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HE 染色切片行荧光原位杂交检测方法的探讨
目的:建立 HE 染色切片上进行荧光原位杂交(FISH)检测的技术方法。方法 HE 染色后的切片,轻轻揭掉其盖玻片,然后放在二甲苯中浸泡40 min,重复2次。接着按本实验室标准的 FISH 操作规程进行。结果用此方法进行 FISH 检测,组织无脱片,信号清楚,定位准确,背景干净。结论 HE 染色切片行荧光原位杂交检测方法稳定,结果可靠,在病理诊断中有一定的应用价值。
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冰冻切片制作中的几点体会
冰冻切片在病理操作中占着举足轻重的作用,广泛地用于临床病理快速诊断、教学和科研.冰冻切片就是一种借助在低温下(-18℃以下),使组织在短时间内达到一定硬度进行切片的方法.
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三种不同固定液固定淋巴结所制切片的比较
淋巴结活检病理诊断为病理科常规的工作之一,它主要包括病理制片和病理诊断两个环节,而淋巴结病理诊断工作常常比较困难,有时良恶性不易区分,其重要原因之一就是淋巴结制片困难,切片质量较差,与其它组织的制片相比淋巴结制片更易造成许多假象,如切片厚、有刀痕、包膜不完整、细胞收缩变形、皮髓质分界不清、淋巴滤泡模糊、染色比较深、分布不均匀等.因此欲对淋巴组织做出准确的病理诊断,高质量的切片是必不可少的.要想制出好的切片,固定液的选择至关重要.本文采用三种常规固定液,对淋巴组织进行固定,将分别所制出的HE切片进行比较,从而找出适合淋巴组织的固定液,以提高切片质量及诊断的准确性.
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1例肺泡蛋白沉着症患者的护理
肺泡蛋白沉着症是一种原因未明的少见疾病,其特点是肺泡内有不可溶性富磷脂蛋白沉积,临床症状主要表现为气短、咳嗽和咳痰.胸部X线呈双肺弥漫性肺部浸润阴影、病理学检查以肺泡内充满有过碘酸雪夫(PAS)染色阳性的蛋白样物质为特征.经肺泡灌洗治疗后,约60%的患者病情可以改善或痊愈.我科于2004年收治该病患者1例,现报道如下.
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杰雪用于静脉穿刺部位皮肤消毒的临床观察
碘伏作为一种皮肤消毒剂,可与表面活性剂结合而形成水溶液,因具有广谱、快速、强力的杀菌作用,在临床上广泛使用,但对皮肤有染色作用,影响血管的观察,我科从2000年5月外始至今试用杰雪皮肤消毒剂(兴远实业成都有限公司制造),现将临床观察结果报告如下.
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激光牙齿漂白术中术者与助手配合的体会
激光牙齿漂白术是近年来出现的漂白牙齿多种染色的新技术,以过氧化硫脲为主要成分的漂白药涂布于染色牙齿表面,再给予激光照射,达到漂白牙齿目的.我中心自1998年至2000年共收治各类牙变色1400人,其中外源性染色(烟、茶)470人,内源性染色(四环素、氟斑等)856人,混合性染色74人,经1、2小时漂白操作,患者牙齿均有不同程度的漂白,患者满意率较高.治疗采用457~501 nm氩离子牙科漂白激光机,连续波,光纤输出,光斑直径1.2 mm,功率150~400 mW,光纤头贴近牙唇面,每次照射20 s,药物留置3 min后冲洗、吹干,重复操作3~5次,为1次治疗.
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活性氧与光动力学疗法
自1900年医学生Oscar Raab偶然发现丫啶橙(acridine orange)染色使草履虫发生光敏致死现象,揭开了人们对于光敏化反应研究的序幕[1].此后的一个多世纪,对于光动力过程的研究逐步深入,特别是近二十余年,随着激光技术的发展和新型光敏剂的出现,光动力学疗法(photodynamic therapy,PDT)作为一项新型诊疗技术,逐渐被各国学者接受.
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人外周血嗜碱性粒细胞过氧化物酶染色观察
嗜碱性粒细胞是血液及骨髓液中较少的一类血细胞,该类细胞的过氧化酶染色(POX)定性在教材及操作规程中存在争议,故针对此问题,特将对正常及病态嗜碱性粒细胞的过氧化酶常用染色方法嗜碱性粒细胞结果供参考.
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成人缺铁性贫血的病因分析
随着人们生活水平的不断提高,像贫血这样的营养性疾病往往被忽视,直至病情恶化影响到健康才引起重视.缺铁性贫血的特点是骨髓、肝、脾及其他组织中缺乏可染色铁,血清铁蛋白浓度降低,血清铁浓度和血清转铁蛋白饱和度均降低,表现为小细胞、低色素性贫血.
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肥大细胞活化在高脂饲养大鼠胰岛纤维化形成中的作用
目的::探讨胰腺肥大细胞( MC)活化在高脂饲养大鼠胰岛纤维化发生中的作用。方法:8周龄雄性SD大鼠40只随机分为2组,正常饲养组(NC, n=20)、高脂饲养组(HF, n=20),每组各20只。每组大鼠饲养20周后检测空腹血糖、血胰岛素( Ins)、胰高糖素( Glc)、游离脂肪酸( FFA);正常血糖高胰岛素钳夹评价外周胰岛素抵抗程度;胰岛细胞表面灌注评价β及α细胞分泌功能;检测外周血炎症指标:TNF-α、IL-6,取胰腺组织制片,甲苯胺蓝染色显示肥大细胞并计数定量,免疫组织化学标记胰岛IL-6、TNF-α、苦味酸-天狼星红胶染色鉴别胰岛内沉积的胶原纤维类型。结果:(1)HF组大鼠葡萄糖输注率(GIR)明显低于NC组,血Ins、Glc、FFA水平显著高于NC组;(2)HF组大鼠葡萄糖刺激的胰岛素分泌(GSIS)功能明显下降( P<0.01);HF组大鼠基础Glc的分泌是NC组的3倍( P<0.01),16.7 mmol/L葡萄糖灌注后Glc分泌未受抑制;(3) HF组大鼠胰岛纤维化,肥大细胞数量明显增多,部分细胞呈脱颗粒状。肥大细胞IL-6呈阳性表达。苦味酸-天狼星红胶染色结果:根据胰岛内纤维化的范围,将胰岛纤维化程度分为轻、中、重三度:轻度纤维化范围<30%;中度纤维化范围在>30%<60%之间;重度纤维化范围>60%胰岛纤维化,偏振光显微镜观察胰岛内沉积的纤维,主要为I型及III型胶原纤维,炎细胞浸润。结论:长期高脂饲养脂毒性使肥大细胞增生、活化脱颗粒释放致炎因子IL-6、TNF-α从而促进了胰岛内胶原纤维沉积。
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Salubrinal抑制小鼠破骨细胞发育和骨细胞凋亡
骨质疏松是一种以骨量减少和骨微结构破环为特征而导致骨折危险性增加的疾病。 Salubrinal是真核翻译起始因子2α( eIF2α)的选择性抑制剂,保护细胞免于内质网应激。前期工作表明salubrinal可促进骨损伤愈合,但是对骨丢失的作用尚需探索。本实验使用骨量减少的动物模型--鼠尾悬吊小鼠,验证以下假设:salubrinal通过抑制小鼠破骨细胞发育和骨细胞凋亡治疗骨质疏松。 C57 BL/6雌性小鼠(14周龄)随机分为3组:年龄对照组、鼠尾悬吊对照组和治疗组(n=20)。悬吊治疗组每天皮下注射salubrinal (1mg/kg),持续2周,鼠尾悬吊对照组小鼠注射同等体积的溶剂。实验前后分别进行骨密度测量。给药2周后处死小鼠,取左侧股骨固定,石蜡包埋。应用HE和TRAP染色进行股骨的组织形态学分析。收集右侧股骨和胫骨骨髓来源细胞以观测破骨细胞的发育状态。采用TUNEL染色检测骨细胞的凋亡情况。结果显示,与年龄对照组相比,鼠尾悬吊组小鼠骨密度显著下降(P<0.001),骨小梁体积分数(BV/TV)显著减少(P<0.001),表明骨量丢失动物模型建立成功;salubrinal显著改善骨密度的降低( P<0.05),增加骨容量( P<0.001)。 TRAP染色显示悬吊组小鼠多核破骨细胞形成明显增加(P<0.001),给药后明显抑制活跃的破骨细胞(P<0.001)。原代骨髓细胞培养发现鼠尾悬吊后破骨细胞活跃,而salubrinal能抑制破骨细胞的形成、迁移和粘附。鼠尾悬吊后,骨细胞凋亡增加,局部给药可显著减少骨细胞凋亡数目(P<0.05),改善失重性骨丢失。本研究表明,鼠尾悬吊通过激活破骨细胞的发育和促进骨细胞的凋亡导致骨质疏松,是一种成功的骨质疏松和骨量减少动物模型。 Salubrinal给药通过抑制破骨细胞发育减少鼠尾悬吊小鼠的骨量丢失,同时,给药后显著抑制了骨细胞凋亡,并使骨丢失趋势下降。然而,salubrinal抑制失重性骨质疏松的分子机制还有待进一步探讨。我们的研究为salubrinal治疗骨质疏松提供了有力理论依据。
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Salubrinal通过调节骨髓干细胞向破骨细胞分化治疗大鼠股骨头坏死
本研究采用大鼠股骨头缺血性坏死作为动物模型,观察Salubrinal是否能通过调节骨髓干细胞中破骨细胞的分化治疗大鼠股骨头坏死,以及股骨头的组织学修复情况。18只雄性SD大鼠随机分为假手术组、股骨头坏死模型组和Salubrinal药物治疗组。手术采用切断大鼠股骨头圆韧带及结扎股骨颈的方法造成股骨头缺血性坏死,使用Salubrinal(0.1mg/kg,1次/d)皮下注射,共治疗5周。采用HE染色方法评估组织学修复情况,TRAP染色评估骨组织内破骨细胞的活跃程度,骨髓细胞培养分析骨髓干细胞向破骨细胞分化情况。与假手术组相比,模型组大鼠的股骨头表面出现不同程度的缺损和塌陷;股骨头内骨小梁体积分数( BV/TV)显著降低(P<0.001);TRAP染色提示股骨头内骨小梁表面破骨细胞数目增加(P<0.01);骨髓来源细胞培养显示破骨细胞形成、迁移、粘附和骨片吸收能力均增强(均P<0.01)。与模型组比较,Salubrinal治疗组大鼠股骨头内的骨小梁体积分数明显升高(P<0.001);股骨头内骨小梁表面破骨细胞数目基本恢复到正常水平(P<0.05);骨髓来源的破骨细胞形成、迁移、粘附和骨片吸收能力基本恢复到正常水平(均P<0.01)。股骨头的缺血性坏死可以导致骨髓来源的破骨细胞发育异常活跃,股骨头组织内的骨吸收显著增强。 Salu-brinal通过抑制骨髓来源的破骨细胞分化和功能,减少股骨头的骨吸收,增强骨修复能力。本研究可以为寻求股骨头坏死治疗提供理论依据。
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组蛋白去乙酰化酶抑制剂减轻阿霉素引起的大鼠心肌损伤
目的::探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA对阿霉素( Adriamycin,ADR)引起的心肌损伤的保护作用。方法:健康雄性SD大鼠随机分为4组:生理盐水对照组( CON)、ADR处理组( ADR)、TSA处理组(TSA)、TSA和ADR共处理组(TSA+ADR)。 ADR组腹腔一次性注射ADR(20mg/kg);TSA组一次性腹腔注射TSA(0.1 mg/kg);TSA+ADR组在注射ADR的前一天一次性腹腔注射TSA,一天后腹腔一次性注射ADR;CON组同期腹腔注射同等体积的生理盐水。处理后继续饲养15天。大鼠麻醉后在体测量左心室功能参数,然后取心脏行HE染色,tunel染色观察心肌的形态学变化。结果:ADR可明显降低大鼠左室收缩峰压LVSP、左室发展压LVDP、收缩期左室压力上升大速率+DP/dt和舒张期左室压力下降大速率DP/dt;提高大鼠左室舒张末期压LVEDP;不改变基础血压和心率;阿霉素( ADR)可造成明显心肌形态学损伤,从用药第5天开始心肌凋亡细胞明显增多。第十四天大量心肌细胞凋亡,光镜可见心肌细胞核固缩和碎裂, tunel染色凋亡率增加,达30%以上。预先给予组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA,可以抑制ADR引起的心肌形态学损伤,减少凋亡细胞。 TSA预处理可以明显阻断阿霉素的上述效应。结论:本研究证实ADR处理可导致大鼠心功能明显下降,心肌出现形态学改变;组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA预处理可以改善由ADR引起的心功能及形态学损伤。本研究结果为有效消除ADR等化疗药物的心脏毒性提供了实验依据。
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合理运用新技术减少病理诊断误诊率
近年来新技术的发展和应用,使整个医学界产生了革命性的进展.就病理技术来讲已从单纯的组织学、组织化学发展到免疫组织化学、原位杂交、荧光原位杂交、聚合酶链反应、原位聚合酶链反应.现时的光学显微镜、HE染色对诊断具有一定的局限性,而新技术的问世对病理诊断的正确性提供了很大的帮助,为认识疾病提供了大量有用的信息.随着公费医疗制度的改革、医疗费用急剧上涨,患者经济负担渐加重.如何依据社会客观情况,合理应用新技术造福人类是一个需要探讨的问题.
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高温烤片对石蜡切片黏附、厚度与染色的影响
目的 笔者实验室近发现,高温烤片可有效解决甲基丙烯酸树脂包埋的组织切片的脱片问题,本文拟进一步研究确定高温烤片对石蜡包埋切片黏附、厚度及染色的影响.方法 大鼠肾脏石蜡切片(切片机设定的切片厚度10 μm)脱蜡后经90℃、140℃热板烤片30 min处理,然后用过碘酸-席夫试剂和苏木精染色,观察脱片情况、切片厚度及染色效果.大鼠脊髓石蜡切片(14μm厚)同样处理后分别进行小胶质细胞和突触素颗粒的免疫组化染色.结果 与对照(未烤片)相比,90℃或140℃烤片都有效防止了肾脏石蜡切片从载玻片上脱落,但染色后的实际切片厚度减少了约50%(与设定切片厚度相比),染色变浅,结构清晰度欠佳(90℃烤片后),甚至有细胞消失(140℃烤片后);90℃烤片后免疫阳性小胶质细胞或突触素颗粒减少,非特异性染色加深,140℃烤片后几乎未见免疫阳性结构.结论 高温烤片防脱片的方法可能不适用于石蜡切片.
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术中快速冰冻制片几点体会
<中国误诊学杂志>编辑部:术中快速病理诊断是医院病理科日常工作的一项十分重要的内容,在尽可能短的时间内向病理医生提供质量的HE染色切片,是保证术中快速病理诊断准确性的关键.本人积十几年冰冻制片之经历,有如下体会.
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介绍一种苏木精新配方
中国误诊学杂志社编辑部:哈瑞(Harris)苏木精是哈瑞于1990年发现的,迄今为止它仍然是世界各国病理技术室常用、重要的HE染液之一,也是经典、历史悠久的染液.几乎所有的常规切片、冰冻切片、涂片等染色都使用这种染液.原配方有很多优点,但是也有不尽人意的地方,以后吉尔及周秀荣等进行改进,但仍然存在各自的优缺点,我们在近10 a余的工作中对Harris染液配方进行改进,取得了良好效果,介绍如下.
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急性心肌梗塞后危险区与梗塞区的识别
目的探讨急性心肌缺血损伤后危险区与梗塞区的识别方法.方法成年健康家兔8只分别制作阻塞性心肌梗塞和缺血再灌注心肌梗塞模型,伊文思蓝和TTC染色分别确定缺血区和梗塞区,染色前行MRI检查,放射微球(99mTc-MAA)测量心肌血流量作为标准对照,光镜和电镜检查验证染色结果.结果伊文思蓝染色正常心肌呈蓝色,危险心肌和梗塞心肌染色阴性,TTC染色正常心肌和危险心肌呈砖红色,梗塞心肌染色阴性,染色确定的病变部位与MRI完全一致.危险和梗塞心肌血流量较正常心肌显著减少,病理损伤程度较正常心肌明显严重.结论伊文思蓝和TTC染色是动物实验中确定危险与梗塞心肌的可靠方法.
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肺泡蛋白沉积症的影像学表现
肺泡蛋白沉积症( Pulmonary Aveolar Proteinosis ,PAP)是一种病因未明的少见疾病,1958年由Rosen等首次报导[1].该病特征是肺泡内充填过碘酸雪夫氏(periodic acid-Schiff,PAS)染色阳性的蛋白质类物质,主要由肺泡表面活性物质及退化的肺泡上皮组成,临床主要特点为进行性呼吸困难,目前全肺灌洗仍是该病唯一有效的治疗方法.本文就近年来的有关文献,主要就其影像学特点,综述如下.
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髋关节股骨头挖除后螺旋CT三维重建方法
采用美国Piker 5000V螺旋CT扫描机,130kV,375mAs,层厚2~4mm,螺旋扫描,螺距(pitch)0.75~1.25,重建间隔 0.5~2.0mm,重建矩阵512×512,采用标准重建算法;用VOXQEL工作站,先对兴趣区进行手工分割(segmentation)染色,即对患侧髋臼及关节腔内碎骨片进行细致的染色,染色时务求要仔细,以免误将不需要的结构(即股骨头及股骨颈)包括其中.