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华南地区鼻咽癌13号和14号染色体长臂发生高频率等位基因杂合性缺失
目的分析鼻咽癌(NPC)13号染色体长臂(13q)和14号染色体长臂(14q)上21个位点的等位基因杂合子丢失(LOH),并分析这些位点的LOH与NPC临床病理及EBV感染的关系.方法用聚合酶链反应(PCR)为基础的微卫星多态性分析技术结合基因扫描和基因绘图技术对60例NPC进行LOH分析.结果 13q染色体发生一个或多个位点LOH频率为78%,高频率LOH(大于30%)位点集中于13q12.3-q14.3和13q32附近.14q染色体发生至少一个位点LOH的频率为80%,高频率丢失位点集中于14q11-q13、14q21-q24和14q32附近.13q31-q32位点的LOH与低滴度血清EBV EA/IgA有关;14q染色体的LOH与NPC细胞的分化差有关.结论华南地区鼻咽癌在13q和14q染色体发生高频率的LOH,这些缺失区可能存在多个在NPC发生发展过程中起重要作用的肿瘤抑制基因.
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膀胱移行细胞癌3号染色体短臂上抑癌基因杂合性缺失的研究
目的探讨位于3号染色体短臂的候选抑癌基因FHIT、 hMLH 和VHL在中国人膀胱移行细胞癌( TCC)发生中的可能作用. 方法选取6个位于上述基因内含子或与上述基因紧密连锁的微卫星多态标记对40例膀胱TCC组织进行杂合性缺失( LOH)分析. 结果位于FHIT基因内含子内的两个微卫星多态标记(D3S1234和D3S1300)中至少有一个为杂合子的杂合率为95.0%(38/40),至少有一个发生LOH的频率为57.8%(22/38).与hMLH1基因连锁的两个微卫星多态标记(D3S1561和D3S1612)中至少有一个为杂合子的杂合率为55.0%(22/40),至少有一个发生LOH的频率为59.1%(13/22).与VHL基因连锁的两个微卫星多态标记(D3S1038和D3S1284)中至少有一个为杂合子的杂合率为90.0%(36/40),至少有一个发生LOH的频率为47.2%(17/36).在所检测微卫星多态标记中仅D3S1284的LOH与膀胱TCC的病理分期正相关(P<0.05),余微卫星多态标记的LOH与膀胱移行细胞癌病理分级及病理分期均不相关(P>0.05). 结论上述3个基因在膀胱TCC中存在高频率LOH,提示它们可能在膀胱TCC的发生发展中起重要作用.FHIT基因和hMLH1基因的缺失作为分子标志有可能为膀胱TCC的早期诊断提供新的途径和依据,而VHL基因的缺失可能是膀胱TCC发生的晚期事件.
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胶质瘤1p/19q联合缺失与病理类型的相关性研究
目的 研究在不同病理类型的胶质瘤中1p/19q的联合缺失情况及相关的临床因素.方法 收集胶质瘤标本127例,采用荧光原位杂交技术检测肿瘤组织标本中1p和19q的缺失状态,统计分析不同病理类型胶质瘤组织的1p/19q联合缺失率并应用Logistic回归分析与联合缺失相关的临床因素.结果 1p/19q联合缺失率为42.52%,其中星形细胞肿瘤、少枝星形细胞肿瘤和少枝胶质细胞肿瘤中1p/19q联合缺失率分别为19.30%、50.00%和80.77%,少枝星形细胞肿瘤和少枝胶质细胞肿瘤的1p/19q联合缺失率显著高于星形细胞肿瘤(P<0.01),少枝胶质细胞肿瘤的1p/19q联合缺失率高于少枝星形细胞肿瘤(P<0.05);1p/19q单独缺失率为9.45%,星形细胞肿瘤、少枝星形细胞肿瘤和少枝胶质细胞肿瘤的1p/19q单独缺失率分别为12.28%、11.36%和0.1p/19q联合缺失与年龄、性别和病理级别的相关分析无统计学意义.结论 在胶质瘤中,联合缺失是染色体1p和19q常见的缺失形式,并且与少枝胶质细胞成分密切相关,在胶质瘤的病理诊断、治疗方案选择和预后判断中有一定价值.
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淋巴结转移性鼻咽癌患者染色体16p杂合性缺失的研究
我们比较基因组杂交研究已发现,鼻咽癌原发灶和淋巴结转移灶均存在显著的染色体不平衡[1].本研究以染色体缺失率较高的16p为研究对象,构建其杂合性缺失(loss of heterozygosity,LOH)图谱,为进一步定位和克隆鼻咽癌转移相关抑癌基因提供基础.
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在染色体9p22区域发现一个新的肺癌和喉癌共有的高频率缺失位点
肺癌和喉癌是呼吸系统两大主要肿瘤.研究表明染色体9p上的杂合性缺失(loss of heterozygosity,LOH)与多种肿瘤的发生密切相关[1,2].众所周知,定位于9p21的MTS1/p16是其中的一个重要的肿瘤相关靶位点[3];而近几年人们把研究热点逐渐转移到p16以外的其他位点[4].
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乙基亚硝基脲诱导小鼠淋巴瘤细胞tk基因杂合性缺失
目的 探讨tk基因分子突变的类型,对不同剂量乙基亚硝基脲(ENU)诱导小鼠淋巴瘤L5178Y3.2.7c-tk+/-细胞tk基因突变的杂合性缺失(LOH)进行分析,为环境致突变荆检测和突变机制研究提供依据.方法 使用乙基亚硝基脲10μg/mL和100μg/mL剂量对L5178Y细胞进行梯度染毒,分别测定细胞毒性、细胞接种效率、相对存活率、相对悬浮生长率和突变频率等.挑选经ENU诱导的tk基因突变子(tk-/-)和自发突变体,提取基因组DNA,应用等位基因特异性PCR扩增、杂合性缺失分析等技术,分析其杂合性缺失的发生.结果 低剂量和高剂量诱导突变体的tk基因LOH发生率分别为73.5%和69.1%.LOH分析结果 显示,诱导突变体的LOH在大集落与小集落之间差异具有显著性(P＜0.05).结论 功能性等位基因缺失是ENU诱导tk基因分子突变的重要形式之一,不同剂量可能具有不同的突变机制.
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p73在卵巢癌中的作用研究进展
p73基因是新近发现的一种抑癌基因,与p53基因高度同源,二者结构和功能相似.p73有多种异构体,且各种异构体功能不同.p73基因在卵巢癌中很少突变,主要通过甲基化和杂合性缺失(loss of heterozygosity)两种方式失活;通过去甲基化或转基因的方法可使失活的p73基因重新表达而达到治疗卵巢癌的作用.
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抑癌基因PTEN在胃癌及癌前病变中的缺失和突变
目的:探讨胃癌及癌前病变中抑癌基因PTEN的缺失和突变.方法:收集中国医科大学2001～2002年胃镜中心活检标本,萎缩性胃炎、肠上皮化生、不典型增生及对应的正常胃粘膜各30例,收集同期肿瘤外科术后大体标本,早期胃癌及进展期胃癌各30例,饱和氯化钠法提取组织DNA,PCR-SSCP变性聚丙烯酰氨凝胶电泳银染法检测PTEN杂合性缺失(LOH),PCR-SSCP测序法检测PTEN基因突变.结果:在胃癌癌前期病变萎缩性胃炎、肠上皮化生、不典型增生中,PTEN的杂合性缺失率分别为10%、10%、13.3%,在早期胃癌中,PTEN的杂合性缺失率为20%,进展期胃癌中PTEN的杂合性缺失率为33.3%,而PTEN基因突变在癌前期病变及早期胃癌中无1例出现,在进展期胃癌中出现比率为10%,而且所有发生PTEN基因突变的病例均为LOH阳性病例.结论:PTEN基因缺失或失活与胃癌的浸润和转移的关系更密切.
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肝外胆管癌染色体3p21.3区段微卫星不稳定和杂合性缺失分析
目的:研究肝外胆管癌染色体3p21.3区段的微卫星不稳定性(MSI)及杂合性缺失(LOH),探讨染色体3p21.3区段遗传不稳定性与肝外胆管癌的发生发展的关系,定位该区段上肝外胆管癌相关肿瘤基因.方法:用PCR-SSCP方法检测24例肝外胆管癌染色体3p21.3区段上D3S1568,D3S1621,D3S1578和D3S1289四个微卫星位点的MSI和LOH发生率,分析其与临床病理因素之间的关系.结果:24例肝外胆管癌组织中,四个微卫星位点的MSI和LOH平均发生率分别为7.23%和15.63%.其中D3S1621位点的LOH高(45.83%,11/24),并与TNM分期、是否伴有局部/淋巴结转移相关(P＜0.05).结论:染色体3p21.3区段D3S1621位点高频率杂合性缺失,提示3p21.3区段可能定位有肝外胆管癌的候选抑癌基因,并在肝外胆管癌的发生发展过程中发挥重要作用.
关键词： 肝外胆管癌 染色体3p21.3区段 微卫星不稳定性 杂合性缺失 -
胃癌7号染色体长臂的杂合性缺失分析
目的:检测胃癌患者7号染色体长臂微卫星位点的杂合性缺失(loss of heterozygosity,LOH),以初步确定7号染色体长臂上与胃癌相关基因连锁密切的微卫星多态位点及LOH的临床意义.方法:在70例原发性胃癌中应用多重PCR技术扩增覆盖整个7号染色体长臂的9个微卫星位点(平均遗传距离为10cm),聚丙烯酰胺凝胶电泳分离PCR产物,用GeneScan、Genotyper软件进行分析.结果:9个微卫星位点的LOH均可发生于原发性胃癌,总的LOH频率为34.3%(24/70),其中D7S486和D7S798位点的LOH频率较高,分别为24.0%(12/50)和19.2%(5/26);总的LOH频率随临床分期而显著增高(P=0.046),D7S486位点的LOH频率在淋巴结转移者显著高于无淋巴结转移者(P=0.015).结论:在7号染色体长臂D7S486和D7S798位点附近,可能存在与胃癌发展相关的抑癌基因.
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非小细胞肺癌中脆性组氨酸三联体基因异常的探讨
目的:探讨脆性组氨酸三联体(FHIT)基因在非小细胞肺癌(NSCLC)中作用机制及其与临床病理间的关系.方法:通过PCR-变性聚丙烯酰胺凝胶电泳-硝酸银染色方法检测40例非小细胞肺癌及其癌旁肺组织与FHIT基因紧密连锁的D3S1300位点杂合性缺失(LOH),并比较其与各临床病理的关系.结果:1)FHIT基因在肺癌组和对照组杂合性缺失的发生率分别为70.0%和0,两组比较有显著性差异(P＜0.001).2)发生FHIT基因杂合性缺失的28例肺鳞癌患者中23例(82.1%)有吸烟史;发生FHIT基因杂合性缺失的12例肺腺癌患者中7例(58.3%)有吸烟史.FHIT基因杂合性缺失与吸烟因素及肺癌组织类型具有相关性(P＜0.05).3)FHIT基因杂合性缺失的发生率与年龄、性别、临床分期、淋巴结转移等临床病理间无明显相关性.结论:非小细胞肺癌FHIT基因杂合性缺失与吸烟因素密切相关,提示FHIT基因可能是烟中致癌物的靶分子.
关键词： 脆性组氨酸三联体基因 非小细胞肺癌 杂合性缺失 -
中国人食管鳞癌10q23微卫星不稳定和杂合性缺失初步探讨
食管癌是较常见的恶性肿瘤之一,早期诊断和积极治疗十分重要.食管癌在癌变发展的不同阶段均有原癌基因的激活和抑癌基因的失活.近年主要集中于研究癌基因c-myc、c-erbB-2、cyclin D1及抑癌基因Rb、p53、p16、APC/MCC等,但尚未发现与食管癌高度相关的特征性基因[1].
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OLK、EK和OSCC 3p微卫星改变及其与病理的关系
目的 探讨口腔白斑、红斑及鳞状细胞癌染色体3p上3个微卫星位点杂合性缺失(LOH)、微卫星不稳定(MSI)改变状况及其与病理的关系.方法 选择3p上3个微卫星位点,应用聚合酶链式反应-变性聚丙烯酰胺凝胶电泳-银染方法,研究39例口腔白斑,12例红斑,32例口腔鳞状细胞癌染色体3p上D3S1266、D3S643、D3S966的LOH、MSI的状况及其与病理的关系.结果 口腔癌前病变及鳞状细胞癌组织中3p上3个位点均出现LOH和/或MSI.不同病理分级组间单个位点LOH或/和MSI发生率无显着性差异(P＞0.05).当综合3p上3个位点的LOH及MSI总的检出率进行统计学分析,LOH检出率在不同临床病理组别之间差异显著(P＜0.01).MSI检出率在不同临床病理组别之间差异无显著性(P＞0.05).MSI在口腔癌前病变癌变早期即已发生,LOH发生频率则随口腔癌前病变癌变的发生发展逐渐增高.结论 3p区域的基因异常是口腔鳞状细胞癌发生和发展过程高频分子事件,该区域可能存在抑癌基因.3p上的微卫星改变状况在口腔癌的发生、发展中扮演重要的角色.
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口腔癌前病变及口腔癌中D9S171微卫星位点变化的研究
目的探讨口腔粘膜癌前病变及口腔鳞癌组织中染色体D9S171微卫星位点变化的情况.方法使用PCR结合琼脂糖凝胶电泳条带Genetools analysis software分析对35例口腔粘膜癌前病变及15例口腔鳞癌的D9S171位点上的杂合性缺失(LOH)和微卫星不稳定(MSI)进行分析.结果 50例口腔粘膜癌前病变及口腔癌组织中,D9S171位点上21例出现微卫星改变(LOH+MSI),其中8例标本出现LOH,13例标本出现MSI.不同临床诊断及病理学分型之间的LOH 或MSI检出率经统计学检验无显著性差异(P＞0.05).结论 D9S171可能为口腔癌前病变癌变过程中的异常基因之一,在口腔癌前病变癌变的发展过程中扮演一定角色.
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食管鳞癌及其前驱病变9q基因杂合子缺失的研究
目的:通过对食管黏膜高级别不典型和鳞状细胞癌中的等位基因杂合子缺失(LOH)的检测,以期发现9q上与食管鳞癌密切相关的抑癌基因.方法:应用显微切割、PCR扩增、凝胶电泳、AgNO3染色等技术,对照分析正常组织、高级别不典型增生和癌组织中的LOH的变化,并就各位点的杂合性丢失率与患者的临床病理参数分别进行单因素分析.结果:①在食管高级别不典型增生和癌组织中,3个微卫星位点的LOH率分别为D9S303(31%,38%)、D9S753(29%,43%)、D9S242(11%,17%).②应用SPSS软件对3个微卫星序列的等位基因LOH率与患者的性别、组织学分化及是否有淋巴结转移进行单因素分析,差异均无显著性(P＞0.05).结论:①从正常鳞状上皮到不典型增生再到癌变的过程中存在基因的异常累积.②9q末端可能存在与食管鳞癌的发生发展相关的抑癌基因.
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神经鞘瘤D22S268杂合缺失与组织学类型的相关性研究
目的探讨神经鞘瘤组织学类型与NF2基因微卫星标记D22S268杂合性缺失(LOH)的相关性.方法选择与NF2基因密切相关的微卫星标记D22S268,应用PCR方法检测35例神经鞘瘤患者的新鲜肿瘤组织标本.结果病理分型为Antoni A型20例, 其中LOH 15例;Antoni B型15例,LOH 0例.两种病理分型中D22S268 LOH发生率存在着显著差异(P<0.01 ).结论 NF2基因的LOH可能在Antoni A型的神经鞘瘤发生过程中起决定性作用.
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细胞重编程前后基因组的动态稳定性
背景：研究表明，人类早代诱导多能性干细胞发生拷贝数变异多于晚代、体细胞及人类胚胎干细胞。目的：分析重编程过程是否危及基因组稳定性，进一步探讨诱导多能性干细胞建系的有效性。
方法：利用高分辨率的Affymetrix Cytoscan HD芯片检测遗传性癫痫先证者的体细胞及早代诱导多能性干细胞，分析重编程后基因组拷贝数变异及杂合性缺失的变化。
结果与结论：与遗传性癫痫患者体细胞相比，其早代诱导多能性干细胞的杂合性缺失未发现明显差异，而存在更多的拷贝数变异，且均为微重复，涉及致癌基因。结果证明重编程过程中基因组稳定性动态变化，需要动态监测诱导多能性干细胞保证其基因组稳定性及临床安全性。 -
中国人喉鳞癌染色体9p21.3-23区域LOH分析
目的 :分析染色体9p21.3-23区域等位基因杂合性缺失(loss of heterozygosity,LOH)情况,确定其在中国人喉鳞癌中发生频率和小缺失区域,为定位克隆喉鳞癌相关抑癌基因提供线索.方法 : 应用9个微卫星多态性标记对24例喉鳞癌组织及其对应的正常远端肺组织进行了同位素标记的聚合酶链反应和变性凝胶电泳,并探讨各位点LOH与病理分级和病理分期的关系.结果: 24例喉鳞癌组织中,共有23例(95.83%)存在至少一个位点的LOH,丢失频率高的位点位于9p22-23的D9S1782(100%)其次是位于9p22-23的D9S162(85.71%).结论 : 在9p21.3-23区域可能存在两个或两个以上的与喉鳞癌发生相关的候选抑癌基因,分别位于9p22-23的D9S1782和D9S162附近.
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胃癌FHIT基因杂合性缺失及微卫星不稳定性的研究
目的:检测胃癌FHIT基因的杂合性缺失(LOH)和微卫星不稳定性(MSI),探讨其与胃癌临床病理特征的关系.方法:从染色体3p14.2选取4个微卫星标记,PCR方法检测50例胃癌和远端正常胃黏膜组织FHIT基因的LOH和MSI.结果:胃癌组织中FHIT基因LOH和MSI发生的平均频率分别为32.4%和26.4%.LOH和MSI与胃癌的Bormann分型、组织学类型、Lauren分型均无显著相关.LOH阳性率胃癌穿透浆膜组显著高于未穿透浆膜组(P＜0.05).MSI阳性率无淋巴结转移组显著高于有淋巴结转移组(P＜0.05).结论:FHIT基因的MSI参与胃癌发生的早期阶段,LOH对胃癌的发展演变起重要作用.
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高加索人和日本人胰腺癌基因组杂合性缺失比较
目的 研究胰腺癌细胞基因组范围内的杂舍性缺失(LOH),比较高加索人和日本人的异同.方法 应用高密度单核苷酸多态性芯片和分析软件,研究12种高加索人和8种日本人胰腺癌细胞株基因组范围内的LOH.结果 每一种胰腺癌细胞基因组中都有不同程度的LOH,其中T3M-4细胞频率高(54.5%);高加索人和日本人胰腺癌细胞株不同染色体臂出现LOH频率不同,高加索人中常见的LOH是9p(12/12,100.0%),而日本人出现频率高的是13q(7/8,87.5%).高频率的(50%以上)共同的LOH出现在染色体臂3p,8p,9p,13q,17p,18q和22q.结论 胰腺癌全基因组范围内出现多处LOH.不同种族LOH出现可 能频率不同,高频率的杂合性缺失区域可能含有新抑癌基因,为今后胰腺癌的研究提供了新的线索和方向.
