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新疆维吾尔族宫颈癌组织中Bcl-2、 Bcl-xl和c-IAP1的检测及临床意义
[目的]通过比较维吾尔族宫颈癌与宫颈非病变组织中Bcl-2、Bcl-xl、c-IAP1表达的差异,了解维吾尔族宫颈癌与凋亡基因的关系及意义.[方法]采用含20 000条Oligo DNA的人类全基因组寡核苷酸芯片,对5例维吾尔族宫颈癌与宫颈非病变组织成组检测差异表达基因,通过MAS分析得到两组间凋亡相关的差异表达基因:Bcl-2、Bcl-xl、c-IAP1,并采用RT-PCR及免疫组化验证芯片检测其mRNA和蛋白的表达.[结果]与宫颈非病变组织相比,维吾尔族宫颈癌患者中凋亡相关基因Bcl-2、Bcl-xl和c-IAP1 mRNA和蛋白表达均上调.[结论]基因芯片筛选出的肿瘤差异基因,对于研究新疆宫颈癌发生的分子机制及宫颈癌的临床早期诊疗具有重要意义,有利于宫颈癌的易感性预测、早期诊断及疾病监测.维吾尔族宫颈癌的发生与细胞增殖、凋亡的动态平衡密切相关,IAP家族和Bcl-2家族抗凋亡基因在维吾尔族宫颈癌组织中高表达可能在宫颈癌抗凋亡机制中起着重要作用.
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川楝素下调ATF2蛋白的表达增强顺铂对肺癌细胞的凋亡诱导活性研究
目的 探讨川楝素辅助治疗是否能增强顺铂对肺癌细胞的凋亡诱导活性并研究其机制.方法 MTT法检测肺癌细胞系A549在顺铂和川楝素处理下的细胞活力.Western blot试验检测顺铂和川楝素对A549细胞ATF2磷酸化水平,Bcl-xl蛋白表达水平、细胞色素C释放水平、caspase-9和caspase-3活化水平的影响.流式细胞术检测A549细胞在顺铂和川楝素联合处理下的细胞凋亡率.结果 MTT试验结果显示,川楝素辅助治疗能明显提降低顺铂对A549的IC50.Western blot试验结果显示川楝素处理能显著抑制A549细胞ATF2的表达和磷酸化.MTT试验结果显示,转染ATF2表达质粒显著抑制川楝素对顺铂的协同抗肺癌活性.Western blot和流式细胞试验结果显示,川楝素能显著抑制A549细胞中顺铂诱导的 Bcl-xl表达水平的上调,进而促进A549细胞中顺铂诱导的细胞色素C的释放、caspase-9和caspase-3活化及A549细胞的凋亡水平.结论 川楝素通过抑制ATF2蛋白的磷酸化增强顺铂对肺癌细胞的凋亡诱导活性.
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Bcl-xL的基因克隆及其原核表达体系构建
目的 克隆人Bcl-xL基因全长编码区,并利用载体pet28a在大肠埃希菌(ROS)原核表达人Bcl-xL蛋白,为探讨Bcl-xL与肿瘤的关系奠定基础.方法 分离胃癌患者外周血单核细胞并提取总RNA;采用RT-PCR方法扩增Bel-xL基因,构建重组表达质粒pet28a/Bcl-xL；酶切鉴定挑选阳性重组质粒转化大肠埃希菌ROS,测序鉴定后增菌培养,IPTG 25℃诱导6h,SDS-PAGE电泳判断以包涵体形式存在的带有His标签的融合蛋白,进一步利用免疫印迹法鉴定.结果 成功扩增获得Bcl-xL基因CDS区全长702 bp,与GenBank中发表的序列完全一致；成功构建了原核表达载体pet28a/Bcl-xL,并在工程菌ROS中获得大量表达.结论 扩增获得人Bcl-xL基因,并成功原核表达获得人Bcl-xL融合蛋白,为进一步深入研究其生物学功能奠定了基础.
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SOCS-1在肝癌中的表达及其与BCL-XL的关系
目的 探讨SOCS-1在肝癌中的表达及其对BCL-XL表达的影响.方法 采用免疫组织化学SP法检测36例肝细胞癌,8例肝硬化以及4例正常肝组织中SOCS-1和BCL-XL蛋白的表达水平.结果 SOCS-1在正常肝组织和肝硬化组织中呈强胞浆表达.66.7%(24/36)的肝细胞癌组织SOCS-1异常低表达与BCL-XL过表达显著相关(P=0.00011).36例肝癌中20例(55.6%)显示SOCS-1异常低表达伴BCL-XL阳性染色.10例(27.8%)显示SOCS-1正常表达伴BLC-XL阴性染色.结论 SOCS-1异常低表达与肝癌的进展和转移有关.其机制可能是通过上调BCL-XL基因的表达,促使肝细胞增殖和恶化转化而实现.
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Bcl-XL siRNA对肺腺癌细胞A549/DDP药物敏感性及凋亡的影响
目的:探讨小干扰RNA沉默Bcl-XL对肺腺癌耐药细胞株A549/DDP药物敏感性的影响及其凋亡机制.方法:将Bcl-XL siRNA质粒载体转染至A549/DDP细胞,MTT、流式细胞仪检测细胞药物敏感性的改变;丫啶橙/溴化乙锭(AO/EB)染色法检测细胞凋亡;RT-PCR检测Bcl-XL mRNA水平;Western-Blot检测Bcl-XL、caspase-3蛋白表达的变化.结果:分别用 0.2、2、20、200μg/mL顺铂处理细胞 48 h,MTT显示转染Bcl-XL siRNA细胞组A570吸光度值较阴性siRNA细胞组和未转染对照组明显降低,细胞生长抑制率明显增高;用 20 μg/mL顺铂处理细胞 48 h,流式细胞仪检测,转染Bcl-XL siRNA组凋亡率较转染阴性siRNA组和未转染组增加;AO/EB染色显示转染Bcl-XL siRNA的细胞较转染阴性siRNA及未转染者凋亡率增加;转染Bcl-XL siRNA降低了Bcl-XL mRNA和蛋白水平,升高了caspase-3活性形式蛋白表达.结论:Bcl-XL siRNA特异性下调A549/DDP细胞Bcl-XL的表达,活化caspase-3 蛋白,促进A549/DDP细胞凋亡,增强该肺腺瘤细胞对顺铂的敏感性.
关键词： 小干扰RNA Bcl-xl A549/DDP细胞 凋亡 顺铂 -
Bcl-XL siRNA对人胃腺癌MGC-803细胞药物敏感性的影响
目的:研究靶向Bcl-XL基因的小干扰RNA对胃腺癌MGC-803细胞Bcl-XL基因表达的作用及对药物敏感性的影响.方法:构建的Bcl-XLsiRNA载体或阴性siRNA并稳定转染到胃癌MGC-803细胞,G418抗生素筛选阳性克隆,克隆扩大培养,免疫荧光观察细胞蛋白表达.用不同浓度的5-FU或DADS处理稳定转染细胞,MTT观察细胞增殖的变化.用一种浓度的5-FU或DADS处理稳定转染细胞,流式细胞术观察亚G1细胞的比例.结果:免疫荧光结果表明,Bcl-XLsiRNA稳定转染组细胞中Bcl-XL蛋白的表达比阴性siRNA稳定转染组细胞Bcl-XL基因的表达均有明显的降低.当不同浓度的5-FU(13、130、1 300、13 000 mg·L-1)或 DADS(20、35、50 mg·L-1)处理细胞24 h后,MTT结果表明Bcl-XLsiRNA细胞组A570吸光度值较阴性siRNA细胞组和未转染对照明显降低,细胞生长抑制率明显增高.5-FU或DADS药物的IC50值在Bcl-XLsiRNA细胞组有明显降低.使用5-FU(130 mg·L-1)或DADS(50 mg·L-1)处理细胞24 h后,流式结果表明,Bcl-XLsiRNA细胞组较阴性siRNA和正常对照细胞组亚G1细胞比例有明显增高.结论:Bcl-XL siRNA下调了MGC-803细胞Bcl-XL基因的表达;Bcl-XLsiRNA能够促进MGC-803细胞凋亡,增强细胞对化疗药物的敏感性.
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激活蛋白酶活化受体2抑制肺癌细胞凋亡
目的：观察蛋白酶激活受体2( PAR2)活化对肺癌细胞株A549表皮生长因子受体( EGFR)表达及凋亡影响。方法在A549及EGFR基因沉默的A549细胞株培养液中加入类胰蛋白酶,用定量RT-PCR及Western blot法检测EGFR表达,观测细胞凋亡情况及与Bax/Bcl-xL表达水平。结果与类胰蛋白酶共培养48 h后,A549细胞EGFR表达明显增加。凋亡比例明显降低,而且这种降低呈现剂量浓度依赖性。细胞中Bax表达明显减少而 Bcl-xL 明显增加。 EGFR基因沉默后,类胰蛋白酶对A549细胞凋亡的抑制作用被阻断,对Bax/Bcl-xL比率亦无影响。结论类胰蛋白酶能增加肺癌细胞株A549EGFR表达,减少其凋亡,明显减少Bax表达而增加Bcl-xL表达。
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革皮氏海参总皂苷对小鼠骨髓细胞周期和细胞凋亡的影响
目的 研究革皮氏海参总皂苷对环磷酰胺(cyclophosphamide,Cy)诱导的骨髓抑制模型小鼠骨髓细胞细胞周期和细胞凋亡的影响.方法 通过腹腔注射Cy建立小鼠骨髓抑制模型,灌胃不同剂量的革皮氏海参总皂苷(10和30 mg(kg·d)-1),1次/d,连续16 d.采用流式细胞术检测革皮氏海参总皂苷对小鼠骨髓细胞周期分布和凋亡的影响,逆转录聚合酶链式反应(reverse ranscription polymerase chain reaction,RT-PCR)技术检测小鼠骨髓细胞cyclinB1、bcl-2和bcl-xl基因mRNA表达水平.结果 革皮氏海参总皂苷能明显增加骨髓有核细胞数;促进骨髓细胞周期由S期进入G2/M期,提高G2/M期关键因子cyclinB1 mRNA的表达水平;明显降低细胞凋亡率,提高抑制凋亡基因bcl-2和bcl-xl mRNA表达量.结论 革皮氏海参总皂苷明显促进骨髓细胞增殖.其作用机制可能通过促进细胞进入增殖活跃期,抑制细胞凋亡,达到促进小鼠骨髓造血的作用.
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迷迭香酸对谷氨酸诱导的PC12细胞损伤的效应
目的 探讨迷迭香酸(rosmarinic acid,Ros A)对谷氨酸(glutamate,Glu)诱导PC 12细胞损伤的作用和机制.方法 以谷氨酸损伤PC 12细胞为模型,用甲氮甲唑蓝(MTT)法检测细胞存活状况,碘化丙啶(propidium iodide,PI)染色流式细胞术检测细胞凋亡,RT-PCR检测bcl-xl和bax基因的表达.结果 用不同剂量谷氨酸(1、5、10、12.5、15、20 mmol·L-1)孵育细胞24 h后,细胞活性随药物浓度的增加依次下降,Ros A(100 μmol·L-1)预处理1 h后可以改善PC12细胞的存活率,存活率由55.65%±5.07%增加到63.74%±2.04%;使PC12细胞的凋亡率由21.11%降至3.24%,并且使bcl-xl基因表达上调和bax基因表达下调.结论 迷迭香酸有抗谷氨酸诱导PC 12细胞凋亡的作用,其机制可能与调节bcl-xl和bax基因的表达有关.
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芹黄素对Aβ25-35诱导损伤的海马神经元的保护作用
目的探讨中药提取单体芹黄素对体外原代培养条件下Aβ25-35诱导的海马神经元损伤的影响.方法采用SD大鼠海马神经元原代培养,经终浓度分别为5、10、20、40、80μmol·L-1的芹黄素预处理后,用10 μmol·L-1的Aβ25-35处理24 h,MTT法比较神经元的存活情况、Hochesst荧光染色检测神经元的凋亡,并测定SOD活性及Bcl-xl蛋白表达的变化.结果芹黄素10、20、40 μmol·L-1组可提高海马神经元存活率和引起Bcl-xl蛋白表达的增加,增加Mn-SOD活性、促进Cu与聚集型Aβ25-35结合,而且10、20 μmol·L-1芹黄素剂量组与雌二醇抗Aβ25-35毒性损伤效果相同(P＞0.05).结论芹黄素对Aβ25-35的毒性损伤的海马神经元具有保护作用,其保护作用可能与提高Bcl-xl蛋白表达、增加Mn-SOD活性、促进Cu与聚集型Aβ25-35结合,使之转变成无毒性的可溶状态有关.
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免疫调节肽对卵巢癌skov3细胞凋亡及相关基因表达的影响
目的 研究免疫调节肽(PGPIPN)对人卵巢癌细胞株skov3凋亡及相关基因表达的影响.方法 体外培养卵巢癌skov3细胞,分别使用10-6 、10-5 、10-4、10-3、10-2 g/L的PGPIPN孵育 skov3细胞48 h,观察量效关系;通过cDNA芯片技术筛选凋亡相关基因;实时荧光定量 PCR法检测Bax、Bcl-xl、Caspase-3 mRNA水平的表达量;Western blot法检测Bax、Bcl-xl、Caspase-3 蛋白表达量.结果 与对照组相比,Bax和Caspase-3的表达随着PGPIPN浓度升高而升高(P<0.05);Bcl-xl 的表达随着PGPIPN浓度升高而降低(P<0.05).结论 PGPIPN通过促进细胞中Bax及抑制Bcl-xl的表达来调控skov3细胞的凋亡,该过程可能和Caspase的活化相关.
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熊胆粉对肝癌移植瘤裸鼠Pim1、Pim2、bcl-xl的影响
目的 观察熊胆粉对肝癌移植瘤裸鼠Pim1、Pim2、bcl-xl表达的影响. 方法 用人肝癌细胞株HepG2制作皮下移植瘤裸鼠模型,随机分为熊胆粉组和对照组,3周后剥取肿瘤,RTPCR、免疫组织化学检测Pim1、Pim2、bcl-xl的表达. 结果 熊胆粉组可抑制Pim1、Pim2、bcl-xl 的mRNA和蛋白表达,与对照组比较,差异具有统计学意义. 结论 熊胆粉通过下调Pim1、Pim2、bcl-xl的表达,抑制移植瘤裸鼠肝癌的生长.
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Bcl-xl、STC2在喉癌组织中的表达及其与EB病毒关系的研究
目的 探讨Bcl-xl、斯钙素2(STC2)在喉癌组织中的表达及其EB病毒的关系.方法 选取耳鼻喉科喉癌手术患者79例,术中采集喉癌组织标本(79例)作为研究组,癌旁正常喉黏膜组织标本(79例)作为对照组,采用免疫组织化学检测STC2、Bcl-xl表达水平,采用原位杂交检测EB病毒编码下小RNA(EBER).结果 研究组Bcl-xl、STC2、、EBER阳性表达率明显高于对照组(P<0.05),Ⅲ~Ⅳ期、合并淋巴结转移与低中分化喉癌组织Bcl-xl、STC2、EBER阳性表达率明显高于Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移与高分化喉癌组织两组比较差异具有统计学意义(P<0.05),EBER(+)组Bcl-xl、STC2阳性表达率明显高于EBER(-)组(P<0.05),Pearson相关性分析显示,Bcl-xl、STC2与EBER表达呈正性相关(r=0.512,0.605,P<0.05).结论 喉癌组织Bcl-xl、STC2、EBER表达上调,Bcl-xl、STC2在喉癌的发生、发展过程中与EB病毒具有协同作用.
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中药黄芪水提液对HepG2细胞作用研究
目的:体外观察中药黄芪提取液对人肝癌HepG2细胞的作用及其可能的机制.方法:设正常对照组及黄芪药物组,采用MTT法观察中药黄芪提取液对HepG2细胞的生长抑制作用,半定量RT-PCR检测Bcl-xl、53基因mRNA表达的变化,比较两组异同.结果:(1)光镜下可见黄芪组细胞数量减少,伪足减少,有细胞脱壁现象.(2)上调p53基因mRNA表达,下调Bcl-xl基因mRNA表达.结论:中药黄芪提取液能抑制HepG2细胞增长,其可能机制与激活抑癌基因p53基因、下调原癌基因Bcl-xl基因表达有关.
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白英水提物对肺癌SPC-A-1细胞的凋亡及bcl-xl、bid表达的影响
目的 观察白英水提物(extracts of solanun yratum thumb,ESL)对肺癌SPC-A-1细胞凋亡及基因bcl-xl、bid表达的影响.方法常规法制备ESL,实验分为正常对照组、白英处理组.白英处理组加入ESL,终质量浓度分别为12.5、25.0和50.0 mg· mL-1；正常对照组的培养细胞不加药物处理.采用流式细胞仪检测细胞凋亡、半定量RT-PCR和免疫组织化学法分析细胞中bcl-xl、bid基因表达.结果 与正常对照组比较,白英处理组SPC-A-1细胞增殖有显著性下降,细胞凋亡显著性增多(P＜0.05)；bcl-xl mRNA和Bcl-xl蛋白表达降低、bid mRNA和Bid蛋白表达升高(P＜0.05),并随ESL质量浓度的增加而加强.结论ESL能诱导人肺癌SPC-A-1细胞上调bcl-xl基因表达,下调bid基因表达,且作用有一定的量效关系,这可能是白英诱导细胞凋亡的重要作用机制.
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姜黄素对肺纤维化大鼠肺组织及其凋亡相关因子的影响
目的：探讨姜黄素对肺纤维化大鼠肺组织及其凋亡相关因子 Bcl-xl、Bax、Caspase-3蛋白表达的影响，为姜黄素治疗肺纤维化的临床应用提供实验依据。方法将40只雄性 SD大鼠适应性饲养1周后随机分为4组：假手术组（A组）、模型组（B组）、醋酸泼尼松组（C组）、姜黄素组（D组），每组10只。除 A组外均采用气道内一次性注入5 mg·kg-1博莱霉素制作肺纤维化模型。各组均于造模后第2天开始给药，A、B组大鼠每日给予0．5％羧甲基纤维素钠0．014 L·kg-1，C组大鼠每日给予醋酸泼尼松混悬液0．56 mg·kg-1，D组大鼠每日给予200 mg·kg-1姜黄素羧甲基纤维素钠溶液。各组大鼠均于给药第28天称重后处死，留取肺组织。常规 HE染色观察肺组织病理形态学改变。Western blot法检测肺组织内凋亡相关因子 Bcl-xl、Bax、Caspase-3蛋白含量的变化。结果 D组大鼠一般状态、肺系数及病理学改变与 C组相似，肺纤维化程度减轻。Western blot法检测结果显示：与 A组比较，B组大鼠肺组织内各因子蛋白含量升高，差异有统计学意义（P＜0．01）；与B组比较，C、D组大鼠体内各因子蛋白含量下降，差异有统计学意义（P＜0．05）；C组与 D组大鼠体内各因子蛋白含量比较，差异无统计学意义（P＞0．05）。结论姜黄素在肺纤维化疾病中可以延缓疾病进展，并且具有与激素相似的疗效，其作用机制可能是通过调整肺内凋亡相关因子的改变达到对肺纤维化的治疗作用。
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姜黄素对肺纤维化鼠Bcl-xl表达的影响
目的 探讨姜黄素对博莱霉素诱导肺纤维化大鼠肺组织Bcl-xl基因表达的影响.方法 选取SD大鼠96只,随机分为空白组、模型组、醋酸泼尼松龙组、姜黄素组,每组各24只.各组动物于7、14、28 d随机处死8只,取肺组织采用RT-PCR检测Bcl-xl mRNA的表达和免疫组化法检测蛋白的表达,观察姜黄素对博莱霉素诱导肺纤维化大鼠肺组织Bcl-xl基因表达的影响.结果 模型对照组Bcl-xl蛋白与Bcl-xl mRNA表达在第7天开始下降,第14天达低峰,第28天略有回升,但仍低于空白对照组,姜黄素组Bcl-xl mRNA及蛋白表达显著高于模型对照组及空白对照组,均有统计学意义(P<0.01);姜黄素组与泼尼松龙组比较7、14 d均无统计学意义(P>0.05),28 d姜黄素组Bcl-xl表达高于泼尼松龙组,有统计学意义(P<0.01).结论 在博来霉素诱导肺纤维化形成阶段应用,姜黄素干预可能通过上调Bcl-xl mRNA及蛋白的表达减轻肺纤维化的程度.
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STAT3活化途径阻断对结直肠癌细胞HT29生长的影响
目的:探讨诱骗寡核苷酸技术靶向阻断STAT3活化途径对结直肠癌细胞HT29生长的影响,为结直肠癌的基因治疗提供实验依据.方法:利用decoy ODN体外转染结直肠癌细胞HT29,靶向阻断STAT3活化途径,荧光显微镜下观察及流式细胞术检测转染情况及效率,MTT法检测细胞的生长抑制情况,Realtime RT-PCR及Western blotting检测细胞内STAT3、Bcl-xl及Caspase3的mRNA及蛋白表达量.结果:STAT3 decoy ODN能够高效率的转染入结直肠癌细胞内,并定位于细胞核内.STAT3decoy ODN组HT29细胞生长抑制率显著增高,细胞内STAT3及Bcl-xl的mRNA及蛋白表达量显著降低(P＜0.05),Caspase3显著增加(P＜0.05).结论:Decoy ODN靶向阻断STAT3活化途径后,能够有效下调结直肠癌细胞HT29内STAT3基因的表达,抑制其细胞生长,其机制可能与降低STAT3、Bcl-xl及Caspase3的表达有关.
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胰腺癌细胞对5-Fu和吉西它滨获得性耐药后bcl-xL和mcl-1表达的变化
目的:探讨胰腺癌细胞对5-Fu和吉西它滨的获得性耐药后bcl-xL和mcl-1表达的变化.方法:应用SRB方法检测5-Fu和吉西它滨对胰腺癌细胞株Panc-1,Mia-Paca-2和Capan-1的细胞毒性作用,应用Western blot法来检测bcl-xL和mcl-1的蛋白表达水平.结果:5-Fu和吉西它滨对3株胰腺癌细胞均产生了细胞毒性作用, 5-Fu长期作用后, Capan-1细胞IC50上升了2.1倍(P<0.05).吉西它滨长期作用后,Capan-1细胞IC50上升了1.5倍(P<0.05).5-Fu或吉西它滨长期作用后,产生了获得性耐药的胰腺癌细胞bcl-xL和mcl-1表达水平上调.结论:5-Fu或吉西它滨长期作用后,产生了获得性耐药,这种耐药与bcl-xL和mcl-1的过度表达相关.
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含caspase募集区的凋亡抑制蛋白ARC在卵巢癌细胞中的表达及其对内源性凋亡的调节
目的:探讨含casepase募集区的凋亡抑制蛋白ARC在卵巢癌细胞株中的表达,以及其对卵巢癌细胞凋亡的影响及内源性凋亡蛋白的调节.方法:脂质体转染干扰卵巢癌细胞A2780和SKOV3细胞内ARC表达.Western blot和RT-PCR法检测细胞内ARC及其编码基因NOL3,流式细胞仪检测细胞凋亡比例,观察细胞内Bax和Bcl-xl表达.结果:卵巢癌细胞株中ARC均为高表达或较高表达,A2780和SKOV3细胞内ARC表达减少使细胞的凋亡比例增加,导致Bax表达增加,Bcl-xl表达减少.结论:含caspase募集区的凋亡抑制蛋白ARC可通过内源性凋亡途径抑制卵巢癌细胞凋亡.
