065荧光标记寡核苷酸探针快速鉴定血培养中的细菌

快速鉴定水环境中霍乱弧菌的简便方法

052荧光原位杂交快速鉴定血培养中的微生物

047采用ITS2基因和荧光毛细管电泳快速鉴定致病性真菌

MALDI-TOF MS快速鉴定1例双路普雷沃菌血流感染

双路普雷沃菌属于普雷沃菌属,专性厌氧菌,革兰阴性球杆菌,又属条件致病菌,主要寄生于人和动物的口腔、胃肠道以及女性生殖道中,当患者免疫功能低下或者有创伤时可以引起齿龈、女性生殖道、腹腔或盆腔等感染[1].2016 年6 月,1 例剖宫产术后血流感染患者的血液中分离出1 株厌氧菌,应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)进行快速鉴定,通过VITEK2 Compact 生化鉴定和16SrRNA 基因序列分析方法确诊为双路普雷沃菌,根据鉴定结果调整抗菌药物应用,迅速控制了该菌的血流感染.具体鉴定过程及治疗情况报道如下.

利用MALDI-TOFMS快速鉴定经固体培养基短时培养的阳性血培养物中的病原菌

目的 探讨利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)快速鉴定经固体培养基短时培养的阳性血培养物中的病原菌的可行性,为临床早期诊断血流感染并提供合理的用药依据.方法 血培养瓶呈阳性结果以后按照日常处理流程转种于血平板上,孵育2、4、6、8 h后,挑取菌膜于靶标板上,用MAL-DI-TOF MS进行病原菌鉴定.同时,所有标本经过16～24 h的隔夜培养后,用MALDI-TOF MS、VITEK?Compact、各种生化反应以及凝集反应进行确认.结果 该研究共有来自102例患者的171份单一菌感染的血培养阳性瓶用于试验,包括76份(44.4％)革兰阳性菌和95份(55.6％)革兰阴性菌.与终鉴定结果比较,在转种培养2、4、6、8 h时用MALDI-TOF MS进行鉴定的成功鉴定率分别为106份(62.0％)、150份(87.7％)、161份(94.2％)、165份(96.5％);其中,革兰阳性菌的鉴定率分别为26份(34.2％)、56份(73.7％)、66份(86.9％)、70份(92.3％),革兰阴性菌的鉴定率分别为80份(84.2％)、94份(98.9％)、95份(100.0％)、95份(100.0％).结论 该研究表明,利用MALDI-TOF MS快速鉴定经固体培养基短时培养的阳性血培养物中的病原菌是一个早期可靠的方法.

基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术在尿标本微生物快速鉴定中的应用

目的 评估基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术在尿液标本微生物快速鉴定中的临床应用价值.方法 收集苏州大学附属第二医院2016年10-12月住院和门诊送检的中段尿标本进行差速离心沉淀后经MALDI-TOF MS技术检测,同时进行尿常规和有形成分分析,并与传统尿培养鉴定结果进行比较,计算质谱的鉴定率.结果 212例尿培养阳性标本中MALDI-TOF MS技术鉴定出病原菌168例,总鉴定率为79.2％,大肠埃希菌鉴定率高,为92.0％,其他肠杆菌科细菌、肠球菌属、非发酵菌科鉴定率分别为79.4％ 、66.5％ 、66.7％,假丝酵母菌属、链球菌属、其他革兰阳性菌标本量少,鉴定率分别为58.3％ 、50.0％ 、44.4％.其中140例标本菌落计数大于105 CFU/mL,鉴定率为92.9％.结论 MALDI-TOF MS技术直接检测尿液标本中的微生物具有简单快速、准确性高等优点,可以弥补传统方法的不足,有效缩短检验时间,优化实验室流程,准确快速地为临床提供检验结果,结合尿常规和有形成分分析等辅助手段具有较高的临床应用价值.

应用MPB64抗原检测快速鉴定结核分枝杆菌的研究

目的 评价检测分枝杆菌MPB64抗原对快速鉴别分枝杆菌菌种的价值.方法 采用结核分枝杆菌MPB64抗原胶体金法和传统对硝基苯酸(PNB)生长实验,对652株分枝杆菌临床分离株进行鉴别并比较分析.结果 两种方法 的检测结果 相符647株,不符5株,符合率99.2%(647/652),两种方法 对分枝杆菌复合群检出率差异无统计学意义(P>0.05),用胶体金法检测结核分枝杆菌复合群敏感性为99.1%,特异性为100.0%.结论 与PNB方法 相比,分枝杆菌MPB64抗原胶体金法有较高的特异性和灵敏性,方法 简便、快速,是分枝杆菌菌种鉴别的有效方法.

快速鉴定肠杆菌科细菌的实验观察

临床上由肠杆菌科引起的疾病愈来愈普遍,将近50%的败血症,70%以上的泌尿道感染和大量的肠道感染都是由肠杆菌科细菌引起的[1].而肠杆菌科的细菌鉴定,均离不开糖发酵试验,传统的24小时糖发酵试验,操作繁琐,而且费时,为了缩短鉴定时间,作者设计了一种糖醇发酵试验,省时省力,3～5小时可以初步鉴定,现报道如下.

荧光实时定量PCR检测溶藻弧菌方法的建立

目的 建立荧光实时定量PCR(qPCR)定量检测溶藻弧菌的方法,检测该方法的灵敏度并与传统细菌培养比较其特异性吻合率.方法 选择溶藻弧菌的鞭毛基因fliC为目的基因设计探针引物,建立Taqman探针qPCR体系.采用双盲法设计,分别用qPCR和Biolog Microstation System对溶藻弧菌和10株相关细菌进行鉴定,以考核qPCR检测体系的特异性.同时,通过梯度稀释和绘制标准曲线,评价利用qPCR检测溶藻弧菌的灵敏度.结果 本试验建立的qPCR方法能特异、准确、快速鉴定溶藻弧菌,敏感度达102 CFU/ml.结论 qPCR方法能够有效快速检测溶藻弧菌.

大肠埃希菌蛋白指纹诊断模型临床应用价值的验证

目的 验证已建立的大肠埃希菌(Escherichia coli,ECO)蛋白指纹图谱实验诊断模型在细菌快速鉴定中的应用价值.方法 利用前期建立的基于ECO蛋白标志物和Fingerwave软件的蛋白指纹诊断模型,对2014年临床分离的163株细菌进行盲法检测.通过与传统微生物学及分子生物学鉴定方法相比较,计算模型的诊断符合率,以验证模型的诊断识别能力.结果 163株细菌检测到29个共有蛋白质峰,经聚类分析后将前期建模的19个蛋白质峰表达丰度导入Fingerwave软件,设置判定阈值为0.7,利用该模型的判定结果与传统微生物学鉴定方法及分子生物学方法相比较,其符合率为86.5％(141/163).结论 细菌蛋白指纹诊断模型在ECO快速鉴定中具潜在应用价值,但需进一步优化建库的各细菌蛋白质峰谱,建立标准化流程和质量控制规则.

科玛嘉念珠菌显色培养基的临床应用评价

科玛嘉(CHROMagar)念珠菌显色培养基是通过菌落的不同颜色和形态对念珠菌进行快速鉴定的一种选择性培养基,为了全面评价这一培养基在临床中的应用价值,我们对94份临床标本同时作CHROMagar念珠菌显色培养基鉴定和接种沙氏基经ATB鉴定,以探讨CHROMagar念珠菌显色培养基在临床念珠菌鉴定方面的价值.

基于MALDI-TOF MS与FCM联合应用对临床血流感染病原体鉴定和药敏试验新方法的建立和应用

目的 探讨基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术(MALDI-TOF MS)与流式细胞学(FCM)联合应用在临床血流感染(BSI)病原体快速鉴定和药敏试验中的意义及应用价值.方法 采用分离胶-吸附法菌体分离系统直接将菌体从血培养阳性瓶中分离,通过流式细胞学(FCM)与基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术(MALDI-TOF MS)联合应用,快速对病原体进行鉴定和药敏试验.结果 MALDI-TOF MS法和VITEK2系统对常见菌都有超过90％的鉴定到种的能力(t=12.70,P=0.213).MALDI-TOF MS较VITEK2有更高的鉴定到群和属的能力(t=6.31,P=0.027;t=8.64,P=0.031).FCM法的药敏结果与VITEK2系统结果几乎完全一致(t=4.30,P=0.127),且FDA的加入可以很好地发现感染菌群中的耐药异质性.结论 联合应用MALDI-TOF MS与FCM对临床BSI病原体进行鉴定和药敏试验的结果与传统方法间有很好的一致性,且报告时间可由传统的36,72 h缩短至3 h以内.该方法对BSI的快速诊断有较大意义和较好的临床应用价值.

MALDI-TOF MS在短期培养后胸腹腔积液中细菌快速鉴定的应用

目的 对临床胸腹腔积液样本进行短期培养,使用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱仪(MALDI-TOF MS)进行细菌鉴定,以建立可用于胸腹腔积液的快速细菌检测方法.方法 收集360例细菌感染的胸腹腔积液(胸腔积液163例、腹腔积液1 97例),所有样本分为三份:一份常规培养并使用微生物鉴定仪检测;第二份直接离心集菌后用MALDITOF MS鉴定;第三份与营养肉汤混合并短期培养2h,离心洗涤后用MALDI-TOF MS鉴定.以微生物鉴定仪结果作为金标准,评估MALDI TOF MS对短期培养后胸腹腔积液中致病菌的鉴定效能.结果 MALDI-TOF MS对短期培养后两种样本的正确检出率分别为94.5％和90.9％,总的未检出率只有7.5％;单一细菌生长的样本鉴定结果与常规方法符合率达到94.1％;能从混合细菌生长的样本中准确鉴定优势菌.结论 经过短期培养后的胸腹腔积液样本,MALDI-TOFMS检出率高,结果可靠:所需时间比常规培养缩短至少12h,可为临床准确快速提供病原菌报告.

快速鉴定大肠埃希菌方法的临床适用性的评估

目的 评估新的方法对大肠埃希菌快速鉴定的临床适用性.方法 同时采用科玛嘉显色平板鉴定法和JAMES试验法对100株大肠埃希菌进行快速检测,比较两种方法的一致性.结果 配对χ2检验、Kappa检验(0.779)均显示两种方法检测结果有良好的一致性.结论 接种显色培养基的同时,加做JAMES试验法能快速有效地鉴定大肠埃希菌,适合临床开展.

泌尿系凝固酶阴性葡萄球菌快速两步一补法鉴定

目的介绍一种凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)快速鉴定方法--"两步一补法",并用该法检测泌尿系CNS的分布情况.方法 CNS菌株先经二步鉴定:第一步4 h,包括:蕈糖、尿素酶、碱性磷酸酶;第二步24 h,包括:鸟氨酸脱羧酶、新生霉素敏感性、磷霉素敏感性、厌氧生长.极少数不能鉴定的CNS菌株,用补充试验完成.结果该方法4 h能鉴定61.0%的菌株,24 h能鉴定95.1%的菌株,48 h能完成其余4.9%的菌株鉴定;182株CNS分布以表皮葡萄球菌为主(57.7%),其次是溶血葡萄球菌(17.1%)与腐生葡萄球菌(7.1%).结论"两步一补法"在鉴定CNS方面,具有可靠、快速、简单、经济等优点,适合临床医学与预防医学对CNS的研究,特别是基层微生物室普及使用.

微量生化反应快速鉴定淋病奈瑟菌

淋病奈瑟菌(NG)由于其营养要求特殊,常规的生化反应鉴定很难进行,临床实验室对淋病奈瑟菌的鉴定多限于从淋病奈瑟菌专用培养基上(如桂敏、TM等)挑取可疑菌落涂片革兰染色及氧化酶试验[1].由于奈瑟菌属中的某些菌也可以在这些专用培养基上生长,染色特征及氧化酶试验都与淋病奈瑟菌相似,仅仅靠革兰染色及氧化酶试验很难对淋病奈瑟菌作正确鉴定.虽然国内已有人对淋病奈瑟菌快速糖发酵试验进行了研究,但其配制方法、操作过程较为复杂[2].我们使用自己改良的TM培养基,可以诱导淋病奈瑟菌产生糖类分解酶,用自配的微量生化反应板(以下简称微量板)能快速准确作出鉴定.现报告如下.

采用顶空GC-MS进样法鉴定菊花和小茴香

目的 建立全新的顶空进样气相色谱-质谱法快速鉴定菊花和小茴香.方法 测定菊花和小茴香顶空气体中的主要化学成分.结果 确立菊花的主要鉴定色谱峰分别为α-蒎烯、按油精、莰烯和樟脑;小茴香的主要鉴定色谱峰分别为爱草脑、D-柠檬烯和小茴香酮.结论 该方法适用范围广,采样方法简便,分析结果 准确、灵敏、快速,成本低,提供信息可靠等.

谱技术在临床常见呼吸道病原菌检测和鉴定中的应用进展

质谱（mass spectrometry）技术是一种测量离子荷质比（电荷-质量比）的分析方法，可用来分析同位素、元素成分及有机物构造等。质谱仪早的临床应用主要在于检测一些生物标记物以帮助诊断癌症和遗传疾病等。20世纪80年代，日本岛津公司的田中耕一发明了基质辅助激光解析电离（ma-trix assisted laser desorption ionization，MALDI）技术，使得质谱能够检测生物大分子[1，2]，该发明在2002年荣获诺贝尔奖。质谱技术的诞生和发展奠定了用蛋白质指纹图谱鉴定微生物的基础，通过检测未知微生物的蛋白质指纹图谱并与质谱图数据库中特征性谱图进行比对，从而对待测微生物进行快速鉴定。由于测定的图谱中主要的分子离子峰为菌体内高丰度，且表达稳定、进化保守的核糖体蛋白，因而此法不但鉴定结果精确度高，且能借助聚类剖析获取微生物间的进化与亲缘关系。

快速鉴定B群链球菌及检测其耐药性方法的建立和初步应用

目的 建立快速鉴定B群链球菌(group BStreptococcus,GBS)的同时检测其对克林霉素、红霉素耐药基因的多重PCR方法,并初步应用.方法 建立多重PCR方法,同时扩增以下4个基因位点:GBS编码CAMP因子的基因cfd、大环类脂类耐药基因ermB和mefA/E、克林霉素耐药基因linB.对该方法的引物质量浓度、Taq酶量和退火温度进行优化,确定多重PCR适反应体系及低检测限;将该方法用于91株GBS临床菌株的鉴定及其耐药性的检测,并评价其与常规PCR方法结果的一致性.结果多重PCR的适反应体系,总量25 μL:多重PCR mix212.5 μL、多重PCR mix1 Taq酶0.23 μL、linB-F和linB-R引物0.4μmol/L、mefA/E-F和mefA/E-R引物0.2μmol/L、ermB-F和ermB-R引物0.12 μmol/L、cfd-F和cfb-R引物0.08 μmol/L、DNA 10 ～100 ng、不足量补入无菌去离子水.扩增程序为:94℃预变性60 s;94℃变性30 s、53℃退火90 s、72℃延伸30 s,共30个循环;72℃延伸10 min.低检测限为20 pg/μL.多重PCR方法与常规PCR方法检测91株GBS临床菌株,cfd基因结果一致率为100％,ermB、mefA/E和linB基因的Kappa值分别为0.938、0.956和0.935.结论 建立的以GBScfb、ermB、mefA/E和linB基因为检测位点的多重PCR方法,可在鉴定GBS的同时检测其对克林霉素、红霉素的耐药性.