首页 > 文献资料
-
结核分枝杆菌Ag85A质粒DNA疫苗治疗小鼠耐药结核病的效果研究
目的 研究结核分枝杆菌Ag85A质粒DNA疫苗治疗小鼠耐药结核病的效果.方法 用结核分枝杆菌高耐利福平低耐异烟肼临床分离株HB361尾静脉注射17～19 g的6～8周龄雌性BALB/c小鼠后,将小鼠随机均匀地分为6组,感染后第3天开始,分别用生理盐水(A组)、pVAX1空载体(B组)、利福平(C组)、微卡菌苗(D组)、Ag85A质粒DNA疫苗(E组)、利福平和Ag85A质粒DNA疫苗(F组)治疗60d,每组10只小鼠.治疗结束后3周,分别取肺和脾观察病理改变,称取重量做菌落计数.结果 治疗结束后3周,与对照组比较,D组、E组和F组肺脏病变有不同程度减轻,病变局限,病变范围分别为50%、20%、20%,2/3区域可见正常的肺泡结构,肺泡轮廓相对清晰,细胞分布均匀.与A组相比,D组、E组和F组肺脏菌落数分别减少了52%、68%、78%;脾脏菌落数依次减少了48%、65%、79%.结论 与对照组相比,Ag85A质粒DNA疫苗单独应用或与利福平联合应用治疗小鼠耐药结核病均显示疗效.
-
日本血吸虫中国株次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶真核重组质粒的构建及其动物免疫保护性研究
目的 克隆日本血吸虫次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(SjHGPRT)全长编码基因,研究其DNA疫苗诱导小鼠的免疫保护作用.方法 将全长SjHGPRT基因克隆到真核表达载体pcDNA3上,构建真核表达质粒pcDNA3-SjHGPRT,用经双酶切、PCR和测序鉴定正确的真核表达质粒免疫昆明小鼠3次,每次间隙2周,第3次免疫后第2周进行日本血吸虫尾蚴攻击感染,感染后42 d处死小鼠,收集成虫、肝脏和24 h粪便,计算减虫率和减卵率.结果 成功构建真核表达质粒pcDNA3-SjHGPRT.动物免疫实验结果显示:pcDNA3-SjHGPRT疫苗组减虫率23.17%、肝减卵率41.64%、粪减卵率40.57%,每雌虫子宫内卵减卵率26.95%,与对照组相比差异均具有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).每雌虫子宫内卵减卵率及肝、粪减卵率明显高于减虫率,表明pcDNA3-SjHGPRT疫苗可能主要在抗血吸虫卵胚发育或抗生殖方面起作用.结论 日本血吸虫次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶DNA疫苗可诱导抗血吸虫卵胚发育或抗生殖作用,具有潜在的疫苗研究与开发价值.
关键词： 日本血吸虫 次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶 DNA疫苗 -
体内电穿孔对报告基因表达和HIV GagDNA疫苗诱导的免疫反应的影响
目的 研究体内电穿孔递送途径在小鼠模型中对于报告基因表达水平及HIV GagDNA疫苗所诱导的免疫反应的影响.方法 构建荧光素酶(luciferase)表达质粒p1.0-luc,将其通过直接肌肉注射、肌注后以双针电极进行电穿孔、肌注后以钳式电极进行电穿孔等3种不同方法注射小鼠,72 h后取注射部位的肌肉测定luciferase的表达情况.同时构建携带密码子优化的HIV-1 B'/C重组亚型CN54株gag基因的DNA疫苗质粒p1.0-gag,在10μg、100μg两个剂量水平上通过以上3种不同的方法免疫BALB/c雌性小鼠,ELISA方法检测Gag特异的抗体反应,ELISPOT方法和细胞内因子染色(intraeellular cytokine staining,ICS)技术检测细胞免疫应答.结果 通过体内电穿孔可以使luciferase在小鼠肌肉中的表达水平显著提高,大提高幅度达到66倍.Gag DNA疫苗免疫结果显示,电穿孔可以显著提高Gag特异的体液免疫应答,其中使用双针电极的效果要显著好于钳式电极,前者所诱导的抗体滴度比不使用电穿孔组提高可达28倍.但体内电穿孔对于Gag特异的细胞免疫应答并没有显著影响.结论 体内电穿孔(尤其是使用双针电极)可以大幅度提高报告基因在体内的表达水平和DNA疫苗诱导的抗原特异性体液免疫应答.
-
HCV核心-包膜E2抗原融合基因DNA疫苗的构建及对小鼠的免疫应答试验
目的观察一种结构新颖的HCV融合抗原DNA疫苗在BALB/c小鼠的免疫效果,探讨其用于防治丙型肝炎的可行性. 方法用重叠延伸PCR拼接编码小鼠IgG kappa链信号肽和通用型辅助性T细胞表位PADRE的DNA片段,PCR分别扩增HCV核心抗原基因和包膜E2抗原基因,将3段基因插入真核表达载体pcDNA3.1,构成重组表达质粒pST-CE2t,转染COS7细胞,免疫组化检测HCV抗原的表达.将pST-CE2t和HCV核心抗原DNA疫苗pcDNA3.1 core分别肌肉注射接种BALB/c小鼠,检测小鼠的血清抗体、T细胞增殖和CTL反应. 结果 pST-CE2t可在COS7细胞内表达HCV核心抗原和E2抗原,接种于BALB/c小鼠能有效诱导体液和细胞免疫应答,其中抗HCV核心抗原免疫应答的强度明显超过pcDNA3.1 core,且更趋向于TH1型免疫应答. 结论 pST-CE2t对于丙型肝炎的防治有潜在的应用价值.
-
IL-17作为分子佐剂增强HIV DNA疫苗细胞免疫应答的研究
目的 为了进一步增强HIV DNA疫苗的免疫反应,本研究将IL-17作为HIV DNA疫苗的分子佐剂免疫小鼠,旨在探讨IL-17对HIVDNA疫苗诱导体液和细胞免疫应答的影响.方法 将小鼠IL-17构建到真核表达载体,与HW-1膜蛋白DNA疫苗pGX-Env联合免疫BALB/c小鼠;分别在第0、2周进行免疫,在第4周检测T淋巴细胞增殖指数、抗-Env IgG、细胞因子表达水平和体内细胞毒性T淋巴细胞杀伤作用(CTL)等免疫学指标.结果 IL-17能够增强HIV DNA疫苗的特定免疫反应.与单注射疫苗组相比,IL-17作为佐剂组的T细胞增殖、抗体水平和CD4~+T细胞分泌IFN-γ、IL-4和IL-17的表达均无明显增强,但对CD8~+T细胞分泌IFN-γ的表达和体内CTL的效果影响明显(P<0.05).结论 IL-17作为分子佐剂不足以影响Th细胞分化,然而却能够增强特异性CD8~+T细胞中IFN-γ的表达,尤其是增强体内CTL反应.此结果为增强艾滋病DNA疫苗CD8~+T细胞活性和用于艾滋病的治疗提供了一个新的思路.
-
表达丙型肝炎病毒NS3和Core融合蛋白基因的DNA疫苗免疫方案优化
目的 本研究旨在构建一种包含丙型肝炎病毒(HCV)保守区基因的新型DNA疫苗,并在小鼠模型中使用电转技术优化其免疫原性.方法 首先,我们构建了包含HCV非结构蛋白NS3和核心蛋白Core部分基因序列的DNA疫苗,并证实了其表达;然后采用不同的体内电转方式于第0、4周分别免疫BALB/c小鼠,比较分析不同免疫方案的体液免疫(特异性IgG与抗体亚类)与细胞免疫应答(IFN-γ ELISPOT)的效果.结果 使用电转技术可显著增强新型DNA疫苗免疫原性,采用皮内注射加卡钳电极电转的方式产生强NS3特异性T细胞免疫反应.结论 包含HCV保守区基因的新型DNA疫苗可通过优化电转技术增强免疫应答效果.这为我们下一步优化HCV DNA疫苗的免疫方案提供了依据.
-
基于丙型肝炎病毒结构基因的DNA疫苗初免重组腺病毒疫苗加强免疫小鼠后可诱导交叉保护
目的 探索基于HCV多个靶抗原的新型T细胞疫苗研发策略.方法 用表达HCV河北株(1b亚型)结构蛋白(Core,E1,E2)的DNA疫苗与重组腺病毒载体疫苗联合免疫小鼠,并采用ELISPOT与胞内细胞因子染色分析(ICS)方法分析了特异性T细胞免疫应答特点与交叉保护效果.结果 DNA疫苗与重组腺病毒疫苗联合免疫小鼠后,针对Core、E1、E2都可产生较强细胞免疫应答;ELISPOT结果表明:联合免疫针对E1的反应强,明显高于DNA疫苗同源免疫;ICS结果显示:针对E1抗原特异的CD4+T细胞分泌的TNF-α水平与CD8+T细胞分泌的IFN-γ水平以及E2抗原特异的CD4+T细胞与CD8+T细胞分泌的IFN-γ水平均高于三针DNA疫苗免疫组.在表达2a亚型HCV(JFH1)全长ORF的重组痘苗病毒替代攻击小鼠模型中,复制型DNA疫苗与重组腺病毒联合免疫可表现出交叉保护效应.结论 本研究为HCV新型疫苗研制及免疫保护机制研究提供了一定参考.
-
pcDNA3.1/MAGE-3-HSP70融合蛋白诱导特异性抗肿瘤免疫应答的研究
目的构建重组表达质粒pcDNA3.1/MAGE-3-HSP70,观察其诱导免疫应答的能力和抗肿瘤免疫治疗的作用.方法通过RT-PCR扩增MAGE-3和HSP70 cDNA,以pcDNA3.1为载体,构建pcDNA3.1/MAGE-3-HSP70重组质粒,肌肉注射接种小鼠,间隔7 d,共3次,以pcDNA3.1/MAGE-3、pcD-NA3.1/HSP70、pcDNA3.1和PBS为对照,检测脾淋巴细胞CTL杀伤活性、脾细胞培养上清IL-2、IFN-γ浓度、外周血淋巴细胞亚群变化及鼠血清中抗MAGE-3抗体水平.pcDNA3.1/MAGE-3-HSP70重组质粒免疫已负荷B16/MAGE-3的小鼠,观察小鼠成瘤时间、生存时间.结果pcDNA3.1/MAGE-3-HSP70质粒免疫的小鼠,其脾淋巴细胞对MAGE-3阳性靶细胞表现出明显的杀伤活性,与各对照组相比,P＜0.01,差异有统计学意义;外周血中CD4+、CD8+T细胞和脾细胞培养上清中TH1类细胞因子IFN-γ、IL-2水平明显升高.pcDNA3.1/MAGE-3-HSP70重组质粒免疫已负荷B16/MAGE-3的小鼠后,小鼠成瘤时间明显延迟,生存期明显延长.结论pcDNA3.1/MAGE-3-HSP70 DNA疫苗在体内能诱导出显著的MAGE-3特异性抗肿瘤免疫应答,且能抑制体内已经存在的少量肿瘤细胞的成瘤.
-
含HIV-1核心蛋白基因的重组质粒的构建及其免疫应答的研究
目的构建含有HIV-1核心蛋白gag基因的真核表达质粒,并研究其免疫应答反应.方法采用PCR方法从1例HIV感染者中扩增出gag基因,构建重组质粒pcDNA-GAG.接种小鼠后,检测其抗体及抗体亚类,并对小鼠的淋巴细胞亚群进行分析,采用3H-TdR法、ELISPOT方法和51Cr释放法分别检测T淋巴细胞的增殖反应性、特异性分泌IFN-γ的CD8+T淋巴细胞以及特异性CTL杀伤活性.结果重组质粒体外表达目的蛋白的相对分子质量(Mr)约为55×103.免疫小鼠后可诱导产生特异性抗体,其中IgG2a与IgG的比例显著高于IgG1与IgG的比例;T淋巴细胞体外经ConA刺激后SI达到160.67,显著高于对照组(14.04,P＜0.05);产生IFN-γ的CD8+T淋巴细胞数目以及特异杀伤率均显著高于对照组小鼠(P＜0.05).结论重组质粒pcDNA-GAG可诱导小鼠产生特异性体液和细胞免疫应答反应,而且ELISPOT方法检测特异性细胞免疫应答反应的结果与51Cr释放法一致,提示可用此法对DNA疫苗诱导的细胞免疫进行评价.
-
表达前列腺特异性膜抗原的DNA疫苗对肿瘤细胞的抑制作用
目的构建表达前列腺特异性膜抗原(PSMA)的DNA疫苗,观察其在体外对肿瘤细胞的免疫攻击和在体内对肿瘤细胞攻击的免疫保护作用. 方法通过稳定转染构建表达PSMA的小鼠黑色素瘤细胞系B16-PSMA,将DNA疫苗pCDNA3.1-PSMA通过肌肉注射导入C57BL/6小鼠体内,分离小鼠脾细胞, 检测细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocytes,CTL)反应.以B16-PSMA细胞攻击免疫后小鼠,观察免疫动物的无瘤生存期和肿瘤体积增长情况,评价DNA疫苗的抗肿瘤作用. 结果DNA疫苗可诱导小鼠脾淋巴细胞CTL活性,经过免疫后的小鼠成瘤率降低,无瘤生存期延长,肿瘤生长缓慢,肿瘤组织内有较多淋巴细胞浸润,表明产生较强的抗肿瘤反应. 结论表达PSMA的DNA疫苗能够诱导小鼠产生特异性免疫反应,对表达PSMA的肿瘤细胞的攻击产生免疫保护作用,为前列腺癌的预防和免疫治疗提供了新的思路.
关键词： 前列腺癌 前列腺特异性膜抗原(PSMA) DNA疫苗 -
塞姆利基森林病毒翻译增强序列对HIV Gag DNA疫苗抗原表达和免疫原性的调节
目的研究塞姆利基森林病毒(Semliki forest virus, SFV)衣壳蛋白5'翻译增强区对基于该病毒复制子的HIV Gag DNA疫苗抗原表达水平和免疫原性的影响. 方法将SFV衣壳蛋白(capsid, C蛋白)基因的5'端102 bp翻译增强区插入到SFV复制子DNA疫苗载体pCMV-Rep的SFV亚基因启动子下游,得到DNA疫苗载体pCMV-RepC.将删除ATG的HIV-1 gag基因插入pCMV-RepC,使gag编码区与翻译增强区融合,得到DNA疫苗质粒pCMV-RepC-gag.同时,构建携带未融合翻译增强序列的DNA疫苗质粒pCMV-Rep-gag.Western blot检测翻译增强序列对Gag表达水平的影响.用上述两种DNA疫苗分别免疫BALB/c雌性小鼠,ELISA检测Gag特异的抗体反应,ELISPOT和细胞内因子染色技术检测细胞免疫应答. 结果衣壳蛋白5'翻译增强区增强了Gag表达水平,对体液免疫应答没有显著影响,但显著增强了特异性细胞免疫应答水平.结论 SFV C蛋白翻译增强区能显著提高SFV复制子DNA疫苗的抗原表达和抗原特异性细胞免疫反应.
-
Ag85A DNA疫苗加强免疫显著提高卡介苗初免小鼠的抗结核T细胞免疫应答
目的 构建表达结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)免疫优势抗原Ag85A的DNA疫苗,分析其加强免疫后提高卡介苗(BCG)初免小鼠的抗结核T细胞免疫应答.方法 以Mtb毒株H37Rv基因组DNA为模板,PCR扩增Ag85A抗原编码的结构基因并克隆至真核表达载体pVAX1中构建其DNA疫苗；接着,将纯化后的该DNA疫苗加强免疫BCG初免小鼠2针,以BCG和DNA单独免疫小鼠为对照,免疫8周后无菌分离脾淋巴细胞,分别应用IFN-γ ELISPOT和多因子胞内流式细胞术(intracellular staining)分析免疫小鼠的Mtb抗原特异性效应细胞免疫水平与分泌IFN-γ/TNF-α/IL-2的多功能CD4+T细胞频率及其强度以及CD8+T细胞免疫应答.结果 与BCG免疫及DNA单独免疫组相比,Ag85A DNA加强免疫不仅能显著提高小鼠IFN-γ+TNF-α+IL-2+多功能T细胞,IFN-γ+IL-2+、IL-2+TNF-α+双功能T细胞与IL-2+单功能T细胞的频率以及IL-2的分泌能力,还能显著诱导小鼠产生更多分泌IFN-γ和IL-2的CD8+T细胞.结论 本研究成功构建了表达Mtb免疫优势抗原Ag85A的DNA疫苗并分析了其免疫原性,证实了BCG初免-DNA加强的免疫策略可同时显著增强实验小鼠的Mtb抗原特异性CD4+T和CD8+T细胞应答水平,有利于提高BCG的免疫原性,为增强BCG逐渐下降的抗结核保护效果提供新思路.
-
MUC1/Y基因疫苗治疗膀胱肿瘤的实验研究
目的 探讨人黏蛋白MUC1/Y基因DNA疫苗诱导小鼠特异性细胞毒性T细胞(cytotoxic T lym-phocytes,CTL)及体液免疫应答的作用,为人膀胱癌疫苗的应用提供基础实验研究资料.方法 通过pEGFP-C3-MUC1/γ质粒免疫雄性BALB/c小鼠,采用ELISA法检测小鼠抗体生成情况和CTL分泌IL-2和IFN-γ的量,并用LDH释放法测定CTL对膀胱癌细胞株BIU-87的特异性杀伤率.结果 在接种疫苗的小鼠体内特异性抗体明显升高,CTL分泌的IL一2和IFN-γ较对照组高.在效靶比为100:1、50:1、25:1、12.5:1时,实验组特异性CTL对BIU-87杀伤率分别为50.9%、45.9%、47.5%和18.6%,而对照组(空载体pEGFP-C3和灭菌生理盐水)分别为18.3%、10.7%、13.8%、6.3%;16.5%、11.9%、8.6%和10.3%.实验组与对照组两者之间差异具有显著性(P<0.01).结论 MUC1/Y DNA疫苗能够诱导小鼠体内产生抗人膀胱癌黏蛋白的特异性抗体,并能诱导产生特异杀伤表达MUC1/Y的靶细胞的CTL,为MUCl/Y基因疫苗用于膀胱肿瘤生物免疫提供一种新的治疗策略.
-
细胞因子作为DNA疫苗基因佐剂的研究进展和探索
20世纪90年代以来,伴随着基因治疗技术的发展,产生了一种新型疫苗--DNA疫苗,又称核酸疫苗.DNA疫苗就是运用克隆技术把编码某种特异抗原的外源基因连接到真核表达载体上,利用重组的质粒DNA免疫机体,使外源基因在活体内表达.
-
突变型HBV前C-C基因疫苗的构建及真核细胞表达
目的 采用点突变技术对HBV前C-C基因中的蛋白酶切位点进行4处点突变,构建突变型HBV前C-C/ENH Ⅱ重组基因疫苗,转染HepG2细胞,研究其在真核细胞内的表达情况.方法 采用单引物二次PCR法对质粒VEC依次进行基因点突变,得到151+154(VE2)、151+154+164+167点突变(VE4)2种突变型疫苗,转染HepG2细胞,通过细胞免疫化学、酶联免疫分析、免疫印迹等方法 检测其在HepG2细胞内的表达情况及表达产物的分子量.结果 VEC、VE2、VE4转染HepG2细胞均胞浆表达目的 蛋白,产物分子量分别为18、20、22 kD,细胞裂解液的HBeAg含量VE4、VE2高于VEC,上清中则反之.结论 突变型HBV前C-C基因疫苗VE2、VE4构建成功并表达预期病毒前C蛋白前体.
-
GM-CSF基因增强HCV核心蛋白基因DNA疫苗的免疫应答
目的:研究粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony-stimulating factor,GM-CSF)编码基因对丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)核心(core,C)蛋白编码基因重组质粒诱导的免疫应答有无增强作用.方法:人工合成HCV核心蛋白基因至克隆载体pUC119上,酶切后与真核表达质粒pCMH6K连接,测序正确后将重组质粒pCMH6K/HCV-C转染中华仓鼠卵巢(China hamster ovary,CHO)细胞.免疫荧光检测转染的CHO细胞中HCV C蛋白分布与表达.将已构建成功的GM-CSF编码基因重组子(pGM-CSF)联合pCMH6K/HCV-C肌注免疫Balb/c鼠,ELISA 法检测免疫小鼠血清抗HCV C特异性抗体水平,经流式细胞仪检测不同免疫原免疫鼠后脾T淋巴细胞亚群及Th细胞内细胞因子[干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)、白介素-4(interleukin-4,IL-4)]变化,LDH法测定CTL活性.结果:pCMH6K/HCV-C经鉴定构建正确.所编码的蛋白主要分布于胞膜,少量分布于胞浆.pGM-CSF+pCMH6K/HCV-C联合免疫组和pCMH6K/HCV-C单独免疫组均产生抗HCV C特异性抗体,两组间比较差异无统计学意义;联合免疫组CD4+T淋巴细胞比例为44.90％±5.99％,明显高于其他组(P＜0.05).不同免疫组CD8+T细胞比例变化不大,与空载体pcDNA3.1(+)组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).联合免疫组CTL活性为56.48％±4.68％,明显高于其他组(P＜0.05).联合免疫组IFN-γ/IL-4比值为18.20±2.36,明显高于其他组(P＜0.05).结论:GM-CSF编码基因可增强HCV C基因DNA疫苗的细胞免疫应答,并能够诱导Th1型免疫应答.
关键词： 丙型肝炎病毒 核心蛋白 DNA疫苗 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子 -
两种GAD65片段与IL-4基因共表达DNA疫苗的构建与鉴定
目的 构建两种谷氨酸脱羧酶(GAD)65片段与白细胞介素4(IL-4)基因共表达DNA疫苗,并在体外COS-7细胞中对表达产物进行检测.方法 从GAD 65质粒中扩增出GAD190-315和GAD490-570两个片段的cDNA,Overlap法分别与hIL-2信号肽cDNA基因拼接,将拼接后的融合基因与IL-4基因依次克隆入双启动子真核表达载体pBudCE4.1中.重组子经酶切和测序鉴定后,脂质体转染COS-7细胞,Western blot法检测融合基因的表达,ELISA法检测IL-4表达.结果 核酸序列测定表明克隆的融合基因和IL-4基因序列与报告序列一致,开放阅读框正确,Western blot和ELISA显示在COS-7细胞中均可检测两个目的 基因的表达.结论 两种GAD 65片段与IL-4共表达DNA疫苗均成功构建,为1型糖尿病的预防研究提供了实验基础.
-
人胰岛素原DNA疫苗预防非肥胖糖尿病鼠胰岛β细胞凋亡的机制探讨
目的探讨人胰岛素原 DNA疫苗预防非肥胖糖尿病(NOD)小鼠胰岛β细胞凋亡的机制. 方法 (1)4周龄NOD雌鼠随机分为磷酸盐缓冲液(PBS)、质粒载体PcDNA3.1(PcDNA)、胰岛素原(PIns)3组,由胫前肌分别注射PBS、质粒PcDNA3.1、人胰岛素原 DNA疫苗50 μg,1周后重复1次.(2)各组取12周龄未发病的NOD鼠10只,分离胰腺,HE染色观察胰岛炎;TUNEL+SABC法检测胰岛β细胞凋亡;取脾制成细胞悬液培养72 h,ELISA法测定血清白介素4(IL-4)和γ干扰素(IFN-γ)水平;MTT法检测脾细胞增殖反应. 结果 (1)12周龄时PIns组正常胰岛比例高于PBS组和PcDNA组(均P<0.01),胰岛周围炎比例低于PcDNA组(P=0.02),胰岛内炎比例则低于PBS组(P<0.01)和PcDNA组(P=0.006);(2)PIns组胰岛β细胞凋亡率低于PBS组和PcDNA组(均P<0.01);(3)PIns组血清IL-4/IFN-γ比值显著高于PBS组(P=0.014)和PcDNA组(P=0.036);(4)PIns组脾细胞对人胰岛素增殖反应的刺激指数(SI)低于PcDNA组(P=0.021). 结论人胰岛素原 DNA疫苗通过上调IL-4/IFN-γ比值,使免疫平衡向Th2偏移,致NOD鼠胰岛炎减轻,胰岛β细胞凋亡减少.
-
尘螨主要变应原DNA疫苗对其提取液诱导小鼠肺部变应性炎症的免疫保护作用
目的探讨尘螨主要变应原DNA疫苗对尘螨提取液诱导的小鼠肺部变应性炎症的免疫治疗作用.方法分别构建表达Derp1和Derp2的真核表达质粒pCMV-Derp 1和pDerp 2-IRES-Derp1.30只BALB/c小鼠随机分为正常组(6只)、对照组(12只)、单质粒组 (6只)和混合组(6只).后三组分别用空白质粒、pDerp2-IRES-Derp 1或混合的pDerp 2-IRES-Derp 1和pCMV-Derp1免疫,4周后用尘螨提取液致敏、激发,观察肺部炎症、计分、肺泡灌洗液(BALF)细胞总数和分类计数;酶联免疫吸附法(ELISA)检测BALF中白细胞介素4(IL-4)和γ干扰素(IFN-γ)水平.结果细胞总数和嗜酸细胞(EOS)计数:混合组[(6±4)×105/ml、0.05±0.04]和对照组[(21±13)×105/L、1.80±1.39]比较差异有显著性(P<0.05);IL-4水平:混合组[(168±233)g/L]与对照组[(538±256)g/L]比较差异有显著性(P<0.05),各组间IFN-γ比较差异无显著性(P>0.05).结论尘螨主要变应原的DNA疫苗可有效抑制尘螨提取液诱导的肺部变应性炎症,能表达两个主要变应原的DNA疫苗其抑制变应性炎症效果优于只表达一种变应原的疫苗.
-
结核分枝杆菌分泌蛋白64基因重组腺病毒疫苗的构建
卡介苗是当前惟一能够应用于人体的结核病疫苗,但对成人肺结核的保护效率很低.DNA、多肽及病毒等亚单位疫苗能够加强卡介苗或重组卡介苗的免疫保护效果,目前被认为是结核病疫苗研究的重要方向之一~([1-2]).同DNA疫苗和多肽疫苗相比,重组活的结核病亚单位疫苗能在体内持续表达MTB特异性抗原,使其具有高效和经济的优势.
