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淫羊藿苷含药血清对兔软骨细胞增殖及糖胺聚糖分泌的影响
目的:观察不同浓度淫羊藿苷含药血清对兔膝软骨细胞增殖率及糖胺聚糖(GAG)分泌的影响.方法:将3周龄健康新西兰大白兔后肢膝关节分离培养软骨细胞进行鉴定,用制备低、中、高浓度淫羊藿苷(ICA-L、ICA-M、ICA-H)及低剂量仙灵骨葆胶囊(XLGB)含药血清干预分离培养软骨细胞,形态学观察软骨细胞及MTT检测细胞增殖率,邻联甲苯胺(DMB)染色法检测细胞内GAG含量.结果:与对照组比较,空白血清组及含药血清组均使兔软骨细胞大量增殖(P＜0.01);XLGB组和ICA-L组细胞增殖率较空白血清组显著增高(P＜0.01),ICA-L组明显.与对照组比较,空白血清组及XLGB组、ICA-L组、ICA-M组均使兔软骨细胞GAG分泌增多(P＜0.01),其中,ICA-L组分泌GAG多.结论:低浓度淫羊藿苷含药血清对兔软骨细胞增殖率及其分泌GAG功能强大,单纯淫羊藿苷原液对软骨细胞生长有抑制作用,经过生物转化后的含药血清药效与浓度非正比关系.
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猪软骨细胞老化过程中Aggrecan的表达及其糖链分子结构的改变
本实验旨在探讨体外培养软骨细胞在老化过程中,aggrecan的表达水平与分子结构的变化及其间的相互关系.取体外培养P1～P5各代猪耳软骨细胞,RT-PCR检测aggrecan球间区域(interglobular domain, IGD)mRNA的表达状况;阿利新兰(Alcian Blue)法检测糖胺聚糖(glycosaminoglycan, GAG)的含量和糖链的分子结构.结果显示aggrecan IGD mRNA的表达在P4、P5细胞内明显降低(P＜0.05);GAG的合成也在P4、P5时显著减少(P＜0.05),但这2项指标的变化趋势之间无显著相关性.而长链/高度硫酸化的GAG由P4软骨细胞开始,绝对含量和相对含量均显著减少(P＜0.01),其与aggrecan IGD mRNA的变化趋势有显著相关性(P＜0.01) .由此可见,体外培养软骨细胞中aggrecan的表达合成和细胞老化有密切关系.aggrecan IGD mRNA的表达降低与aggrecan中长链/高度硫酸化GAG的合成代谢过程受阻可能是影响老化细胞成软骨能力的重要因素之一.
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CT增强软骨成像技术的研究进展
骨性关节炎(osteoarthritis,OA)发病率高,致残率高,造成社会经济负担重.骨性关节炎晚期的病变不可逆转,其早期主要表现为关节软骨糖胺聚糖(glycosaminoglycan,GAG)含量的丢失,而这个阶段的病理过程是可逆的.因此,无创监测关节软骨GAG含量的变化成为早期诊断及治疗骨关节炎的重要手段.CT增强软骨成像技术(contrastenhanced computed tomography,CECT)是一种新兴的检测关节软骨GAG含量变化的影像诊断技术.本文就CECT软骨成像技术定量检测关节软骨GAG含量的研究进展做一综述.
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黏多糖病的诊断及防治策略
黏多糖病,又称黏多糖贮积症(mucopolysaccharidosis,MPS),是一类因溶酶体内相关的酸性水解酶缺乏或活性降低使黏多糖(也称糖胺聚糖,glycosaminoglycan,GAG)无法降解或降解不完全,导致GAG的中间代谢产物硫酸皮肤素(dermatan sulfate,DS)、硫酸软骨素(chondroitin sulfate,CS)等在体内堆积而引起的严重致残、致死性的单基因遗传性代谢病.
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刺参糖胺聚糖对HBV转基因小鼠肝组织HBV相关抗原表达的影响
目的:研究刺参糖胺聚糖在动物活体内的抗HBV作用.方法:开放性动物实验.HBV转基因小鼠30只,按性别随机分为生理盐水对照组(每天给予等容积的生理盐水)、刺参糖胺聚糖低(30mg/kg)、中(40 mg/kg)、高(50 mg/kg)三个剂量组及干扰素(45 U/kg)对照组,每组雌雄各半,分笼饲养.给药方式为腹腔注射,每日1次,连续用药30 d.给药结束后处死小鼠,剥离其肝脏组织.免疫组织化学染色法及综合评分法观察并半定量分析小鼠肝脏组织HBsAg,HBcAg的表达.结果:与生理盐水对照组比较,刺参糖胺聚糖低、中、高剂量对小鼠肝脏HBsAg,HBcAg的表达均有抑制作用(4.93±1.43,3.57±1.02,3.27±0.64 VS 6.97±0.75;5.73±1.62,4.27±1.03,4.27±1.03 VS 7.23±0.53,P<0.01或0.05),但其抑制作用低于干扰素对照组(P<0.01或0.05),并呈现一定的量效反应关系.结论:刺参糖胺聚糖具有一定的体内抗HBV作用.
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黏多糖病骨科并发症的治疗进展
黏多糖病，又称黏多糖贮积症（mucopolysac-charidosis，MPS），是一类因溶酶体内相关的酸性水解酶缺乏或活性降低使黏多糖（也称糖胺聚糖，gly-cosaminoglycan,GAG）无法降解或降解不完全，导致GAG的中间代谢产物硫酸皮肤素（dermatan sulfate， DS）、硫酸软骨素（chondroitin sulfate，CS）等在体内堆积而引起的严重致残、致死性的单基因遗传性代谢病。流行病学资料显示MPSⅡ型的发病率，美国报道为1∶25000活产男婴，国内为1∶132000男性[1]，但近年来就诊率呈上升趋势。患者除具有典型的黏多糖病面容、身材矮小、肝脾肿大，多关节僵硬屈曲、变形外，骨骼改变也是本病的主要临床特征，X线片可见多发骨骼变形和多发性骨发育不良（dysostosis multiplex）。Vijay等[2]报道约有40%的MPS患者有骨科并发症，这些并发症不仅会加重患者病情，有些甚至是致命性的。
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髓核细胞鉴定方法的相关研究进展
腰椎间盘突出症是引起腰痛的主要原因,目前治疗方法包括药物、手术等,这些方法不能阻止或延缓腰椎间盘突出症的病理进程,如腰椎融合术反而可能促进相邻椎间盘的退变病理进程.干细胞移植可以分化为髓核样细胞或/和可以促进退变椎间盘内髓核细胞的增殖,是目前研究的热点,但是,髓核细胞和关节软骨细胞表型非常相似,这些细胞均表达Ⅱ型胶原、SOX-9和聚集糖胺聚糖(目前常用这三个指标来鉴定这些细胞),如何准确地区分干细胞是向髓核细胞方向分化还是向关节软骨细胞方向分化,这是研究椎间盘及关节疾病的基础,特别是我们如何准确高效地鉴定出髓核细胞是研究椎间盘退变的关键.现就如何准确高效地鉴定出髓核细胞综述如下.
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透明质酸酶对兔耳软骨组织生物力学的影响
目的 探讨透明质酸酶对兔耳软骨组织生物力学性质的早期影响.方法 于兔耳皮下分别注入生理盐水(生理盐水组)和3种浓度透明质酸酶组(低浓度75 U/ml、中浓度150 U/ml、高浓度300 U/ml)各4 ml.注射后第3天、第7天取材,对实验区耳软骨进行力学拉伸测试,分析3种浓度组耳软骨的弹性模量E和破坏强度σb差异性.结果 注射后第3天、第7天,透明质酸酶3种浓度组与生理盐水组比较,弹性模量和破坏强度差异有统计学意义(均P＜0.05);而3种浓度组之间比较,差异无统计学意义(均P＞0.05).同一组别在第3天、第7天,弹性模量和破坏强度差异有统计学意义(均P＜0.05).结论 透明质酸酶在注射后早期可改变兔耳软骨的生物力学性质,这种改变在7d内不能完全恢复.
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人肋软骨细胞体外培养中生长代谢及功能的变化
目的通过检测体外培养的人肋软骨细胞老化过程中Ⅰ、Ⅱ型胶原和蛋白聚糖(aggrecan)的表达变化,为组织工程软骨构建的种子细胞选择适宜的回植时机.方法取体外培养的P1～P5人肋软骨细胞,通过观察细胞形态,细胞增殖率,Alcian blue法定量检测每代Aggrecan中GAG含量,免疫组化蛋白水平观察Ⅰ、Ⅱ型胶原表达及RT-PCR从mRNA水平分析Ⅰ、Ⅱ型胶原及Aggrecan基因表达量.结果人肋软骨细胞从第3代起逐渐向成纤维样细胞形态转换;每代软骨细胞Aggrecan中GAG含量随传代次数逐渐降低,第3代后处于较低水平;Ⅰ、Ⅱ型胶原的表达在蛋白水平及mRNA水平基本一致,第2代以前Ⅱ型胶原表达较强,Ⅰ型胶原表达较弱,之后随传代Ⅱ型胶原表达减弱,Ⅰ型胶原表达逐渐增强;而Aggrecan在第3代以前表达较高,从第4代后明显下降.结论人软骨细胞体外培养老化过程中综合细胞扩增及细胞功能因素,第2代的软骨细胞(体外扩增约18.326倍)可作为构建人组织工程软骨的种子细胞.
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肝素在某些产科并发症方面的应用
肝素是具有抗凝作用和多种生物活性的一族天然糖胺聚糖。1916年由Mcleen发现，1935年因其抗凝作用而开始应用于临床，是预防手术后血栓形成、治疗急性静脉血栓和弥散性血管内凝血(DIC)早期的首选药物。近年来，肝素在产科方面的临床应用有明显增加的趋势。主要原因有：(1)妊娠期特别是妊娠晚期血液呈高凝状态，血液动力学、凝血及纤溶系统均发生改变，孕产妇易发生血栓及DIC；(2)围产医学的发展认识到胎盘局部梗塞与孕产妇患病及围产儿死亡息息相关；(3)低分子量肝素(low-molecular-weight heparin, LMWH)的发现，提高了用药的安全性，有实验表明，大剂量 LMWH用于动物未发现有致畸作用［1］，且LMWH及未分级肝素(unfractionated heparins, UFH)均不通过胎盘［2］。 目前，研究较多的是肝素在一系列妊娠合并症或并发症方面的应用，如妊娠合并抗磷脂抗体综合征(antiphospholipid syndrome, APS)、妊高征(PIH)、胎儿宫内生长迟缓(IUGR)等。现对肝素在这些产科并发症的应用进行综述。
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硫酸软骨素在促进成骨中的研究与应用
骨缺损的修复是临床和基础研究的热点问题,近年来关于如何促进骨形成成为生物医学领域关注焦点.硫酸软骨素是结缔组织中蛋白聚糖的重要组成成分,是细胞外基质的主要成分,已被广泛应用于医学各领域.本文仅就硫酸软骨素在促进成骨方面的研究进展做一综述.
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扇贝糖胺聚糖对受氧化损伤的内皮细胞功能的影响
目的观察血管内皮细胞受到氧自由基损伤后,血管内皮细胞粘附分子-1(VCAM-1)、血小板衍生生长因子B链(PDGF-BB)表达、内皮素(ET)以及血管紧张素Ⅱ(AⅡ)分泌的改变,研究扇贝裙边提取物-糖胺聚糖(SS-GAG)对上述变化的影响,探讨SS-GAG对血管内皮细胞损伤的保护作用.方法体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC),建立氧自由基诱导的HUVEC损伤模型,采用ELISA法观察SS-GAG对Fenton体系所引发的氧化损伤后HUVEC表达VCAM-1,PDGF-BB的影响;应用放射免疫方法,观察SS-GAG对氧化损伤的HUVEC分泌ET及AⅡ的影响.结果与对照组比较,Fenton体系损伤组血管内皮细胞(VEC)VCAM-1,PDGF-BB的表达明显提高(P＜0.01),ET及AⅡ的分泌明显增多(P＜0.01).而细胞经不同浓度的SS-GAG预先处理后,上述表达及分泌均减少(P＜0.01).结论SS-GAG可减少氧自由基损伤血管内皮细胞后VCAM-1,PDGF-BB的表达以及ET和AⅡ的分泌,提示SS-GAG具有保护血管内皮细胞的作用,此作用可能是其抗AS的机制之一.
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扇贝糖胺聚糖对巨噬细胞低密度脂蛋白受体表达的影响
目的 探讨扇贝糖胺聚糖(SS-GAG)的抗动脉粥样硬化作用机制.方法 以体外培养的小鼠单核巨噬细胞RAW264.7为模型,与不同浓度的SS-GAG、肝素孵育12 h后,加入氧化低密度脂蛋白(OX-LDL)作用24 h,采用免疫组化和逆转录聚合链反应(RT-PCR)分别检测低密度脂蛋白受体(LDL-R)蛋白和mRNA表达的情况.结果 OX-LDL与单核巨噬细胞RAW264.7作用24h后能降低LDL-R的蛋白和mRNA表达,SS-GAG对OX-LDL引起的LDL-R表达降低有保护作用,以200 mg·L-1组作用为明显.结论 OX-LDL可降低巨噬细胞LDL-R的表达,而SS-GAG可逆转OX-LDL的作用,这可能是其抗动脉粥样硬化的作用机制之一.
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糖胺聚糖与细胞信号转导的关系
目的介绍糖胺聚糖(GAGs)对细胞信号转导途径的影响,为进一步研究其各种生物学功能提供参考.方法对近年来有代表性的文献进行分析、归纳.结果肝素等GAGs对不同的膜受体介导的信号转导途径均有不同程度的影响.结论进一步研究肝素等GAGs对细胞信号转导途径的影响,对揭示它们各种生物学功能的发生机制有重大的意义.
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糖胺聚糖对肿瘤细胞生长因子及其介导的Ras/MAPK信号转导通路的调节机制
目的 介绍糖胺聚糖(GAGs)对肿瘤细胞生长因子及其介导的Ras/MAPK信号转导通路的影响,为进一步研究GAGs与肿瘤的关系及其生物学功能提供参考.方法 对近年来有代表性的文献进行分析、归纳.结果 肝素等GAGs对多种肿瘤生长因子及其信号转导通路均有重要的调节作用.结论 进一步阐明肝素等GAGs作用于肿瘤细胞生长因子及信号转导通路的机制,对设计新型寡糖类靶向抗肿瘤药物有重要意义.
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糖胺聚糖衍生物在阿尔茨海默病治疗中的前景
目的 综述糖胺聚糖衍生物在阿尔茨海默病治疗中的前景.方法 查阅国内外近年来大量文献,对阿尔茨海默病的发病机制、重要靶点和糖胺聚糖衍生物在阿尔茨海默病治疗中的应用进行分析和归纳.结果 与结论淀粉样蛋白β(Aβ)与微管相关蛋白Tau是治疗老年痴呆的重要靶点,它们的神经毒作用与糖胺聚糖(glycosaminoglacan,GAGs)密切相关.而GAGs中糖链种类、分子聚合度、硫酸基的数目和位置等变动,将影响GAGs与APP,Aβ,Tau蛋白的结合位点、结合能力.从而引起不同的空间构象变化,发挥不同的生物学功能.因此深入研究GAGs与Aβ,Tau的构效关系和作用规律,通过对糖胺聚糖的分子结构改造有望开发出新的抗老年痴呆药物.
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硫酸软骨素的结构及其在骨关节炎治疗中的应用
目的 综述硫酸软骨素(CS)的结构及其在骨关节炎(OA)中的应用.方法 通过检索近期文献,结合笔者实践,进行整理和分析.结果与结论 CS结构具有高度的不均一性.在欧洲,CS被推荐为缓解OA的症状慢作用药物；在美国,CS主要用作针对OA的膳食补充剂.CS对关节软骨的修复和保护作用,在于其能促进软骨细胞的合成代谢功能,促进细胞外基质(ECM)结构组分的合成、更新；同时抑制分解代谢功能,抑制酶对ECM组分的降解作用.
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牛膝醇提物对兔骨关节炎软骨细胞体外增殖及糖胺聚糖的干预作用
目的 观察牛膝醇提物对兔骨关节炎软骨细胞体外增殖及对糖胺聚糖(GAG)形成的影响.方法 骨关节炎造模成功后提取、分离兔骨关节炎软骨细胞,用甲苯胺蓝染色确定软骨细胞的存在,将软骨细胞接种于5组:空白对照组、牛膝醇提物低剂量组、牛膝醇提物中剂量组、牛膝醇提物高剂量组、经典软骨增殖组.倒置相差显微镜观察软骨细胞形态,用CCK-8法检测软骨细胞增殖率,免疫细胞学检测Ⅱ型胶原蛋白荧光表达,qRT-PCR检测软骨细胞标记基因Ⅱ型胶原mRNA表达水平,邻联甲苯胺(DMB)染色法检测细胞内GAG含量.结果 牛膝醇提物高、中、低剂量组与空白对照组比较Ⅱ型胶原蛋白荧光明显阳性表达;牛膝醇提物高、中剂量组与空白对照组比较软骨细胞标记基因Ⅱ型胶原mRNA明显增加(P＜0.05),其中牛膝醇提物高剂量组效果佳(P＜ 0.01),与经典软骨增殖组比较差异无统计学意义(P＞0.05);空白对照组GAG含量与经典软骨增殖组及不同剂量牛膝醇提物组比较,差异有统计学意义(P＜0.05),其中牛膝醇提物高剂量组GAG多(P＜0.01),牛膝醇提物高剂量组与经典软骨增殖组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 牛膝醇提物中药含药血清可促进体外软骨细胞的增殖和蛋白合成,具体作用机制有待进一步探讨.
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淀粉样变性的消化系统表现
淀粉样变性是指具有β片层结构且刚果红染色阳性的淀粉样纤维结构物质在细胞外沉积而导致的一组疾病.目前有6种分型:原发性、继发性、透析相关性、遗传性、老年性和局限性.淀粉样物质主要由淀粉样多肽和附加成分组成,前者目前发现的已超过20余种,后者包括血清淀粉样物质、糖胺聚糖及载脂蛋白E等.尽管成分各异,"刚果红染色呈砖红色,偏光显微镜下为苹果绿双折光"是淀粉样变性的诊断性特征[1].
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玉足海参糖胺聚糖抗血栓形成的研究
目的 研究玉足海参糖胺聚糖(GAG)抗血栓形成作用的机制.方法 分别用不同浓度的GAG与人血管内皮细胞株EA.hy926共孵育24 h;GAG(10 mg/L)或肝素(10 U/mL)分别与EA.hy926细胞孵育不同时间,检测细胞培养上清中游离组织因子途径抑制物(TFPI)的抗原含量和活性水平;定量测定EA.hy926细胞内TFPI mRNA水平;观察细胞内、细胞表面TFPI荧光强度的变化.采用凝血酶、组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)、氯化钙建立正常人混合血浆的体外凝块溶解实验,分别加入不同浓度的GAG和(或)凝血酶激活的纤溶抑制物(TAFI)特异的抑制剂羧基肽酶抑制物(CPI),观察凝块的凝固和溶解时间,以及TAFI相关的凝块溶解延滞(TRR)时间.结果 GAG以浓度和时间依赖的方式促进内皮细胞TFPI的合成、表达和分泌.低浓度GAG(0.1 mg/L和0.5 mg/L)延长了血凝块的溶解时间,而较高浓度的GAG(5 mg/L和10 mg/L)能够缩短血凝块的溶解时间.GAG以浓度依赖的方式缩短TRR.结论 GAG促进血管内皮细胞TFPI的合成、表达和分泌,可以抑制TAFI功能,促进血栓的溶解.
关键词： 糖胺聚糖 内皮细胞 组织因子途径抑制物 凝血酶激活的纤溶抑制物 肝素
