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中药复方血清药理学方法规范化探讨
利用给药后血清的特殊药理活性检测以观察药物(包括中药)作用已有长久历史,但作为观察中药特别是中药复方作用的常规则刚起步,历时近10年,日本和我国的一些研究都取得了较好结果,表明其不失为值得推广应用的方法,但这一方法也存在一些问题与局限性.在中药复方血清药理学的实验研究中,含药血清的制备技术的规范化研究是一切研究的基础,其中包括给药天数、给药次数、给药剂量、采血时间、含药血清的灭活与保存等一系列问题需要探讨.
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含药血清体外药理试验的评价
1988年田代真一正式提出了"血清药理学"这一概念,是指动物经口服给药后,采集动物的含药血清进行体外试验的一种实验方法[1].国内到20世纪90年代初才开始探索,国家非常重视并给予扶持.1991年国家中医药管理局正式立题,1996年国家自然科学基金将其列为重点项目,使该方法得到比较系统的研究.此后,血清药理学方法被广泛地应用于中药的药理学研究中[2].
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屏风固金颗粒免疫调节作用的血清药理学研究
屏风固金颗粒由黄芪、白术、防风、太子参、金银花、连翘、藿香、防风、甘草等组成.本实验采用血清药理学方法,通过测定屏风固金颗粒含药血清对自然杀伤细胞(NK细胞)杀伤活性、脾脏T淋巴细胞增殖活性及分泌白细胞介素-2(IL-2)的活性等指标,探讨该药的免疫药理活性及其作用机制.
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补脾方药血清对离体脾虚大鼠壁细胞胞内[Ca2+]i的影响
目的:探讨脾虚状态的分子病理机制及补脾方药对其的影响.方法:采用血清药理学方法对分离后的大鼠壁细胞在体外给药,并用荧光指示剂Fura-2/AM负载细胞,使用双波长荧光分光光度计分别检测静息状态下壁细胞内的[Ca2+]i及胃泌素负荷后[Ca2+]i动态变化情况.结果:静息状态下,脾虚模型组大鼠壁细胞胞内[Ca2+]i(64.32±12.82)明显低于正常组(76.64±14.21)(P<0.05),加入胃泌素(终浓度100 nM)后,胞内[Ca2+]i的增高幅度模型组(13.43±2.70)明显大于正常组(9.80±2.12)(P<0.01);脾虚大鼠经补脾方药血清作用后各组的静息状态下[Ca2+]i均介于正常组与模型组之间,胃泌素刺激后胞内[Ca2+]i的增高幅度也有不同程度的减小,其中党参治疗组的增高幅度(11.13±2.46)与模型组(13.43±2.70)相比差异显著(P<0.05).结论:脾虚大鼠壁细胞胞内静息状态下[Ca2+]i降低和胃泌素刺激后胞内[Ca2+]i的异常变化可能是脾虚证病理机制之一,Ca2+可能在分子水平上参与了脾虚证的形成.
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益气健脾药物血清对离体脾虚大鼠壁细胞胃泌素受体结合作用的影响及机制
目的:观察益气健脾药物血清对离体脾虚大鼠壁细胞胃泌素受体结合作用的影响并探讨其相关机制.方法:采用血清药理学方法和放射配基受体结合测定技术分别对正常、脾虚、药物血清作用后的大鼠壁细胞结合位点数进行检测,并对补中益气汤含药血清抑制大鼠胃泌素与其受体结合的抑制率进行了测定.结果:脾虚大鼠壁细胞胃泌素受体结合容量明显少于正常大鼠(876.0±88.2 vs 1 071.1±102.1,P<0.01);补中益气汤药物血清作用后结合位点数明显上升(980.4±89.2 vs876.0±88.2,P<0.05);党参及白术药物血清组作用后结合位点数也有上升趋势,但与脾虚组相比差异不显著;补中益气汤含药血清部分抑制大鼠胃泌素与其受体的结合(抑制率=42.9%>30%).结论:益气健脾药物血清对脾虚大鼠的结合位点数下降具有上调作用;其机制可能与其同胃泌素受体的竞争结合相关.
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清肝化瘀方含药血清对TGFα诱导SMMC-7721细胞Raf-MEK-ERK信号传导的影响
目的:观察清肝化瘀方含药血清对TGFα诱导人肝癌细胞,对Raf-MEK-ERK信号传导的影响.方法:采用血清药理学方法,以病理鼠血清作对照,用Western免疫印迹方法检测清肝化瘀方含药血清对Raf、MEK、ERK蛋白表达影响,RT-PCR方法检测清肝化,瘀方含药血清对MEK 1mRNA表达影响.结果:清肝化瘀方含药血清能抑制Raf、MEK、ERK蛋白的表达,但以抑制MEK蛋白为主(P<0.05),能抑制MEK1 mRNA的表达(P<0.05).结论:清肝化瘀方含药血清能够抑制TGFa诱导的人肝癌细胞增生,阻断TGFa在细胞内的信号传导.
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用血清药理学方法研究中药苦参的抗肿瘤作用
目的 探讨血清药理学方法在中药苦参抗肿瘤作用研究中的应用价值.方法 选取20只SD大鼠作为实验动物,分别给予中药苦参灌胃(给药组)和生理盐水灌胃(对照组)进行对照分析,通过噻唑蓝法检测、细胞形态学观察以及细胞周期分析,对中药苦参的抗肿瘤作用做出评价.结果 与对照组相比,给药组的对于肿瘤细胞的生长抑制率相对更高,差异有统计学意义(P<0.05),对于肿瘤细胞细胞周期分布的影响更为显著.在给药组中,含药血清浓度越高,其对于肿瘤细胞的生长抑制率也就越高,差异有统计学意义(P<0.05).结论 经过血清药理学方法研究,能够从中了解到中药苦参在抗肿瘤方面具有良好的作用效果.
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壮药依肝达含药血清对2215细胞分泌HBsAg和HBeAg的影响
乙型肝炎是由乙肝病毒(HBV)引起的,以肝脏炎性病变为主的一种传染性疾病.尽管已有干扰素及核苷类等各种抗HBV药物,但其疗效均不理想.目前,中药抗HBV已成为国内外的研究热点.壮药依肝达是通过长期的民间临床观察而拟定的治疗急慢性乙型肝炎和肝硬化的验方,主要由壮族民间草药饭汤子、田基黄、三姐妹等组成,具有清热解毒、利湿退黄和促进肝功能恢复之功效,临床疗效显著.本实验以2215细胞株为研究对象,采用中药血清药理学方法,研究依肝达的体外抗HBV作用.
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解毒维康片抑制HL-60细胞增殖及其机制探讨
我们采用血清药理学方法,获取含解毒维康片成分的大鼠血清,观察此血清对白血病细胞株HL-60细胞体外生长的影响.
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傅氏生化汤缩宫效应的血清药理学研究
傅氏生化汤出自<傅青主女科>,具有活血化瘀、温经止痛的功效,对产后血瘀证、恶露不绝疗效显著.临床上长期应用于产后宫缩乏力、子宫复旧不全导致的产后出血及伴随的剧烈腹痛等症状,效果明确.本文运用中药血清药理学方法对傅氏生化汤缩宫效应的物质基础进行了研究.同时对该方不同提取部位的时效关系进行了比较与分析.
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血清药理学方法体外实验系统的血清添加量问题
为了解不同血清添加对体外培养细胞系的影响,采用MTT法分别检测含红参、黄芪血清不同添加量对胚鼠皮肤成纤维细胞(3T3)增殖的影响.结果:含红参血清在与血浓度相等的条件下有明显的抑制细胞增殖的作用,延长培养时间在较低添加量时也呈现抑制作用;含黄芪血清在低血清添加量时对细胞的增殖呈促进作用,在高添加量下呈抑制作用.提示:在体外反应系统中,通过适当的增加血清添加量来提高药物浓度是可行的.
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六神丸抗肿瘤血管生成的体外实验研究
目的:观察六神丸对人乳腺癌MCF-7细胞的抑制作用,并从抗肿瘤血管生成角度探讨了其作用机制.方法:大鼠灌服六神丸水溶液,制备含药血清,以顺铂(DDP)作为对照组,分别作用于体外培养的人乳腺癌MCF-7细胞,检测相关指标.结果:六神丸含药血清对MCF-7细胞的增殖有明显抑制作用,可破坏正常形态,阻碍其生长,抑制作用随含药血清浓度增大而增强,流式细胞仪检测证明,经六神丸含药血清作用后的人乳腺癌MCF-7细胞的b-FGF及MMP-9荧光强度明显下降.结论:六神丸具有对肿瘤细胞的直接杀灭作用,此作用是通过抗肿瘤血管生成机制实现.
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掀起中药盖头来--膜片钳技术与血清药理学方法的结合揭示中药作用机制
中医药是我国的瑰宝,在五千年历史长河中,它为人民健康作出了极大的贡献.随着现代科技的进步,创新的、现代化的科技手段已开始在中药研究中展现出优势,这必然将中医药研究推向现代化科学的前沿,为有着几千年的传统医药发展带来无限的想象空间.本文综述近年来中医药研究中新近建立和发展起来的血清药理学方法以及二十世纪八十年代后期迅速成功应用的电生理膜片钳技术的现况,并对两种技术结合应用于中药研究的前景进行展望.
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应用中西结合方法筛选抑制前列腺增生有效中药复方的研究
目的 筛选抑制前列腺增生(BPH)有效中药复方.方法 根据中医治疗良性BPH的辨证施治理论,对临床实践证明有效的方剂中不同功能类型的中药,采用血清药理学方法以及离体实验和动物模型相结合的方法筛选出抑制BPH能力强的种类,然后运用中医理论和直接实验设计技术找出佳配方.结果 以中医理论为指导,利用现代化科学研究方法精选其中有效的药物,组成一个治疗BPH的有效方剂.结论 本方法有助于研究开发控制前列腺增生的新药,提高中医药治疗BPH的效果.
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中药血清药理学研究现状
自1987年,日本学者Hiroko 1wama等首次利用血清药理学方法进行中药研究.1988年,日本国东京都医院的田代真一[1]正式提出了血清药理学方法的近20年里,我国利用血清药理学方法对中药复方进行了一系列的研究,到目前为止,这些研究取得了很大的进展,渗透到了中药研究的各个领域,为中药研究开辟了一条崭新的、更为科学的途径.
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中药血清药理学研究概述
中药血清药理学方法是由日本学者于20世纪80年代首先提出的.定义是给动物灌服中药一定时间后,取其血清进行实验的药理学研究方法[1].1中药血清药理学的由来数十年来,人们对中药制剂的化学成分和药理活性进行了大量研究,取得了令人瞩目的成绩,为阐明中药制剂的作用机理做出了贡献.中药药理的离体实验多是运用中药粗提物直接进行体外实验,在方法学上存在一些问题和缺陷,影响实验结果的真实性和可靠性,大致可归纳为4点[2]:①中药绝大部分情况下是口服给药,在经胃肠道和肝脏代谢后,后进入血液的并不完全是原药成分,还包括中药在体内的代谢物等成分;②中药由多种成分组成,这种多成分的整体效应并非等于各部分效应之和;③中药成分复杂,粗提物理化性质(如杂质、酸碱度、鞣质等)不十分恒定,体外实验结果可能影响药效的判断和评价;④中医临床注重辨证施治,也就是说,某些中药可能在某一证侯存在前提下(即某种特定的机体状态下)才体现出药效作用.因此,中药或复方的粗提物的体外药理实验结果,既不能有效消除上述四点因素的影响,也难以反映机体真实血药浓度下的药理作用及变化规律,亦不利于中药制剂药理作用的机理研究以及合理解释其药理作用的物质基础.