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通用型基因悬浮芯片检测生物恐怖细菌的方法研究
目的 建立快速、高通量的基因悬浮芯片检测方法,用于生物恐怖病原体的快速筛检.方法 选择保守的细菌16 S rDNA序列,并针对炭疽芽孢杆菌(Bacillus anthracis,B.a)、鼠疫耶尔森菌(Yersinia pestis,Y.p)、布鲁菌属(Brucella spp.,Bru)、土拉弗朗西斯菌(Francisella tularensis,F.t)和类鼻疽伯克霍尔德菌(Burkholderia pseudomallei,B.p)等5种生物恐怖细菌设计种(属)特异性探针,经16 S rDNA通用引物341A、519B扩增基因组DNA,用基因悬浮芯片方法进行检测,并对方法的灵敏度、特异度、重复性、检测能力进行验证.结果 经16 S rDNA通用引物扩增,特异性探针杂交检测,能将样本细菌鉴定到属水平,同属菌出现交叉反应;检出限分别为类鼻疽伯克霍尔德菌1.5 pg/μl,布鲁菌属20 ps/μl,炭疽芽孢杆菌7 pg/μl,土拉弗朗西斯菌0.1 pg/μl,鼠疫耶尔森菌1.1 pg/μl;15次重复检测各探针变异系数(CV)为5.18%～17.88%,具有较好的重复性;方法可正确检出模拟白色粉末样本中炭疽芽孢杆菌和鼠疫耶尔森菌.结论 建立了通用型基因悬浮芯片检测体系快速高通量筛查生物恐怖细菌的方法.
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基于DPO的四重荧光PCR检测常见分枝杆菌方法的建立与应用
目的 利用多重荧光PCR技术,建立一种快速、准确、特异的检测常见分枝杆菌的方法.方法 以分枝杆菌16S rRNA作为检测靶基因,设计双启动寡核苷酸(DPO)引物和TaqMan探针,探针的5’端分别用FAM 、ROX、HEX和JOE进行荧光标记,3’端标记淬灭荧光.通过对4种分枝杆菌标准株基因组DNA的扩增,评价多重荧光PCR方法的特异性和灵敏度.采用建立的多重荧光PCR方法,采用该方法检测2010年6至12月杭州市红十字会医院68例结核科住院患者清晨痰液标本,结果与细菌培养和抗酸染色镜检进行比较.采用x2检验比较3种方法的阳性率.结果 该方法可准确、特异地鉴定结核分枝杆菌和3种常见非结核分枝杆菌,检测灵敏度均为1 ×101 cfu/ml.对68份痰液标本进行检测,结果显示31份检测结果阳性,阳性率45.6％,明显高于涂片染色镜检(阳性率14.7％),差异具有统计学意义(x2=15.4,P ＜0.05),其中28例为结核分枝杆菌,1例为鸟分枝杆菌,2例为胞内分枝杆菌,与细菌培养鉴定方法一致.1例培养阳性而PCR检测结果阴性标本经16SrRNA扩增测序鉴定为龟分枝杆菌.结论 本研究建立的多重荧光PCR方法敏感、特异、快速,能有效检测结核分枝杆菌和常见非结核分枝杆菌,可用于分枝杆菌感染者的实验室快速诊断.
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改进的四引物扩增受阻突变体系PCR方法同时检测叶酸代谢过程相关的四个单核苷酸多态性位点的研究
目的 建立改进的四引物扩增受阻突变体系PCR(T-ARMS-PCR)检测方法,实现单管一次性检测叶酸代谢过程相关的4个单核苷酸多态性(SNP)位点:rs1801133,rs1801131,rs1805087和rs1801394.方法 方法学建立.于2017年1至4月在河北省儿童医院检验科收集150名体检儿童抗凝全血标本以待验证.利用T-ARMS-PCR原理及多重嵌合引物策略设计rs1801133、rs1801131、rs1805087及rs1801394的特异性内外嵌合引物.通过优化引物浓度和反应条件,经单管PCR反应,结合QIAxcel毛细管电泳分析扩增产物长度,判读150份标本的SNP基因型,同时所有标本经测序法进一步验证.利用SPSS 17.0统计软件卡方检验对150份标本的4个SNP位点分别进行哈迪-温伯格遗传平衡(HWE)检测.结果 改进的T-ARMS-PCR结合毛细管电泳分析的方法可在3 h内一次性识别本研究中叶酸代谢过程相关的4个SNP位点的8个不同等位基因,可对150份全血标本的SNP位点准确分型,其分型结果与测序法完全相符.4个SNP位点基因型的分布均符合HWE平衡定律(χ2rs1801133=0.69,Prs1801133=0.40; χ2rs1801131=0.21, Prs1801131=0.64; χ2rs1805087=3.32, Prs1805087=0.07;χ2rs1801394=1.91,Prs1801394=0.17).结论 本研究建立的改进的T-ARMS-PCR结合毛细管电泳分析方法,可准确地同时检测叶酸代谢过程相关的4个SNP位点,为指导人群特异性地补充叶酸提供了一种可能的技术手段.
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单引物二次PCR法对重组质粒中HBV前C-C基因进行点突变的研究
目的 建立单引物二次PCR法对重组质粒中HBV前C-C基因进行4处点突变,并与传统环状突变法进行对比.方法 将变异点合成在一对互补引物中,先加入单条引物行PCR扩增,再以产物为模板,加入另一单条引物行PCR扩增.PCR产物加入Dpn Ⅰ酶,切除其中变异前的模板质粒,转化入大肠埃希菌DH5α,卡那霉素培养基筛选阳性菌落增菌测序.结果 对该质粒而言,采用单引物二次PCR法预期位点均发生变异,成功率高于传统环状突变法.4个变异后质粒与模板条带位置基本一致,4个质粒的拟变异位点均如预期变异成功,而其他氨基酸无变异.结论 单引物二次PCR法进行重组质粒基因突变较传统环状突变法成功率有所提高.
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肺癌细胞系mtDNA D-环序列微卫星不稳定性的研究
目的:分析七种常用肺癌细胞系线粒体DNA(mitochondrial DNA, mtDNA)非编码D-环区序列的微卫星不稳(mitochondrial microsatellite instability,mtMSI)现象并探讨其意义.方法:培养七种常用肺癌细胞系,人肺腺癌A549、SPC-A-1、Calu-3和LTEP-a-2,人肺扁平上皮癌QG-56,人高转移肺癌95-D,人小细胞肺癌NCI-H446.应用改良一步法提取七种肺癌细胞系mtDNA,设计引物扩增非编码区,PCR产物直接测序,以剑桥序列为标准,对比分析D-环区序列mtMSI情况.结果:七种常用肺癌细胞系mtDNA D-环区中,全部出现了mtMSI.在2个不同位点上共发现10个mtMSI.结论:肺癌细胞系mtMSI发生率高, D环区碱基序列的mtMSI可能与肿瘤的发生发展有关.
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基因组简并寡核苷酸引物聚合酶链反应的影响因素
目的:对影响现有微量基因组扩增方法--简并寡核苷酸引物聚合酶链反应(degenerate oligonucleotideprimed PCR,DOP-PCR)的因素进行探讨.方法:针对现有DOP-PCR扩增过程中存在的影响产物产量和特异性的因素进行分析,分别从不同的DNA模板来源、模板梯度稀释与否以及DOP-PCR扩增产物是否采用低熔点胶回收去除干扰分析的小片段等方面进行研究,后以特异性基因(FTCD和CBS)PCR扩增的结果作为评价指标,了解上述因素对DOP-PCR扩增的影响.结果:以小鼠单个卵细胞基因组为模板与以肝基因组DNA为模板相比,在产量上前者明显低于后者,特异性上两者相当.小鼠肝基因组DNA梯度稀释作为模板进行扩增的结果没有明显差异.与未经低熔点胶回收的DOP-PCR产物相比,经低熔点胶回收的DOP-PCR产物在常规PCR扩增反应中得到的产物特异性更好.结论:应用DOP-PCR方法进行扩增时,小鼠单个卵细胞可以用来进行DOP-PCR的扩增从而用于对特异性基因的检测,但是在扩增产量方面需要进一步的改进或优化.对现有DOP-PCR反应进行产物低熔点胶回收纯化,能够增加产物的特异性,效果满意.
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通过引物设计和提高退火温度提高实时定量PCR检测microRNA的特异性
目的:了解因某些microRNA(miRNA)家族成员序列相似,以及同一种成熟miRNA的长度不均一对PCR定量检测结果的影响,寻找区分相似miRNA成员和准确定量的方法和条件.方法:采用RNA加尾和引物延伸实时定量RT-PCR法,设计不同位置错配的引物,以克隆到质粒中的全长成熟miRNA为模板,比较在不同退火温度下各种错配引物与完全匹配引物在扩增miRNA上的效率差异,并根据由此得出的经验设计let-7家族成员引物,以克隆的成熟miRNA为模板,检测其在不同退火温度下区分相似家族成员的能力.此外,设计了10组3'末端碱基位置不同的特异引物,比较了它们在检测小鼠大脑miRNA表达水平上的差异.结果:提高退火温度12℃～14℃将大限度增加特异性而不降低敏感性,将引物的3'末端置于差异碱基或其附近可以有效区分相似miRNA序列,将引物3'末端置于miRNA第18～20个碱基,可避免漏检较短的成熟miRNA,使定量更真实准确.结论:精心设计引物并提高退火温度可提高实时定量PCR检测microRNA的特异性和准确性.
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不同荧光定量聚合酶链反应法基因检测肺炎链球菌的比较研究
目的 比较不同荧光定量聚合酶链反应法(PCR)基因检测肺炎链球菌的敏感性和特异性.方法 通过设计5种针对肺炎链球菌不同基因的引物[自溶素基因(lytA)、溶菌素基因(ply)、黏附基因(spn9802)、荚膜多糖生物形成蛋白基因(psaA)、编码DNA片段的基因(cspA)],采用荧光定量PCR检测37株肺炎链球菌、28株非肺炎链球菌以及80例临床痰液标本,评价这5种基因检测肺炎链球菌的敏感性和特异性.结果 5种引物均具有较好的检测灵敏度,扩增效率均高于90％.5种引物的Ct值变化均在0.5以内,在PCR扩增时具有可靠的稳定性.利用这5种引物对37株肺炎链球菌和28株非肺炎链球菌进行荧光定量PCR检测,lytA 、ply和spn9802特异性较强(检出阳性率和检出阴性率均为100％).但是lytA 、ply的检测下限较spn9802高一个数量级(101CFU/ml比102 CFU/ml).saA和cspA特异性较弱[psaA检出阴性率为89％(25/28),cspA检出阳性率为97％(36/37)].对80例临床痰液标本进行检测表明,荧光定量PCR在检测特异性上明显优于传统培养法.5种引物在检测临床痰液标本中存在差异,lytA和ply显示出较好的检出率[阳性率分别为92.50％(74/80)、90.00％(72/80)],spn9802次之[86.25％(69/80)],psaA和cspA特异性弱[76.25％(61/80)和78.75％(63/80)].结论 临床常用的5种荧光定量PCR基因在检测肺炎链球菌感染中的特异性和敏感性各不相同,lytA和ply特异性强,spn9802次之,psaA和csPA特异性弱.
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脊髓性肌萎缩症单细胞巢式聚合酶链反应技术的建立及初步应用
目的 建立单细胞巢式聚合酶链反应技术,并探讨进行脊髓性肌萎缩症基因诊断的可行性,为植入前遗传学诊断奠定基础.方法 应用显微操作技术从外周血中分离单个淋巴细胞,制备单细胞DNA模板.分别应用巢式聚合酶链反应和引物延伸预扩增两种方法扩增正常对照者外周血中单个淋巴细胞运动神经元生存(SMN)基因第7、8号外显子,计算其阳性率,建立SMN1基因的单细胞巢式聚合酶链反应技术.并应用该项技术及限制性酶切对1例脊髓性肌萎缩症患者进行基因诊断.结果 正常对照者巢式聚合酶链反应共扩增60个外周血单个淋巴细胞SMN1基因第7号外显子,其中54个扩增成功,阳性率为90%;引物延伸预扩增共扩增10个外周血单个淋巴细胞,巢式聚合酶链反应分别扩增SMN1基因第7、8号外显子,在20个聚合酶链反应扩增中共有17个单个淋巴细胞扩增成功,阳性率为85%.应用巢式聚合酶链反应和引物延伸预扩增两种方法对1例脊髓性肌萎缩症患者单个淋巴细胞扩增后经限制性酶切显示SMN1基因缺失,结果与全血基因组聚合酶链反应-限制性酶切一致.结论 巢式聚合酶链反应和引物延伸预扩增方法各有优缺点,巢式聚合酶链反应耗时短、操作简便,可作为脊髓性肌萎缩症患者单细胞基因诊断的首选方法.
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急性炎症性脱髓鞘性多发性神经病和急性运动性轴索型神经病易感性与HLA-DQ基因的关联性
目的研究格林-巴利综合征(Guillain-Barre syndrome)两种不同亚型急性炎症性脱髓鞘性多发性神经病(acute inflammatory demyelinating polyneuropathy,AIDP)和急性运动性轴索型神经病(acute motor axonal neuropathy,AMAN)与人类白细胞抗原-Ⅱ(human leucocyte antigen-Ⅱ,HLA-Ⅱ)类基因DQ位点分型的关系,探讨AIDP和AMAN患者免疫遗传的特点.方法用改良快速盐析法抽提基因组DNA,采用聚合酶链反应-顺序特异性引物法(polymerase chain reaction-sequence specific primer,PCR-SSP)对31例AIDP患者、33例AMAN患者和132例健康人进行HLA-Ⅱ类基因DQ位点分型.结果 AIDP组中DQ5的频率较健康人升高(Pc=0.025);AMAN组中DQ8的频率较健康人升高,但无显著性意义(Pc=0.07).结论 DQ5与AIDP的易感性可能有关,未发现HLA-Ⅱ类基因中DQ位点与AMAN有明显的关联.
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聚合酶链反应-序列特异性引物在精神疾病大样本多基因分型检测中的应用
背景:聚合酶链反应限制性片段长度多态性分析不适合临床的快速检测应用,也不适合对精神疾病候选基因作大样本量、多个基因的检测分析,而聚合酶链反应-序列特异性引物可能弥补其不足之处.目的:建立多个基因多态性分型的聚合酶链反应-序列特异性引物,认识其在精神疾病分子研究水平中的应用.设计:观察实验.单位:新乡医学院分子生物研究室和病理生理教研室.材料:实验于2005-12/2006-10在新乡医学院分子生物研究室完成.精神疾病患者血样200份,0.5 mL/份,由新乡医学院第二附属医院提供.患者对本实验均知情同意.方法:应用聚合酶链反应-序列特异性引物的方法分析以下基因的多态性:TNFα-308A/G和-238G/A变异,IL-6-174G/C变异,CYP2D6*10B外显子第188位的C/T变异,COMT基因的第472位编码序列的G/A变异,MAOA基因位于第8外显子CDNA顺序的第941位点的G/T变异.主要观察指标:聚合酶链反应-序列特异性引物分析患者血样的基因多态性.结果:TNFα-308A/G位点可检测到的基因型有G/G和A/G:TNFα-238G/A位点可检测到的基因型有G/A,G/G和A/A;IL-6-174G/C变异位点可检测到的基因型均为G/G纯合子;CYP2D6 *10B外显子第188位的C/T位点可检测到的基因型为C/C,C/T和T/T;COMT基因的第472位编码序列的G/A变异位点可检测到的基因型为A/G,A/A和G/G;MAOA基因位于第8外显子CDNA顺序的第941位点的G/T变异可检测到的基因型为T/G,T/T和G/G.结论:聚合酶链反应-序列特异性引物适合对大样本、多个基因的单核苷酸位点变异进行多态性分析,成本低、快速、准确,可用于精神疾病分子水平的研究.
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内蒙古8种啮齿类动物细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ基因引物的优化研究
目的 确定内蒙古鼠疫自然疫源地8种啮齿类动物细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ (CO Ⅰ)基因扩增的佳引物.方法 在内蒙古锡林郭勒盟和乌兰察布市,采集8个鼠种的动物,提取基因组DNA,选择6对已报道的扩增鼠CO Ⅰ基因的引物(F1/R1、F2/R2、F3/R3、F4/R4、VF/VR、F6/R6),PCR扩增8个鼠种的CO Ⅰ基因,对扩增的产物进行测序,并对测序结果进行生物信息学分析和比较.结果 达乌尔黄鼠扩增CO Ⅰ基因的佳引物为F3/R3,达乌尔鼠兔和蒙古兔尾鼠均为鸡尾酒引物VF/VR,大沙鼠、蒙古毛足鼠和布氏田鼠均为F6/R6,五趾跳鼠为F2/R2,子午沙鼠为F1/R1.8种啮齿动物的CO Ⅰ序列进行比对后,发现所有DNA条码都是物种所独有,每个物种都有各自的鉴别位点.结论 不同鼠种在扩增CO Ⅰ基因时需要相应种属特异性引物;扩增多种鼠种时,优先选择F6/R6引物或鸡尾酒引物,针对特殊鼠种可选择该鼠种特异引物进行扩增.
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主要组织相容性复合体Ⅱ类反式激活因子基因编码区单核苷酸多态性与慢性乙型肝炎病毒感染的转归
目的 探讨主要组织相容性复合体(MHC)Ⅱ类反式激活因子(CⅡTA)编码区两个非同义单个核苷酸多态性(SNP)位点C19170G、C30799G的多态性与慢性HBV感染不同临床表型的关系.方法 在627例不同临床表型的慢性HBV感染人群与101名健康献血员中,用序列特异性引物-聚合酶链反应(PCR-SSP)的方法对CⅡTA编码区两个非同义SNP位点C19170G、C30799G进行基因分型;X2检验判断上述位点的基因型分布是否符合Hardy-Weinberg平衡;列联表X2检验检测两组间的差异;非条件Logistic回归进行分析.结果 CⅡTA基因编码区19170位点G等位基因和GG+GC基因型在肝硬化人群中的频率显著高于其在非进展性肝病人群中的频率(X27.128,P=0.008;X26.404,P=0.011),且各基因型频率在肝硬化与非进展性肝病两组人群间存在显著差异(OR:0.742,95%CI:0.552～0.998,P=0.048),其两者间的差异主要存在于G基因显性模式下(OR:0.581,95%CI:0.353～0.954,P=0.032);30799位点C等位基因和CC基因型在肝细胞癌人群中的频率显著高于其在肝硬化人群中的频率(X24.861,P=0.027;X24.993,P=0.025).且各基因型频率在肝硬化与肝细胞癌两组人群间存在显著差异(OR:0.557,95%CI:0.334～0.930,P=0.025),其两者间的差异主要存在于C基因隐性模式下(OR:0.491,95%CI:0.269～0.898,P=0.021).结论 在慢性HBV感染者中,C19170G位点多态性与肝硬化的形成密切相关,携带G等位基因者易发展为肝硬化;C30799G位点多态性与肝细胞癌的发生密切相关,携带CC基因型者易发展为肝细胞癌.
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慢性乙型肝炎干扰素疗效与人类白细胞抗原-等位基因的关系
目的探讨慢性乙型病毒性肝炎干扰素-α治疗6个月疗效与人类白细胞抗原(HLA)部分等位基因的关系.方法应用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)技术对60例上海地区接受干扰素-α正规治疗6个月的慢性乙型肝炎患者的HLA-Ⅱ类分子DRB1、DQA1、DQB1进行等位基因多态性分析.结果无应答组的HLA-DRB1*04携带率高于有应答组(P＜0.025),有应答组的HLA-DQA1*0505(P＜0.025)、DQB1*0301(P＜0.005)的携带率高于无应答组.结论干扰素-α治疗无应答与HLA-DRB1*04(P＜0.025)呈正相关,与HLA-DQA1*0505、HLA-DQB1*0301呈负相关.
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以S2-R2为引物PCR检测石蜡切片中的孢子丝菌
R2为引物的PCR适用于孢子丝菌病石蜡切片中病原菌的检测.
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四对孢子丝菌引物的特异性和敏感性评价
目的 筛选对孢子丝菌特异且敏感的引物.方法 以50株不同地区来源的孢子丝菌临床分离株及标准株的基因组DNA作为研究样本,以毛霉、烟曲霉、念珠菌临床分离菌株基因组DNA作为对照,通过特异引物PCR扩增的方法 筛选国内外文献中报道的4对孢子丝菌引物.所有受试孢子丝菌菌株均出现同一扩增产物,而对照菌株未出现者记为特异性引物,随后将基因组DNA模板倍比稀释后依次行PCR扩增,记录各引物出现阳性扩增结果 时的小模板浓度,检测敏感性.结果 在相同PCR条件下,引物S2-R2、SSHF31-SSHR97及ITS3-SSP具有较好特异性,而引物SS3-SS4对孢子丝菌及念珠菌菌株均可扩增出同样大小的PCR产物.引物S2-R2的敏感性好,基因组DNA模板浓度为5 pg/μL时即可被检出.结论 针对几丁质合成酶1基因的引物S2-R2为孢子丝菌特异且敏感的引物.
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种特异性引物鉴定申克孢子丝菌
目的研究申克孢子丝菌的分子鉴定方法,为孢子丝菌感染的分子诊断奠定基础.方法对22株申克孢子丝菌和12种12株暗色真菌临床分离株的核糖体DNA(rDNA)内转录间隔区(ITS)进行聚合酶链反应扩增.对10株来源于中国不同地区及1株来源于美国的申克孢子丝菌的扩增产物测序并进行分析,以获得的ITS2区序列为靶序列设计出申克孢子丝菌的种特异性引物(SSP),并用该引物扩增全部受试菌株.结果序列分析显示,申克孢子丝菌rDNA的ITS2区相当保守,特异性引物对22株申克孢子丝菌可扩增出一条300 bp的片段,其他受试菌株均为阴性.结论应用设计出的种特异性引物,结合PCR方法,鉴定申克孢子丝菌特异、敏感、可靠,可用于临床诊断.
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采用等温链置换扩增结合纳米金测流层析试纸条检测登革热病毒
目的:探讨等温链置换扩增结合纳米金测流层析试纸条用于登革热病毒(DENV)快速检测的可行性.方法:采用磁珠富集法提取病毒总RNA,并逆转录为cDNA用于等温链置换扩增检测体系;等温链置换扩增用于检测DENV,琼脂糖凝胶电泳用于分析等温链置换扩增产物及其检测的敏感度;采用柠檬酸三钠还原法制备用于试纸条的纳米金颗粒;利用核酸碱基互补配对原理设计纳米金测流层析试纸条的检测线与控制线,建立DENV的检测体系.结果:等温链置换扩增的敏感度为10 fmol/L.基于等温链置换扩增的纳米金测流层析试纸条检测DENV的敏感度也为10 fmol/L,取其检测样品浓度的对数值进行线性分析,检测浓度范围为10～1012 fmol/L,符合线性回归方程,线性相关系数(R2)为0.98.基于等温链置换扩增的纳米金测流层析试纸条检测DENV的特异性较高,与其他对照组无交叉.结论:建立了基于等温链置换扩增反应的纳米金试纸条用于DENV的检测方法,检测结果肉眼可见,敏感度高,可用于DENV的快速检测.
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用TaqMan探针实时定量PCR法快速检测鼠疫耶尔森菌
目的建立一种快速、准确、特异的定量检测鼠疫耶尔森菌的方法.方法针对鼠疫耶尔森菌特异的染色体标识序列设计引物和TaqMan探针,进行实时定量聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)分析,优化反应体系,检测其灵敏度、特异性和重复性.结果以EV76灭活培养物为对象,检测灵敏度可达每反应体系0.08 CfU;30株非鼠疫菌株的检测结果表明,对照菌株均为阴性,检测特异性良好;对同一样品进行17次重复检测,其循环阈值的标准偏差为0.35.结论 TaqMan探针法能够灵敏、特异、稳定地对鼠疫耶尔森氏菌进行定量检测,为鼠疫监控、诊断提供有力手段.
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不同产地和不同环境生长的金线莲的ISSR遗传特性分析
目的 研究不同产地及生长方式的金线莲样本间遗传多样性和亲缘关系. 方法 以20份福建金线莲新鲜叶片为实验材料,采用ISSR-PCR分子标记技术,筛选出15条多态性好、扩增条带清晰的ISSR引物.经琼脂糖凝胶电泳成像后,统计其扩增条带数,运用NTSYS-Pc 2.1和POPGENE 32软件进行UPGMA聚类分析.结果 共扩增出130条清晰可见的条带,多态性比率达100％,遗传相似系数分布在0.647 6～0.971 4,遗传距离分布在0.029 0～0.434 5,其中编号为3和4的样本具有较近的亲缘关系.聚类分析结果显示,当相似系数取0.78时,20份样本被分为3类,可以区分不同的产地和种类. 结论 运用ISSR标记技术,可以从分子水平上揭示福建省内金线莲的遗传多样性.
