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浓度梯度法监测苛养菌对9种抗生素的耐药性
使用营养丰富的培养基和修改后的判断值,虽然纸片扩散法也可用于苛养菌的药物敏感试验;但是对于苛养菌,简易的纸片扩散法只能对常用抗生素作有限的分析.特别是近年来,美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)不再推荐用纸片扩散法测定阿莫西林/棒酸和氨苄青霉素/舒巴坦对流感嗜血杆菌的抗菌作用, 以及广谱头孢菌素对肺炎链球菌的抗菌作用, 其原因是纸片扩散法的结果会造成过多的解释错误.为此,我们选用了已逐渐被认可的浓度梯度法(Etest法)测定100株苛养对9种抗生素的低抑菌浓度(MIC),来监测它们对抗生素的耐药性,指导临床用药.
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变色液体培养基系统快速鉴定结核分枝杆菌和耐药性测定
由于固体培养基鉴定结核分枝杆菌(结核菌)及药敏试验均需28 d,其制作过程需加热,且培养基中蛋白质对药物有吸附作用,故仅用于常规抗结核药敏试验,不适合用于分枝杆菌低抑菌浓度(MIC)测定.多耐药结核菌和非结核菌对常用抗结核药物耐药,因此急需一种快速测定分枝杆菌药敏的方法,筛选新的药物.尽管Bactec系统可用于分枝杆菌药敏试验和MIC测定[1],但试剂和仪器昂贵.因此,我们采用快速变色液体培养基系统鉴定结核与非结核分枝杆菌,并测定了结核菌常规药物的敏感性和非结核分枝杆菌对9种药物的MIC,结果如下.一、材料和方法1.标本来源:128株结核菌,34株非结核分枝杆菌(其中15株龟分枝杆菌脓肿亚种、4株龟分枝杆菌龟亚种、14株偶发分枝杆菌和1株胞内分枝杆菌).上述菌株为深圳地区和广州地区分离株.2.结核菌快速鉴定及药敏试剂、分枝杆菌MIC测定试剂和菌株鉴定试剂:对硝基苯甲酸(PNB)培养基、5%氯化钠耐受试验、芳香硫酸酯酶(3、14
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喹诺酮类药物体外抗结核分枝杆菌活性的比较研究
第三代喹诺酮类药物因其具有较强的抗结核分枝杆菌活性,与其他抗结核药物之间无交叉耐药性,因此,这类药物已成为耐药结核病人的主要选用药物[1].目前国产与进口氟喹诺酮类均已广泛应用,为了比较国产与进口药物的抗结核分枝杆菌活性,通过国产左氧氟沙星、司帕沙星与进口同类药物对临床分离58株结核分枝杆菌的低抑菌浓度(MIC)测定,进行比较研究,报道如下.
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临床常见念珠菌对四种抗真菌药物体外敏感性研究
为了解我院从临床标本中分离的念珠菌对常用抗真菌药物的敏感性情况,以期为临床正确选择抗真菌药物和有效控制念珠菌感染提供依据,测定了4种常用抗真菌药物对从临床标本分离的226株念珠菌的低抑菌浓度(MIC).
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何谓Etest法?它用于分枝杆菌药敏试验有哪些优点?
答:Etest法是根据琼脂扩散法原理,将不同浓度的药条贴于种有细菌的培养基表面,药物扩散形成浓度梯度,作用细菌后产生抑菌环,其他缘于药条的切点即为该药对该菌的低抑菌浓度.Etest法是定量检测,结果准确,快速;操作简便,不需特殊仪器设备;可用于联合药敏试验;易于标准化操作和质量控制等.
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什么是VISA?
问:什么是VISA?答:VISA是英文vancomycin intermediate S.aureus的缩写,中文译为万古霉素中度耐药金黄色葡萄球菌.细菌对万古霉素敏感度的判断标准,美国临床实验室标准化委员北会的规定是低抑菌浓度(MIC)≤4 μg/ml为敏感,MIC≥32 μg/ml为耐药,MIC=8~16 μg/ml为中度耐药.所以,将万古霉素MIC在8~16 μg/ml的金黄色葡萄球菌称为VISA.VISA名称的产生源于1996年和1997年分别在日本和美国发现的万古霉素MIC=8 μg/ml的耐甲氧苯西林金黄色葡萄球菌.这种菌株没有万古霉素耐药基因,不表现高度耐药(MIC>32 μg/ml).VISA的发现提示万古霉素高度耐药葡萄球菌可能会出现.检测VISA,实验室须做稀释法药敏试验,纸片扩散法可能会漏检.
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分枝杆菌MIC测定中需要注意哪些问题?
答: 低抑菌浓度(MIC)测定中必须注意菌液的浓度、培养基的制备和限定培养时间,不同的培养基制备过程中药物变化程度不同会出现不同的MIC,好采用液体培养基.
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全自动微生物鉴定专家系统的临床应用与评价
为了有效控制和治疗传染性疾病,快速和准确获得细菌的药敏结果是非常必要的.近10多年来随着计算机的发展及广泛应用,先后出现了许多自动与半自动细菌鉴定与药敏系统, VITEK系统即为其中之一.由于药敏结果的可靠性直接关系到临床的治疗效果,但是对体外药敏试验的结果正确解释,需要掌握多方面知识: 如细菌的耐药机理及对应的表型,细菌的天然耐药性,细菌群体中的低抑菌浓度(MIC)分布,药物的化学结构及作用方式,体液及组织中药物代谢动力学,体外测试结果与治疗效果的关系等,这些都是由少数专家来完成[1].于是VITEK系统中设置了专家系统对药敏结果进行审核分析和解释.一、什么是专家系统
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抗生素使用的个体化与药敏监测
药敏试验给临床提供抗生素使用依据,尤其是疗效不满意时,对药物选择有指导意义.一般药敏报告如果使用纸片扩散法以S(敏感)和R(耐药)报告,可给临床提供基本选药信息.但目前临床感染较复杂,应综合考虑患者情况,选用合适合理的抗生素搭配,争取在短时间内取得较好疗效,即抗生素使用个体化.临床用药的个体化往往更多需要参考低抑菌浓度(MIC)的值.仅举2例说明.
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美国临床实验室标准化委员会2003年版产孢丝状真菌药敏试验方案简介
美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)1997年版推出了关于酵母菌的液体培养基稀释法(全量法与微量法)抗真菌药物敏感性试验方案M27-A .该方案准确性高、重复性好,实验室间结果的一致性可以与抗细菌的药物敏感试验相媲美.之后,NCCLS 1998年版又提出了关于产孢丝状真菌的抗真菌药敏试验倡导方案M38-P.该方案包括微量液基稀释法与多量液体培养基稀释法,适用于曲霉菌、镰刀菌、波氏霉菌等丝状真菌,一致性好.近年来,NCCLS在该方案的基础上,又在某些药物的低抑菌浓度(MIC),即MIC值的判定等因素方面进行了广泛深入的多中心研究,加上新型三唑类药物的问世和临床应用的逐渐增多,于是NCCLS在2003年新版中又推出了产孢丝状真菌抗真菌药物敏感性试验方案,即M38-A,简介如下.
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野艾组分对幽门螺杆菌的体外抑菌作用
目的:分析中药野艾可能的抑制幽门螺杆菌(Hpylori)组分.方法:采用琼脂稀释法测定野艾的各种提取物的小抑菌浓度.结果:四种野艾提取物低抑菌浓度分别为:正己烷提取物为10.24 g/L、乙酸乙酯提取物为2.56 g/L、正丁醇提取物为5.12 g/L,野艾乙醇提取物的MIC>10.24 g/L.结论:野艾的乙酸乙酯提取物具有较强的抑制Hpylori生长的作用.为进一步开发野艾的药用价值提供了资料.
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不同基因亚型幽门螺杆菌对大蒜素的敏感性
目的:研究不同基因亚型幽门螺杆菌对大蒜素的敏感性.方法:从新鲜胃黏膜中分离、培养出Hpylori共5l株.经聚合酶链反应(PCR)鉴定Hpylori菌株的cagA,vacA(sl,mlb,m2)基因亚型.用琼脂稀释法测定51例Hpylori分离株对大蒜素的低抑菌浓度(MIC),并计算MIC5o值.结果:大蒜素对5l株Hpylori菌株表现出良好的抑菌效果,总抑菌率达92.2%(47/51),其MIC5o值为7.97 mg/L,MIC值范围在1.25-40 mg/L.vacAmlb+基因亚型Hpylori菌株较vacAmlb-基因亚型Hpylori菌株对大蒜素敏感(相对中位数潜力0.55,95%可信区间0.30-0.89);vacAm2+基因亚型Hpylori菌株较vacAm2-基因亚型Hpylori菌株对大蒜素敏感(相对中位数潜力0.67,95%可信区间0.44-0.98).cagA+vacAsl+mlb+、cagA+vacAsl+m2+基因亚型组合Hpylori菌株较cagA+vacAsl-mlb-Hpylori菌株对大蒜素敏感(相对中位数潜力0.38/0.37,95%可信区间0.10-0.78/0.11-0.81).结论:大蒜素对Hpylori菌株有良好的抑菌效果,其MIC5o值为7.97 mg/L,MIC值范围在1.25-40 mg/L.并且其抗菌作用随着大蒜素浓度的增高而加强.不同基因亚型及组合的Hpylori菌株对大蒜素的敏感性不同.
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胞内分枝杆菌临床分离株耐药谱及基因型特征研究
目的 分析我国胞内分枝杆菌临床分离株的耐药谱及基因型特征,为治疗胞内分枝杆菌感染性疾病提供科学依据.方法 纳入2013—2015年北京胸科医院150株胞内分枝杆菌临床分离株,采用微孔板Alamar Blue法测定胞内分枝杆菌对15种药物的低抑菌浓度(MIC),以确定其药物的敏感度;对16 个可变数目串联重复序列( VNTR)位点进行 PCR 扩增和产物电泳分析,使用BioNumerics软件对菌株进行聚类分析,以确定其基因型特征.使用SPSS 19.0软件对结果进行统计分析,应用χ2检验分析不同组间耐药率的差别.结果 药敏试验结果显示,克拉霉素(97.3%,146/150)、莫西沙星(94.0%,141/150)和阿米卡星(90.0%,135/150)对胞内分枝杆菌具有较好的抗菌活性; 75.3%(113/150)、64.0%(96/150)、52.7%(79/150)和8.7%(13/150)的菌株对利福平、利奈唑胺、卷曲霉素和乙胺丁醇敏感;3种注射类抗结核药物的MIC50与MIC90值为:阿米卡星4和16 mg/L,链霉素4和16 mg/L,卷曲霉素8和16 mg/L;5种氟喹诺酮类药物的MIC50与MIC90值为:莫西沙星0.5和2 mg/L,环丙沙星1和8 mg/L,左氧氟沙星1和8 mg/L,安妥沙星2和16 mg/L,氧氟沙星2和16 mg/L.采用16位点VNTR方法对胞内分枝杆菌进行基因分型,150株胞内分枝杆菌共分为21个簇,121种基因型,总Hunter-Gaston指数为0.997.结论 克拉霉素、莫西沙星和阿米卡星在体外对胞内分枝杆菌具有较好的抗菌活性;16位点VNTR方法对胞内分枝杆菌临床分离株的分辨率较高;胞内分枝杆菌的耐药谱与菌株是否成簇并无明显相关性.
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生物被膜克雷伯杆菌β-内酰胺酶活性的检测
近年来研究证明克雷伯杆菌易形成生物被膜(BF)[1],关于生物被膜克雷伯杆菌产β-内酰胺酶活性的研究国内外尚未见到报道。本实验检测浮游克雷伯杆菌、生物被膜克雷伯杆菌及亚胺培南诱导后生物被膜克雷伯杆菌产β-内酰胺酶的能力,探讨生物被膜中克雷伯杆菌的耐药机制。 材料与方法材料:抗菌药物:亚胺培南(美国默沙东公司)。试剂:2.5%戊二醛、1%锇酸、枸橼酸铅等,均为国产分析醇。菌株:选取产β-内酰胺酶肺炎克雷伯杆菌30株(中国医科大学附属第二临床学院细菌室分离)。培养基:胰酶大豆肉汤(TSB,法国BioMerieux公司)。Nitrocefin (英国Oxiod公司)。器材:医用硅胶膜(北京医用硅胶研究所);扫描电镜(S-800 日本Hitachi公司);低温超速离心机(上海安亭公司);可见紫外分光光度计:日本岛津制作所MIB-2000型外接岛津超级恒温水浴槽。方法:(1) 生物被膜的建立:取30株肺炎克雷伯杆菌,经37 ℃孵育24 h,配制成0.5 mol/L菌悬液,将每株菌菌悬液3等份分为3组,A组为浮游克雷伯杆菌,B组及C组菌以硅胶膜为载体,用改进的平板培养法[2]建立生物被膜,标本经固定、脱水、置换、干燥、枸橼酸铅染色等处理后通过扫描电镜观察鉴定[3]。(2) 诱导β-内酰胺酶产生:亚胺培南低抑菌浓度(MIC)的测定,采用标准微量稀释法,其MIC值介于0.07~0.5 mg/L,将1/2 MIC亚胺培南加入C组菌悬液中孵育。(3) β-内酰胺酶粗酶提取液的制备:A、B、C 3组菌孵育至第3天,将细菌硅胶膜及胰酶大豆肉汤在超声水浴震荡(120 W,15 min)。提取的菌悬液于4 ℃ 6 000 r/min离心30 min,弃去上清液,以0.05 mol/L,pH 7.0磷酸钾缓冲液洗涤两次后,将收获的菌体悬浮在同样适量的缓冲液中,用冻融法[4]使细菌菌体破坏,然后以低温2 000 r/min离心60 min,上清液即为粗酶提取液。(4) β-内酰胺酶定性:用Nitrocefin纸片测定。(5) β-内酰胺酶活性测定:以Nitrocefin为底物,在紫外分光光度计波长482 nm处进行时间扫描测定酶活性。(6) 统计分析:对A组和B组、A组和C组、B组和C组数据进行配对t检验,分析差异的显著性。
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结核分支杆菌临床株环丙沙星低抑菌浓度和GyrA序列测定
为了解国内结核分支杆菌(MTB)临床株对喹诺酮的耐药状况,我们对2001年10月~2002年1 月自南通地区分离的34株MTB临床株进行了环丙沙星低抑菌浓度(MIC)和喹诺酮作用靶位酶基因GyrA序列的检测.现将结果报告如下.
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左氧氟沙星对结核分枝杆菌耐氧氟沙星临床分离株的抗菌活性分析
为了解左氧氟沙星对结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)耐氧氟沙星临床分离株的抗菌活性,我们对2008年1月至6月上海市肺科医院收治的肺结核患者痰MTB耐氧氟沙是星临床分离株行左氧氟沙星低抑菌浓度(MIC)测定.现将结果报道分析如下.
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单药及联合用药对金黄色葡萄球菌突变选择窗的影响
随着细菌耐药现象越来越严重,人们对细菌耐药机制的研究越深入,但主要集中在如何延缓获得性耐药的传播.Dong等[1]1999年提出的防突变浓度(mutant prevention concentration,MPC)和突变选择窗(mutant selection window)的概念,则是用于体外判定药物是否可能导致病原菌产生自发耐药,为研究耐药机制开辟了新的领域.我们通过测定氟喹诺酮类药物单用及与头孢唑林联用对金黄色葡萄球菌ATCC29213株的低抑菌浓度(MIC)MIC99和MPC,探讨联合用药对细菌突变选择窗的影响,寻找减少耐药突变菌株产生的新途径.
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结核病治疗中利福平耐药金黄色葡萄球菌的筛选
获得性细菌耐药通常归因于感染部位抗菌药物浓度低于低抑菌浓度(MIC),因此提倡抗菌药物浓度要高于MIC,从而清除敏感菌.但根据耐药突变选择窗(MSW)假说可以预测,即使药物浓度高于MIC,敏感菌被清除后仍会出现获得性细菌耐药.本课题旨在通过临床研究验证这一预测.
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幽门螺杆菌体外药敏和耐药性的研究
随着幽门螺杆菌(Hp)根除治疗中抗生素的广泛应用,Hp的药敏和耐药性问题日益突出。我们采用E-test试验对Hp感染率较高的西安地区Hp药敏和耐药问题加以探讨。 1.材料和方法:(1)菌液制备:将50株Hp临床分离株制成菌悬液,使其浊度达到0.5麦氏单位,并计数为3×108菌落形成单位(CFU/ml)。(2)E-test试剂条:瑞典AB Biodisk公司产品。(3)E-test试验:用无菌棉拭子将所制菌液均匀涂布于MHA琼脂平板上,待平板干后,取试条放置于琼脂表面(1条/90mm平皿),37℃微需氧培养72 h后,终点法记录低抑菌浓度(MIC)值。(4)结果判定范围:敏感:MIC≤4 mg/L;中界:4 mg/L<MIC<32 mg/L;耐药:MIC≥32 mg/L。
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严重烧伤早期创面下抗生素屏障的形成与临床意义
目的:观察和探讨严重烧伤患者第三间隙抗生素潴留、返释现象及其意义.方法:分别观察30%TBSAⅢ度烧伤新西兰兔模型和重度烧伤患者应用亚胺培南或阿米卡星后,血液、水疱液、痂下水肿液中的抗生素浓度,观察抗生素的潴留情况,分析其药代动力学特点;在不同烧伤面积(8%TBSAT和40%TBSA)Ⅲ度烧伤模型兔痂下注射示踪白蛋白,观察其向血浆返释的情况.结果:①烧伤新西兰兔应用亚胺培南1h后即可在痂下组织液中被检测出,并且达到峰浓度[(8.99±1.10)μ g/ml],可维持6~8 h;痂下水肿液中亚胺培南的消除相半衰期明显延长,分别是烧伤组血浆和对照组血浆值的1.67倍和2.26倍.②烧伤后单次应用阿米卡星1h即能在痂下水肿液测到阿米卡星浓度并达峰值[(30.23±2.75)μ g/ml],且痂下水肿液消除相半衰期[(80.04±9.52) h]为健康成年人血浆半衰期的28.20~44.78倍,半衰期显著延长.③烧伤患者伤后3~4 h内应用阿米卡星,水疱液中达峰时间为1 h[(12.53±1.76)μ g/ml],伤后10 h应用则达峰时间为2 h[(9.56±1.13)μ g/ml],高于多数致病菌的低抑菌浓度(MIC),包括铜绿假单胞菌(MIC50=4.2 μg/ml),伤后20、30 h应用其达峰时间延长(>4 h),峰浓度明显降低(低于多数致病菌的MIC).④烧伤新西兰兔痂下注射人血白蛋白,可于2h后在血浆中检测到其含量,烧伤面积越大分布相半衰期越小(8%TBSA vs.40%TBSA;4.027 1 h vs.1.732 6 h),曲线下面积越大(8%TBSA vs.40%TBSA:22 336.38 μg.h-1ml-1 vs.88 814.84μg.h-1ml-1).结论:严重烧伤早期大量的抗生素被蓄积在以痂下水肿液为代表的第三间隙,体液回收期后这些物质能够被回吸收.潴留在痂下水肿液中的大量抗生素形成了抗生素屏障,这一现象有助于防止创面细菌的深部侵袭.