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金莲花总黄酮抗菌作用的实验研究
目的:观察金莲花总黄酮(FTLR)体内外的抗菌活性.方法:体外抗菌实验,采用营养肉汤对金黄色葡萄球菌等14个菌株进行试管连续稀释法和营养琼脂扩散法测定FTLR的低抑菌浓度(MIC)和低杀菌浓度(MBC).体内实验采用金黄色葡萄球菌26002-6标准株感染昆明种小鼠作为模型,模型小鼠被随机分为FTLR 440,220,110 mg·kg-1剂量组,金莲花片2 400 mg· kg-1对照组(金莲花片2 400 mg·kg-1与FTLR 440 mg·kg-1的生药剂量相等)及模型对照组,以感染后24,48 h小鼠的死亡率为指标,观察对金黄色葡萄球菌的体内抗菌活性.结果:在体外抑菌实验中,FTLR对13个细菌标准菌株和10个临床株均有抑制作用,其MIC和MBC均低于双黄连口服液；在体内抑菌实验中,FTLR各剂量组金黄色葡萄球菌感染小鼠48 h死亡率均明显低于模型对照组,440 mg·kg-1组死亡率低于金莲花片2 400 mg·kg-1组.结论:对多种细菌有明显的抑制作用.相等生药量的总黄酮对金黄色葡萄球菌感染小鼠的保护作用强于金莲花片.
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白木香果皮提取物的抗菌活性
目的:为开发利用白木香果皮资源,对其提取物进行抗菌活性评价.方法:用三氯甲烷对白木香果皮进行提取,提取物分别采用滤纸片法和生长速率法对不同细菌和真菌进行抗菌活性测定,并采用连续稀释法测定其低抑菌浓度.结果:白木香果皮提取物对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌有显著抑制作用,小的抑菌浓度分别为6.25,625,12.5g·L-1,对大肠杆菌则没有抑制效果;对绿色木霉、黑曲霉、黄曲霉也有明显的抑制作用,小的抑菌浓度分别为6.25,6.25,12.5 g·L-1.结论:白木香果皮三氯甲烷提取物具有显著的抗菌活性,值得开发利用.
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黔产青皮挥发油化学成分及抑菌活性研究
目的:对黔产青皮的挥发油化学成分及抑菌活性进行研究.方法:利用水蒸气蒸馏法从青皮中提取挥发油,用气相色谱-质谱联用法(GC-MS)分析鉴定成分并进行抑菌活性研究试验.结果:从挥发油中共鉴定出49个化学成分,占挥发油色谱总峰面积的96.39%;抑菌活性研究表明青皮挥发油对5种受试菌有一定的抑制作用,对枯草芽孢杆菌、大肠埃希氏菌、伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和藤黄微球菌的小抑菌浓度分别为0.65～1.25,1.25,0.62～1.25,0.62,0.31～0.62 g·L-1.结论:青皮挥发油的主要成分为萜类,具有一定的抗菌活性.
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头花蓼不同极性部位抑菌作用的谱效学分析
目的:建立头花蓼醇提浸膏中7个有效部位的指纹图谱,阐明不同部位所有色谱峰代表的化学成分及其对抑菌效果的贡献值,揭示头花蓼抑菌的药效物质基础.方法:采用UPLC-TOF-MS建立头花蓼醇提浸膏中不同极性部位的指纹图谱,并对各色谱峰进行化学成分分析,通过96孔板法测得不同极性部位对大肠埃希菌、铜绿假单胞菌的低抑菌浓度(MIC),利用偏小二乘回归法(PLSR)建立不同极性部位指纹图谱与抑菌作用的谱效关系.结果:头花蓼不同极性部位对大肠埃希菌、铜绿假单胞菌抑菌效果成正相关的色谱峰分别为9个和13个,其主要抑菌成分为1～5和15,19号峰所代表的化合物.结论:头花蓼对大肠埃希菌、铜绿假单胞菌的主要抑菌活性部位为4个强极性部位(A,B,C,D),其主要抑菌成分为6-没食子酸酰葡萄糖,3,6-二没食子酸酰葡萄糖,1,3,6-三没食子酸酰葡萄糖和davidiin,为深入研究头花蓼的抑菌机制奠定了基础.
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正交法研究如意金黄贴剂的提取工艺
目的:研究如意金黄贴剂的佳提取条件.方法:采用正交设计法,以小檗碱含量和低抑菌浓度为指标,以提取挥发油、醇浓度、提取时间为因子进行试验.结果:如意金黄贴剂的佳提取条件是:提取时间为3h(第一次提取2h,第二次提取1h,醇浓度为90%.结论:优选得到的工艺稳定可行.
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超微戊己丸复方及单味药的抑菌作用研究
目的 探讨戊己丸及其各单味药对胃肠道内6种常见(条件)致病菌的抑制作用,并比较超微药物与常规药物的抑菌效果.方法 采用药敏纸片法及二倍稀释法研究各药物的抑菌能力及低抑菌浓度(MIC).结果 黄连水煎液能够抑制除沙门氏菌以外的所有供试菌种;吴茱萸的抑菌谱和抑菌作用相对较小,对绿脓杆菌和金黄色葡萄球菌表现出一定的抑制作用;白芍仅对金黄色葡萄球菌具有抑制作用.对于药物敏感菌,通过MIC比较发现,戊己丸及其单味药超微药剂的抑制效果明显优于常规药剂.结论 戊己丸能够抑制胃肠道内常见(条件)致病菌的生长,且超微粉体能够提高药物的利用度.
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艾叶挥发油体内外抑菌作用的实验研究
目的 检测艾叶挥发油体内外抑菌作用.方法 艾叶挥发油的低抑菌浓度(MIC)检测采用琼脂二倍稀释法,并以红霉素为对照;其致死保护率检测是通过对感染小鼠进行试验性治疗来实现.结果 艾叶挥发油对实验菌的MIC90值范围0.78～25μL/mL;对实验菌感染小鼠致死保护率40%～50%.结论 艾叶挥发油体外对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌具有抑菌作用,其抑菌作用优于或等同于红霉素;体内对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌感染小鼠具有较好的保护作用.
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匙羹藤提取物体外抑菌活性的观察
目的 观察匙羹藤提取物(Gymncma sylvcstrc cxtractant,GE)的体外抑菌活性.方法 采用琼脂稀释的实验方法 ,分别测定匙羹藤提取物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、变形杆菌以及绿脓杆菌的低抑菌浓度(MIC).结果 匙羹藤提取物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、变形杆菌以及绿脓杆菌的MIC分别为0.625、1.25、1.25、2.5 mg/mL.结论 匙羹藤提取物对多种细菌具有抑菌作用.
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了哥王不同提取部位抑菌作用研究
目的 比较了哥王不同提取部位的体外抑菌作用.方法 采用二倍稀释法测定不同提取物对11种细菌的低抑菌浓度.结果 乙酸乙酯提取物的抑茵效果显著强于正丁醇提取物,且两者对葡萄球菌属的细菌抑茵作用强,水提取物基本没有抑菌作用.结论 了哥王乙酸乙酯提取物抑菌效果显著,具有广谱抗茵作用.
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淋球菌对5种抗菌药物的敏感性测定
目的了解淋球菌对5种抗菌素的敏感性及耐药性.方法用5种Etest试条对52例淋球菌进行抗菌素的低抑菌浓度测定.结果氧氟沙星耐药率为71.2%,美满霉素耐药率为13.5%,壮观霉素和头孢三嗪耐药率同为1.9%,阿奇霉素耐药率为3.8%.结论持续监测淋球菌耐药性非常重要.
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鱼腥草乙醚粗提物体外抗真菌作用研究
本文采用NCCLS<产孢丝状真菌的液基稀释抗真菌药敏试验参考方案>(M-38P)对鱼腥草乙醚粗提物进行体外抗真菌实验,结果鱼腥草乙醚粗提物对表皮真菌具有明显的抑菌作用.
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一株产碳青霉烯酶IMP-26阴沟肠杆菌的分离鉴定
在过去的几年中,产碳青霉烯酶的肠杆菌科细菌不断被发现,这引起了临床工作者的强烈担忧.我院发现一株碳青霉烯类抗菌药物耐药的阴沟肠杆菌,此临床菌株分离自一位9个月的哮喘患儿,对亚胺培南和厄他培南表现为耐药,其低抑菌浓度分别为4 μg/ml和16μg／ml.对青霉素类,头孢类及头孢与酶的复合制剂都表现为耐药.进一步的实验显示此菌株的Hodge试验阳性,确定该菌株产碳青霉烯酶.通过对亚胺培南与亚胺培南+EDTA的纸片的抑菌圈直径的比较,发现此种碳青霉烯酶能被EDTA抑制.通过PCR扩增,发现此阴沟肠杆菌含有blaInt11、blaIMP和blaTEM基因,通过测序和比对确定blaIMr的基因型为blaIMP-26,balTEM基因的基因型为blaTEM-104.通过等电聚焦电泳,也证实此阴沟肠杆菌产IMP和TEM酶.
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药物对分枝杆菌低抑菌浓度快速测定方法的研究
采用分枝杆菌变色培养系统(方法见中华检验医学杂志2001,24:306),对耐多药结核杆菌(MDR-TB)和非结核分枝杆菌感染(MOTT)的MIC测定进行了分析.检测18株MDR-TB对克拉霉素(CLA)、阿奇霉素(AZI)、罗红霉素(ROX)、左氧氟沙星(LEV)、司帕沙星(SPA)、环丙沙星(CIP)、氧氟沙星(OFL)、卷曲霉素(CAP)、阿米卡星(AMI)、乙硫异烟胺(TH1314)、丙硫异烟胺(PTA)、多西环素(DOX)和米诺环素(MIN)13种抗生素的MIC及34株MOTT对MIN、OFL、 DOX、AZI、CLA、CIP、AMI、头孢西丁(CEF)和亚胺培南/西司他丁钠(IM)9种抗生素的MIC.
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流式细胞术检测抗生素低抑菌浓度
目的建立一种流式细胞术(FCM)快速检测抗生素低抑菌浓度(MIC)的方法,与常规药敏试验结果进行比较,探讨其应用价值. 方法取20株肠杆菌科细菌,用碘化丙啶(PI)染色,分别检测阴性对照管和MIC浓度抗生素作用管的平均荧光强度(MFI),计算两者比值,据此,设定流式细胞药敏试验(FCST)检测MIC的判断值,根据设定的判断值对28株临床分离细菌同时进行常规药敏和FCST双盲测定. 结果 20株肠杆菌科细菌测得的MFI比值为2.07,CV为0.31;将MFI大于阴性对照细菌2倍(增加100%)的低药物浓度定义为该菌的MIC,28株临床菌株FCST所测得的MIC与常规药敏试验相比r＝0.92,(P＜0.001),回归方程为:Y＝1.4X-0.48. 结论 FCST与常规药敏试验结果有显著相关性,并且具有快速、稳定、准确、便于自动化等优点,有着较大的临床应用前景.
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Carba NP 试验用于检测产碳青霉烯酶菌株的研究
耐碳青霉烯类抗菌药物的菌株是目前全球抗感染治疗的大威胁[1]，因其编码碳青霉烯酶的基因大多数由质粒介导，可在细菌之间水平转移，导致了菌株耐药基因的进化，使其在多个国家和地区之间暴发流行，并且部分产酶菌株低抑菌浓度(MIC)值达不到耐药水平，仅表现为对碳青霉烯类抗菌药物敏感性减低，容易引起人们的忽视。应用改良Hodge 试验[2]耗时长且对部分碳青霉烯酶敏感度低，已不能满足临床感染监控的需要。美国临床和实验室标准协会(CLSI)2015年药敏标准引入Carba NP 试验[3]的概念，以其操作简便、快速、灵敏度和特异度高的特点，很大程度上提高了产碳青霉烯酶菌株的检出率。本研究对比分析 Carba NP试验和改良 Hodge 试验检测碳青霉烯酶之间的差异，为临床实验室提供参考。
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纳米银和二氧化钛对金黄色葡萄球菌核酸的影响
目的 研究纳米银(Ag)和二氧化钛(TiO2)两种无机抗菌剂对金黄色葡萄球菌核酸含量的影响,分析抗菌剂的抗菌作用机制.方法 制备牛肉膏蛋白胨液体培养基,分别测定纳米Ag和TiO2的低抑菌浓度(MIC);以1/2MIC纳米Ag和TiO2浓度作用于金黄色葡萄球菌的培养液,用紫外分光光度计检测培养液中从菌体漏出的DNA和DNA等大分子物质含量,确定抗菌剂对细菌细胞膜的损伤程度;用荧光显微镜观察菌体荧光强度,确定菌体内核酸染色程度;并用荧光分光光度计测定荧光值,确定菌体内核酸DNA和RNA含量.结果 纳米Ag和TiO2对金黄色葡萄球菌的MIC值分别为5.781μg/mL和1.6 mg/mL,以1/2MIC为作用浓度,纳米Ag组和TiO2组分别与对照组相比培养液上清液中漏出的DNA和DNA等大分子物质含量,结果差异无统计学意义(P＞0.05),菌体核酸染色荧光强度和DNA和RNA含量,结果显示纳米Ag组和TiO2组与对照组相比显著减少(P＜0.01).结论 纳米Ag比TiO2对金黄色葡萄球菌具有明显抗菌作用,纳米Ag比TiO2有更强的抗菌性能;纳米Ag和TiO2的抗菌机制可能与抑制了金黄色葡萄球菌核酸DNA和RNA的合成有关,从而抑制细菌蛋白合成,抑制细菌的生长.
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实验评价6个氟喹诺酮药物对250株致病菌的MIC
目的 比较研究加替沙星(GTLX)等6个氟喹诺酮类药(FQNS)对临床分离致病菌的体外抗菌活性.方法 采用国际推行的琼脂平板和肉汤2倍稀释法测定GTLX等6个FQNS对250株临床分离的G+和G-的MIC.结果 抗菌活力排位大致为GTLX=MXLX＞LVFX＞OFLX＞SPFX＞CPLX.GTLX和MXLX对葡萄球菌属的MIC比其他4个FQNS低,对其他G+球菌亦是如此,GTLX(和MXLX对埃希菌属的MIC90比LVEX低2倍,比其他FQNS低8倍左右,而对肠肝菌属、假单胞菌属及其他G-杆菌的敏感率都明显的强.结论 临床分离的致病菌对FQNS的敏感率有下降趋势,目前GTLX和MXLX仍保持其广谱高效的抗菌作用.
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MIC法评价不同厂家左氧氟沙星的抗菌活性
目的 测定不同厂家左氧氟沙星注射液的MIC,为医院选用提供依据.方法 采用美国临床实验标准委员会推荐的琼脂稀释法和肉汤稀释法检测7个厂家的左氧氟沙星注射液对铜绿假单胞菌的MIC,评价其体外抗菌活性.结果 7家左氧氟沙星的MIC从0.5～4.Oμg/ml不等,其抗菌活性相差8倍.结论 市场有多家左氧氟沙星注射液品牌,医院应选择其抗菌活性较高(MIC较低)的药物.
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鲍曼不动杆菌6种氨基糖苷类药物修饰酶基因的研究
为研究鲍曼不动杆菌氨基糖苷类药物修饰酶基因及其与耐药表型关系,我们用琼脂稀释法检测了庆大霉素、阿米卡星等6种抗菌药物对20株多重耐药性鲍曼不动杆菌的低抑菌浓度(MIC),并用聚合酶链反应(PCR)检测了6种氨基糖苷类药物修饰酶基因.
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产孢丝状真菌NCCLS药敏试验方法的应用
美国国家临床实验室标准化委员会(NCCLS)于1997年推出了关于酵母菌的液体培养基稀释(多量法与微量法)抗真菌药敏试验方案M27-A，建立了被众多实验室认同的重复性好、准确性较高的标准化体外药敏试验方法。但由于丝状真菌本身的诸多特点如产孢条件难以控制、接种量难以精确量化、孵育时间长等，使其试验方法标准化具有一定难度。近年来NCCLS分会成员以M27-A的微量法为基础进行了多中心广泛深入研究［1，2］，于1998年提出了《产孢丝状真菌的液基稀释抗真菌药敏试验参考方案》(M38-P)。该方案在提出了一些建设性意见的同时，重申了多量法与微量法的一致性。现将其方法简介如下。 一、材料和方法 1.抗真菌药物：测试用药物包括氟康唑(FCZ)，5-氟胞啶(5-FC)、酮康唑(KCZ)、伊曲康唑(ICZ)和两性霉素B(AmB)。药物来源、贮备液的制备等同M-27方案［3］。 2.被检测的真菌：本方案主要针对常见侵袭性真菌感染的菌种：曲霉、镰刀霉、根霉，波氏假阿利什霉及申克孢子丝菌的菌丝相。不包括其他非产孢丝状真菌，也不适应于双相真菌的酵母相。 3.培养基：建议应用RPMI-1640培养基，配制方法要求同M27-A方案。 4.真菌接种液的制备：(1)为保证受试菌的纯度及活性，需在马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）上35℃培养7 d或35℃培养48～72 h后，转至25～28℃至7 d(镰刀菌)。(2)取1 ml无菌0.85%盐水加入培养7 d的培养皿中，用巴氏吸管轻轻抽吸，制备菌悬液(加入1滴吐温20将有利于曲霉的接种)，将菌悬液吸至无菌试管中，静置3～5 min后，取上部匀质液体(含孢子或孢子囊孢子和菌丝片断)，在振荡器上振荡15 s。(3)用分光光度计调整菌悬液浓度，波长530 nm，A值曲霉、申克孢子丝菌0.09～0.11，镰刀霉、波氏假阿利什霉及根霉0.15～0.17。(4)将上述菌悬液用RPMI-1640稀释50倍得2倍终浓度(0.4～5×104)的菌悬液备用。(5)为保证试验准确性应做菌落计数，取0.01 ml终浓度菌悬液接种于改良的沙氏萄葡糖琼脂培养基的平皿中(28～30℃)，每天观察并计数肉眼可见的真菌菌落(尤其是对于镰刀菌)，孵育时间为24 h以内(镰刀菌)至5 d(波氏霉)。 5.液体培养基的接种：在96孔板的1～10列孔中每孔加入0.1 ml的2倍终浓度的菌悬液。每次试验均应包括质控、参考菌株。 6.培养：35℃条件下(不要摇动)大多数菌需46～60 h判定低抑菌浓度(MIC)结果，根霉则需21～26 h，波氏假阿利什霉则需70～74h。
