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线粒体自噬参与Ox-LDL诱导的THP-1来源泡沫发生发展过程
目的:探索线粒体自噬在泡沫细胞形成过程中的作用。
方法:不同剂量ox-LDL(25μg/ml、50μg/ml 或100μg/ml)分别与THP-M共孵育6、12、24、36、48、60、72 h,油红染色观察THP-M细胞内脂质沉积量,并提取细胞蛋白利用Western blot检测不同阶段泡沫细胞中LC3Ⅱ,Beclin-1, P62和Parkin蛋白的表达量,观察线粒体自噬的变化情况;然后,利用Parkin siRNA干扰Parkin蛋白的表达,ox-LDL(50μg/ml)与THP-M共孵育48 h,通过JC-1 indicator,荧光共定位、western blot、油红染色以及电镜观察Parkin蛋白表达量的变化对线粒体自噬、泡沫细胞形成的影响。 -
急性病毒性心肌炎
肌炎这一术语初由Corvisart于19世纪早期提出.然而,在20世纪初期随着人们认识到冠状动脉疾病是心脏病的一个重要原因,心肌炎这一术语在很大程度上被摈弃了.为使心肌炎的诊断指标标准化,于1987年提出了达拉斯分类.但是这一分类存在一些缺陷,如病理学诊断上易出现不一致,取样误差,以及未考虑病理性改变的确切原因.更由于缺少用于明确炎症的其他免疫学染色和用于病毒诊断的聚合酶链反应(PCR),这一分类不再作为金标准用于病毒性或自身免疫性心肌炎的诊断.所以近年来对病毒和自身免疫性心脏病进行重新定义的努力可能会导致所谓的"达拉斯标准的灭亡".
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P27蛋白在非小细胞肺癌中表达的预后意义
P27蛋白具有限制性调节细胞周期进程的作用,这一作用主要通过抑制细胞周期蛋白依赖性激酶(CDKS)复合物的功能来实现。P27蛋白表达与预后的关系在乳癌、淋巴瘤、前列腺癌以及消化道肿瘤已有报道[1],而在肺癌中的研究甚少。我们运用免疫组化法检测P27在非小细胞性肺癌组织中的表达水平,从而探讨其在非小细胞性肺癌中的意义。 对象和方法 1.对象:56例非小细胞肺癌(NSCLC)病例均在本院接受治疗及随访。其中男42例,女14例,年龄39~77岁,平均60岁。中位随访时间2年(1~5年),56例NSCLC中,腺癌36例,鳞癌18例,腺鳞癌2例。高分化12例,中分化20例,低分化24例。第1、2年每3个月随访一次,以后每半年一次。2.方法:(1)试剂:鼠抗人P27单克隆抗体(G173-524)购自美国Pharmingen公司。羊抗鼠IgG、链菌素亲生物蛋白和过氧化物酶、3,3-二氨基联苯胺盐酸盐(DAB)均购自丹麦DAKO公司。(2)染色流程:5 μm石蜡切片脱蜡水化→过氧化氢室温处理20 min→甩干后微波抗原修复2次,每次10 min→鼠抗人P27单抗(1∶10)湿盒孵育过夜→生物素标记羊抗鼠IgG(1∶200),37 ℃湿盒温育40 min→DBA显色、复染、封片。用已知P27表达阳性的胰腺癌作阳性对照。用缓冲液(PBS)取代一抗作阴性对照。(3)染色结果判断:观察染色切片中10个具有代表性的高倍视野,其肿瘤细胞阳性数在50%以上为(+),低于50%为(-)。3.统计学方法:采用第二军医大学统计教研室统计软件SPSS软件包,运用Logistic逐步回归对P27表达与临床及病理指标的相关性进行分析;应用Kaplan-Meier法进行单因素生存分析,时序检验(log rank test),根据寿命表各随访年份生存率作生存曲线。
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肺原发性血管外皮细胞瘤一例
患者,女,30岁,已婚,农民,因咳嗽2个月,反复发热1个月于2000年5月11日入院。入院查体:体温39 ℃,呼吸20次/min,脉搏80次/min,血压90/69 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa),浅表淋巴结不肿大,双肺散在干湿性音,左下肺呼吸音稍弱,心脏及腹部无异常。外院CT示:左下肺块影,并与胸壁粘连。纤维支气管镜检查可见左下叶粘膜充血,炎症改变,活检标本(苏木素-伊红染色)无异常。CT引导下行经皮肺活检术,病理切片(苏木素-伊红染色)结合免疫组化[波形蛋白(+)、神经元特异性烯醇化酶(-) 、嗜铬素A(-)、溶菌酶(-) 、角蛋白(-) 、Ⅷ因子(-) 、平滑肌肌动蛋白(-)],考虑为左下肺血管外皮细胞瘤(低度恶性)。经外科手术切除肿瘤,其大体标本示(肉眼观):离肺门残端3 cm处可见一7 cm×6 cm×3 cm结节状肿物,突出肺表面,无包膜,边界清楚,无明显粘连,质软,切面呈灰白色,鱼肉样,部分区有出血、坏死;病理切片(苏木素-伊红染色)示:瘤组织由梭形、椭圆形细胞构成,其内有薄壁血管腔隙,衬以单层内皮细胞,瘤细胞围绕血管周围,异型性显著,胞核大,不规则,核膜粗糙,核仁可见,核分裂像多见,并见病理性核分裂像(图1,2),结合网织染色(图3),诊断为肺血管外皮细胞瘤(低度恶性)。
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朗格汉斯与朗格汉斯细胞组织细胞增生症
朗格汉斯细胞组织细胞增生症(Langerhans' cell histiocytosis,LCH)是以组织细胞异常增殖和播散为特征的一种疾病.这种组织细胞与朗格汉斯(Paul Wilhelm Heinrich Langerhans)早描述的树突状细胞几乎完全相同.典型表现为侵犯表皮、淋巴结、胃肠道和呼吸系统的黏膜上皮.在光镜下见到具有典型形态特征的朗格汉斯细胞,S-100蛋白染色阳性,可以拟诊该病.
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本刊对标注染色方法及放大倍数有关事宜的声明
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肺泡蛋白沉积症合并隐球菌脑膜炎一例
患者男,31岁.因“发热3个月,头痛10余天”于2011年5月13日由我院呼吸科转入我科.患者2011年2月初受凉后出现发热,体温波动于37.0~37.5℃,反复诊治无好转,于2011年4月23日入住我院呼吸科,行胸部CT示双肺地图样改变(图1),肺活检组织病理HE染色见肺泡腔内见大量粉染渗出物,并见慢性炎性细胞浸润(图2);糖原染色(PAS)阳性,诊为肺泡蛋白沉积症.
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经皮超声造影检测兔V X2乳腺癌前哨淋巴结的引流路径观察
目的:观察采用经皮超声造影的方法检测兔VX2乳腺癌前哨淋巴结的引流路径并探讨其临床应用价值。方法本实验选取的20只实验兔全部用接种肿瘤的方法建立动物模型(VX2乳腺癌转移淋巴结),采用皮下注射的方式给予Sono Vue,通过超声造影显示乳腺癌前哨淋巴结造影增强的图像。结果20只建立动物模型的实验兔检测结果为:超声造影检测:终检出34个乳腺癌前哨淋巴结,包括12个回声增强均匀的和22个回声增强不均匀或是部分有充盈缺损的。病理切片检查的结果是38个乳腺癌前哨淋巴结中染色为阳性的有24个,超声造影检出阳性的是21个。结论采用经皮超声造影的方法检测兔VX2乳腺癌前哨淋巴结的引流路径明显准确,且此法检出率高,敏感性强,具有较强的优势,是值得临床上推广使用的方法。
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大鼠肠缺血再灌注对小肠屏障、吸收、通透和蠕动功能的影响
目的:从不同角度探讨大鼠肠缺血再灌注对小肠屏障、吸收、通透和蠕动等功能的影响,为更深入地研究创伤后肠道损伤及其保护提供理论及诊治依据.方法:42只Wistar大鼠随机分成健康对照组(C)、单纯肠系膜上动脉夹闭组(Ⅰ)、肠系膜上动脉夹闭再灌1h组(Ⅰ/R1h)、肠系膜上动脉夹闭再灌2h组(Ⅰ/R2h)和肠系膜上动脉夹闭再灌4h组(Ⅰ/R4h).动物活杀后取血和小肠组织,测定血浆和小肠组织二胺氧化酶(DAO),观察肠屏障功能的变化;测定血浆D-乳酸浓度以判断小肠通透性;测定血浆中D-木糖含量以作小肠吸收功能的诊断;肠道给予葡聚糖蓝来测定肠蠕动的长度.与此同时,还进行小肠组织脂质过氧化(MDA)的测定和普通小肠光镜检查.结果:缺血再灌注后各组血浆DAO较C组显著升高(P<0.05),而小肠组织DAO则在各组有不同程度降低,其中在Ⅰ/R 2h和Ⅰ/R 4h组降低显著.血浆和小肠组织DAO的变化呈显著的负相关(P<0.05);缺血再灌注后小肠D-木糖的吸收呈显著升高(P<0.05);缺血再灌注后各组D-乳酸的浓度有不同程度升高,其中Ⅰ/R1h和Ⅰ/R2h组升高显著(P<0.05);给予葡聚糖蓝后各组小肠染色长度均显著较C组有增加(P<0.05);小肠MDA含量在Ⅰ/R2h和Ⅰ/R4h组有升高,Ⅰ/R4h组较C组显著升高(P<0.05).小肠组织HE染色光镜检查见小肠绒毛有较多嗜酸性白细胞,有少量淋巴细胞浸润,小肠绒毛出血.结论:肠缺血再灌注后小肠的屏障、吸收、通透性及肠蠕动功能均发生不同程度的改变.
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免疫组化标记切片褪色再行HE染色的方法介绍
在临床病理工作中,一些经过免疫组化标记的病理切片需要褪色后重新进行苏木素(HE)染色,以满足诊断、教学和学术交流的需要.我们经过长期摸索,建立了一种将免疫组化标记切片褪色后重新进行HE染色的病理技术方法,效果良好,现介绍如下.1 材料与方法1.1 材料收集近2年在我院病理科行病理学检查的子宫平滑肌瘤和结肠癌病例各10例,每例挑选1个组织蜡块,连续切片3张,厚度4 μm,分别行HE染色(HE组)、免疫组化标记(IHC组)和免疫组化标记褪色复染(IHC褪色复染组).其中HE组以普通载玻片捞片,IHC组和IHC褪色复染组以涂胶片捞片.
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冷冻切片原理及操作技术分析
冷冻切片是利用低温将组织冷冻后结冰、变硬,然后切成薄片,附贴于载玻片,再经染色、封片等步骤,便于进行显微镜下观察的切片技术.过程简单,制片快速,一般需10~20分钟便可制成切片,组织中的水分或专用包埋剂起着切片介质支持剂的作用,无需经脱水、透明、浸蜡等步骤.由于组织不经有机溶剂处理,甚至不需要固定,不受高温影响,故而组织没有明显收缩,保存了脂肪、类脂及各种酶的活性,组织细胞保持在生活时状态.
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体外培养破骨细胞的标志酶染色
破骨细胞体外培养是从细胞与分子水平研究骨吸收机理与骨质疏松症防治药物的基础[1].由于破骨细胞数量少,很难分离到纯的破骨细胞,体外培养所获破骨细胞常与其他细胞混合存在,因此从这些混杂细胞内辨别出破骨细胞尤为重要.鉴别破骨细胞的方法有多种,其中方便而具特异性的指标为标志酶TRAP与TrATPase染色,作者应用细胞化学方法成功地对体外培养破骨细胞的标志酶进行了染色,报道如下.
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肝癌组织微血管密度及其相关因素的实验研究
本研究采用VEGF和FⅧ因子染色的免疫组化技术,观察肝癌组织连续切片中VEGF阳性表达和微血管密度(MVD),以探讨两者与肝癌肿块大小、病灶数目及门脉癌栓等的关系.
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前列腺癌MVD和DNA倍体值检测的临床意义
我们采用敏感性、特异性较高的CD34抗体作为检测肿瘤微 血管标志物,对30例病理证实的前列腺癌(Pca)标本进行了微血管密度(MVD)和DNA倍体值检 测,探讨其临床意义。报告如下。 材料与方法 30例前列腺癌患者,年龄54~91岁。其中行膀胱造瘘 活检+去势术16例,行前列腺切除术或根治性前列腺切除术14例。选取30例BPH开放手术标本 和 10例正常前列腺标本作为对照。所有标本均经病理证实。鼠抗人CD34抗体购自DAKO公 司,工作浓度1:60。 MVD检测采用免疫组化SP法。切片厚度4 μm,92 ℃~94 ℃微波修复抗原5 min,共2次,DA B显色。TBS代替一抗作为阴性对照。用已知肺癌阳性切片作阳性对照。CD34阳性染色 的微血管呈棕黄色至深棕色。按改进的Weinder法计数MVD,即在低倍镜下选5个MVD 多区域,随后在高倍镜下计数,取平均值。DNA染色采用Feulgen染色法。用真彩色病 理图像分析系统进行DNA含量测定,每例测定参照细胞50个, 分析细胞50个,校正因子1:1。统计学处理两样本比较采用t检验。
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上尿路结石中纳米细菌的检测
纳米细菌是20世纪90年代新兴的研究课题,研究认为肾结石可能是一种纳米细菌疾病[1].我们从上尿路结石中培养出纳米细菌并通过电镜鉴定.现报告如下.材料与方法主要试剂:DMEM细胞培养液(高糖型,Hyclon公司),类标准胎牛血清(兰州民海生物公司),Hoechst33258DNA染色试剂盒(江苏碧云天生物公司).
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乳腺癌骨髓和前哨淋巴结微小转移检测的临床研究
淋巴和血行转移是乳腺癌二种主要转移形式,我们采用HE染色、免疫组织化学(immunohistochemistry, IHC)和RT-PCR等不同方法同时检测骨髓和前哨淋巴结(sentinel lymph node, SLN)的微小转移,探讨其临床意义.
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肌间黏液瘤一例
患者男,49岁.因右腋下肿块1年于2005年1月11日入院,查体:右腋下第6、7肋间可扪及6.0 cm×5.0 cm肿块,质软,活动欠佳.术中见肿块位于前锯肌与肋间肌的肌膜间隙之间.病理示:灰白色透明黏液样物,大小6.0 cm×5.5 cm×2.5 cm,切面灰红、灰白色,质软,部分有被膜.瘤细胞多呈星形或小圆形.胞质呈不规则凸起向四周伸出.少数细胞胞质明显,核小,深染,无核仁及核分裂象.瘤细胞稀疏分散在大量黏液样基质中,伸入周围的横纹肌和脂肪组织内(图1).奥辛蓝染色(+),瘤细胞胞质内偶尔存在黏液染色阳性的空泡.免疫组化:瘤细胞仅波形蛋白(+).病理诊断:(右腋下胸壁)肌间黏液瘤.
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副乳腺富脂质癌一例
患者,女,43岁,因发现右腋窝肿块1个月于2003年2月入院,查体:一般情况好,双乳对称,乳头无溢液及内陷,皮肤无桔皮样变,胸大肌外侧腋前线至腋下处可及4 cm×4 cm×3 cm质软包块,均匀与右乳腺不相连,其腋窝侧可及实性肿块,大小2.5 cm×2 cm×2 cm,质硬、边界欠清,活动度可;同侧乳腺未及肿块;左乳腺未发现异常.B超报告:右侧副乳合并右腋窝实质性肿物,右乳腺未见肿物;胸片、腹部B超未发现异常.2003年2月17日在局麻下予以行右腋窝肿块切除快速冰冻切片,病理报告副乳腺组织中见腺癌细胞,遂行右副乳腺癌根治术,术中未发现腋窝肿大、质硬淋巴结,病理检查:肿物呈浅黄色,2 cm×3 cm×2 cm无包膜、切面灰白、灰红色,质地坚实,肿物周围连有少许乳腺组织.镜下见肿瘤细胞呈浸润性生长,分散在间质中,癌细胞呈圆形或椭圆形,体积较大,包膜清晰,胞浆丰富透亮,呈泡沫样,少数细胞浆内见较大的圆形空泡,将胞核推向细胞的一侧.胞核不规则,核染色质较多,有嗜酸性大核仁,可见核分裂象(图1),脂肪染色,癌细胞胞浆内充满大量脂质.同侧乳腺标本未查到癌细胞,腋窝淋巴结未见转移癌.
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超声定位下美兰染色行肝段切除术在肝癌治疗中的应用
目的 探讨超声定位下美兰染色行肝段切除的可行性及效果.方法 回顾性分析近3年收治的16例超声定位下美兰染色行肝段切除的病例,与16例传统肝切除病例做对比分析.结果 所有患者均成功行超声定位下美兰染色肝段定位,对于Ⅳ段及Ⅴ、Ⅷ段染色需酌情使用反染法.染色后肝段切除组术中出血较传统手术组少且差异有统计学意义(t=3.011,P=0.009),但手术时间较传统手术组长(t=5.423,P=0.000 07).2组在术后并发症方面无差异,染色后切除组肿瘤复发率6.25%,传统组复发率18.75%,但2组差异无统计学意义(x2=0.133,P=0.285).结论 超声定位下美兰染色行肝段切除较之传统肝段切除在手术安全性方面更好.熟练掌握多种染色方法及肝内解剖走行可提高染色成功率.
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生育镜在妇科疾病诊断治疗中的进展
生育镜(fertiloscopy)是一个检查过程,问世于上个世纪,此过程联合了经阴道注水腹腔镜(穹窿镜,染色通液试验和宫腔镜),输卵管镜和显微输卵管镜,形成了一种新的微创诊断技术.这种用于诊断的检查方法与腹腔镜检查的功能没有根本区别.因其简便,安全,微创,被认为是诊断性腹腔镜的良好替代方法,其应用日益普及.