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MAPK信号通路在淫羊藿甙促进成骨细胞Cbfa1蛋白表达中的作用
目的 观察淫羊藿甙对体外培养大鼠成骨细胞丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路的影响以及MAPK信号通路在淫羊藿甙促成骨细胞核心结合因子α1(core binding factor-1,Cbfa1)蛋白表达中的作用,以探讨淫羊藿甙对成骨细胞作用的信号传导机制.方法 用酶消化法分离24 h内新生SD大鼠颅盖骨成骨细胞,进行原代培养.在培养液中加入淫羊藿甙(10 ng/mL),作用于成骨细胞5 min、10 min、30 min、60 min,抽提总蛋白,用Western blot法检测细胞中ERK、p-ERK、P38和p-P38蛋白的表达.用雌二醇(10-8 mol/L)作用于成骨细胞5 min、10 min、30 min,同上法检测细胞中ERK、p-ERK、P38和p-P38蛋白的表达.用淫羊藿甙(10 ng/mL)、雌二醇(10-8 mol/L)和u0126或SB203580单独或共同干预成骨细胞24 h,抽提核蛋白,用Western blot法检测Cbfa1蛋白的表达.结果 ①淫羊藿甙作用于成骨细胞,30 min时可促进ERK蛋白的磷酸化,并可持续至60 min,和空白组比较,差异有显著性(P<0.05);淫羊藿甙作用于成骨细胞,5 min时即可促进P38蛋白的磷酸化,在30 min时达高峰,并可持续至60 min,和空白组比较,差异有显著性(P<0.05).②雌二醇作用于成骨细胞,在30 min时可促进ERK蛋白的磷酸化,和空白组比较,差异有显著性(P<0.05);雌二醇作用于成骨细胞,在10 min时可促进P38蛋白的磷酸化,并可持续至30 min,和空白组比较,差异有显著性(P<0.05).③淫羊藿甙和雌二醇均能促进成骨细胞中Cbfa1蛋白的表达,和空白组相比,差异有显著性(P<0.05).u0126和SB203580可以抑制淫羊藿甙和雌二醇促进Cbfa1蛋白表达的作用.结论 ①淫羊藿甙和雌二醇均可以激活成骨细胞中ERK/MAPK和P38/MAPK信号通路;②淫羊藿甙和雌二醇均能促进成骨细胞中核转录因子Cbfa1的表达,并且ERK/MAPK和P38/MAPK信号通路参与了此过程.
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伊班膦酸钠对大鼠膝骨关节炎关节软骨及软骨下骨的影响
目的 观察伊班膦酸钠对大鼠膝骨关节炎关节软骨及软骨下骨的影响,并从MAPKs信号通路探讨其作用机制.方法 将30只3月龄SD雄性大鼠随机分成3组(每组10只).假手术组、前交叉韧带切断术组(ACLT组)、前交叉韧带切断术+伊班膦酸钠治疗组(治疗组).其中ACLT组及治疗组均行ACLT术(膝关节前交叉韧带切断术)处理.术后1w,治疗组予以腹腔注射伊班膦酸钠10 μg/kg,1w1次,共12 w;ACLT组腹腔注射生理盐水,剂量参照伊班膦酸钠,1w1次,共12w.12w后处死动物,对关节软骨行Mankin评分、软骨下骨显微CT及骨组织定量分析、以及对MAPKs信号通路和MMP-13 mRNA表达水平进行分析.结果 ①ACLT组的骨体积分数(BV/TV)、骨小梁数量(Tb.N)显著低于假手术组(P ＜0.05、P＜0.05),骨小梁厚度(Tb.Th)两组之间差异无明显统计学意义、而骨小梁间隔(Tb.Sp)显著高于假手术组(P＜0.01);治疗组骨体积分数(BV/TV)、骨小梁数量(Tb.N)明显高于ACLT组(P ＜0.05、P＜0.05),骨小梁厚度(Tb.Th)两组之间差异无明显统计学意义,而骨小梁间隔(Tb.Sp)显著低于ACLT组(P＜0.05).②ACLT组的Mankin评分明显高于假手术组(P＜0.01);治疗组的Mankin评分明显低于ACLT组(P＜0.05).③ACLT组中MAPKs信号通路(C-JUN、ERK1及P38)和MMP-13水平明显高于假手术组(P＜0.01、P＜0.01、P＜0.01、P＜0.01);治疗组的MAPKs信号通路(C-JUN、ERK1及P38)和MMP-13水平明显低于ACLT组(P＜0.01、P＜0.01、P＜0.01、P＜0.01).结论 伊班膦酸钠可能通过调控MAPKs信号通路的机制缓解大鼠膝骨关节炎关节软骨退变,并且抑制软骨下骨的骨质疏松.
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姜黄素对白细胞介素1β诱导兔骨关节炎标志物的作用
目的：探讨姜黄素对白细胞介素1β（ IL-1β）体外诱导兔关节软骨细胞分泌基质金属蛋白酶-13（MMP-13）、环氧化酶-2（COX-2）、Ⅱ型胶原的影响及可能涉及的信号通路转导。方法分离兔软骨细胞进行体外培养及鉴定，用IL-1β不同时间点刺激软骨细胞，Western Blot 检测MMP-13、COX-2的表达。将IL-1β分别与不同浓度的姜黄素共育于兔关节软骨细胞不同时间点，Western Blot检测MMP-13和Ⅱ型胶原的表达，以期获得佳的作用浓度和时间。使用姜黄素和（或）特异性的p38丝裂原活化蛋白激酶（ MAPK）抑制剂SB203580共培养IL-1β刺激的软骨细胞，RT-qPCR 检测细胞MMP-13、COX-2、Ⅱ型胶原；Western Blot检测p38、p-p38的表达。结果体外分离培养软骨细胞并鉴定，IL-1β上调软骨细胞的MMP-13、COX-2的表达，姜黄素能够抑制p38的磷酸化，p-p38表达有统计学意义（ t＝11.22，P＜0.01）；姜黄素下调IL-1β刺激软骨细胞的MMP-13、COX-2的表达，同时上调Ⅱ型胶原的表达，与IL-1β组相比差异有统计学意义（ tMMP ＝15.79，tCOX ＝10.27，tⅡ胶原＝5.00，P值均小于0.01）。结论姜黄素能够通过减少p38的磷酸化抑制p38 MAPK途径，显著抑制IL-1β刺激兔软骨细胞分泌MMP-13和COX-2，减少软骨基质的降解，增加Ⅱ型胶原的含量，延缓软骨退变，并对软骨细胞具有一定的保护功能。
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p38丝裂原活化蛋白激酶抑制剂SB203580对严重烧伤大鼠离体库普弗细胞促炎性细胞因子分泌的影响
目的 探讨p38丝裂原活化蛋白激酶抑制剂SB203580对严重烧伤大鼠离体库普弗细胞促炎性细胞因子肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor, TNF)-α和白细胞介素(interleukin, IL)-1β分泌的影响.方法 健康成年的SD大鼠10只分为假烫组和烧伤组,假烫或烧伤24 h后处死分离出库普弗细胞.37℃ 5% CO2条件下培养60 min后加入SB203580,18 h后用25 ng/孔的脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)刺激.酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)测定库普弗细胞上清液TNF-α和IL-1β的含量.结果 烧伤大鼠的离体库普弗细胞在LPS刺激后分泌的TNF-α和IL-1β量较假烫组增高显著[(2.847±0.398)ng/ml vs (1.232±0.101)ng/ml,P<0.01;(742.1914±103.7009) pg/ml vs (320.5462±26.3022)pg/ml,P<0.01)].体外使用SB203580既可以抑制烧伤大鼠的离体库普弗细胞分泌TNF-α和IL-1β[(0.1021±0.018)ng/ml vs (2.847±0.398)ng/ml,P<0.01;(26.7167±4.9213) pg/ml vs (742.1914±103.7009)pg/ml,P<0.01)],也可以抑制正常大鼠的离体库普弗细胞分泌TNF-α和IL-1β[(0.113±0.032)ng/ml vs (1.232±0.101)ng/ml,P<0.01;(30.2427±8.9803)pg/ml vs (320.5462±26.3022)pg/ml,P<0.01)].结论 p38 MAPK信号转导通路介导了严重烧伤后库普弗细胞TNF-α和IL-1β的产生,在烧伤后全身炎症反应的发生中发挥着重要的调控作用.
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丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶1与胰腺癌细胞获得性耐药的关系
目的探讨丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)磷酸酶1(MKP-1)在介导胰腺癌耐药细胞株SW1990/Fu产生获得性耐药过程中的可能机制.方法采用Northern 印迹杂交和Western蛋白免疫印迹杂交方法,检测MKP-1在体外诱导建立的人胰腺癌耐药细胞株SW1990/Fu、亲本细胞株SW1990和胰腺癌细胞株MiaPaCa-2中的表达,分析MKP-1在SW1990/Fu产生获得性耐药前后的变化.结果Northern印迹杂交结果显示,在SW1990/Fu、SW1990和MiaPaCa-2细胞株中均检测到2400 bp的MKP-1 mRNA,MKP-1在SW1990/Fu的表达水平明显低于SW1990和MiaPaCa-2.在蛋白水平上,Western 蛋白免疫印迹杂交结果也表明,与SW1990和MiaPaCa-2相比,MKP-1蛋白在SW1990/Fu细胞中的表达水平明显降低.结论 MAPK家族的关键调节酶MKP-1可能参与SW1990/Fu获得性耐药的产生,推测细胞信号转导系统的改变可能是导致胰腺癌细胞产生获得性耐药的机制之一.
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细胞外信号调节激酶抑制剂对烫伤脓毒症大鼠肿瘤坏死因子-α表达的影响及意义
目的观察细胞外信号调节激酶(ERK)抑制剂对烧伤后金黄色葡萄球菌(金葡菌)脓毒症动物组织肿瘤坏死因子(TNF)-α表达及多器官功能损害的影响.方法采用SD大鼠20%总体表面积Ⅲ度烫伤后金葡菌攻击所致脓毒症模型,34只动物随机分为正常对照组(n=6)、烫伤对照组(n=6)、烫伤后金葡菌感染组(n=12)和ERK抑制剂AG126拮抗组(n=10),检测动物肝、肾、肺组织中ERK磷酸化和TNF-α基因/蛋白表达的改变.结果烫伤脓毒症后0.5～2.0 h肝、肺、肾组织ERK均呈现不同程度的活化,其中2.0 h分别为正常对照组的1.94倍(P<0.05)、2.86倍(P<0.01)、1.41倍.AG126拮抗组肺组织磷酸化ERK水平在2.0 h下降70.6%(P<0.01),而肝、肾组织其磷酸化水平不同时相点几乎完全抑制,同时各组织中TNF-α基因及蛋白表达水平明显下调(P<0.05或0.01).与烫伤脓毒症组相比,AG126拮抗组2.0 h肝、肾功能指标明显改善,肺组织髓过氧化物酶活性下降40.3% (P<0.05).结论 ERK信号通路参与了严重烧伤后金葡菌感染所致炎症反应与急性组织损伤的病理过程,针对该环节进行早期干预可有效缓解多器官功能异常改变.
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胎儿宫内生长受限胎盘组织中胰岛素样生长因子Ⅰ受体/MAPK信号通路异常的研究
胎儿宫内生长受限( FGR)的发生率为4％～7％,明显增加新生儿在围生期的死亡率(4～6倍)[1].目前胎儿宫内生长受限的发病机理尚不清楚,近年来,胰岛素或胰岛素样生长因子(IGF)及其受体(IGF-R)分泌和功能的失调成为目前研究的重点[2].胰岛素样生长因子在细胞的分化、增殖、个体的生长发育中具有重要的促进作用.并且在妊娠过程中,该类分子水平的异常及其下游信号通路的异常可能导致胎儿宫内生长停滞[3].本研究通过测定分娩正常儿、FGR的产妇胎盘组织中胰岛素样生长因子/丝裂原活化蛋白激酶(IGF/MAPK)信号通路中多种分子蛋白的表达,探讨其与胎儿生长发育之间的关系.
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MKK4与肿瘤关系的研究进展
目的:探讨MKK4基因与肿瘤关系的研究进展.方法:以MKK4和肿瘤为关键词,检索1989-2008年PubMed全文数据库和维普资讯-中国科技期刊数据库.纳入标准:1)MKK4基因结构及生物学特性的研究;2)MKK4与肿瘤发生发展关系的研究.粗选有76篇关于MKK4结构特点及其与肿瘤关系研究文章,根据纳入标准,精选45篇文献,后纳入分析27篇文献.结果:MKK4是MAPK信号转导通路的组成部分,能磷酸化并激活JNK通路和p38通路,将细胞外刺激信号转导至细胞及其核内,引起细胞的增殖、分化、转化及凋亡等生物学反应.MKK4在肿瘤的形成发展过程中具有重要作用,有研究证实MKK4为肿瘤转移抑制基因或抑癌基因,对肿瘤有抑制作用.然而,也有研究证实MKK4为癌基因,有致肿瘤作用.结论:到目前为止,MKK4与肿瘤关系还存在许多争议,需要我们进一步时其进行认识.
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尾加压素Ⅱ、丝裂原活化蛋白激酶在预缺血联合巴曲酶处理缺血性大鼠脑损伤中的表达
目的 探讨尾加压素Ⅱ(UⅡ)和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导通路在缺血性脑损伤中的病理生理作用及巴曲酶增强缺血耐受现象的脯保护作用.方法 采用预缺血大鼠局灶性脑缺血模型,将大鼠随机分为假手术组、缺血性损伤组、预缺血组、预缺血联合巴曲酶组4组,各组按大脑中动脉永久性阻断后3、6、24、72 h再分为4个亚组.应用免疫组织化学法检测各亚组UⅡ及孤儿G蛋白耦联受体14(GPRl4)免疫活性,Western blot法检测各哑组MAPK亚型ERK和JNK表达.结果 各组大鼠大脑中动脉永久性阻断后24 h其大脑UⅡ和GPR14阳性细胞表达达高峰;同一时间点间比较,预缺血联合巴曲酶组可明显改善大鼠脑损伤症状,明湿降低UⅡ和GPR14表达,增强磷酸化ERK表达,减弱磷酸化JNK表达.结论 巴曲酶可通过抑制UⅡ的合成降低其促血管平滑肌增殖和血管收缩效应,以及促进ERK生存通路和抑制JNK死亡通路而增强内源性脑保护作用.
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γ-干扰素诱导银屑病皮损角质形成细胞MAPK活性的研究
目的 研究γ-干扰素(IFN-γ)诱导银屑病皮损角质形成细胞的丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)活性,以及MAPK在银屑病发病中的意义.方法 在培养的银屑病患者及正常人角质形成细胞中加入IFN-γ、genistein及二甲基亚砜( DMSO)进行刺激,检测MAPK的活性.结果 银屑病皮损角质形成细胞中MAPK活性较正常人高,且在IFN-γ的刺激下活性均增加,而加入genistein时两组MAPK活性明显下降,两组接受IFN-γ、genistein刺激后,MAPK活性变化的比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论 IFN-γ对银屑病角质形成细胞MAPK活性有明显促进作用.
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丝裂原活化蛋白激酶通路在糖尿病视网膜病变中的作用
丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导通路是糖尿病视网膜病变(DR)发生、发展的共同通路.新近研究发现在糖尿病患者中,MAPK通路可被高糖、血管活性物质和细胞因子等多种因素单独或协同激活,并在和其它信号转导途径交叉作用下,影响细胞因子的产生和改变各种视网膜细胞的增殖活性,终导致DR.本文主要讨论MAPK通路在DR患者的作用机制,以期通过各种手段阻断MAPK通路来防治DR的发生、发展.
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杞精明目汤含药血清对结膜松弛症MAPK信号通路的影响
目的 探讨杞精明目汤含药血清对结膜松弛症(CCh)成纤维细胞表达丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)的影响及其作用机制.方法 体外培养结膜松弛症结膜成纤维细胞并鉴定,分为CCh对照组、CCh+20%含药血清组(含药血清组)、CCh+20%无药血清组(无药血清组),予20%的含药或无药血清干预48 h.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测p38 MAPK、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、细胞外信号调节激酶(ERK)及其磷酸化水平的光密度值,Western Blot 检测p38 MAPK、JNK、ERK 蛋白及其磷酸化水平,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测p38 MAPK、JNK、ERK的mRNA表达,并行统计学分析.结果 ELISA结果显示:含药血清组较CCh对照组p38 MAPK、p-p38 MAPK光密度值明显降低(P＜0.05),而无药血清组与CCh对照组差异无统计学意义(P>0.05).含药血清组较CCh对照组JNK光密度值降低(P＜0.05),而无药血清组与CCh对照组差异无统计学意义(P>0.05);含药血清组、无药血清组较CCh对照组p-JNK光密度值下降(P＜0.05).含药血清组较CCh对照组ERK、p-ERK光密度值下降,差异有统计学意义(P＜0.05);而无药血清组与CCh对照组差异均无统计学意义(P>0.05). Western Blot结果显示:含药血清组、无药血清组较CCh对照组p-p38 MAPK蛋白表达量明显下降(P＜0.05),且20%含药血清的p38 MAPK蛋白磷酸化水平下调更为明显.含药血清组、无药血清组与CCh对照组JNK、p-JNK蛋白表达量差异无统计学意义(P>0.05).含药血清组、无药血清组与CCh对照组ERK蛋白表达量差异无统计学意义(P>0.05);含药血清组、无药血清组较CCh对照组p-ERK蛋白表达量均明显降低(P＜0.05),其中含药血清组的ERK蛋白磷酸化水平下调更为明显. RT-PCR结果显示:无药血清组和含药血清组较CCh对照组p38 MAPK、 JNK、ERK的mRNA表达水平均显著下降,差异有统计学意义(P＜0.05),且20%含药血清组p38 MAPK、JNK、ERK mRNA 水平下调更为明显.结论 杞精明目汤含药血清可下调结膜松弛症成纤维细胞MAPK信号通路相关蛋白和基因的表达,其对p38 MAPK、ERK蛋白的磷酸化水平和基因表达的抑制,可能是该方疗效机制的关键.
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丝裂原活化蛋白激酶通路在角膜创伤愈合中的作用
丝裂原活化蛋白激酶（ MAPK）是哺乳动物细胞中重要的信号转导通路，细胞通过这一通路将细胞外信号传递到细胞内，从而调节细胞增殖、迁移、分化及凋亡等生理过程，以及创伤愈合等病理过程。丝裂原活化蛋白激酶-细胞外调节蛋白激酶（ MAPK-ERK）通路是MAPK通路中近年来研究为广泛的1条。通过信号通路水平调控MAPK-ERK通路的表达，其可能成为临床角膜创伤治疗的有效途径。本文对MAPK-ERK通路的结构和功能等特性，及其在角膜创伤愈合中起到的作用进行综述。
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MAPK-ERK在牙本质基质蛋白1信号通路中的作用
目的 探讨在人骨髓间充质干细胞(hMSC)、小鼠前成骨细胞(MC3T3)和成牙本质细胞(MDPC-23)中,牙本质基质蛋白1(DMP1)是否通过激活丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)-细胞外调节蛋白激酶(ERK)信号通路发挥作用.方法 Western blot 检测不同时间点rDMP1C 和rDMP1F 蛋白处理hMSC、MC3T3-E1 和MDPC-23 后,对MAPK-ERK 的激活情况;并检测使用MAPK 抑制剂后,ERK 的激活是否被抑制;细胞免疫荧光技术观察MAPK 抑制剂抑制激活的ERK 从胞浆向胞核的转位情况.Western blot 检测siRNA 沉默Ras 基因后,对rDMP1 引起MAPK-ERK 信号通路激活的影响.结果 三种细胞中,rDMP1F 和rDMP1C 在5 min ～ 3 h 均可以激活MAPK-ERK 通路,而总ERK 在各时间点均无显著变化;rDMP1F 激活信号通路的持续时间均明显长于rDMP1C;MAPK 抑制剂处理组的p-ERK 条带与rDMP1F/C 处理组的p-ERK 条带差别明显.hMSC 中,rDMP1F 激活MAPK 信号通路持续时间要长于其在MC3T3 和MDPC-23 中的作用.细胞免疫荧光检测发现,MAPK 抑制剂组可以阻断ERK 向细胞核内的转位.MC3T3 和MDPC-23 在siRNA 沉默Ras 基因后,ERK 的磷酸化水平与rDMP1F 单独处理组相比显著降低.结论 rDMP1C 和rDMP1F 都通过Ras 激活MAPK-ERK信号通路,而rDMP1F 比rDMP1C 具有更强的信号功能.
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转化生长因子β1、丝裂原活化蛋白激酶在唾液腺腺样囊性癌中的表达及临床意义
目的 探讨人唾液腺腺样囊性癌(SACC)中转化生长因子β1(TGF-β1)、丝裂原活化蛋白激酶[MAPK(p-ERK1/2、P-p38及p-JNK1/2)]的表达、相关性及其与临床病理特征的关系.方法 应用免疫组织化学SP二步法检测27例SACC组织和15例正常唾液腺组织标本中TGF-β1、MAPK的表达情况.所有数据采用SPSS 17.0统计软件包进行统计学分析.结果 SACC中TGF-β1、MAPK的阳性表达率明显高于正常对照唾液腺(分别为P<0.01,P<0.01,P<0.01和P<0.05).SACC组织中TGF-β1、p-ERK1/2和p-p38在Ⅲ～Ⅳ期组的阳性表达率明显高于I～Ⅱ期组(分别为p<0.01,P<0.05和P<0.05),但p-JNK1/2的表达与临床分期无统计学关系(P>0.05),TGF-β1、MAPK的表达与患者的其他临床病理因素均无统计学关系(均为P>0.05);TGF-β1与MAPK的表达显著正相关(分别为r=0.819、P<0.001;r=0.728,P<0.001;r=0.640,P<0.05).结论 TGF-β1、MAPK的高表达与腺样囊性癌的临床进展密切相关.TGF-β1可能通过激活MAPK信号通路调控腺样囊性癌的发生、发展、侵袭及转移过程.
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p38MAPK信号转导通路和蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛
蛛网膜下腔出血引起的脑血管痉挛是患者死亡和致残的主要原因之一.丝裂原活化蛋白激酶是细胞内主要的信号转导系统,它在炎症、细胞增殖分化、细胞凋亡等方面起着重要作用.本文就丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路与蛛网膜下腔出血引起脑血管痉挛的关系作一综述.
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尾吊对大鼠比目鱼肌中ERK1/2磷酸化状态的影响
目的观察尾吊模拟失重后大鼠比目鱼肌中ERK1/2磷酸化状态的变化.方法采用尾部悬吊大鼠模拟失重效应,以Western blot技术检测游离的大鼠比目鱼肌中总的ERK1/2含量和其磷酸化状态的变化.结果 7 d和14 d尾吊模拟失重后,大鼠比目鱼肌内总ERK1/2的含量没有发生改变.而ERK1磷酸化状态在7 d和14 d模拟失重后均显著降低.ERK2的磷酸化状态在尾吊7 d后显著下降,而在14 d尾吊后其下降程度却未达显著性.结论尾吊模拟失重后可降低大鼠比目鱼肌内ERK1/2的磷酸化状态.
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尾吊大鼠股动脉中ERK1/2 含量变化及对收缩功能的影响
目的研究细胞外信号调节激酶(ERK1/2)在尾吊大鼠股动脉中含量的变化及其对收缩功能的影响. 方法采用14 d尾部悬吊大鼠模型模拟微重力效应,利用离体血管环灌流技术,在无抑制剂存在或分别给予α1受体拮抗剂哌唑嗪(prazosin)及丝裂原活化蛋白激酶的激酶(MEK)抑制剂PD98059后,检测大鼠股动脉对去甲肾上腺素的反应性变化;用Western 免疫印迹-增强型化学发光系统(ECL)检测基础状态下ERK1/2的总含量及无抑制剂存在或分别给予哌唑嗪、PD98059后,NE 诱导的ERK1/2磷酸化程度,并与对照组相比.结果与对照组相比,尾部悬吊14 d后,大鼠股动脉对NE的大收缩反应明显下降;PD98059可明显抑制对照组和悬吊组大鼠股动脉由NE诱导的大收缩反应,且对照组的抑制效应明显大于悬吊组;哌唑嗪导致对照组和悬吊组大鼠股动脉对NE的量-效反应曲线右移,但由Schild公式计算所得的PA2值显示受体敏感性在两组间无显著差异.尾吊14 d恢复7 d后,大鼠股动脉对NE的收缩反应与同步对照组相比无显著差异.Western免疫印迹结果表明,与对照组相比,悬吊14 d后基础状态下大鼠股动脉中ERK1/2的总含量高于对照组,但磷酸化程度却低于对照组;经NE作用后,ERK1/2磷酸化程度仍低于对照组.恢复7 d后,ERK1/2的总含量及磷酸化程度与对照组相比无显著差异.结论尾吊14 d模拟失重后MAPK/ERK信号转导通路异常是大鼠股动脉收缩功能下降的原因之一.
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HSP27在热打击致F98细胞氧化应激损伤及细胞凋亡中的作用
目的 探讨热休克蛋白27(HSP27)在热打击(HS)致F98细胞氧化应激损伤及细胞凋亡中的作用.方法 以43℃热刺激60min建立F98细胞热打击模型,在热打击后的不同时间点(0、3、6、9、12h)收集细胞,Western blotting检测HSP27及其各丝氨酸位点的磷酸化水平;采用丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)通路抑制剂(SB203580、SP600125、PD98059)及腺病毒转染特异性抑制相关信号通路,探索F98细胞HSP27的信号调节途径;继而通过磷酸化位点抑制性突变腺病毒转染观察HSP27各位点磷酸化对F98细胞活力、活性氧(ROS)及凋亡水平等的影响.结果 给予热打击后,F98细胞HSP27在复温早期即轻度升高,其3个丝氨酸位点(Ser15,Ser78,Ser82)均发生磷酸化,以Ser78位点磷酸化为主.经MAPKs抑制剂预处理后,HS+SB203580组HSP27的3个位点磷酸化水平较对照组明显下降(P<0.05);MAPK激活蛋白激酶2(MK2)特异性抑制剂2'-氟-N-(4-羟基苯基)-[1,1'-联苯]-4-丁酰胺(CMPD-1)及腺病毒Ad-MK2(A)的干预,使HSP27丝氨酸位点磷酸化水平较HS组明显降低(P<0.05).将F98细胞分别转染HSP27磷酸化位点的抑制性突变腺病毒后,与HS组比较,Ad-Ser78-HSP27组细胞活力增强,ROS水平、Caspase-3活性及细胞凋亡率下降(P<0.05);而AdSer15-HSP27、AdSer82-HSP27组与HS组比较无明显差异(P>0.05).结论 p38 MAPK/MK2途径主要通过磷酸化HSP27的Ser78位点上调ROS,促进F98细胞凋亡.
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丝裂原活化蛋白激酶通路对成纤维细胞内游离钙的影响
为观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对离体热烫伤后成纤维细胞内钙离子的作用以及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路对胞内游离钙的影响,将培养的人成纤维细胞进行热损伤刺激后分成4组:①bFGF处理组(10ng/ml); ②预先加入PD98059(10μmol/L)阻断剂30min,再行bFGF(10ng/ml)刺激;③预先加入SB203580(10μmol/L)阻断剂30min,再行bFGF刺激(10ng/ml); ④同时加入PD98059(10μmol/L)和SB203580(10μmol/L)2种阻断剂30min,再加入bFGF(10ng/ml).应用特异性Ca2+荧光指示剂Fluo-3/AM负载细胞,激光共聚焦显微镜检测细胞内游离钙的浓度.结果显示,受热刺激的成纤维细胞荧光强度较弱.加入bFGF后可促使成纤维细胞中游离Ca2+浓度升高,分别预先加入PD98059和SB203580拮抗剂的成纤维细胞,再加入bFGF,胞内钙离子浓度出现不同的钙振荡现象.同时加入2种阻断剂后胞内钙离子浓度则迅速降低.表明bFGF引起热损伤后的成纤维细胞中游离Ca2+浓度的增加,MAPK信号通路对胞内钙离子有反馈调节的作用.
