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黏附因子N-cadherin在体外骨髓间质细胞诱导分化中的表达
目的:探讨黏附因子N-cadherin在骨髓间质细胞诱导分化中的表达及其转化机制.方法:体外分离,扩增Wistar大鼠骨髓间质细胞,按一定浓度种植于24孔板内,并加入TGF-β诱导剂,于不同时间点取材固定.用免疫组化方法动态观察N-cadherin在骨髓间质细胞诱导分化中表达时相.同时加入抗N-cadherin抗体干扰细胞聚集.结果:N-cadherin主要表达于加入诱导剂后24 h,之后呈下调控趋势,并呈现时间依赖性.加入抗体后可明显干扰细胞聚集,当浓度为300μl/孔时,未见细胞小结形成.结论:N-cadherin介导了细胞与细胞之间的相互作用,在体外间质细胞转化中发挥重要作用.
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火针治疗膝关节骨关节炎110例
膝关节骨关节炎,是关节软骨发生退行性变、在关节边缘有骨刺形成的病变.笔者自1980年开始用火针治疗本病110例,疗效较好,现报道如下.
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人类脂肪来源成体干细胞体外定向成软骨的诱导实验
目的 评价人类脂肪来源成体干细胞(hADASc)体外培养转基因定向成软骨诱导的可行性.方法 hADASc体外培养后行PGL3.转化生长因子β1(TGF-β1)基因转染并鉴定,检测转染细胞Lueiferase活性相对光读数(RLU),再行反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测和抗Ⅱ型胶原免疫组织化学染色(实验组:转染的hADASc,同比对照组:加入软骨细胞定向诱导培养基的未转染hADASc;阴性对照组:未转染的hADASc),自动图像分析系统分析免疫染色图片并计算阳性颗粒(PU)值.结果 人类皮下脂肪体外分离培养出具有干细胞特征的有核组织细胞.hADASc转染后,实验组测得RLU值(9 212.583±315.240)高于阴性对照组(317.000±20.710,P＜0.01).RT-PCR结果显示转染的hADASc表达TGF-β1;免疫染色结果显示,实验组与同比对照组呈阳性反应,且两组PU值(13.864±2.416,13.637±2.548)均与阴性对照组的PU值差异有统计学意义(6.013±0.827,P＜0.05).结论 人类皮下脂肪体外分离培养出具有干细胞特征的有核组织细胞.PGL3-TGF-β1基因转染的hADASc可表达TGF-β1.内源性TGF-β1可诱导hADASc分泌Ⅱ型胶原蛋白,与外源性TGF-β1作用相类似.
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静态进展型支具在关节挛缩中的应用进展
关节起着连接、带动和引导周围各个关节的作用,创伤后的功能障碍不仅使关节活动受限,还将影响到肢体的功能活动.长时间的制动可加重组织间的粘连,使关节软骨发生退行性改变,还可以使关节囊、韧带、肌肉等组织发生形态结构、生物化学及生物力学等方面的改变,甚至发生纤维化、钙化等情况,造成关节僵硬.
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骨关节炎的功能评定与康复治疗
骨关节炎是一种常见、缓慢发展的关节疾病,也称骨性关节病或退行性关节病等.其特征是关节软骨发生原发性或继发性退行性变,并在关节边缘有骨赘形成,出现不同程度的关节僵硬与不稳定,导致功能减退,甚至丧失.原发性骨关节炎多发生在50岁以后,女多于男,老年性组织变性和劳损积累是主要病因.
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脂肪干细胞在软骨组织工程领域中的应用
由于软骨细胞再生能力有限,因此软骨的病变很难自身修复.外科手段促进软骨修复多采用软骨下骨钻孔、制造微骨折等技术打通髓腔,造成局部出血从而加速修复进程.这些方法虽然有一定的疗效,但新生的软骨大部分是纤维软骨,短期内可以缓解疼痛等症状,长期效果较差.
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结缔组织生长因子与骨重建
结缔组织生长因子(CTGF)是即刻早期基因(CCN)家族的成员之一,早由Bradham等[1]在1991年用亲和色谱法从人脐静脉内皮细胞条件培养基中发现,研究表明,CTGF mRNA及其蛋白产物可在内皮细胞、成纤维细胞、软骨细胞、血管平滑肌细胞和成骨细胞等多种细胞中表达,在机体多种生物学过程,如胚胎发育、瘢痕组织、恶性肿瘤、软骨发生和诱导成骨细胞的分化、创伤愈合及促进多种细胞的黏附和运动等方面发挥着重要作用.
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周期性动态压力对海藻酸钠培养间充质干细胞成软骨分化的作用
目的：观察延迟性周期性动态压缩应力对立体培养条件下骨髓间充质干细胞成软骨分化的影响，探讨力学因素在软骨分化过程中的作用机制。方法 KM小鼠骨髓间充质干细胞分离，体外培养至第3代，与海藻酸钠混匀制作成海藻酸钠凝胶。根据实验设计，进行7d的相应的预培养。实验分为4组：空白对照组：普通培养液组，静态培养；实验组：完全成软骨诱导液，后7d加力培养；单纯诱导组：完全成软骨诱导液，静态培养14 d；阴性对照组：普通培养液，后7 d加力培养。于培养第7和14天分离各组细胞，采用RT-PCR分析SOX9、ROCK1及Col2的表达，应用免疫荧光技术对各组处理前后的Ⅱ型胶原蛋白（ Col2）表达进行检测，Image J软件进行图像定量检测。正态计量资料采用均数±标准差表示，组间计量资料采用单因素方差分析，组间多重比较采用SNKq检验法。结果预培养7 d后，实验组SOX9、Col2及ROCK1的mRNA表达与对照组比较有统计学差异（ P＜0.01）。14 d后，实验组中压力干预组 SOX9及Col2的 mRNA 表达与未受力组比较有统计学差异（ P＜0.01），ROCK1的mRNA表达与未受力组比较有统计学差异（P＜0.01）。免疫荧光显示压力组Col2蛋白表达高于未受力组。结论延迟性周期性动态压缩应力可促进间充质干细胞成软骨分化， ROCK信号通路可能参与有关调控。
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雌激素对增殖期ATDC5细胞生长及C型利钠肽信号通路蛋白表达的影响
目的 观察雌二醇(E2)对增殖期ATDC5细胞的生长及C型利钠肽(CNP)信号通路蛋白[包括CNP、利钠肽B受体(NPR-B)及利钠肽C受体(NPR-C)]表达的影响.方法 以胰岛素(10 μg/ml)诱导分化第6天的ATDC5细胞为研究对象,观察E2对细胞生长的影响(MTT法)及CNP、NPR-B及NPR-C蛋白表达的影响(Western-blot法):(1)量效研究:分别加入7个不同浓度(10-11 ～10-5 mol/L)的E2(浓度组)及DMSO溶剂(对照组)共8组,比较作用24 h后各组细胞数吸光度(A)值及作用48 h后各组细胞的蛋白水平;(2)时效研究:加E2(10-8 mol/L)作用不同时间(0、24、48、72、96、120 h)(6组),除0h外,各时间点均设相应溶剂对照组.比较不同时间点细胞数与其对照组的差值;比较0 ～96 h细胞蛋白水平;(3)雌激素受体阻断试验:分别加入E2(10-8 mol/L)(E2组)、雌激素受体阻断剂ICI 182782(10-7 mol/L)(ICI组)、E2(10-8 mol/L)和ICI 182780(10-7mol/L)(E2+ ICI组)以及溶剂DMSO(对照组),比较作用24 h后4组细胞数.结果 (1)量效研究:①作用24 h后,与对照组(0.38±0.02)相比,随E2浓度增大,ATDC5细胞数呈增加趋势,至浓度为10-9和10-8 mol/L时为显著(A值分别为0.56±0.06和0.52±0.02,P值分别＜0.05和＜0.01);②作用48 h后,与对照组相比,各浓度组细胞CNP、NPR-B及NPR-C蛋白水平均显著增加(P均＜0.01),CNP和NPR-B蛋白增加以10-10 mol/L组为显著,NPR-C蛋白增加以10-9 mol/L组为显著.(2)时效研究:①E2(10-8 mol/L)分别作用24 ～96 h后,各时间点细胞数均较对照组增多,48 h时为显著(0.030±0.003),随后逐渐减少(P＜0.05或P＜0.01),至120 h时(0.007 ±0.001)与对照组差异无统计学意义.②CNP水平在24 h时显著增加(P＜0.05),48 h和72 h时有增加趋势,96 h时则有降低趋势.NPR-B和NPR-C蛋白水平在24 h时均有增加趋势(P分别为0.060和0.055),48 h则均有降低的趋势,至72 h和96 h时均低于对照组(P均＜0.05).(3)雌激素受体阻断试验:作用24 h时,E2组、ICI组、(E2 +ICI)组和对照组4组细胞数的差异有统计学意义(P＜0.05).E2组(0.470±0.032)和(E2+ICI)组(0.410±0.018)均多于对照组(0.370±0.011),E2组多于(E2+ ICI)组(P均＜0.05);ICI组(0.360-±0.035)与对照组差异无统计学意义.结论 E2能通过雌激素受体介导、以时效和量效作用方式促进增殖期ATDC5细胞生长.E2在一定浓度、不同作用时间时可以不同方式调节(上调或下调)CNP、NPR-B和NPR-C蛋白的表达,提示雌激素是CNP信号通路的调节因子之一.
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FGFR2功能获得性突变对长骨发育过程的影响
目的 对比观察Fgfr2+/S252W突变型小鼠和同窝野生型小鼠长骨的生长发育情况,探讨FGFR2功能持续增强对软骨内成骨过程的影响.方法 采用经基因敲入技术建立的模拟人Apert综合征的Fgfr2+/S252W小鼠模型,经繁殖、鉴定后分为Fgfr2+/S252W功能获得突变型和同窝野生型.于出生后7、10、14、28d分别处死突变型和野生型小鼠各3只,对长骨进行长度测量、X线检查及Micro CT检查,另取部分长骨标本进行HE染色和免疫组化染色观察.结果 Fgfr2+/S252W突变小鼠呈典型Apert综合征圆颅和短颅畸形,体形发育缓慢,体长、四肢长度明显小于同窝野生小鼠,且长骨发育障碍,第二骨化中心延迟出现,骨密度及骨小梁数量低于同窝野生型小鼠.组织学观察可见突变小鼠胫骨近端生长板软骨细胞增殖区和肥大区厚度缩短,细胞排列不及野生型整齐,肥大软骨细胞体积小,免疫组化检测显示软骨相关增殖、分化基因表达均减弱.结论 FGFR2功能持续增强可导致小鼠长骨发育障碍.FGFR2可能具有调控成骨细胞系及软骨细胞系发育的功能,在骨骼发育等方面发挥重要作用.
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复发性髌骨脱位手术治疗现状
频繁发生的髌骨复发脱位尚无有效的保守治疗方法,也不可能自愈,病程越长,脱位引起的损害就越严重,应该积极手术治疗,否则将引起一系列并发症:滑膜肥厚、髌骨软骨发生变性、骨性关节炎、骨软骨游离体,患肢运动能力下降,逐渐发生膝关节周围肌肉萎缩.复发性髌骨脱位的手术目的就是矫正脱位和防止脱位复发,防止髌骨软骨进一步损伤,尽早矫正髌骨力线不正引起的恶性循环.综合文献报道,作者总结目前临床上应用的术式可分为二大类:软组织手术和骨性手术.下述的(1)-(7)式为软组织手术,(8)-(10)为骨性手术.
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致死性侏儒一例
患儿女，头大、面小、前额突、鼻塌、胸廓窄、腹膨隆、手指短粗分离，生后25 min死亡。母，32岁，分娩史2次，流产史1次，孕36周临产入院，4 h后行胎头吸引助产分娩。父健康，36岁。家族无遗传病史，非近亲结婚。双亲及姐姐表型正常，染色体分析为正常的46，XX核形。其母妊娠期无用药史。死婴X线表现：脑颅大，面颅小，顶骨重叠；胸廓狭窄，肋骨短小且前后端呈扁平状；四肢长骨明显粗短且弯曲，呈电话受话器状，干骺端不规则膨大,呈杯口状，以肱骨及股骨较典型；胸椎呈“U”形、腰椎呈“H”形，椎间隙增宽；手足短骨粗短，略呈方形；髂骨小而方，耻、坐骨短而宽(图 1～3）。 讨论致死性侏儒又称致死性软骨发育异常，是1种罕见的短肢畸形。自Maroteaux(1967)首次报告以来，本病已成为具有明确临床、放射学和病理学特征的疾病，发病率为(4～5)/100万［1］。男女均可发病，性别无显著性差异［2］。病儿常为死胎，或生后短时间内死亡，原因多为胸廓狭窄引起的呼吸窘迫［3］。本例仅存活25 min，文献报告1例存活156 d［2］。本病多散发，可能为基因突变，亦可能为常染色体隐性遗传［1，2］。本例双亲及姐姐表型正常，亦无家族遗传史，染色体分析显示正常的46，XX核形，提示为基因突变所致。发病机理不甚明确，可能系异常胎儿间充质的持续存在，此间充质能转变为严重异常的骨和软骨［1 ］。本例具有典型临床和X线表现，诊断无疑。本病应与软骨发生不全、软骨发育不全等相鉴别。软骨发生不全表现为椎体骨化中心缺如，X线片仅见椎弓根影，而本病椎体骨化并无严重延迟［3］。软骨发育不全表现为椎弓根变短，椎体发育较小，与本病椎弓根发育正常、椎体变扁而呈U形或H形截然不同，而且四肢短小不如本病明显，亦不弯曲。
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NELL-1：高效特异的新型生长因子
骨与其他组织的再生往往需要种子细胞、支架材料和相关生长因子三方面的参与，而生长因子作为维持微环境的重要组成部分，对于组织再生起着重要作用［1－2］。人类尼尔样-1型分子（Nel-like mol-ecule-1，NELL-1）基因位于第11号染色体p15．1-p15．2，长度约906 kb，包含20个编码外显子。基因编码的分泌蛋白包含810个氨基酸开放阅读框架，其相对分子质量在糖基化之前约为90000。NELL-1是人类颅缝早闭症相关的一种分泌蛋白，结构包含有6个表皮生长样因子结构域，一个分泌信号肽，一个N末端分子，4个半胱氨酸富集区。NELL-1与胚胎系统发育密切相关，在骨骼系统的发育进程中扮演着重要角色，其具有良好的诱导骨再生与软骨再生的能力，尤其是针对软骨细胞系有较高的特异性。相对于经典的成骨诱导因子骨形态发生蛋白-2（bone morphogenetic protein 2，BMP-2），NELL-1具有特异性强、诱导成骨的骨质更为致密、不良反应小等优势。近年来，NELL-1在组织工程领域进行了大量的研究，NELL-1研究涉及的方面主要包括基因或者蛋白结构及其表达谱［3－4］、生物学功能［5－6］、分子调控机制［7－8］、与疾病相关性［9－10］等。NELL-1与胚胎系统发育密切相关，在骨骼系统的发育进程中扮演着重要角色，其具有良好的诱导骨再生与软骨再生的能力，尤其是针对软骨细胞系有较高的特异性。NELL-1还具有与BMP-2协同作用的能力，NELL-1能够提高细胞对于BMP-2成骨诱导的反应，以及显著降低BMP-2诱发的炎症反应。因此本文拟通过循证医学系统评价的方法综述 NELL-1生物学功能。
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转录因子Sox9调控软骨发育的研究进展
骨的发育主要有膜内成骨和软骨内成骨两种形式,其中软骨内成骨是体内大部分骨骼包括四肢骨、脊椎骨、颅底骨和一部分锁骨的发育形式.软骨内成骨包括软骨发生和生长板发育阶段.在软骨发生阶段,间充质干细胞分化为软骨细胞形成软骨原基.软骨原基是未来骨骼的雏形,原基内的软骨细胞有序分化、增殖和排列形成典型的生长板结构.软骨生长板在结构上包含4个分区:即静息区、增殖区、前肥大区和肥大区.静息区软骨细胞体积小呈圆形,细胞排列紧密,增殖少而且分化不成熟,表达Ⅱ型胶原蛋白(Col2a1).增殖区软骨细胞分裂旺盛,细胞扁平呈柱状排列.前肥大区为软骨细胞由增殖区向肥大区的过渡阶段.肥大区软骨细胞停止增殖进入终末分化阶段,细胞体积变大分泌一些特定的软骨基质如X型胶原蛋白(ColX)等.终末分化的软骨细胞后发生生理性死亡,同时伴有成骨细胞、破骨细胞和血管侵入,成骨细胞分泌的骨基质终取代软骨基质实现骨化.一系列的研究表明软骨内成骨受到多因素、多层次严格有序的调控,如全身性的生长激素和甲状腺素;软骨细胞分泌的Wnts、BMP、FGF、IGF和Ihh-PTHrp等信号[1].这些信号通过激活多种转录因子启动一系列基因表达,终使软骨内成骨协调有序进行.近年来的研究表明,转录因子Sox9参与调控软骨内成骨的多个阶段的发育过程,包括软骨发生、生长板内软骨细胞的成熟、肥大等过程,本文就Sox9基因调控软骨发育的新研究进展进行综述.
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距骨骨软骨骨折的诊断和治疗进展
距骨骨软骨骨折指距骨穹隆的关节软骨及软骨下骨的骨折.距骨表面大部分被关节软骨所覆盖,当距骨骨软骨发生骨折时,距骨的血供受到影响,仅具有有限的自我修复能力.因此,恢复距骨骨软骨的连续性非常重要.本文就距骨骨软骨骨折的诊断及治疗进展作一综述.
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骨性关节炎的饮食调养
骨关节炎(osteoarthritis)又名退行性骨关节炎,为关节软骨发生退行性变,并在关节边缘有骨刺形成.骨关节炎多见于老年人,随着人类平均寿命的延长,骨关节炎的发病率愈来越高,它严重妨碍工作,成为50岁以后丧失劳动力的第二个常见原因,仅次于心脏病.西方国家的发病率尤为增高,据统计,占门诊病例的2.3%.
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腰椎退行性改变在常规平片中征象形成探讨
随着我国人口结构的不断变化.老年人口逐年增加,老年性疾病引起了全社会的高度重视.慢性退行性骨关节病又称肥大性关节炎、骨关节炎、畸形性关节炎或增生性关节炎,是关节软骨发生部分破坏后,继之以邻近软骨增生、骨化而形成的一种关节病变.凡能够引起关节软骨发生部分变性的病变,终均能产生退行性骨关节病.现对我们收集的289例有临床症状、体征,X线平片上有椎体边缘棱角锐利,骨质不同程度增生或椎小关节骨质增白硬化,椎间隙变窄,脊柱不稳等X线表现者作一具体分析.
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SOX9基因在软骨发育过程中的表达谱分析及其质粒转染鼠骨髓基质细胞的实验研究
目的 检测并分析SOX9基因在软骨发育过程中的表达规律;构建其质粒并转染至培养的骨髓源基质细胞(BMSCs)中,通过细胞培养观察SOX9基因对BMSCs生长特性的影响,为可能的骨关节炎(OA)基因治疗提供理论基础.方法 用基因芯片技术建立妊娠胎鼠肢芽软骨发育过程的基因表达谱,分析SOX9基因在软骨发育过程中的表达规律;用噻唑蓝(MTT)法、免疫组织化学、苏木素-伊红(HE)染色、反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测SOX9基因转染MSCs的效果及产物的表达.结果 SOX9基因在软骨发育过程中的软骨形成关键期表达显著上调;pDC316-SOX-9质粒转染骨髓基质细胞后可促进骨髓基质细胞的增殖,细胞有向软骨细胞分化趋势.结论 SOX9能够促进软骨形成,SOX9基因质粒转染的MSCs可望在软骨组织工程临床治疗中得到更广泛的运用.
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综合疗法治疗退行性膝关节炎
退行性膝关节炎又名老年性膝关节炎、增生性膝关节炎、肥大性膝关节炎,是一种慢性损伤性疾病,主要是关节软骨发生退行性改变,伴软组织发炎或积化,好发于重体力劳动者、中老年人,此病应早发现,早治疗,否则会影响工作、生活,笔者以传统中医理论、现代医学和自身临床经验在治疗退行性膝关节炎方面取得了较好效果,现总结如下.
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生长分化因子-5基因突变与骨发育异常
生长分化因子5(Growth and differentiationfactor 5,GDF-5)是人体软骨发生和骨骼发育过程中发挥重要功能作用的一种调节因子,其基因改变可引起诸多肢体畸形,如Hunter-Thompson肢端发育不良、A2或C型短指/趾症、Grebe型软骨发育不良、腓骨发育不全/复合性短指、多发性骨性联合综合征、近端指/趾关节粘连和骨关节炎,因此近年来受到了广泛关注.此外,其在组织损伤修复、神经系统保护等方面的广阔应用前景越来越被专家学者们所重视.本文将就GDF 5在肢体骨骼发育中的作用、GDF 5突变引起的相关疾病、GDF5在组织工程学上的应用现状等方面进行综述,并对GDF 5未来的研究与应用前景进行了探讨.
