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Cyclopamine联合喜树碱诱导口腔鳞癌凋亡的机制
目的 研究Hedgehog通路特异性抑制剂cyclopamine联合喜树碱对口腔肿瘤细胞增殖、凋亡的影响.方法 CCK8法检测cyclopamine联合喜树碱对HSQ-89细胞增殖的影响;流式细胞仪检测cyclopamine联合喜树碱对HSQ-89细胞凋亡的影响;RT-PCR检测cyclopamine及喜树碱处理后HSQ-89细胞凋亡相关分子表达变化情况.结果 Cyclopamine 联合喜树碱较单用喜树碱能更加明显抑制HSQ-89细胞活性.Cyclopamine处理后HSQ-89细胞中Bcl-2表达下降,而Bcl-xl、Bid等表达不变,联合喜树碱后Bci-2表达进一步减少.结论 Cyclopamine联合喜树碱能有效抑制Bcl-2表达而发挥抑制癌细胞增殖,并诱导凋亡效应.
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Lipofectin介导bcl-xL反义寡核苷酸对鼻咽癌CNE-2Z细胞的影响
目的:探讨阳离子脂质体Lipofectin对bcl-xL反义寡核苷酸进入CNE-2Z细胞的影响.方法:采用阳离子脂质体Lipofectin介导bcl-xL反义寡核苷酸转染CNE-2Z细胞,应用MTT法观察Lipofectin介导前后对CNE-2Z增殖的影响;RT-PCR检测处理前后bcl-xL mRNA表达水平.结果:Lipofectin介导bcl-xl反义核酸可提高反义核酸对细胞的增殖抑制率;Lipofectin介导bcl-xL反义核酸可增强反义核酸下调bcl-xL mRNA表达水平的能力.结论:Lipofectin可促进反义核酸转染进入细胞.
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人类抗凋亡基因bcl-xL的克隆及其在大鼠心肌细胞内的高效表达
[目的]克隆人类抗凋亡基因bcl-xL cDNA,构建两种不同的真核表达载体,评价大鼠心肌细胞表达外源性bcl-xL的效果,并比较不同转染方法对bcl-xL表达的影响.[方法]]RT-PCR法从人肝脏组织获取bcl-xL cDNA,连接至pTargeTTM载体,并亚克隆至真核表达载体pEGFP-C1上;细菌内同源重组构建重组腺病毒质粒,腺病毒纯化试剂盒获取高滴度的重组腺病毒;脂质体和腺病毒介导分别转染体外培养的大鼠心肌细胞,荧光显微镜观察转染效率,RT-PCR和免疫细胞化学染色法检测bcl-xL mRNA和bcl-xL蛋白的表达.[结果]获取的bcl-xL cDNA测序正确,成功克隆真核表达质粒pEGFP-bcl-xL;病毒颗粒滴度高达5.3×1012 pfu/L;脂质体和腺病毒转染心肌细胞效率分别为40.3%和95.4%,转染后bcl-xL mRNA和bcl-xL蛋白的表达均增加,但两种方法之间差异有统计学意义(P＜0.01).[结论]成功获取人类bcl-xZ基因并制备真核表达质粒和重组腺病毒,心肌细胞能高效表达外源性bcl-xL,并以腺病毒介导更为理想.为bcl-xL基因治疗缺血性心脏病提供实验基础.
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重组bcl-xL腺病毒对心肌细胞凋亡的影响
[目的]探讨转染人类抗凋亡基因bcl-xL能否提高心肌细胞对缺氧的耐受性,评价它对心肌细胞的抗凋亡作用.[方法]体外培养SD大鼠乳鼠心肌细胞,建立模拟心肌缺氧模型;将携带人类bcl-xL基因的重组腺病毒感染心肌细胞;免疫细胞化学染色法分析bcl-xL蛋白的表达;TUNEL法检测凋亡指数;荧光显微镜下观察心肌细胞表达绿色荧光蛋白,用Hoechst33342染色观察细胞核的形态变化.[结果]转染rAd-bcl-xL/s的心肌细胞表达bcl-xL蛋白阳性单位(PU)(17.84±3.42)明显高于正常对照组(11.02±2.56)与rAd-bcl-xL/as转染组(8.53±2.25)(P＜0.01);缺氧诱导后心肌细胞凋亡指数为(45.67±8.47)%,而转染rAd-bcl-xL/s后的细胞凋亡指数减少至(9.42±2.48)%,有显著性差异(P＜0.01),未见典型的凋亡小体.[结论]腺病毒介导的bcl-xL基因能高效转染心肌细胞,并表达目的基因;外源性bcl-xL基因对体外培养的心肌细胞具有抗凋亡作用,能够提高心肌细胞对缺氧的耐受性,促进损伤心肌的恢复.
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布地奈德对哮喘小鼠淋巴细胞凋亡和stat5b/Bcl-xL信号通路的影响
目的 观察布地奈德(BUD)吸入治疗对哮喘小鼠淋巴细胞凋亡的作用及其对stat5b/Bcl-xL信号通路的影响,探讨BUD的作用靶点.方法 SPF级的BALB/c雌性小鼠30只随机分为正常组、哮喘组、BUD组,每组10只.用卵清蛋白(OVA)腹腔注射和雾化吸入制备哮喘小鼠模型.所有小鼠于末次激发后24 h处死,取右肺作病理切片,行左肺支气管肺泡灌洗液(BALF)白细胞总数计数.用流式细胞仪检测各组小鼠脾脏淋巴细胞的细胞凋亡率;用半定量RT-PCR检测各组小鼠脾脏淋巴细胞stat5b基因和Bcl-xL基因的mRNA表达.结果 哮喘组与正常组比较,BALF白细胞总数增多,淋巴细胞凋亡率降低,stat5b基因和Bcl-xL基因的mRNA表达增高;BUD组与哮喘组比较,BALF白细胞总数减少,淋巴细胞凋亡率增加,stat5b基因和Bcl-xL基因的mRNA表达降低.结论 BUD能促进哮喘淋巴细胞凋亡,减轻气道炎症,并且下调stat5b/Bcl-xL信号通路,提示stat5b/Bcl-xL信号通路可能是BUD治疗哮喘的一个重要作用靶点.
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赖氨匹林与卡氮芥协同抗肿瘤作用的研究应用
目的 探讨赖氨匹林与卡氮芥协同抗肿瘤的作用价值.方法 通过基础实验、动物实验与临床观察等三大部分对赖氨匹林与卡氮芥作用进行研究.结果 ①基础实验:赖氨匹林对C6细胞具有促凋亡和增殖抑制作用；②动物实验:赖氨匹林与卡氮芥联合使用对胶质瘤具有显著性治疗作用；③临床观察:脑胶质瘤术后36例患者随访18个月,赖氨匹林、卡氮芥联合组疗效明显优于无化疗组和卡氮芥组.结论 赖氨匹林+卡氮芥对动物模型胶质瘤有显著治疗效果.收集脑胶质瘤术后患者,初步证实赖氨匹林的抗胶质瘤的作用和它在神经外科临床中的应用前景.
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DHA对人鼻咽癌CNE2细胞增殖的抑制作用及机制研究
目的 研究DHA对鼻咽癌细胞增殖、凋亡的影响.方法 CCK8法检测DHA对CNE2细胞增殖的影响;AnnexinV/PI双染流式细胞仪检测DHA对CNE2细胞凋亡的影响;RT-PCR检测DHA处理后CNE2细胞凋亡相关蛋白表达变化情况.结果 DHA较对照组明显抑制CNE2细胞增殖.经DHA处理后CNE2细胞中Bcl-2、Bcl-xl表达下降,且呈剂量依赖性.结论 DHA可有效抑制Bcl-2、Bcl-xl的表达而发挥抑制癌细胞增殖、诱导凋亡效应.
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Bcl-xL和Survivin在结直肠癌中的研究进展
肿瘤的发生发展,与有癌变潜能细胞的凋亡抑制密切相关.线粒体途径和死亡受体途径是介导细胞凋亡的主要过程,终启动caspase级联活化和瀑布样反应,诱导细胞凋亡.Bcl-xL 和Survivin都是细胞凋亡强有力的抑制剂,均与caspase级联反应过程有关,可能与肿瘤的形成和发展、耐药性的产生以及免疫耐受密切相关.
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BMP-7对大鼠脑缺血损伤后神经细胞凋亡的影响
目的 观察骨形态发生蛋白-7(BMP-7)对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤诱导的神经细胞凋亡与凋亡相关蛋白Caspases-3和Bcl-xl表达的影响.方法 成年健康雄性Sprague-Dawley大鼠53只,应用线栓法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,随机分为假手术组、模型组、治疗组,治疗组于再灌注后立即给予尾静脉注射BMP-7 (0.1 mg·kg-1),假手术组和模型组同步给予等量生理盐水,再灌注24 h后进行神经功能缺陷评分,原位末端标记(TUNEL)法检测梗死脑组织细胞凋亡,免疫组织化学法及Western Blot法检测Caspase-3和Bcl-xl的表达.结果 缺血再灌注24 h后,与模型组比较,BMP-7治疗组大鼠神经功能缺陷评分明显降低(P＜0.01),TUNEL检测阳性细胞数明显减少(P＜0.01),Western Blot显示缺血侧脑组织Caspase-3表达明显减弱(P＜0.01),Bcl-xl表达明显增强(P＜0.01).结论 BMP-7可通过调节Caspase-3和Bcl-xl表达,抑制神经细胞凋亡,发挥神经保护作用.
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小干扰RNA抑制bcl-xL表达对食管癌细胞化疗敏感性的影响
目的 探讨凋亡抑制分子bcl-xL表达下调对食管癌细胞化疗敏感性的影响.方法 根据人bcl-xL基因序列设计和合成3对小干扰RNA,将其转染于体外培养的人食管癌细胞株Eca-109,通过RT-PCR和Western-blotting检测bcl-xL的表达情况,筛选出对bcl-xL表达抑制作用强的小干扰RNA,通过MTT法检测小干扰RNA转染细胞和对照细胞在不同浓度顺铂和紫杉醇作用下的细胞增殖抑制率,计算出半数抑制浓度IC50值并进行对比分析.结果 食管癌细胞转染靶向bcl-xL的3种小干扰RNA后,bcl-xL mRNA和蛋白表达均显示出不同程度下调,其中siRNA1对癌细胞bcl-xL表达的抑制作用强.siRNA1转染食管癌细胞后可使顺铂和紫杉醇对癌细胞的IC5o值由转染前的(31.4±4.3)μmol/L和(35.3±6.1)μmol/L下降至转染后的(8.4±3.3)μmol/L和(15.1±4.7)μmol/L(P＜0.01).结论 小干扰RNA抑制bcl-xL表达可增强食管癌细胞对顺铂和紫杉醇化疗的敏感性.
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Bcl-xL、Bax和Bcl-2蛋白在大肠癌伴血吸虫病中的表达及其意义
目的 检测Bcl-xL、Bax和Bcl-2蛋白在大肠癌伴血吸虫病中的表达,探讨血吸虫感染与大肠癌之间的可能发病机制.方法 76例大肠癌患者分为两组,大肠癌伴血吸虫病组40例及单纯大肠癌组36例.用免疫组化SP法检测Bcl-xL、Bax和Bcl-2蛋白在两组患者中的表达水平.肿瘤HE切片在显微镜下观察细胞形态并进行凋亡率统计.结果 在大肠癌伴血吸虫病组及单纯大肠癌两组中,Bcl-xL蛋白的表达强度均为中等,阳性率分别为50.0％,66.7％(P＞0.05);在大肠癌伴血吸虫病组中,Bax蛋白的表达强度为中度,阳性率为25.0％,而在单纯大肠癌组中的表达强度为中到强阳性,阳性率为77.8％ (P＜ 0.001);Bcl-2蛋白在大肠癌伴血吸虫病组中的表达强度为弱到中度,阳性率为55.0％,而在单纯大肠癌组中的表达强度较弱,阳性率为22.2％ (P＜ 0.05).大肠癌伴血吸虫病组及单纯大肠癌两组的细胞凋亡率分别为15.0％、42.0％ (P＜ 0.001).结论 慢性日本血吸虫病与大肠癌之间可能存在一定的关系;在慢性血吸虫病引起的肠粘膜的恶变过程中,Bcl-2和Bax的异常表达,引起凋亡的失调,从而导致肿瘤的发生、发展.
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彩色多普勒超声对大鼠早孕胚胎组织细胞凋亡及Bcl-xl表达的影响
目的 探讨诊断用彩色多普勒超声对大鼠早孕胚胎组织细胞凋亡及B细胞淋巴瘤/白血病-xl基因(Bcl-xl)表达的影响.方法 彩色多普勒超声固定持续照射孕鼠子宫体表位置,60只大鼠按照射时间分为0、5、10、20、30、60 min组.利用Western blotting检测胚胎组织Bcl-xl表达强度变化,流式细胞仪检测胚胎组织凋亡细胞百分率.结果 各组胚胎组织中Bcl-xl蛋白均有表达,照射20 min、30 min组较0 min组Bcl-xl表达增强(P<0.05),照射60 min组较 0 min组Bcl-xl表达减弱(P<0.05).各组胚胎组织均存在凋亡细胞,照射30 min组、60 min组凋亡细胞百分率高于0 min组 (P<0.05).结论 诊断用彩色多普勒超声过度照射早孕大鼠,可诱发胚胎组织细胞凋亡,抑凋亡基因Bcl-xl参与了细胞凋亡的调节过程.
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Bcl-xl阻断肿瘤坏死因子α诱导的caspase 8活化及细胞凋亡
目的探讨Bcl-xl对肿瘤坏死因子α(TNFα)介导的细胞凋亡信号通路以及细胞凋亡的影响. 方法将iκBα负性突变体质粒pmiκB与绿色荧光蛋白(GFP)表达质粒pEGFP-C1,pmiκB、pBcl-xl/HA与pEGFP-C1分别共转染HeLa细胞;将pBcl-xl/HA转染核因子-κB(NF-κB)/p65基因敲除的p65-/-MEF细胞,并用嘌呤霉素筛选及western blot鉴定获得稳定表达Bcl-xl的细胞系p65-/-/Bcl-xlMEF.用TNFα处理HeLa/miκB、HeLa/miκB/Bcl-xl细胞以及p65-/-MEF、p65-/-/Bcl-xlMEF细胞,并在显微镜下观察细胞形态变化、台盼蓝染色计算死亡细胞以检测各组细胞凋亡情况;采用western blot检测凋亡信号通路中caspase 8活化及腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)裂解情况. 结果单独转染pmiκB的HeLa细胞,TNFα诱导的细胞凋亡明显,表现为细胞变圆、脱落、死亡,而pBcl-xl/HA与pmiκB共转染的HeLa细胞,TNFα处理后未见细胞凋亡.p65-/-MEF细胞经TNFα处理发生凋亡,该作用在TNFα处理后4h即可出现,处理12h后细胞死亡率为90%,而在表达Bcl-xl的p65-/-/Bcl-xlMEF细胞,TNFα处理24h也未见细胞凋亡或死亡发生.Western blot检测表明单独转染pmiκB的HeLa细胞,TNFα诱导了caspase 8裂解活化及PARP裂解,而pBcl-xl/HA与pmiκB共转染、表达Bcl-xl的HeLa细胞,TNFα诱导的caspase 8裂解活化及PARP裂解被阻断. 结论在NF-κB被抑制的实验细胞系统,Bcl-xl能阻断TNFα介导的细胞凋亡信号通路以及细胞凋亡,这对于进一步研究TNFα相关疾病发生机制及治疗措施有重要价值.
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Bcl-xL mRNA在正常肝及肝癌组织中的表达
1.材料与方法:肝癌组织21例（男12例，女9例），平均年龄64岁（范围33～76岁），Ⅱ期6例,Ⅲ期13例,IV期2例;高分化癌9例,低分化癌7例,未分化癌2例.
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婴儿双歧杆菌介导HSV-TK/GCV对裸鼠肾癌组织细胞凋亡及p-Stat3、Bcl-xL表达的影响
目的 评价婴儿双歧杆菌介导单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)/丙氧鸟苷(GCV)自杀基因治疗系统对裸鼠肾癌的疗效,初步探讨其诱导肾癌组织细胞凋亡及对肾癌组织p-Stat3、Bcl-xL表达的影响.方法 采用肾癌786-O细胞悬液皮下注射法建立裸鼠肾癌模型,将模型裸鼠分为4组,分别经尾静脉注射生理盐水(生理盐水组)、婴儿双歧杆菌(婴儿双歧杆菌组)、携带空质粒pGEX-5X-1的婴儿双歧杆菌(空质粒组)、携带重组质粒pGEX-TK的婴儿双歧杆菌(重组质粒组),再联合腹腔注射GCV.治疗4周结束后,称取各组裸鼠质量及荷瘤质量.TUNEL染色法检测各组肾癌组织细胞凋亡情况.免疫组化染色法检测各组肾癌组织p-Stat3、Bcl-xL蛋白表达情况.Real-time PCR检测各组肾癌组织Stat3、Bcl-xL mRNA表达水平.Western blot检测各组肾癌组织p-Stat3、Bcl-xL蛋白表达水平.结果 治疗后,重组质粒组较空质粒组、婴儿双歧杆菌组和生理盐水组裸鼠质量增加(P＜0.05),荷瘤质量降低(P＜0.05).TUNEL染色结果显示重组质粒组凋亡指数明显高于空质粒组、婴儿双歧杆菌组和生理盐水组(P＜0.01).免疫组化染色结果显示重组质粒组肾癌组织p-Stat3、Bcl-xL蛋白表达明显低于空质粒组、婴儿双歧杆菌组和生理盐水组(P＜0.01).重组质粒组肾癌组织Star3、Bcl-xL mRNA及p-Stat3、Bcl-xL蛋白表达水平较空质粒组、婴儿双歧杆菌组和生理盐水组明显下调(P＜0.01).结论 婴儿双歧杆菌介导HSV-TK/GCV自杀基因治疗系统明显抑制裸鼠肾癌生长,可能通过抑制Stat3活化进而阻断Stat3信号转导通路,下调其下游抗凋亡蛋白Bcl-xL的表达来诱导裸鼠肾癌组织细胞凋亡,发挥抑瘤作用.
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新型纳米载体Ac-αCD携带的Bcl-xl反义寡核苷酸对肺动脉平滑肌细胞增殖和凋亡的作用
目的 研究纳米载体Ac-αCD携带的Bcl-xl反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide,ASON)对大鼠肺动脉平滑肌细胞(rat pulmonary arterial smooth muscle cells,RPASMCs)增殖和凋亡作用.方法 设计合成5′端标记Cy3的Bcl-xlASON,由纳米载体Ac-αCD携带.实验分3组:纳米载体携带的Bcl-xl ASON组(ASON-NPs组)、单纯纳米载体组(NPs 组)和空白对照组,分别使用纳米载体Ac-αCD携带的Bcl-xl ASON、纳米载体Ac-αCD和培养液处理RPASMCs 48 h,激光共聚焦显微镜观察RPASMCs对纳米载体携带的Bcl-xl ASON的摄取情况；RT-PCR、Western blot检测Bcl-xl的mRNA和蛋白表达；MTT检测处理后细胞的增殖抑制率；流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 激光共聚焦显微镜下可见ASON-NPs组细胞质内大量呈颗粒状均匀分布的红色荧光物质,空白对照组和NPs组细胞细胞质内未见红色荧光物质；ASON-NPs组处理的RPASMCs的Bcl-xl mRNA和蛋白表达显著低于空白对照组和NPs组(P＜0.05)；ASODN-NPs组、NPs组、空白对照组细胞抑制率分别为:(53.61±3.02)％、(6.30±1.90)％、(1.40±0.62)％,凋亡率分别为:(53.04±2.09)％、(10.98±2.03)％、(2.19±0.11)％、ASON-NPs组和NPs组细胞抑制率、凋亡率均显著高于空白对照组(P＜0.01),ASON-NPs组均显著高于NPs组(P＜0.01).结论 纳米载体Ae-αCD携带的Bcl-xl反义寡核苷酸能被RPASMCs有效摄取,从而抑制其增殖,促进凋亡.
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NF-κB及bcl-xL在口腔鳞癌引流淋巴结中的表达及意义
目的 研究核转录因子κB(nuclear transcription factor kappα,NF-κB)及其靶基因bcl-xL在口腔鳞癌引流淋巴结(炎性淋巴结、转移性淋巴结)中的表达及意义.方法 将所选口腔鳞癌病例引流淋巴结石蜡标本按病检结果分为炎性淋巴结组、转移性淋巴结组,应用免疫组织化学S-P法,检测NF-κB(p65)及bcl-xL在两组间的表达差异.结果 NF-κB(p65)在炎性淋巴结、转移性淋巴结中的阳性表达率分别为30.8%、76.9%,两组有显著性差异(P＜0.01);bcl-xL在炎性淋巴结、转移性淋巴结中的阳性表达率分别为33.3%、73.1%,两组有显著性差异(P＜0.01).结论 口腔鳞癌引流淋巴结从炎性淋巴结向转移性淋巴结的转变可能和NF-κB、bcl-xL表达变化有关.
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幽门螺杆菌对胃癌BGC-823细胞中Bcl-xl基因表达的影响及作用
目的 探讨幽门螺杆菌超声裂解液对胃癌BGC-823细胞中Bcl-xl基因表达的影响,以及Bcl-xl基因在胃癌BGC-823细胞增殖中所起的作用.方法 分别用东亚型和西方型幽门螺杆菌超声裂解液处理胃癌BGC-823细胞24 h,MTT法检测细胞增殖情况,荧光定量PCR法检测胃癌BGC-823细胞中Bcl-xl基因mRNA水平的表达情况.设计特异的Bcl-xl shRNA阻断Bcl-xl基因的表达,抑制胃癌BGC-823细胞增殖.结果 螺杆菌超声裂解液处理胃癌BGC-823细胞24 h后,与对照组相比,处理组BGC-823细胞出现增殖(P<0.01),BGC-823细胞中Bcl-xl基因mRNA水平的表达也出现上调;并且东亚型螺杆菌超声裂解液处理组的促增殖作用强于西方型处理组(P<0.01),东亚型螺杆菌超声裂解液处理组细胞中Bcl-xl基因mRNA的表达水平也高于西方型处理组(P<0.01).Bcl-xl shRNA可以下调Bcl-xl基因mRNA及蛋白水平的表达,同时抑制胃癌BGC-823细胞的增殖.结论 Bcl-xl基因对幽门杆菌感染相关性胃癌中癌细胞的增殖起了促进作用.
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灵杞黄斑颗粒对光损伤大鼠视网膜c-fos、caspase-3及bcl-xL表达的影响
目的:研究灵杞黄斑颗粒对大鼠光损伤模型视网膜细胞凋亡相关基因c-fos、caspase-3及bcl -xL表达的影响.方法:SD大鼠随机分为正常对照组、光损伤给水组、光损伤给药组.采用白色荧光灯持续照射5h建立光损伤模型,于光照2.5h、5h及光照后1d及3d,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫蛋白印迹(western blot)分析视网膜c-fos、caspase-3及bcl -xL的转录表达.结果:c-fos、caspase-3mRNA和蛋白表达下调,bcl-xL mRNA和蛋白表达上调.结论:灵杞黄斑颗粒可调控光损伤大鼠视网膜细胞凋亡相关基因的表达.
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甘草总黄酮抗大鼠应激抑郁行为作用及对海马脑区神经细胞凋亡调控相关蛋白表达的影响
目的:研究宁夏地区栽培甘草(Glycyrrhiza uralensis Fisch.)中获得的甘草总黄酮(licorice tlavonoids,LF)的抗应激抑郁作用的机制.方法:将40只雄性SD大鼠分为正常组对照组、模型组、甘草总黄酮组(100、300 mg/kg)和氟西汀对照组(10 mg/kg);建立慢性不可预见性应激抑郁模型(chronic unpredicted stress model of depression,CUS).采用强迫游泳实验(forced swimmingtest,FST)、悬尾实验(tail suspension test,TST)和旷场实验(open field test,OFT)评价甘草总黄酮的抗应激抑郁行为作用;Western蛋白印迹法检测海马组织中Bcl-xl和Caspase-3蛋白表达水平的变化.结果:甘草总黄酮能够明显改善CUS大鼠的应激抑郁行为;海马中Bcl-xl蛋白表达明显增加,Caspase-3蛋白表达明显降低.结论:甘草总黄酮抗大鼠慢性应激抑郁行为的作用可能涉及神经细胞凋亡的保护机制.
