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雷公藤红素诱导视网膜母细胞瘤Y79细胞凋亡及对凋亡核因子-κB的影响
目的研究雷公藤红素抑制视网膜母细胞瘤(Rb)Y79细胞生长并诱导其凋亡的作用及信号转导机制.方法应用3H-胸腺嘧啶掺入分析法观察雷公藤红素对细胞生长的抑制作用,以细胞形态学改变和DNA片段凝胶电泳分析细胞凋亡,用Western blot分析对NF-κB的影响.结果雷公藤红素可明显抑制Y79细胞的生长,1μmol/L雷公藤红素处理48小时,3H-胸腺嘧啶掺入率下降达56.15%,此条件下雷公藤红素可诱导Y79细胞凋亡.在此过程中NF-κB表达被抑制.结论雷公藤红素可抑制Y79细胞生长并诱导其凋亡,其作用机制是抑制NF-κB.
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巨噬细胞膜包裹的PEG-PLGA载雷公藤红素纳米粒靶向治疗重症急性胰腺炎的大鼠体内药效学研究
急性胰腺炎常伴随局部或全身性炎症反应,本研究旨在开发一种雷公藤红素靶向治疗急性胰腺炎的策略.首先,选择小鼠单核巨噬细胞RAW264.7为模型巨噬细胞,通过细胞溶胀、机械破坏和密度梯度离心法提取巨噬细胞膜;采用探头超声法制备平均粒径约150 nm左右的PEG-PLGA纳米粒;利用挤膜法将细胞膜挤过400 nm多孔聚碳酸酯膜而制备巨噬细胞膜包裹的PEG-PLGA纳米粒.体内分布研究发现,该细胞膜包裹的纳米粒有很好地胰腺炎症靶向性;与未包膜纳米粒比较,载雷公藤红素巨噬细胞膜包裹的纳米粒对胰腺局部和全身炎症有较好的治疗效果.
关键词： RAW264.7巨噬细胞 PEG-PLGA 纳米粒 雷公藤红素 急性胰腺炎 -
雷公藤MCT基因RNAi对雷公藤萜类活性成分生物合成的影响
MCT是萜类生物合成MEP途径上重要的关键酶,本研究利用Gateway克隆重组技术构建TwMCT基因的RNAi表达载体,得到了大小为484 bp的载体片段.通过基因枪技术将TwMCT RNAi载体转入到雷公藤悬浮细胞.采用UPLC测定雷公藤萜类活性成分的含量,结果显示细胞中雷公藤甲素和雷公藤红素的含量相对于对照组pK7GWIWG2D分别下降了23.4％和42.8％.同时利用qRT-PCR检测TwMCT基因及萜类合成途径上主要基因的表达量,结果表明,相对于对照组pK7GWIWG2D,TwMCT表达量下降了29.2％,TwDXR、TwGGPS、TwHMGR和TwHMGS的相对表达量分别下降了36.3％、31.3％、62.2％和29.1％,但TwDXS的表达量上调了114.2％,而TwFPS没有显著性变化.本研究在体内验证了干扰TwMCT的表达对雷公藤萜类活性成分雷公藤甲素和雷公藤红素的积累有显著抑制作用,为进一步探究MCT基因对雷公藤萜类成分生物合成的调控机制奠定基础.
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TwHMGR过表达对雷公藤甲素和雷公藤红素生物合成的影响
雷公藤3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(Tripterygium wilfordii 3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme-A reductase,TwHMGR,GenBank:ALU11310.1 3)是MVA途径中的第一个限速酶,是细胞质中萜类代谢途径中的重要调控位点.为探讨TwHMGR对雷公藤甲素和雷公藤红素生物合成的影响,对其进行了过表达研究.利用Gateway技术将TwHMGR的开放阅读框(Open Reading Frame,ORF)构建到过表达载体中,通过基因枪介导过表达载体转入雷公藤悬浮细胞.qRT-PCR结果显示TwHMGR的基因相对表达量在过表达组显著提高,是空载体组基因相对表达量的1.75倍;UPLC结果显示雷公藤甲素及雷公藤红素含量在过表达组中分别提高为空载组的163.93％和190.04％.本实验中TwHMGR在雷公藤悬浮细胞中成功过表达,表现为基因相对表达量的上升和雷公藤甲素及雷公藤红素含量的上调,证明了TwHMGR在雷公藤萜类成分生物合成途径上的正向调节作用,为雷公藤重要活性萜类成分的合成生物学研究奠定了基础.
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雷公藤红素对奥氮平所致大鼠糖脂代谢紊乱的改善作用
目的 建立奥氮平诱导的糖脂代谢紊乱大鼠模型并研究雷公藤红素对糖脂代谢紊乱的作用.方法 24只SD雌性大鼠,按照体重随机分成对照组、模型组、2个剂量实验组.模型组给予奥氮平(1 mg·kg-,ip,bid),实验组在建模的同时给予2个剂量(3,9 mg·kg-1·d-1,ig,qd)雷公藤红素,对照组腹腔注射等量的生理盐水,记录4组大鼠的摄食量和体重的变化.28天后采血并将大鼠处死,测定血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)、空腹血糖(FBS)及胰岛素(INS)水平.结果 28 d后,对照组、模型组和低、高2个剂量实验组大鼠血清TG水平分别为(0.24±0.09),(0.50±0.11),(0.31±0.06),(0.31±0.03) mmol·L-1;HDL-C水平分别为(0.83±0.13),(0.33 ±0.24),(1.52 ±0.55),(1.78 ±0.24) mmol· L-1;INS水平分别为(32.40±16.70),(123.60±41.80),(38.31±8.53),(22.96±8.06)μU· mL-1,HOMA-IR分别为9.49±5.01,35.73±12.19,11.33±2.50,6.39±1.96.与对照组相比,模型组的TG水平显著升高,HDL-C水平显著降低,INS水平以及胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)显著升高,差异均有统计学意义(均P＜0.05);而LDL-C和FBS无明显变化.与模型组相比,2个剂量实验组血清TG、INS水平以及HOMA-IR显著降低,HDL-C水平显著升高,差异均有统计学意义(均P＜0.01);而LDL-C、TC、FBS无显著差异.低、高2个剂量实验组间各指标均无显著性差异.结论 雷公藤红素对奥氮平引起的糖脂代谢紊乱可起到明显的改善作用.
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雷公藤红素对转基因小鼠原代肝细胞HBV的抑制作用
目的:考察雷公藤红素对HBV转基因小鼠原代肝细胞的抗HBV作用.方法:改良的两步灌流法分离HBV转基因小鼠原代肝细胞；MTT法检测细胞毒性作用；药物作用24 h后取上清,分别应用ELISA法和荧光定量PCR法测定HBsAg和HBV-DNA.结果:雷公藤红素对原代肝细胞TC50为(6.49±0.8) μmol·L-1；雷公藤红素浓度低于0.8μmol·L-1时,对原代肝细胞没有明显毒性；在0.08～0.8μmol·L-1浓度范围内对HBsAg和HBV-DNA有显著抑制作用(P＜0.05)；随着雷公藤红素浓度的增加,对HBsAg和HBV-DNA的抑制作用增强.结论:雷公藤红素不仅能够抑制转基因小鼠原代肝细胞HBV-DNA的复制,而且可以有效抑制其HBsAg的表达.
关键词： 雷公藤红素 乙型肝炎病毒 蛋白酶体抑制剂 转基因小鼠原代肝细胞 HBV-DNA -
雷公藤红素药理作用分子靶点的研究进展
雷公藤红素是从传统中药雷公藤中提取分离得到的一种醌甲基三萜,具有抗炎、免疫抑制及抗肿瘤等药理活性.雷公藤红素几个特殊的分子靶点大多会抑制IKK-NF-κB信号通路,包括:①抑制IKKα/β激酶；②失活热休克蛋白90的分子 伴侣蛋白细胞分裂周期蛋白37及P23:③抑制蛋白酶体的功能；④激活热激因子1诱导热休克蛋白反应；⑤影响肿瘤细胞的增殖；⑥影响细胞凋亡；⑦影响丝裂原活化蛋白激酶；⑧影响Akt/mTOR信号级联；⑨影响血管生成和转移；⑩抗炎作用.本文对其药理作用分子靶点研究进展做一综述.
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响应面优化超声辅助提取独子藤中雷公藤红素
研究了从独子藤中提取雷公藤红素的关键提取参数,包括提取时间(10-20 min),提取温度(30-60℃),超声功率(60-90 W)和液料比(10-30 mL/g)对提取效果的影响.采用Box-Behnken Design设计实验方案,通过响应面法,进一步考察了溶剂种类对提取效果的影响.结果表明,在所选的溶剂甲醇、乙醇、乙酸乙酯、正丁醇和水中,乙醇为佳提取溶剂.采用二阶多项式模型进行数据分析,模型的相关系数R2=0.9928.确定了独子藤中雷公藤红素的较优提取工艺条件为:提取时间20 min,提取温度46℃,提取功率60 W,液料比30 mL/g,按此条件雷公藤红素的提取率可达3.116 mg/g.预测值和实验实测值之间相关性很强.结果表明,应用响应面法优化超声辅助提取独子藤中雷公藤红素的方法高效且可靠.
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雷公藤红素体内外诱导人宫颈癌HeLa细胞自噬作用及分子机制
目的 探讨雷公藤红素诱导人宫颈癌HeLa细胞自噬的分子机制.方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖、流式细胞仪检测细胞周期及凋亡率、荧光显微镜检测细胞自噬、Western blotting检测相关蛋白的表达、小鼠皮下移植肿瘤模型检测肿瘤生长.结果 实验结果表明,雷公藤红素体外抑制人宫颈癌HeLa细胞的增殖并诱导细胞自噬及细胞周期阻滞于G0/G1期,但对细胞凋亡无影响;雷公藤红素促进自噬标志性蛋白LC3 Ⅰ转化为LC3Ⅱ以及Beclin 1上调;此外,雷公藤红素促进PTEN、p-ERK1/2、p-MEK1/2的表达,但抑制Akt、p70S6K及mTOR的磷酸化;用自噬抑制剂3-methyladenine(5 mmol·L-1)预处理可逆转雷公藤红素对HeLa细胞的抗增殖及自噬诱导作用.动物实验结果表明,雷公藤红素剂量依赖性地抑制皮下移植肿瘤的生长,且抑制肿瘤组织中p-AKT、p-mTOR等蛋白的表达并上调自噬标志性蛋白Beclin-1及LC3Ⅱ的表达.结论 雷公藤红素在体内外的抗肿瘤作用是通过抑制Akt信号通路并诱导HeLa细胞自噬产生的.
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雷公藤红素药理作用研究进展
雷公藤系卫矛科雷公藤属植物,具有广泛的疾药用途,能抗肿瘤、抑制免疫、抗炎和抗生育等,已应用于类风湿性关节炎、肝炎、脉管炎、麻风病、外科皮肤病及癌症等多种疾病的治疗.雷公藤红素(tripterine)为雷公藤的生物活性成分之一,具有抗肿瘤、抑制免疫反应和抗炎症作用、抑制血管生成等药理作用.本文通过综述近十年有关雷公藤红素的文献,介绍了雷公藤红素的各种药理作用研究状况.
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雷公藤红素对肥胖型哮喘气道高反应的影响
目的 探讨雷公藤红素(celastrol)对肥胖型哮喘小鼠气道高反应的影响.方法 雄性C57BL/6小鼠30只,随机分为正常对照组、哮喘组、肥胖组、肥胖型哮喘组和雷公藤红素干预的肥胖型哮喘组(简称干预组)共5组.肥胖型哮喘组和干预组予以高脂饲料(HFD)喂养16周,于第13周起第1天和第13天腹腔注射卵清蛋白/氢氧化铝[OVA/AL(OH)3]致敏,第25 ～ 31天连续7天雾化吸入OVA激发,干预组在每次雾化吸入前30rmin口服celastrol(10 mg/kg).哮喘组进行普通饲料喂养+OVA致敏激发.肥胖组进行高脂饲料喂养+生理盐水致敏激发.正常组进行普通饲料喂养+生理盐水致敏激发.运用小鼠肺功能仪检测小鼠气道高反应性(AHR)的指标呼吸气道阻力(Rn),进行相关分析.结果 哮喘组和肥胖组Rn值显著高于正常对照组,肥胖型哮喘组Rn值高于其余各组,干预组Rn显著低于哮喘组和肥胖型哮喘组(P均＜0.01),而干预组Rn与正常组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).经乙酰甲胆碱激发后,哮喘组和肥胖组小鼠Rn值上升幅度显著高于正常对照组(P＜0.01),肥胖型哮喘组Rn值上升幅度高于其余各组,干预组小鼠较哮喘组、肥胖组和肥胖型哮喘组小鼠比较,Rn值上升幅度显著降低(P均＜0.01);而干预组小鼠Rn值的上升幅度与正常对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 雷公藤红素显著减轻肥胖型哮喘小鼠呼吸气道阻力,改善了其AHR.
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雷公藤红素联合5-氟尿嘧啶在人结肠癌细胞中的相互作用
目的 体外观察雷公藤红素与5-氟尿嘧啶(5-FU)联用在人结肠癌HCT-116细胞增殖中的相互作用.方法 采用MTT法观察不同浓度雷公藤红素及5-FU单独或联合应用对结肠癌细胞的生长抑制作用,并利用中效原理判断联合用药的效果.结果 雷公藤红素和5-FU单独应用时,随药物浓度增加对HCT-116细胞的抑制作用也增加,中效浓度分别为3.533μmol/L,9.254μmol/L,两药联用时在大部分效应范围(0＜fa＜83%)表现协同作用(CI＜1),中效浓度为6.433μmol/L,其中雷公藤红素0.099μmol/L,5-FU 6.33μmol/L.两药合用给药时间及次序不同时,合用效应无明显差异.结论 上述两种药物联合应用时具有较好的协同效应,且药物效应与给药顺序无关.
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雷公藤红素抗肿瘤研究进展
雷公藤红素又名南蛇藤醇,是从雷公藤根部分离到的三萜类色素,近年来雷公藤红素的抗肿瘤作用及其机制备受关注,现就其研究进展做一综述,以期对雷公藤红素的进一步研究提供参考.
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雷公藤红素对游离脂肪酸诱导HepG2细胞Toll样受体4通路的影响
目的 探讨雷公藤红素对游离脂肪酸(FFAs)诱导肝细胞的干预作用及相关机制.方法 以人肝癌细胞株HepG2为研究对象,脂质体转染Toll样受体4(TLR4) siRNA,荧光定量PCR检测干扰效率.给予FFAs、雷公藤红素干预,未处理的HepG2细胞作为正常对照组.油红O染色观察细胞脂质沉积情况;应用Western印迹检测TLR4及相关信号通路蛋白髓样分化因子88(MyD88),核因子κB(NF-κB)p65,白细胞介素(IL)1β,肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达水平.各组间计量资料比较采用单因素方差分析.结果 0.5 mmoL/L FFAs处理24 h,油红O染色镜下可见HepG2细胞内大量红色脂滴,0.5 μmol/L雷公藤红素干预后红色脂滴明显减少.与正常对照组相比,FFAs组TLR4及下游炎症介质蛋白表达明显升高,差异均有统计学意义(均P ＜0.05);与FFAs组相比,TLR4siRNA和雷公藤红素均有效抑制TLR4蛋白表达(0.69 ±0.14,1.63 ±0.12比2.46 ±0.23,均P＜0.01),并使下游炎症介质MyD88(1.21 ±0.12,1.35 ±0.18比1.62 ±0.19)、NF-κBp65(1.69±0.14,1.54±0.36比2.19 ±0.47)、IL-1β(1.51±0.16,1.45 ±0.38比1.82 ±0.27)、TNF-α(1.60±0.14,1.41 ±0.29比1.88 ±0.19)表达明显减少(均P＜0.01);与FFAs+ TLR4 siRNA相比,FFAs+ TLR4siRNA+雷公藤红素联合应用组MyD88(1.09 ±0.23比1.21 ±0.12)、NF-κBp65(1.24 ±0.20比1.69 ±0.14)、IL-1β(1.28 ±0.31比1.51 ±0.16)、TNF-α(1.10 ±0.29比1.60 ±0.14)表达进一步减少(均P＜0.01).结论 TLR4介导的信号通路可能是雷公藤红素改善肝细胞脂肪变性的机制之一.
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雷公藤红素对人乳腺癌细胞系MCF-7的作用
目的：研究雷公藤红素对人乳腺癌细胞系MCF-7细胞生长周期的影响及其分子生物学机制。方法以不同浓度的雷公藤红素处理MCF-7细胞不同时间，采用四甲基偶氮唑盐分析法检测各组MCF-7细胞增殖情况，流式细胞仪检测药物作用前后对细胞周期的变化，Western blot检测药物作用前后生存蛋白及p21蛋白表达的变化。结果 MTT法检测结果显示雷公藤红素对MCF-7细胞增殖的抑制呈浓度依赖性和时间依赖性（P<0.05）且存在大抑制浓度1μmol/L；流式细胞仪检测发现随着魟鱼骨素作用时间的延长G1期细胞百分比明显增加（P<0.05）而G2/M期细胞比例明显减少（P<0.05）且细胞凋亡率随药物作用时间的延长明显升高(P<0.05)；Western blot检测结果显示随着药物作用时间延长，MCF-7细胞中的生存蛋白表达降低，p21蛋白表达逐渐增高（P<0.05）。结论雷公藤红素抑制MCF-7细胞增殖，阻滞细胞停留在G1期，其机制可能与调控此两种蛋白表达有关，雷公藤红素可能成为未来治疗乳腺癌药物之一。
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雷公藤红素衍生物的合成与评价
目的 以蛋白酶抑制剂雷公藤红素为先导化合物进行结构修饰,以期得到脂溶性的前体药物.方法 经常规提取分离得到雷公藤红素(I),通过脱水缩合方法和先成盐后酯化方法合成雷公藤红素衍生物;采用MTT法研究了5个衍生物的细胞毒活性.结果 合成的5个衍生物经结构确证为雷公藤红素甲酯(Ⅱ)、雷公藤红素苄酯(Ⅲ)、雷公藤红素正十六醇酯(Ⅳ)、雷公藤红素环氧丙酯(V)和雷公藤红素酰胺(Ⅵ);5个衍生物除雷公藤红素酰胺外,其余4个衍生物的细胞毒活性与母体相当,均比阳性对照药顺铂的细胞毒活性强.结论 首次合成了雷公藤红素酯类衍生物,且具有较强细胞毒活性.
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雷公藤固体分散体大鼠在体肠吸收研究
目的 研究雷公藤固体分散体的大鼠肠吸收动力学特征,考察不同肠段、药物浓度、pH值和P-糖蛋白(P-gp)对肠吸收的影响.方法 采用大鼠在体单向肠灌流模型,HPLC法测定各指标成分含量,重量法校正数据并计算各指标成分的吸收速率常数(Ka)和表观渗透系数(Papp).结果 将原料药制成固体分散体后,雷公藤各成分在全肠段的Ka较原料药显著增大(P＜0.05),雷公藤各指标成分在各肠段均有吸收且存在一定差异.随着药物浓度的升高,各指标成分的吸收均具有饱和现象.酸性环境(pH 5.4)有利于各指标成分的吸收,尤其是酸性成分雷公藤红素.加入P-gp抑制剂后,雷公藤红素的吸收与不加P-gp抑制剂比较有显著差异(P＜0.05),可能为P-gp底物.结论 雷公藤固体分散体各指标成分在全肠段均有吸收,且具有饱和现象;酸性环境有利于各成分的吸收,雷公藤红素吸收过程受药物浓度和P-gp的外排影响,可能为P-gp底物;制成固体分散体能显著提高雷公藤各成分的吸收,提示各指标成分均为生物药剂学系统II类药物,制剂研发过程中增加药物溶解度或可提高制剂的生物利用度.
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雷公藤红素对巨噬细胞焦亡的影响
目的 探讨雷公藤红素对小鼠巨噬细胞RAW264.7焦亡的影响及相关机制.方法 采用MTT法测定细胞增殖;吖啶橙(AO)/溴化乙啶(EB)、Hoechst/PI荧光染色观察细胞焦亡形态变化;ELISA法检测细胞上清液中白细胞介素-1β(IL-1β)分泌量;Westem blotting法检测Caspase-1蛋白表达水平;Caspase-1活性检测试剂盒检测细胞内Caspase-1酶活性.结果 经MTT法检测发现,雷公藤红素在50 nmol/L以下对巨噬细胞RAW264.7增殖活性无显著影响;AO/EB、Hoechst/PI染色显示雷公藤红素能够改善脂多糖(LPS)与三磷酸腺苷(ATP)诱导的细胞焦亡;ELISA结果显示,雷公藤红素能够抑制IL-1β的分泌(P＜0.05),且具有一定的浓度依赖性;Western blotting检测发现cleaved-Caspase-1蛋白表达量降低,同时雷公藤红素能抑制Caspase-1的酶活性.结论 雷公藤红素抑制LPS与ATP诱导的细胞焦亡,可能与抑制IL-1β的分泌,抑制Caspase-1的活化有密切关系.
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雷公藤红素对SGC-7901细胞和ECV304细胞增殖及能量代谢的影响
目的 研究雷公藤红素对人胃癌细胞SGC-7901和人脐静脉内皮细胞ECV304增殖抑制活性及能量代谢干预的作用机制.方法 选取SGC-7901和ECV304细胞,采用MTT法、生长曲线测定雷公藤红素对2种细胞增殖抑制活性;HE染色法观察细胞形态变化;分光光度法测定糖酵解途径酶[己糖激酶(HK)、丙酮酸激酶(PK)和乳酸脱氢酶(LDH)]、三羧酸循环酶[琥珀酸脱氢酶(SDH)]的活力及能量代谢产物ATP的量;Western blotting法测定低氧诱导因子(HIF-1α)和单羧基转运体(MCF-4)蛋白表达水平.结果 雷公藤红素对SGC-7901和ECV304细胞增殖抑制作用具有时间和剂量依赖性,引起2种细胞形态变化,降低2种细胞HK、LDH和SDH活力,使细胞内ATP的量明显减少,SGC-7901细胞中HIF-1α和MCT-4表达明显降低,而ECV304细胞内2种蛋白表达下降不明显.结论 雷公藤红素通过降低SGC-7901细胞和ECV304细胞中HIF-1α和MCT-4蛋白表达水平,抑制2种细胞能量代谢相关酶活力,导致能量不足,细胞增殖受到抑制,从而达到抑制胃癌细胞生长和肿瘤血管生成的双重抗肿瘤作用.
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雷公藤红素对神经胶质瘤U87细胞增殖、凋亡和迁移的影响
目的 研究雷公藤红素对神经胶质瘤U87细胞增殖、凋亡和迁移的影响及其机制.方法 采用MTT法检测雷公藤红素对U87细胞增殖的影响;流式细胞术检测U87细胞凋亡和线粒体膜电位;Western blotting法检测U87细胞中线粒体途径相关凋亡蛋白表达水平;Transwell和划痕实验检测U87细胞的迁移能力.结果 雷公藤红素可显著抑制U87细胞的增殖、降低U87细胞线粒体膜电位并诱导U87细胞凋亡;雷公藤红素显著性地调控Bcl-2、Bax、细胞色素C(Cyt C)、Caspase-9和Caspase-3的表达水平;同时雷公藤红素显著抑制U87细胞迁移能力.结论 雷公藤红素抑制U87细胞增殖、迁移和诱导其凋亡,其中凋亡机制可能是通过调控线粒体途径相关凋亡蛋白来实现的.
关键词： 雷公藤红素 神经胶质瘤U87细胞 细胞凋亡 线粒体途径 细胞迁移
