料.结果 45例经手术病理证实为急性阑尾炎,CT诊断急性阑尾炎41例,91.1%(41/45)成功获得重组技术多平面重组及曲面重组图像.应用16层螺旋CT重组技术后,提高了阑尾系膜水肿、回盲肠壁水肿的显示率及阑尾识别率.结论 16层螺旋CT重组技术可以准确地识别阑尾,能快速、准确地诊断急性阑尾炎,并能发现除阑尾炎以外的病变.
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肿瘤基因治疗研究曙光初现
第四军医大学生物化学与分子生物学教研室副主任、“长江学者奖励计划”特聘教授杨安钢等采用基因重组技术,成功地建立了一类新型的抗原特异性杀伤细胞,这类杀伤细胞能够分泌免疫毒素,特异性杀灭肿瘤细胞或HIV感染细胞。该成果引起国际学术界广泛关注,并获美国专利。英国《自然》和其姊妹杂志《自然·生物技术》等世界著名期刊近期均刊出了这项成果的研究论文。1998年12月从美国留学回国的杨安钢在陈思仪教授指导下,经多年努力,和同事们在国际上首次证明人T淋巴细胞能够产生和分泌免疫毒素,同时细胞自身生长和功能正常。在此基础上,他们利用基因重组技术,将识另癌基因产物HER-2的抗体和HIV被膜抗原gp120的抗体分别与自然界毒性强的毒素分子(PE40)的基因联接在一起,构建了两种免疫毒素基因,然后分别导人在体外培养的人T淋巴细胞,使其能够不断产生和分泌免疫毒素,而自身生长不受影响,形成了兼有细胞免疫和体液免疫特点的新型杀伤细胞。实验中,抗肿瘤的特异性杀伤细胞注射到载瘤小鼠体内后,它们分泌的免疫毒素能够识别和进入到肿瘤细胞内,有效地杀伤肿瘤细胞,使肿瘤生长明显得到抑制。 (摘自《健康报》2000年5月16日第1版)
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胰岛素给药途径的研究进展
近年来,随着DNA重组技术的发展及人工胰岛素(INS)的合成成功,INS正由单一的注射剂向非注射给药和可调式给药方向发展.现将INS给药途径的进展作一综述.
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转基因大豆的是是非非
转基因食品从诞生起,就一直饱受争议,关于转基因大豆是否会致癌、导致不育的争论和研究,也从未间断过.站在当代科学的肩膀上,如何认识“转基因大豆”,这个熟悉的陌生词呢? 转基因大豆乃何方神圣转基因大豆是通过人工手段改变了遗传物质的大豆,改变的方法是采用“基因重组技术”,将人类需要的目的基因转入大豆,使大豆表达新的性状.这些基因要么是抗除草剂的基因,要么是抗虫的基因,转入这些基因后,能降低除草剂或杀虫剂的使用,降低种植成本,提高农民受益,其出油率、产量都要明显高于非转基因大豆,在相当大程度上缓解了全球粮食紧缺的现象,同时也降低了自然环境中除草剂与农药残留,有利于保护人类的生存环境,可谓是“一举多得”.
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128层螺旋CT重组技术在胆管梗阻中的诊断价值分析
目的 探讨128层螺旋CT重组技术在胆管梗阻中的诊断价值.方法 选取2014年1月至2016年7月舞钢市人民医院收治的经病理诊断确诊为胆管梗阻的79例患者,入院后均由同一医师完成128层螺旋CT重组技术检查,统计记录患者128层螺旋CT重组技术检测结果,并与病理诊断结果比较.结果 79例患者经128层螺旋CT重组技术检查,胆管梗阻检出77例,准确率为97.47%;肝外胆管近段梗阻或中段梗阻与肝外胆管远段梗阻影像学表现有明显差异.结论 128层螺旋CT重组技术在胆管梗阻中具有较高检出率,可为临床治疗提供重要诊断依据,值得推广.
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体外受精与胚胎移植技术的国内外研究进展
体外受精和胚胎移植技术(IVF-ET)俗称试管婴儿,是近二十年在世界范围内广泛开展的一项高新尖的科技项目。1978年世界第一例试管婴儿在英国的诞生,是医学和生物学上一次伟大的革命。以试管要儿为代表的辅助生育技术经历20年的发展,无论对不孕症的治疗范围还是对人类优生学的应用已有长足的进步。IVF技术不仅是治疗多种原因所引起的不孕症的一项措施,而且在生殖医学、人类遗传学、早期胚胎学及免疫学等基础学科研究方面,均有广阔的前景。在我国尤其对基本国策之一--计划生育具有重要意义,起着优生和生殖保险的作用。IVF-ET技术的出现,减轻了许多育龄夫妇对做绝育手术的"后顾之忧",绝育的概念也相对化了,由于有IVF-ET技术的保障,近年来做绝育手术夫妇的比例也增加了,从绝育的可逆性来说,IVF-ET技术对计划生育工作的开展起着重要的推动作用;从优生学角度来说,IVF-ET技术的出现,从根本上推进了演进性优生学的发展。IVF技术加上DNA重组技术,将能使人类进入操纵和改变自身遗传物质的新时代,按预定的方案裁剪和组装人类的遗传物质,使人类变的更为聪明、健康和长寿,达到优生的目的。它必将会对医学和人类生物学产生划时代的影响。
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64层螺旋CT重组技术对胆管梗阻的诊断价值
目的:探讨64层螺旋CT重组技术对胆管梗阻临床诊断的应用价值。方法指定具有专业知识及丰富临床经验的医生完成81例胆管梗阻患者64层螺旋CT重组技术的检查工作;记录其检查结果并将其与病理诊断结果进行有效对比。结果81例胆管梗阻患者经64层螺旋CT重组技术检查后,其检出率高达96.30%,与病理诊断结果(100.00%)比较差异未见统计学意义(P>0.05)。结论对疑似胆管梗阻患者给予64层螺旋CT重组技术检查可获得较为理想的检出率,有利于临床医生准确判断病情并制定针对性的治疗方案,保障患者疗效及预后。
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血管生成抑制因子Arresten基因对裸鼠移植瘤的研究
Arresten是新发现的一种强有效血管生成抑制因子,是Ⅳ型胶原α1链的羧基末端NC1结构域多肽片段;它能有效抑制新生血管形成及肿瘤的生长和转移[1].近,我们采用RT-PCR方法和基因重组技术,已成功地完成了人arresten基因的分子克隆与序列测定[2].并已构建arresten基因的原核表达载体,且在大肠杆菌中进行了表达,在此基础上,我们拟构建arresten基因的真核表达载体,并观察体内转染质粒DNA-脂质体复合物的方法对裸鼠移植瘤的影响.
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螺旋CT图像重组技术在人工牙种植术中的应用
人工种植牙耐用坚固,比起其他形式的假牙有着更多优点,被越来越多患者所接受.以往牙种植术前的设计和术后检查主要以颌骨全景片和牙根片、咬合片、颌骨正侧位片等X线片为根据.随着影像技术和牙种植科学的发展,常规X线检查提供的影像资料显得越来越局限,全面准确了解颌骨种牙区的综合情况是临床医生追求的新方向.螺旋CT的出现为解决这些问题提供了新的途径[1,2].本文介绍种牙前后螺旋CT各参数的设计和CT工作站进行图像后处理的过程,探讨螺旋CT多层面重组技术的意义.
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64层螺旋CT三维重组技术在肩胛骨骨折中的临床应用
肩胛骨骨折是一种严重而复杂的损伤类型,如处理不当或延误治疗时机,可引起肩关节和上肢功能障碍.而单纯的X线平片检查和轴面CT图像观察有一定的局限性.近年来,随着多层螺旋CT及三维重组技术的应用,尤其是64层螺旋CT(Volume CT,VCT)三维重组技术实现了对图像立体和任意平面的观察,可以清晰地显示各种骨折的三维空间关系,为诊断肩胛骨骨折提供了一种新的技术手段.笔者回顾性分析36例肩胛骨骨折患者VCT的各种图像,旨在探讨VCT三维重组技术在肩胛骨骨折诊断中的临床应用价值.