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结肠癌细胞对吉非替尼的敏感性与Akt、MAPK表达的关系
达弱(P<0.05).结论 Akt、MAPK及其磷酸化蛋白的表达水平与结肠癌细胞对吉非替尼的敏感性不一致,提示结肠癌对吉非替尼的反应性不能完全由EGFR表达和活性决定,也与其下游信号蛋白Akt、MAPK无关.
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EGFR信号通路的活化状态与结肠癌细胞对吉非替尼敏感性的关系
vo、HT29和HCT116细胞内PTEN的表达均无明显变化(P>0.05).结论 耐受吉非替尼的细胞表现为其生长不依赖EGFR,且下游信号通路的活化状态不伴随EGFR活性受阻而受抑制.结肠癌细胞对吉非替尼的敏感程度是由细胞对EGFR的依赖性以及EGFR和下游信号通路的伴随性所决定的.
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血管生成过程中促血管生成因子及其在内皮细胞中信号转导途径的研究进展
新血管生成在个体发育、创伤愈合及肿瘤生长等过程中具有十分重要的意义.多种促血管生成因子作用于血管内皮细胞,通过不同的信号转导途径调节细胞的迁移、增殖、凋亡、分化、分泌及管腔状结构的形成.本文回顾了多肽类生长因子、脂类介质,如鞘氨醇-1-磷酸酯(sphingosine-1-phosphate,SPP)、溶血磷脂酸(lysophosphatidic acid,LPA)以及一氧化氮分子等在血管内皮细胞中的信号转导途径及其在血管生成过程中的主要作用,并简述了电离辐射对血管生成影响的研究进展.
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运动对c-Jun氨基末端激酶影响研究进展
c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)家族是1990年被发现的丝裂原活化蛋白激酶(mito-gen-activated protein kinase,MAPK)超家族成员之一,涉及多种生理过程.在细胞分化、细胞凋亡、应激反应中起着至关重要的作用.JNK也参与了许多病理过程,可能介导了病理性心脏肥大反应、高血糖引起的血管内皮细胞凋亡、胰岛素抵抗、胰岛β细胞凋亡、神经萎缩和多种人类肿瘤的发生发展.JNK信号通路已成为近年来研究的热点.
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丝裂原活化蛋白激酶抑制剂对急性肺损伤影响
目的 探讨p38 MAPK抑制剂SB203580对大鼠急性肺损伤影响.方法 采用LPS建立SD大鼠急性肺损伤模型,随机分为对照组、LPS组、SB203580组.造模后注射p38 MAPK抑制剂SB203580,在1h、3h、6h及12h时,剖杀大鼠,观察肺组织病理改变,ELISA法测血清中的TNF-α及IL-6;免疫组化检测肺组织中的p38 MAPK及其磷酸化-p38 MAPK.结果 注射LPS后,SB203580治疗组较LPS组血清中的TNF-α及IL-6显著减少(P＜0.05 or 0.01);肺组织中的磷酸化-p38 MAPK的表达显著减轻,而p38丝裂原活化蛋白激酶未明显减轻.结论 p38 MAPK抑制剂SB203580可减轻血清中的TNF-α及IL-6和肺组织中的磷酸化-p38MAPK的表达,从而减轻LPS诱导的急性肺损伤.
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二苯乙烯苷通过MAPK、HIF-1α和p53通路减轻缺氧/复氧损伤诱导的支气管上皮细胞凋亡
本文研究二苯乙烯苷(2,3,5,4’-tetrahydroxystilbene-2-O-β-D-glycoside,TSG)对缺氧/复氧损伤诱导的支气管上皮细胞(BEAS-2B)氧化应激损伤的保护作用及机制.正常培养的BEAS-2B细胞,以缺氧/复氧处理,采用DCFH-DA探针检测细胞内ROS生成,试剂盒检测MDA生成和SOD活性,DAPI染色观察细胞核形态学改变,MCF-7/GFP-Bax细胞观察Bax至线粒体的转位,JC-1探针检测线粒体膜电位,免疫荧光检测细胞色素C自线粒体的释放,Western blotting检测胞浆和线粒体Bax、细胞色素C表达,及caspase-9、caspase-3、磷酸化MAPK、HIF-1α和磷酸化p53 (p-p53)表达.结果显示,TSG可显著提高细胞存活率、降低ROS和MDA生成,抑制Bax蛋白向线粒体的转位,改善核固缩、碎裂等改变,抑制线粒体膜电位下降、细胞色素C释放和caspase-9、caspase-3的激活.同时TSG能抑制SAPK JNK1/2和p38 MAPK的激活但不影响ERK1/2信号通路,抑制HIF-1α表达和核蛋白p53的磷酸化.以上结果表明,TSG能显著抑制缺氧/复氧诱导的BEAS-2B细胞线粒体途径凋亡反应,且MAPK、HIF-1α和p53通路可能是其发挥支气管上皮细胞保护作用的潜在机制.
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川皮苷对人乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭转移能力的影响
目的 研究川皮苷对人乳腺癌细胞MDA-MB-231侵袭的影响.方法 设立空白组和5个浓度(川皮苷:12.5,25,50,100,200 μmol·L-1)实验组.用噻唑蓝法观察不同浓度川皮苷对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖的影响;用Transwell小室和伤口愈合划痕实验检测川皮苷对人乳腺癌细胞MDA-MB-231侵袭转移能力的影响;用免疫印迹法检测川皮苷对侵袭相关分子环氧化酶2(COX-2)、金属基质蛋白酶-2(MMP-2)、金属基质蛋白酶-9(MMP-9)及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路相关蛋白表达的影响.结果 川皮苷可明显抑制人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖,呈时间和剂量依赖性.中高2个浓度(30,50 μmol·L-1)实验组的OD570nm分别为0.32±0.02,0.27±0.01,与空白组的0.62 ±0.07比较,差异具有统计学意义(均P＜0.05).在作用24h后,3个不同浓度(10,30,50 μmol·L-1)实验组的迁移距离分别为(75.52±0.69),(111.73±23.12),(115.71±28.09)μm,较空白组的(47.03±8.29)μm明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05).低中高3个浓度川皮苷处理后的MMP-2的表达分别为(14.17±5.26)×103,(9.33±1.76)×103,(9.28±1.76)×103,与空白组的(22.51±0.90)× 103比较,中高2个浓度实验组差异有统计学意义(均P＜0.001);同样,这3组MMP-9的表达分别为(16.82±2.38) ×103,(9.91±2.08)×103,(8.86±3.26)×103,与空白组的(21.94±1.50)×103比较,差异有统计学意义(均P＜0.05).低中高3个浓度川皮苷处理后的JNK表达分别为(11.78±3.59)×103,(8.65±1.89)×103,(6.21 ±0.60)×103,与空白组1的(13.26±2.69) ×103比较,高浓度组差异有统计学意义(P＜0.05);同样,这3组p38MAPK的表达分别为(11.05±0.42) ×103,(10.08±0.83) ×103,(6.94±0.14)×103,与空白组的(12.38 ±0.14)×103比较,差异均有统计学意义(均P＜0.01).结论 川皮苷在体外具有一定的抑制MDA-MB-231细胞侵袭迁移的作用,其机制可能与MAPK信号通路下调并抑制MMP-2与MMP-9等表达有关.
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胸腺肽β4通过丝裂原活化蛋白激酶信号通路致敏肥大细胞的研究
目的 研究胸腺肽β4(Tβ4)对肥大细胞的致敏作用及可能的机制.方法 将不同浓度的Tβ4作用于肥大细胞株RBL-2H3,检测肥大细胞释放的β氨基己糖苷酶.用丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路特异性抑制剂10μmol·L-1 U0126或抗过敏剂5 mmol·L-1色甘酸钠分别联合4 pmol·L-1 Tβ4作用于小鼠肠黏膜肥大细胞,检测是否可以阻断Tβ4对肥大细胞β氨基己糖苷酶的释放作用.结果 随着Tβ4浓度的增加对肥大细胞的脱颗粒效应逐渐增加,在4 pmol·L-时达到峰值.同样,4 pmol·L-1的Tβ4可显著引起肠道肥大细胞的过敏反应,U0126和色甘酸钠可以抑制Tβ4的致敏效应.结论 Tβ4可通过MAPK信号通路致敏肠黏膜肥大细胞,但可被U0126和色甘酸钠阻断.这为Tβ4的药物开发和应用提供参考依据.
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脱氢枞胺对氟苯甲醛激活JNK/P38通路诱导人肝癌HepG2细胞凋亡
目的：研究脱氢枞胺对氟苯甲醛（DHAA-F）对人肝癌HepG2细胞存活的影响，探讨其诱导细胞凋亡作用机制。方法用不同浓度DHAA-F处理HepG2细胞24，48和72 h，CCK-8法检测细胞存活；DHAA-F 20，40和80μmol · L-1处理 HepG2细胞24 h，荧光显微镜观察细胞形态的变化，Annexin V-FITC/PI双染检测细胞凋亡，Western蛋白印迹法检测凋亡相关蛋白BCL-2、BAX、活化的胱天蛋白酶9和胱天蛋白酶3蛋白表达水平，以及丝裂原激活蛋白激酶（MAPK）家族中ERK，JNK和P38蛋白的表达。结果与细胞对照组比较，DHAA-F可显著抑制细胞存活（P<0.01），24，48和72 h的IC50值分别为56.8±4.4，40.2±3.4和24.2±2.4μmol·L-1；DHAA-F 20，40和80μmol·L-1作用24 h后，核固缩程度加深，PI染色增多，细胞凋亡率明显增加（P<0.01），由细胞对照组的（6.4±0.6）%分别增加至（12.3±1.7）%，（28.8±3.2）%和（61.8±4.6）%；DHAA-F可以增加HepG2细胞中JNK和P38蛋白的磷酸化（P<0.01），引起BCL-2表达下调（P<0.01）、BAX及活化的胱天蛋白酶9和胱天蛋白酶3表达上调（P<0.01）；与DHAA-F组相比，P38MAPK抑制剂SB203580和JNK抑制剂SP600125可逆转DHAA-F引起的BCL-2表达下调、BAX表达上调和胱天蛋白酶3的活化（P<0.01）。结论 DHAA-F可通过激活JNK/P38通路诱导人肝癌HepG2细胞发生凋亡。
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大黄酚对氨诱导小鼠星形胶质细胞c-fos和c-jun mRNA表达下调的影响及其相关机制
目的：探讨大黄酚对氨诱导小鼠星形胶质细胞的影响及相关机制。方法原代小鼠星形胶质细胞共分5组，分别同时加入氯化铵5 mmol·L-1+大黄酚0.1，1.0和10.0 mg·L-1（共3组），氯化铵5 mmol·L-1+细胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）抑制剂UO126（10μmol·L-1）组和氯化铵5 mmol·L-1+p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）抑制剂SB239063（10μmol·L-1）组，处理48 h。紫外分光法测定氧化应激指标丙二醛（MDA）、一氧化氮（NO）的含量以及谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、超氧化物歧化酶（SOD）和一氧化氮合酶（NOS）的活性；Western蛋白印迹法检测ERK1/2和p38 MAPK磷酸化水平，RT-PCR 检测c-fos和c-jun mRNA的表达。结果与氯化铵5 mmol·L-1相比，大黄酚1.0和10.0 mg·L-1显著改善氨诱导的细胞氧化应激，降低了MDA和NO的含量及NOS的活性（P<0.05），明显升高了GSH-Px和SOD的活性（P<0.05）；大黄酚1.0和10.0 mg·L-1也明显降低氨诱导ERK1/2和p38 MAPK的磷酸化增加（P<0.05）；大黄酚0.1，1.0和10.0 mg·L-1，UO126和SB239063均可逆转氨诱导c-fos和c-jun mRNA表达下调的作用（P<0.05）。结论大黄酚通过抗氧化机制影响ERK1/2和p38 MAPK的磷酸化，进而逆转氨诱导c-fos和c-jun mRNA表达下调。
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虫草素抗肿瘤作用分子机制研究进展
虫草素是一种脱氧核苷类似物,具有抗肿瘤、抗白血病、抗菌、抗衰老、免疫调节和清除体内自由基等多种药理作用,对多种疾病尤其是恶性肿瘤具有明确的治疗作用.虫草素抗肿瘤作用机制及其靶点目前已成为分子生物学研究的新热点.虫草素在细胞内有多个作用靶标,可调控肿瘤细胞生长、增殖和转移等过程.虫草素发挥抗肿瘤的作用机制包括抑制嘌呤、DNA和RNA合成及蛋白质翻译,诱导肿瘤细胞凋亡和调控细胞周期,抗肿瘤细胞侵袭,抑制血小板凝集和抗炎5个途径及其相应的信号通路.虫草素在体内迅速脱氨从而丧失生物活性.笔者提出了合成虫草素衍生物、虫草素与腺苷脱氨酶抑制剂联合用药及与纳米新材料等形成新的复合物等3个解决方案,旨在为虫草素的研发提供新的思路,为其临床应用奠定理论基础.
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丹参酮ⅡA磺酸钠影响Ang Ⅱ诱导心肌细胞肥大反应及p-p38,MKP-1表达
目的 观察丹参酮ⅡA磺酸钠(Sodium tanshinone ⅡA sulfonate,STS)对血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ)诱导的心肌细胞肥大反应及p-p38,MKP-1表达的影响.方法 培养新生大鼠心肌细胞,考马斯亮蓝法测定心肌细胞蛋白含量、[3H]-亮氨酸掺入法测定蛋白合成速率作为心肌细胞肥大指标;用Western-blot测定p-38,MKP-1表达.结果 STS能显著降低AngⅡ诱导的心肌细胞蛋白含量、蛋白合成速率上升;对p-p38表达具有显著抑制作用;同时上调MKP-1表达.结论 STS可以抑制Ang Ⅱ诱导的心肌细胞肥大反应,机制与上调MKP-1表达,降低p-p38表达有关.
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MAPK和AKT磷酸化下调参与Toll样受体抑制的人牙周膜干细胞的成骨分化
目的:探讨Toll样受体(Toll like receptors, TLR)对人牙周膜干细胞成骨分化的影响及其可能的分子机制.方法:应用实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time polymerase chain reaction, real-time PCR)及流式细胞术检测TLR在人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells, hPDLSCs)上的表达.在成骨培养基中加入多种浓度的不同TLR配体培养7 ～ 14 d,检测TLR对hPDLSCs成骨的影响.通过Western blotting方法检测TLR配体刺激hPDLSCs 7 d 后,丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase, MAPK)及蛋白激酶 B(protein kinase B, PKB or AKT)磷酸化水平的变化及runt相关转录因子2(runt related transcription factor 2, Runx2)的变化,并对比加入MAPK及AKT抑制剂后Runx2的变化,探究TLR是否通过影响下游的MAPK及AKT的活化而影响hPDLSCs的成骨分化.结果:TLR1、TLR3、TLR4、TLR6在hPDLSCs上表达较高,不同TLR的阳性细胞百分比为TLR1 2.82％ ± 0.68％,TLR2 1.26％ ±0.09％,TLR3 13.23％ ±2.05％ ,TLR4 3.64％ ±0. 79％ ,TLR6 3. 21％ ±1.64％,其趋势与 TLR 在 hPDLSCs 中 mRNA 表达相一致.高浓度的 TLR 配体(PolyI:C 10 mg/L, LPS 10 mg/L , Pam3CSK4 1 mg/L, FSL-1 50 μg/L)刺激hPDLSCs可减少矿化结节的形成,减弱ALP染色及降低ALP活性.高浓度TLR配体刺激还可下调细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases, ERK)、P38、c-Jun 氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase, JNK)及AKT的磷酸化水平,伴随Runx2的表达水平下调,应用MAPK及AKT抑制剂也可下调Runx2的表达.结论:高浓度的TLR配体刺激可抑制hPDLSCs的成骨分化,这种抑制作用和MAPK及AKT磷酸化降低相关.
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MAPKs信号通路干预对体外培养大鼠星形胶质细胞划痕损伤后水通道蛋白4表达的影响
目的 研究体外培养大鼠星形胶质细胞划痕损伤后水通道蛋白4(aquaporin 4,AQP4)表达变化,并观察丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPKs)信号通路特异性抑制剂对此变化的影响.方法 利用传代培养10 d左右的大鼠星形胶质细胞制作划痕损伤模型,部分实验于划痕损伤前1 h 分别加入ERK抑制剂U0126,p38 MAPK抑制剂SB203580及JNK抑制剂SP600125.观察细胞形态变化、GFAP免疫细胞化学染色变化,并用实时荧光定量PCR法检测AQP4 mRNA 表达变化.结果 划痕损伤后12 h,细胞形态由扁平形变为不规则形,部分细胞突起向划痕区伸出,划痕区出现GFAP 免疫化学染色阳性细胞,AQP4 mRNA表达水平明显降低(P<0.05),而U0126,SB203580和SP600125预处理均能阻止此种变化(P<0.05).结论 划痕损伤引起培养星形胶质细胞AQP4 mRNA表达下调,MAPKs抑制剂可对抗此作用,提示MAPKs信号通路参与星形胶质细胞损伤后AQP4表达变化的调节.
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人脑动静脉畸形差异表达基因的筛选和研究
目的 应用基因芯片技术分析人脑动静脉畸形的基因表达谱.方法 收集4例脑动静脉畸形样本和4例难洽性癫痫患者行颞叶切除后显微分离的脑血管对照样本,提取组织中的总RNA,分别标记荧光探针后与含有21522个基因的寡核苷酸芯片进行杂交,SAM软件筛选差异表达基因,后应用在线生物分子功能注释系统分析其可能参与的分子信号通路.结果 脑动静脉畸形样本中118个基因的表达存在显著性差异,表达上调的45个,下调的73个.丝裂原活化蛋白激酶(MARK)信号通路富集基因多,差异基因MAPK3、RPs6KA1、DUSP14、DUSP2参与ERK1/ERK2 MAPK信号传导.ITGA4基因表达显著上调,其平均表达水平是对照组的6.15倍.一些血管生成相关基因如血管内皮生长因子、血管生成索和Ephrin家族基因表达未见显著性差异.结论 ERK1/ERK2 MAPK信号通路可能参与脑动静脉畸形的血管生成和血管重构.ITGA4基因可能通过其产物介导纤维结合蛋白信号,促进血管内皮细胞的增殖,在脑动静脉畸形的血管生成中发挥重要作用.
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丝裂原活化蛋白激酶MAPK信号通路与糖尿病心肌病关系的研究进展
糖尿病心肌病是导致糖尿病患者心血管疾病高发生率和高病死率的主要原因。由于糖尿病心肌病病因复杂，又具有独特的病理生理改变，故其确切的发病机制尚未完全阐明。目前研究认为，丝裂原活化蛋白激酶MAPK信号通路参与胰岛素抵抗、细胞应激、炎症、凋亡等代谢过程，是涉及了多级蛋白激酶的级联反应。本文总结了近年来关于MAPK信号通路与糖尿病心肌病的研究状况，旨在说明从阻断MAPK信号通路角度对糖尿病心肌病进行干预可以成为防治糖尿病心肌病的一个新途径。
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丝裂原活化蛋白激酶与高通气量高氧肺损伤研究进展
机械通气在临床上鲁适应用于新生儿与ARDS,但是高通气高氧引起的氧化应激反应会导致志慢性肺损伤.本文就其中起重要传递作用的MAPKs作用做一概述.
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顺铂诱导自噬和丝裂原活化蛋白激酶调控骨肉瘤细胞耐药的机制研究
目的 探讨自噬和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)在骨肉瘤细胞顺铂化疗后耐药性获得过程中所发挥的功能.方法 通过细胞克隆分析实验检测不同顺铂浓度下的细胞存活情况以确定佳处理浓度及耐药细胞株,Western Blot检测自噬和MAPK等相关蛋白表达含量变化,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测自噬相关基因转录水平变化,AnnexinV-FITC及Z-VAD-FMK检测细胞凋亡情况,利用药物抑制自噬和MAPK信号通路探讨两者对骨肉瘤细胞耐药性获得的贡献.结果 细胞克隆分析实验结果显示,7.5μmol/L顺铂浓度诱导显著的细胞凋亡,通过连续10 d的药物筛选获得耐药细胞株,且在显微镜下观察到骨肉瘤细胞获得耐药性后细胞形态发生变化,同时DNA损伤修复的关键因子PARP蛋白表达上调明显;RT-PCR及Western Blot结果显示顺铂激活了骨肉瘤细胞中的自噬过程,ATG5和LC3B-Ⅱ蛋白及mRNA水平均上调(P<0.05),同时AnnexinV-FITC及Z-VAD-FMK实验结果显示当抑制了自噬后细胞凋亡显著增加(P<0.05),骨肉瘤细胞恢复了对顺铂的敏感性,且此过程有MAPK信号的参与.结论 自噬和MAPK信号在骨肉瘤细胞顺铂耐药过程中发挥重要作用,这一结果可对改善骨肉瘤患者的治疗策略提供新思路.
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LTB4在THP-1源性巨噬细胞中通过MAPK途径上调EMMPRIN的表达
目的 探讨白三烯B4在MAPK信号通路中对细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN)表达的影响.方法 将人类单核细胞系THP-1分为6组,用PMA诱导2～6组的THP-1成巨噬细胞,3～6组加入白三烯B4,第4组加入PD98059(ERK1/2抑制剂),第5组加入SB203580(P38抑制剂),第6组加入SP600125(JNK抑制剂),观察EMMPRIN和MMP-9的mR-NA以及EMMPRIN的蛋白变化.结果 LTB4使单核细胞EMMPRIN的mRNA表达增加(P＜0.05)、MMP-9的mRNA表达增加(P＜0.01),及EMMPRIN的蛋白表达明显增加(P＜0.01),加入PD98059后,EMMPRIN的mRNA表达明显下降(P＜0.01),MMP-9的mRNA表达明显下降(P＜0.01),EMMPRIN蛋白表达明显下降(P＜0.01),加入SB203580后,EMMPRIN的mRNA明显下降(P＜0.01),MMP-9的mRNA明显下降(P＜0.01),EMMPRIN蛋白表达明显下降(P＜0.01),加入SP600125后,EMMPRIN的mRNA明显下降(P＜0.05),MMP-9的mRNA明显下降(P＜0.01),EMMPRIN蛋白表达明显下降(P＜0.01).结论 白三烯B4通过激活MAPK信号通路增加THP-1源性巨噬细胞EMMPRIN的表达,可能是其增加巨噬细胞MMPs产生的机制.
