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黄芪注射液对贫血小鼠骨髓有核细胞表达抗凋亡蛋白的影响
目的:观察黄芪注射液对放化疗因素所致骨髓抑制性贫血小鼠造血的影响.方法:采用Co60照射加注射环磷酰胺、氯霉素复合造模建立贫血模型小鼠,用黄芪注射液(AMI)进行治疗,检测外周血和骨髓有核细胞,并应用免疫组化和造血祖细胞体外培养技术检测骨髓有核细胞Bcl-XL和Bcl-2蛋白的表达.结果:AMI给药组RBC、HB、PLT和BMC明显高于贫血对照组;CFU-E、BFU-E、CFU-Meg和骨髓有核细胞抗凋亡蛋白Bcl-XL的表达也明显高于贫血对照组,CFU-E和骨髓有核细胞抗凋亡蛋白Bcl-XL的表达也高于贫血对照组.结论:黄芪注射液可通过上调抗凋亡蛋白Bcl-XL表达减轻骨髓有核细胞的凋亡,并促进红系、巨核系造血.
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线粒体hsa-let-7b在机采血小板储存过程中的表达变化
目的 通过检测机采血小板储存过程中线粒体hsa-let-7b的表达情况,探讨其对血小板凋亡可能的影响.方法 提取不同储存时期机采血小板线粒体总RNA及miRNA,以5s RNA为内参照,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分别检测hsa-let-7b及Bcl-xL mRNA的表达量变化并分析它们的相关性.结果 在血小板贮存过程中线粒体hsa-let-7b表达水平明显增加,Bcl-xL mRNA在血小板贮存过程中呈下降趋势,2者之间的表达变化呈负相关,具有显著性(P＜0.05).生物信息学分析推测let-7b可能靶向调控Bcl-xL.结论 血小板线粒体hsa-let-7b的表达变化可能是下调Bcl-xL从而促进血小板凋亡的分子机制之一.
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硫代反义Bcl-xL寡脱氧核苷酸对BcaCD885颊癌细胞凋亡及热敏感性的影响
目的探讨硫代反义Bcl-xL寡脱氧核苷酸(AS-sODN)对BcaCD885颊癌细胞凋亡及热敏感性的影响.方法以脂质体Lipofectin为载体,转染AS-sODN于BcaCD885细胞内,倒置显微镜观察细胞形态学改变,TUNEL原位末端标记检测细胞凋亡,流式细胞技术(FCM)测定细胞凋亡率及Bcl-xL蛋白表达水平;转染AS-sODN于BcaCD885细胞内,再以43 ℃,40 min加热细胞,FCM检测细胞凋亡率.结果AS-sODN转染后,BcaCD885颊癌细胞出现皱缩、呈浮起状,TUNEL原位末端标记阳性,Bcl-xL蛋白表达明显下降(P<0.05),热诱导细胞凋亡率明显提高(P<0.05).结论硫代反义Bcl-xL 寡脱氧核苷酸能诱导BcaCD885颊癌细胞凋亡并能提高其热敏感性.
关键词： 反义寡脱氧核苷酸 Bcl-xl BcaCD885细胞 凋亡 热敏感性 -
帕金森氏病相关蛋白Pink1促进自噬的研究
目的 探讨帕金森氏病相关蛋白Pink1在自噬过程的作用.方法 采用RT-PCR扩增基因片段,构建Pink1、自噬抑制蛋白Bcl-XL和自噬激活因子Beclin1等重组质粒,并通过慢病毒系统建立稳定表达Pink1-Flag的HEK293细胞株,通过重组质粒转染细胞,过表达相关蛋白,用免疫共沉淀和Western blot检测Pink1和Bcl-XL的相互作用,Pink1对Bcl-XL和Beclin1相互作用的影响,以及Pink1对自噬的影响.结果 自噬抑制蛋白Bcl-XL与Pink1有相互作用,过量表达Pink1可以抑制Bcl-XL与自噬激活因子Beclin1的相互作用.过量表达Pink1提高自噬下游蛋白LC3Ⅱ/LC3 Ⅰ.结论 帕金森氏病相关蛋白Pink1通过与自噬抑制蛋白Bcl-XL相互作用释放自噬促进因子Beclin1来激活自噬.
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大鼠脑出血血肿周围补体与细胞凋亡的动态观察
目的:动态观察大鼠脑出血后血肿周围组织补体激活与细胞凋亡的规律.方法:用胶原酶注入到大鼠尾状核的方法制作脑出血模型.将大鼠分为脑出血、假手术组、正常组3组.采用苏木素伊红(HE)染色、免疫组织化学染色及原位末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)分别观察各组在脑出血后第6 h、12 h、24 h、48 h、72 h、5 d、7 d时血肿周围补体C3、促凋亡基因(Bax)、抑凋亡基因(Bcl-xl)及TUNEL的表达.结果:补体C3的表达峰值在24～48 h;TUNEL、Bax蛋白表达术后12h增加,48～72 h达高峰,而Bcl-xl蛋白表达高峰在48h.结论:大鼠脑出血后血肿周围组织补体C3的表达增加与细胞凋亡的演变趋势一致,C3与凋亡有相关.
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银杏叶提取物对阿尔茨海默病大鼠学习记忆能力及海马神经元凋亡的影响
目的 观察银杏叶提取物(EGB)对A β25-35所致阿尔茨海默病(AD)模型大鼠的学习记忆能力及脑内海马神经元c-Rel和Bcl-xl表达的影响.方法 采用双侧海马注射A β25-35制备AD大鼠模型,采用Morris水迷宫检测EGB对模型大鼠认知功能的的影响;通过病理形态学观察EGB对模型大鼠的脑保护作用;采用免疫组化法观察EGB对模型大鼠海马神经元c-Rel和Bcl-xl的表达.结果 AD组与假手术组(SC)比较,每天隐匿平台逃避潜伏期均明显增长(P＜0.05),海马CA1区Bcl-xl和c-Rel阳性细胞光密度明显减少(P＜0.05);ECB(150和300mg/kg)组与AD组比较,空间学习记忆能力明显改善(P＜0.05),海马CA1区Bcl-xl和c-Rel阳性细胞光密度明显增高(P＜0.05).但EGB1(150mg/kg)组与EGB2(300mg/kg)组比较,每天隐匿平台逃避潜伏期和海马CA1区Bcl-xl和c-Rel阳性细胞光密度值差异无统计学意义(P＞0.05).结论 EGB能通过增强c-Rel及Bcl-xl的表达,抑制海马神经元的凋亡,改善AD大鼠学习记忆能力.
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神经营养因子、凋亡相关因子和轴突导向因子在大鼠神经管畸形发育中的表达
目的 探讨神经营养因子(NT-3,CNTF,IGF-1,PDGF)、凋亡相关因子(Caspase-3,Bcl-xl)、轴突导向因子(Netrin)的mRNA在大鼠神经管畸形发育中的表达变化.方法 选取孕鼠随机分为正常组(不作任何处理)、对照组(按50 mg/kg橄榄油于E10d时一次性胃饲孕鼠)和(按50 mg/kg溶于橄榄油的维甲酸于E10d时一次性胃饲孕鼠).正常组、对照组和实验组又各自分为E15d、E16d、E17d、E18d、E19d、E20d组,每组5只胎鼠,用于RT-PCR实验.结果 (1)实验组的胎鼠中66％发生了死胎、脊髓脊柱裂、无尾畸形、下肢不发育等； (2)神经营养因子(NT-3,CNTF,IGF-1,PDGF)、凋亡相关因子(Caspase-3,Bcl-xl)、轴突导向因子(Netrin)在E15 d～E20 d正常及畸形大鼠神经管发育过程中,均有表达.其中,IGF-1在E16d与正常组比较表现为表达减少的趋势；实验组内比较IGF-1表达有先增加后减少再增加的趋势.CNTF在E17d时与正常组比较表达有减少.以上变化均具有统计学意义(P＜0.05).凋亡因子(Caspase-3,Bcl-xl)和导向因子(Netrin)均无统计学意义.结论 神经营养因子(NT-3,CNTF,IGF-1,PDGF)、凋亡相关因子(Caspase-3,Bcl-xl)、轴突导向因子(Netrin)在E15 d～E20 d正常及畸形大鼠神经管发育过程中有重要作用.IGF-1、CNTF的mRNA变化均较正常组有不同程度减低,可能是维甲酸通过干扰此三类神经营养因子等大分子物质在发育过程中的形成和分布,在某种程度上改变了大鼠神经胚发育的进程和方式,以此也就干扰了神经元的正常的分化增殖发育过程.
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γ辐射诱发的人AHH-1 T淋巴细胞凋亡及其调控机制
目的:研究电离辐射诱发正常人AHH-1 T淋巴母细胞凋亡的特点及其调控机制, 为辐射免疫损伤的防治提供实验依据.方法:用TUNEL、麦格-姬姆萨(MGG)法、MTT比色法及碱磷酶免疫组织化学染色法, 分别检测T细胞凋亡、细胞活存以及Bax、Bcl-XL和caspase-3重要凋亡相关蛋白的表达及规律.结果:①在一定照射剂量范围内随照射剂量的增加, AHH-1 T细胞凋亡率持续升高, 而细胞活的活存率则急剧下降, 两者均呈现明显的剂量效应关系.②促凋亡蛋白Bax的表达随照射剂量的增加明显增强, 而凋亡抑制蛋白Bcl-XL则呈持续下降的趋势.③活化的凋亡执行蛋白caspase-3的活性随照射剂量的增加显著升高, 与凋亡率呈现明显的相应关系.结论:AHH-1 T细胞的大量凋亡, 可能是辐射导致淋巴细胞急剧减少、机体免疫功能降低的重要原因; Bax、Bcl-XL和caspase-3蛋白在辐射诱发的T细胞凋亡调控中具有重要作用.
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STAT3、 Bcl-xL、 Bax和CyclinD1在非小细胞肺癌中的表达
目的:分析STAT3、 Bcl-xL、 Bax和CyclinD1在非小细胞肺癌和正常肺组织中的表达及关系, 以进一步探讨其与非小细胞肺癌发生发展的关系.方法:利用SABC免疫组织化学技术检测84例非小细胞肺癌组织及30例正常肺组织中STAT3、 Bcl-xL、 Bax和CyclinD1的表达.结果:(1)STAT3、 Bcl-xL和CyclinD1在非小细胞肺癌组织中的表达水平明显高于正常肺组织(P＜0.05), Bax在非小细胞肺癌组织有一定表达, 但与其在正常肺组织的表达比较无统计学意义(P＞0.05);(2)STAT3、 Bcl-xL表达水平与非小细胞肺癌组织学类型有关, 在腺癌组织中的表达明显高于鳞癌, 与肿瘤大小、组织分化程度、 TNM分期及淋巴结转移无关;(3)Bax、 CyclinD1的表达水平与与组织学类型、肿瘤大小、组织分化程度、 TNM分期及淋巴结转移无关(P＞0.05).结论:STAT3、 Bcl-xL和CyclinD1可能在肺癌的发生发展中发挥重要作用, 由此可望寻找到新的非小细胞肺癌的诊断方法和治疗靶点.
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STAT5和Bcl-xl在非小细胞肺癌组织中的表达及相关性分析
目的: 分析信号转导与转录激活因子5(Signal transducer and activator of transcripton 5, STAT5)与Bcl-xl(B-cell Lymphoma/Leukemia-xl)在非小细胞肺癌和肺正常组织中的表达及关系, 以进一步探讨STAT5和Bcl-xl与非小细胞肺癌发生与发展的关系.方法: 利用SABC免疫组织化学技术检测42例非小细胞肺癌(NSCLC)组织及15例肺正常组织中STAT5和Bcl-xl的表达.结果: (1)STAT5和Bcl-xl 在非小细胞肺癌组织中的表达水平明显高于肺正常组织(P＜O.05).(2)STAT5和Bcl-xl的表达水平与非小细胞肺癌组织学类型有关, 在腺癌组织中的表达明显高于鳞癌, 与性别、年龄、肿瘤大小、组织分化程度、 TNM分期及淋巴结转移无关. (3)STAT5与Bcl-xl的表达呈显著正相关.结论: 本组资料提示STAT5与Bcl-xl可能在肺癌的发生发展中发挥重要作用, Bcl-xl的表达可能直接由STAT5调控.由此可望寻找到新的非小细胞肺癌的诊断方法和治疗靶点.
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致死剂量的γ线照射后小鼠胸腺淋巴细胞的凋亡规律及与bax、bcl-2和Bcl-XL表达的关系
目的: 观察致死剂量γ线照射后小鼠胸腺淋巴细胞凋亡特征及与Bax、 Bcl-2和Bcl-XL蛋白和mRNA表达的关系, 为急性重度以上放射病的治疗提供依据.方法: 清洁级C57小鼠250只, 随机分为0、 6、 9、 12、 15和20 Gy 6个剂量组. 经γ线全身1次照射后, 于照射后1～28 d和3～12个月, 活杀取胸腺和外周血, 用原位末端标记(TUNEL)和麦格-姬姆萨(MGG)染色检测胸腺淋巴细胞的凋亡; 用原位杂交和碱性磷酸酶免疫组化染色法, 检测Bax、 Bcl-2和Bcl-XL mRNA 和其蛋白的表达.结果: (1)各剂量组小鼠外周血白细胞在照射后6 h, 出现一过性的升高, 以后迅速下降.6 Gy照射后7 d降至低, 至照射后28 d基本恢复到正常水平.(2)不同剂量的γ线照射后24 h, 胸腺淋巴细胞的凋亡率迅速升高; 在6～12 Gy范围内与照射的剂量呈正比, ≥15 Gy照射后变化不明显.(3)6 Gy照射后24 h, 胸腺淋巴细胞的凋亡率达高峰, 而后开始降低; 但直至照射后6个月和12个月, 凋亡率仍明显高于对照组.(4)6 Gy照射后3 h, 胸腺淋巴细胞中Bax蛋白的表达即出现增加, 至24 h达峰值, 显示出时效关系; 而Bcl-2蛋白于照射后3 h即明显下降, 24 h降至低; Bcl-XL蛋白也在照射后24 h降至低.bax和bcl-2 mRNA的检测与蛋白水平的检测一致.结论: 经6～12 Gy照射后, 淋巴细胞的凋亡与照射剂量成正比, ≥15 Gy照射后凋亡率下降, 提示≤12 Gy照射后胸腺淋巴细胞的凋亡是其死亡的主要方式.促凋亡蛋白Bax表达的增加及抗凋亡蛋白Bcl-XL表达的下降, 与照射剂量和淋巴细胞的凋亡率呈现较好的对应关系, 提示它们在致死剂量的照射所致胸腺淋巴细胞凋亡的调控中起着重要作用.
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重组人程序化细胞死亡5蛋白联合顺铂对前列腺癌细胞生长作用的研究
目的 探讨重组人程序化细胞死亡5 (rhPDCD5)联合顺铂(DDP)对人前列腺癌PC3细胞增殖和凋亡的影响及可能的机制.方法 不同浓度rhPDCD5蛋白、DDP及两者联合干预PC3细胞,MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot法检测Cleaved-capase3、Bcl-xl蛋白的表达水平.结果 与对照组相比,rhPDCD5、顺铂单独或联合作用PC3细胞均可抑制细胞增殖,联合用药抑制效果更显著(P＜0.05);rhPDCD5组、DDP组、联合用药组PC3细胞的凋亡率分别为(19.62±2.32)％、(22.45±1.57)％、(59.78±3.31)％.rhPDCD5、顺铂联合应用较单独用药可显著增强PC3细胞凋亡(P＜0.05);蛋白印迹法检测发现rhPDCD5组、DDP组、联合用药组中Cleaved-capase3表达明显上调,Bcl-xl表达显著下调,联合用药组效果更显著(P＜0.05).结论 rhPDCD5可促进PC3细胞的凋亡,且显著增强顺铂对人前列腺癌PC3的抗癌敏感性.
关键词： 前列腺癌 Cleaved-capase3 Bcl-xl 程序化细胞死亡5 顺铂 -
凋亡相关基因蛋白bcl-xl和bak在肺鳞癌中的表达及意义
目的:探讨肺鳞状细胞癌中凋亡调控因子bcl-xl和bak蛋白的表达及其意义.方法:采用免疫组织化学技术检测50例肺鳞状细胞癌及20例正常肺组织中 bcl-xl和bak蛋白的表达水平.结果:bcl-xl蛋白在肺鳞状细胞癌中表达水平高于正常肺组织(P＜0.05) .bak表达水平低于正常肺组织(P＜0.05). bcl-xl和bak蛋白的表达水平在不同分化程度的肺癌之间差异有显著意义(P＜0.05) .结论:肺鳞状细胞癌的发生、发展与bcl-xl和bak蛋白的异常表达有关,可能是细胞凋亡失衡的结果.
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沉默Bcl-XL逆转人胶质瘤获得性SLC22A18的耐药
目的:探讨RNA干扰Bcl-XL(siRNA)在人胶质瘤获得性SLC22A18的耐药中的作用.方法:以Bcl-XL siRNA转染获得性SLC22A18耐药的人胶质瘤U251 -SLC22A18/R细胞,用重组人SLC22A18蛋白处理,MTT法和流式细胞仪检测肿瘤细胞的存活率,免疫印迹法检测凋亡相关蛋白Caspase-3和Caspase-8的表达情况.结果:Bcl -XL siRNA能够降低 U251 -SLC22A18/R细胞中 Bcl -XL的表达,也能逆转其对SLC22A18的耐药.U251-SLC22A18/R细胞经过Bcl-XL siRNA和重组人SLC22A18蛋白共同处理4 h后细胞凋亡率>50%,细胞存活率<30%;而对照组和重组人SLC22A18蛋白处理组的细胞凋亡率和存活率无明显变化.经Bcl-XL siRNA与重组人SLC22A18蛋白联合处理后,U251-SLC22A18/R细胞中Caspase-3和Caspase-8均明显活化.结论:Bcl-XL siRNA能有效逆转人胶质瘤获得性SLC22A18的耐药,为治疗胶质瘤耐药提供一种新的思路.
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白藜芦醇联合TRAIL抑制乳腺癌细胞抗凋亡蛋白Bcl-xl表达
目的:探讨白藜芦醇(Resveratrol,RES)联合TRAIL对乳腺癌细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bcl-xl表达的影响.方法:50μmol/L RES、100ng/ml TRAIL及二者联合分别处理乳腺癌MDA-MB-231和MCF-7细胞,MTT法检测细胞增殖抑制率,Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡,Real time PCR检测Bcl-2、Bcl-xl和Mcl-1的mRNA表达,Western blot检测Bcl-xl、Bcl-2和Mcl-1蛋白表达.结果:MTT结果显示RES、TRAIL均能明显抑制乳腺癌细胞增殖,且联合组抑制率高于单独处理组(P＜0.05).RES、TRAIL单独或联合能诱导MDA-MB-231细胞凋亡,凋亡率分别为(16.34±0.34)％,(43.52±0.99)％和(73.60±2.80)％,与对照组的(4.13±0.25)％比较有统计学意义(P＜0.05)；而对MCF-7凋亡影响不明显.Realtime PCR结果显示RES联合TRAIL能明显抑制MDA-MB-231细胞Bcl-xl mRNA表达,联合组与对照组比较有统计学意义(P＜0.05).Western blot结果显示RES联合TRAIL能抑制Bcl-xl蛋白的表达而对Bcl-2和Mcl-1抑制不明显.结论:RES能增强TRAIL诱导乳腺癌细胞凋亡敏感性,这可能与二者抑制抗凋亡蛋白Bcl-xl的表达有关.
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甲基化EGCG对SGC7901细胞Cyclin E、Bcl-2、Bcl-xL表达影响与抑癌作用研究
目的:观察甲基化表没食子儿茶素没食子酸酯(methylated epigallocatechin gallate,甲基化EGCG)对胃癌SGC 7901细胞Cyclin E、Bcl-2、Bcl-xL表达的影响,探讨甲基化EGCG抗肿瘤的作用机制.方法:采用MTT法观察甲基化EGCG对胃癌细胞SGC 7901增殖的影响,采用免疫细胞化学方法、Western blot法分别检测Cyclin E、Bcl-2、Bcl-xL的表达.结果:甲基化EGCG呈时间依赖性抑制胃癌SGC 7901 细胞增殖(P<0.05),下调Cyclin E、Bcl-2、Bcl-xL的表达.结论:甲基化EGCG可能通过下调Cyclin E、Bcl-2、Bcl-xL的表达,使胃癌SGC 7901细胞的增殖和凋亡之间达到平衡,从而发挥抗肿瘤作用.
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bcl-xL在姜黄素诱导K562细胞凋亡中的作用及机制
目的:探讨bcl-xL基因在姜黄素诱导K562细胞凋亡过程前后的表达情况及其作用机制.方法:不同浓度的姜黄素作用于K562细胞,MTT检测细胞生长抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot分析姜黄素作用前后胃癌细胞中bcl-xL的表达.结果:姜黄素能显著抑制体外培养的K562细胞生长并呈量效和时效关系.流式细胞术检测到亚二倍体凋亡峰,细胞凋亡率增加.RT-PCR和Western blot结果提示经姜黄素作用后,bcl-xL表达下降.结论:姜黄素能抑制K562细胞的生长并促进其凋亡,其发生与bcl-xL有关.
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肺癌组织中bax、bcl-xL、bcl-xS基因表达的研究
目的探讨bax、bcl-xL、bcl-xS 3个基因在非小细胞肺癌组织及癌旁组织中的表达.方法以凝胶上rRNA条带的亮度为依据对后续分析用的起始RNA浓度进行调整;以组成型表达的beta-actin基因为外对照,对两类组织来源的起始RNA量进行监测;基因克隆及序列分析验证所用引物的可靠性;随后采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)的方法对各基因在两类组织中的表达谱进行对比分析.结果在两类组织来源的起始RNA量基本一致的前提下,3个基因在成对组织中的表达谱存在明显差异,bax和bcl-xS在肺癌组织及癌旁组织中均有表达,bcl-xL基因在肺癌组织中的表达量较高.结论肺癌组织中也存在bax和bcl-xS等促凋亡基因的转录.
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胰岛素样生长因子-1抑制Aβ25-35诱导的SH-SY5Y细胞凋亡
目的:探讨胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对β淀粉样蛋白25-35(beta-amyloid 25-35,Aβ25-35)诱导的神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞)凋亡的影响.方法:以SH-SY5Y细胞系为研究对象,将其分为对照组、Aβ25-35组和IGF-1预处理组.利用Cell Counting Kit-8(CCK-8)试剂盒检测细胞活性;Annexin V-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡率;Western blot检测Bcl-xL、Bax及cleaved caspase-3的表达.结果:Aβ25-35可降低SH-SY5Y细胞活性,诱导其发生细胞凋亡.IGF-1预处理组细胞活性增加,细胞凋亡率降低,伴有Bcl-xL表达增加、Bax表达降低及casapse-3活化减少.结论:IGF-1可通过上调Bcl-xL、下调Bax的表达,抑制casapse-3的活化,发挥抗Aβ25-35诱导的细胞凋亡作用.
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紫草素衍生物与Bcl-xl靶标的相互作用的分子模拟研究
目的：紫草素衍生物因其良好的抗肿瘤活性吸引了很多研究者的兴趣。但是还没有针对其与可能靶标蛋白Bcl-x l的作用模式的研究，此文以期通过计算机模拟指导新化合物的设计和合成。方法采用分子对接和分子动力学模拟的方法，研究了化合物Comp A与Bcl-xl之间的相互作用模式，并对相互作用进行了分析。结果 Bcl-xl活性位点区域的电荷分布情况与紫草素衍生物之间的相互作用决定了化合物的活性，在靠近 A 区、B区改善小分子的特性，可增加两者的相互作用和小分子活性。结论通过计算机模拟找到了紫草素衍生物结构优化的方向，可以用于指导化合物的合成和修饰。
