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血吸虫糖蛋白研究进展
有关血吸虫疫苗的研究迄今已有70余年的历史.90 年代中期WHO/TDR 选定了6 种曼氏血吸虫候选疫苗分子,它们是28kDaGST、97kDa 副肌球蛋白、62kDaIrv-5、28kDa磷酸丙糖异构酶(TPI)、23kDa表膜抗原和14kDa脂肪酸结合蛋白.但这些候选疫苗分子单独免疫尚不足诱导40%以上的免疫保护力.因而,对血吸虫疫苗保护性抗原及其效应机制的研究还需要进行大量的基础性工作.糖蛋白是血吸虫主要抗原物质,大量存在于童虫和虫卵阶段,在血吸虫免疫应答及免疫调节方面起着十分重要的作用.现已证明,血吸虫糖蛋白不仅可以诱导保护性抗体,亦可诱导封闭性抗体的产生[1].因此,研究血吸虫糖蛋白的结构、功能及免疫机制,可为血吸虫疫苗的发展提供新的策略.本文就血吸虫糖蛋白及其在疫苗研究中的进展概述如下.
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结核疫苗相关研究现状与展望
结核病,特别是多重耐药性结核病的暴发流行和严重危害性,引起人们的重视.随着耐药菌株与艾滋病的"同流合污",它又一次严重地威胁人类的生命与健康.这些都给此病的防御与治疗带来新的挑战,为此人们不可不对它再次提高警惕.至今,卡介苗(bacillus calmette querin,BCG)仍是预防结核病惟一可用疫苗,但其免疫保护效果极不稳定.过去20年中,分子生物学技术的应用使得新型候选疫苗大量涌现,其中重组BCG疫苗和DNA疫苗被认为是有前途的候选疫苗.但所有疫苗共同的致命缺点是免疫保护力低.佐剂的研究将大大改观这一现状.因此,结核疫苗研究的努力方向还是在研究分支杆菌免疫机制和免疫失败的基础上,进一步增强现有候选疫苗的免疫效力或研制更为有效的新型疫苗.
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从南非艾滋病研发机构的发展看艾滋病疫苗研制前景
研制HIV(人类免疫缺陷病毒)疫苗以往多数工作都是由公共卫生部门进行,很少由制药工业机构承担.尽管国际间合作已经生产出多种候选疫苗,但后继工作急需大量新的投资.艾滋病已成为严重威胁全球人类健康的流行病,其他流行疾病诸如天花、脊髓灰质炎都由于有了疫苗而得到控制或根除,疫苗仍将是控制传染性疾病有效的理想途径.
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脑膜炎奈瑟菌的候选蛋白质疫苗
脑膜炎奈瑟菌是引起脑膜炎、菌血症等侵袭性疾病的重要病原菌,也可以无症状的鼻咽部带菌状态存在.分为13个血清群.但只有6个群(A,B,C,W-135,Y和X)与其致病性有关.目前应用的疫苗主要是荚膜多糖疫苗和多糖蛋白结合疫苗.两者本质上都属荚膜多糖抗原,覆盖的血清群有限,无法做到对B群脑膜炎奈瑟菌的预防,因此发展通用蛋白质疫苗势在必行.能作为候选疫苗的具有免疫原性的蛋白质需具备以下特点:在大多数菌株中都表达且结构保守;可诱生杀菌抗体或保护性抗体.现就有希望成为候选疫苗的蛋白质综述如下……
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不可分型流感嗜血杆菌候选疫苗的研究进展
不可分型流感嗜血杆菌(nontypeable Hae;ophilus influenzae,NTHi)是多种感染性疾病如急性中耳炎,鼻窦炎,结膜炎,慢性支气管炎的常见病原菌,近年来随着NTHi菌株耐药性的增强,NTHi感染已经成为全球一个较严重的健康问题,因此目前亟待研究一种安全有效的疫苗来预防NTHi的感染.多种NTHi的抗原被作为抗NTHi感染的候选疫苗来研究,该文主要针对近年来的一些研究热点如外膜蛋白P6/P5/P2/P26、Haps蛋白、HMW蛋白(high molecular weight protein,HMW protein)等进行综述,为后续疫苗的研制提供一些依据.
关键词: 不可分型流感嗜血杆菌 候选疫苗 外膜蛋白 动物模型 -
H因子结合蛋白作为B群流脑候选疫苗抗原的研究进展
脑膜炎奈瑟菌表面蛋白H因子结合蛋白(fHBP),是脑膜炎奈瑟菌的外膜蛋白和重要毒力因子,能与补体调节蛋白H因子结合.结合于脑膜炎奈瑟菌表面的H因子,能下调补体系统的激活作用,使脑膜炎奈瑟菌逃避补体系统的攻击.fHBP能诱导机体产生高水平的保护性抗体,抗fHBP抗体与fHBP结合后可阻止fHBP与H因子的结合,从而使细菌易于被补体系统杀灭和清除.因此,fHBP已成为B群流行性脑脊髓膜炎理想的疫苗候选抗原之一.现就fHBP的结构、基因的表达与调节、作为B群脑膜炎奈瑟菌疫苗候选抗原的作用、应用策略、安全性和有效性等新研究进展进行综述.
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表达A型H5N1血凝素的重组副流感病毒5能使小鼠抵抗高致病性禽流感病毒H5N1的攻击
安全有效的疫苗是阻止高致病性( HPAI)禽流感病毒H5 N1在人群中大规模暴发的好方法。目前FDA批准的H5 N1疫苗有明显的局限性,因此,迫切需要更加有效的H5N1疫苗问世。副流感病毒5( PIV5)是一种副黏病毒,在人群中不引起任何疾病,因此是一种可行的疫苗载体。在我们的研究中,用单剂量的表达有来自一 H5 N1亚型病毒血凝素(HA)的重组活PIV5(rPIV5-H5)免疫小鼠,发现对致死剂量的HP AI H5 N1攻击具有免疫作用。另外,我们试验了把H5N1 HA插入到PIV5基因组中不同位置对PIV5制成的疫苗有效性的影响。有趣的是,当把H5N1的HA插在前导序列,即PIV5启动子和第一个病毒基因(其编码核蛋白NP )之间时,不能产生有活力的病毒。当把 H5 N1的 HA 插在NP和下一个基因V/磷蛋白( V/P )之间时,能引起病毒生长缺陷。当把H5 N1的HA插在小疏水基因(SH)和血凝素-神经氨酸酶基因(HN)交界处时,其制成的疫苗对HPAI H5N1有好的免疫力:在小鼠试验中,只要用1000 PFU的剂量便已足够。本研究说明了表达有H5N1 HA 的重组PIV5有潜力成为HP AI H5 N1的候选疫苗。
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靶向小衣壳蛋白 L2的具有广泛保护性的VLP 型 HP V疫苗的临床前优化
理想的预防人类乳头瘤病毒( HPV)疫苗应该具备以下特性,即能够提供广泛的保护性和持久的免疫应答,能够应对所有高危人乳头瘤病毒类型,单一剂量注射后即产生免疫效果,在无需制冷的条件下能够长期保存。基于以上要求,作者已经研制出由噬菌体病毒样颗粒( VLP s )组成的HP V候选疫苗,该噬菌体病毒样颗粒具有广泛的HPV16次要衣壳蛋白L2来源的中和表位。免疫接种16L2 VLPs可诱导出高效价、能够引起广泛交叉中和抗体,该中和抗体能够抵抗多种类型的HPV。在该项研究中,作者介绍了两种改进的候选疫苗,以期提高疗效和在发展中国家的临床适用性。首先评估抗原剂量和加强免疫对免疫原性的作用。用含明矾或不含明矾的剂量为2~25μg的16L2-MS2 VLPs免疫小鼠,结果显示,各种剂量下16L2-MS2 VLPs均具有高度的免疫原性,且小浓度明矾具有佐剂作用。虽说加强免疫可以提高抗体效价,实际上单一免疫接种也能够引起持续时间较长的强烈抗体应答。作者也研制出一种用于提高疫苗稳定性的方法。使用喷雾干粉设备,以多糖和氨基酸的结合物作为蛋白质的稳定剂,制造出L2 VLP s的干粉型疫苗。喷雾干燥型的L2 VLP s并不影响VLP s再建物的完整性和免疫原性。喷雾干燥型的VLP s在室温下稳定,37℃可以保存一个月以上,且该VLPs具有高免疫原性。总之,这些增强改进措施的目的在于,促进实现下一代以VLP 为基础的HP V 疫苗的制备,强调美国和全球在疫苗经济负担能力方面的差异,并且对疫苗在农村或偏远地区人群中的普及性进行评估。
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表达三聚物模式糖蛋白的重组狂犬病疫苗在远交系小鼠中使免疫原性和保护性升高
狂犬病是一种由病毒引起的致死性脑炎的疾病,对野生动物、家畜和处于高风险暴露地区的人群进行预防性疫苗接种可以控制狂犬病。目前可用的疫苗价格昂贵、生产繁琐、需要强化免疫以诱导和维持保护性免疫。在目前的研究中,我们描述基于表达单体( RABV-mG)或其三聚体结构( RABV-tG)的原型狂犬病毒的糖蛋白G( RABV-G)来开发候选狂犬病重组亚单位疫苗,使用或不使用Matrix-M T M 佐剂。通过远交系NIH瑞士白化病小鼠测试各个候选疫苗的免疫原性和保护效果。在免疫原性和有效性方面, RABV-tG候选疫苗优于RABV-mG疫苗。添加佐剂可以提高RABV-mG疫苗的弱免疫原性。一个单一低剂量的RABV-tG联合Matrix-MT M 诱导高水平的中和抗体可以保护所有小鼠抵御RABV致死剂量的攻击。因此, RABV-tG联合应用Matrix-MT M 是一种很有前景的候选疫苗,克服了目前所使用的疫苗的局限性。
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水泡性口炎病毒载体共表达的热休克蛋白70可以增强抗人诺瓦克病毒的黏膜免疫
作为病原体,人类诺瓦克病毒( NOV )占全球非细菌性胃肠炎的95%。目前,没有可用于对抗人类NOV病毒的疫苗,因为它不可培养,而且缺乏小动物模型。近研究表明,表达人类NoV 衣壳蛋白(rVSV-VP1)的重组水泡性口炎病毒(rVSV)在小鼠体内引起强烈的免疫应答。为了进一步改善候选疫苗的安全性和有效性,热休克蛋白70(HSP70)被插入到rVSV-VP1骨架载体。作为双重插入,萤火虫荧光素酶( luc)基因插入到HSP70,形成第二构建物。相比 rVSV-VP1,所得到的重组病毒( rVSV-HSP70-VP1和rVSV-luc-VP1)在小鼠体内的细胞繁殖和病毒传播有所衰减。在接种剂量为1.0×106 PFU时,相对于 rVSV-VP1, rVSV-HSP70-VP1触发了显著增高的阴道IgA应答;相对于rVSV-luc-VP1,诱导显著加强的粪便和阴道IgA 应答,尽管血清IgG和T细胞的应答是相似的。在接种剂量为5.0×106PFU 时,rVSV-HSP70-VP1比rVSV-VP1刺激显著增高的T 细胞应答,粪便及阴道 IgA 应答。当rVSV-VP1和rVSV-HSP70构成联合疫苗时,粪便和阴道IgA应答也显著上升。总的来说,这些数据表明:(ⅰ)插入一个附加的基因( HSP70或 luc )到rVSV-VP1骨架,可以进一步衰减以VSV为基础的疫苗在体外和体内的毒性,从而提高了候选疫苗的安全性;( ii ) HSP70增强基于VSV的人NOV疫苗引发的人类NOV病毒特异的黏膜和T细胞的免疫。
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流感病毒 H7 N9病毒样颗粒疫苗的研发
近,中国出现了由禽源性流感病毒A( H7N9)引起的严重性传染病,为此全球付出努力,来实现候选疫苗的快速研发。目前,非流感病毒A ( H7 N9) H7亚型流感候选疫苗在面对新近出现的流感病毒A( H7N9)时,其免疫原性低,保护效果差。一种流感病毒A ( H7 N9)重组候选疫苗,是将A/Anhui/1/2013株的血凝素( HA )、神经氨酸苷酶( NA )和 A/Indonesia/05/2005(H5N1)株的基质蛋白1(M1)克隆进杆状病毒载体,然后用该杆状病毒感染草地贪夜蛾( Sf9)昆虫细胞,再从该细胞分泌出由HA、 NA和M1组成的病毒样颗粒( VLP ),其与成熟的流感病毒颗粒相似。该疫苗从获得H7 N9基因序列进行基因构建到流感病毒A( H7N9) VLP的分泌,共用了26 d。将该疫苗分别在0 d和14 d接种Balb/c小鼠,用致死野生株进行攻击,以期评价其免疫原性和效力,对照组为非同源性的H7疫苗( A/chicken/Ja-lisco/CPA1/2012( H7N3)-VLP )、A/Indonesia/05/2005( H5 N1)-VLP 或安慰剂。所有的疫苗添加或不添加 ISCOMATRIX 佐剂。流感病毒 A ( H7 N9) VLP疫苗诱导针对同源性流感病毒A ( H7 N9)的血凝抑制( HAI )抗体,滴度≥1∶64。该疫苗对异源的流感病毒A( H7N3)能产生交叉反应,抑制血红细胞凝集,同时与相应的ISCOMATRIX 佐剂亚组相比,其血凝反应高出3~4倍。类似的,该疫苗的所有剂量诱导的抗NA抗体,与ISCOMATRIX 佐剂亚组相比,其反应高出3~4倍。非同源性的H7疫苗能诱导H7N3和H7N9的HAI ,但不能产生抗N9 NA的抗体。用致死的野生株A/Anhui/1/2013( H7 N9)攻击小鼠,接种A(H7N9)和A(H7N3)疫苗的小鼠存活率为100%,而接种A ( H5 N1)疫苗和安慰剂的小鼠,存活率为0%。总之,数据表明,重组 H7 N9疫苗研发迅速,免疫原性和效果良好,能够作为大规模流行性感冒H7 N9的候选疫苗用于人体试验。
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纳米颗粒疫苗
1 引言疫苗开发作为一种成功的公共卫生干预措施有着辉煌的历史,历史上疫苗的开发是以路易斯·巴斯德的"分离物、灭活、注射"这一典型模式为基础的.因为疫苗开发驱动了逐渐增强的合理设计疫苗现代观念,故候选疫苗的数量越来越多.大多数的候选疫苗表现出其低程度的构成,显示出较低的免疫原性.当我们朝向现代疫苗领域进军的时候我们越来越需要能够增强免疫原性的佐剂和递送系统.
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以ISA720为佐剂甘氨酸作为保护剂的恶性疟疾疫苗AMA1的长期稳定性
恶性疟原虫顶端膜抗原(AMA1)是恶性疟原虫无性繁殖血液期表达的蛋白,是恶性疟疾疫苗的候选抗原.AMA1蛋白是疟原虫FVO和3D7等位基因表达产物,恶性疟疾候选疫苗AMA1-C1/ISA720是AMA1抗原与佐剂MontanideISA720按照1∶1(质量比)配伍混合合成的.