首页 > 文献资料
-
柿叶黄酮对缺氧复氧以及晚期糖基化终产物诱导的乳鼠心肌细胞凋亡的影响
目的观察柿叶黄酮对缺氧复氧和晚期糖基化终产物诱导的乳鼠心肌细胞凋亡的影响.方法分别建立16、32 h缺氧复氧和晚期糖基化终产物诱导的乳鼠心肌细胞凋亡模型,应用流式细胞术检测柿叶黄酮作用下上述乳鼠心肌细胞的凋亡率.结果16 h和32 h缺氧后复氧6 h均可导致乳鼠心肌细胞的凋亡,其凋亡率分别为6.05±0.46%和12.45±1.66%,且凋亡率随着缺氧时间的延长而增高(P＜0.05).在柿叶黄酮作用下,缺氧复氧诱导的乳鼠心肌细胞凋亡率显著降低.晚期糖基化终产物亦可诱导心肌细胞显著凋亡(11.03±0.39 vs 6.25±0.48,P＜0.05),柿叶黄酮对晚期糖基化终产物诱导的乳鼠心肌细胞凋亡有一定的抑制作用(8.40±0.47vs 11.03±0.39,P＜0.05).结论柿叶黄酮对缺氧复氧和晚期糖基化终产物诱导的乳鼠心肌细胞凋亡均有一定的抑制作用.
关键词： 黄酮类/拮抗剂和抑制剂 细胞凋亡/药物作用 细胞低氧 糖基化终产物 高级/激动剂 -
机体乏氧与肾癌肿瘤微血管生成及预后的关系
[目的]探讨机体乏氧状态下肾透明细胞癌患者肿瘤微血管生成、术后生存期同一般患者的差异,借以评价机体乏氧在肾癌预后中的地位及作用机制.[方法]56例肾透明细胞癌行根治性肾切除手术患者,分为机体乏氧状态组(OH组,14例)和机体常氧状态组(NS组,42例),免疫组化检测手术标本中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达,测量CD105标志的肿瘤微血管密度(MVD),随访术后生存时间,对比二组临床病理资料差别,Kaplan-Meier法分析二组生存率,建立COX模型分析各变量与生存时间的相关性.[结果]OH组表达HIF-1α的阳性率为92.9％(13/14),MVD值为53.1±19.9,中位生存时间为(42.0±10.2)月,NS组表达HIF-1α的阳性率为64.3％(27/42),MVD值为42.8±14.4,中位生存时间为(84.0±6.1)月,二组Hb水平、HIF-1α表达、MVD值间差异有统计学意义.COX分析提示肿瘤高分期、机体乏氧状态、肿瘤HIF-1α高表达和MVD值高可以增加患者的死亡风险(RR依次为2.0、4.1、1.1和4.0).[结论]机体乏氧状态可加剧肿瘤内部的缺氧,上调HIF-1α表达,促进肿瘤微血管形成,终恶化肾透明细胞癌患者的预后.
-
TAK1对大鼠海马神经元细胞缺氧复氧后JNK信号通路和细胞凋亡的影响
目的：探讨TAK1对大鼠海马神经元缺氧复氧后JNK信号通路和细胞凋亡的影响。方法新生（出生＜24 h） SD大鼠，雌雄不拘，体质量5～6 g，原代培养海马神经元，接种于培养孔或培养皿中。采用随机数字表法，将其随机分为4组，每组48孔和12皿，正常对照组（ C组）：不予任何处理；缺氧复氧组（ HR组）：缺氧4 h复氧24 h；TAK1抑制剂组（ T组）、DMSO组：分别于缺氧处理前给予TAK1特异性抑制剂5Z－7－oxozeaenol 1μg／mL和等量DMSO溶液后行缺氧复氧。各组缺氧复氧处理结束后1 h，测定神经元活力、凋亡率、cleaved Caspase －3和Bax蛋白的表达水平，测定JNK磷酸化水平。结果与C组比较，HR组和DMSO组的海马神经元活力降低，细胞凋亡率升高，cleaved Caspase－3和Bax蛋白表达上调，JNK磷酸化水平明显升高（ P＜0．05）；与HR组比较，T组海马神经元活力增强，细胞凋亡率降低，cleaved Caspase －3和Bax蛋白表达下调，JNK磷酸化水平降低（P＜0．05）。结论 TAK1可能通过激活JNK信号通路介导的细胞凋亡参与大鼠海马神经元缺氧复氧后的损伤机制。
-
Nimesulide对低氧条件下人肝癌细胞HepG2的增殖抑制作用及机制
目的 探讨环氧合酶抑制剂Nimesulide对低氧条件下人肝癌细胞HepG2增殖的影响及分子机制.方法 将人肝癌细胞HepG2分为6组,分别作如下处理:常氧(21% O2)不加药、常氧+50 μmol/L Nimesulide、缺氧(1% O2)不加药、缺氧+50 μmol/L Nimesulide、缺氧+100 μmol/L Nimesulide、缺氧+200 μmol/L Nimesulide.采用四唑盐法测HepG2细胞的增殖抑制率;RT-PCR测HepG2细胞中环氧合酶-2(COX-2)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和Survivin mRNA表达的变化;Western blot法测HepG2细胞中COX-2、HIF-1α和Survivin蛋白表达的变化.结果 Nimesulide对低氧条件下HepG2细胞有增殖抑制作用.较常氧下,低氧下人HepG2细胞的COX-2、HIF-1α和Survivin表达升高(P＜0.05).使用Nimesulide后,低氧条件下HepG2中COX-2和Survivin mRNA表达水平下调(P＜0.05);COX-2、HIF-1α和Survivin蛋白表达水平下调(P＜0.05).结论 Nimesulide对低氧条件下HepG2有增殖抑制作用,其机制是抑制COX-2的活性和HIF-1α蛋白表达,进而下调Survivin的表达.
-
低氧对人鼻咽癌细胞尿激酶型纤溶酶原激活物系统表达的影响
目的 研究低氧微环境对鼻咽癌细胞系CNE-2Z尿激酶型纤溶酶原激活物(u-PA)系统表达的影响.方法 以混合气体(5% CO2,95% N2,O2<0.1%)置换法处理24 h,建立CNE-2Z细胞体外低氧培养模型.RT-PCR检测纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)、u-PA、尿激酶型纤溶酶原激活物受体(u-PAR)在CNE-2Z细胞中mRNA的表达;酶联吸附法(ELISA)测定PAI-1和u-PA蛋白表达;细胞免疫化学方法检测u-PAR蛋白表达.结果 低氧处理后,CNE-2Z细胞u-PA系统中PAI-1 mRNA和蛋白表达均显著增加(P<0.05);细胞裂解液中u-PA蛋白含量降低(P<0.001),但u-PA mRNA含量无显著变化(P>0.05);而对u-PAR mRNA和蛋白表达均无显著影响(P>0.05).结论 低氧能影响人鼻咽癌细胞CNE-2Z u-PA系统的表达,主要表现为上调PAI-1的表达,并可能通过促进u-PA/u-PAR复合体内吞降解的机制降低u-PA蛋白表达,但对u-PAR的表达不产生显著影响.低氧可能通过影响u-PA系统的表达而改变CNE-2Z细胞的侵袭转移能力.
-
去铁胺对大鼠肺组织低氧诱导因子-1表达及对模拟高原低氧大鼠肺组织结构的影响
目的:观察去铁胺对大鼠肺组织低氧诱导因子-1(HIF-1α)表达及对模拟高原低氧环境下肺结构的影响.方法:实验分成两部分,(1)25只Wistar大鼠随机分成5组,腹腔注射去铁胺(DFX)200 mg/kg后,分别用RT-PCR和免疫组化方法在各个时相点(0、2、4、8、24 h)检测肺组织HIF-1α mRNA和蛋白质的表达.(2)40只Wistar大鼠随机分成5组,每组8只.常氧对照组(N),急性低氧时照组(H0),急性低氧组(H1),DFX处理组(DFXo),DFX处理+急性低氧组(DFXI).各组动物经相应处理后,测定N、Ho、DFX0组肺组织HIF-1α mRNA,观察N、H1、DFX1组肺显微及超微结构变化并检测肺组织一氧化氮浓度及Na+-K+-ATP酶活性.结果:(1)大鼠腹腔注射DFX后肺组织未表达HIF-1α蛋白质,对照组(O h)大鼠肺组织少量表达HIF-1α mRNA.2 h后开始升高,4 h达峰值(p<0.01),以后逐渐下降,24 h后基本恢复到正常对照组水平.(2)大鼠腹腔注射DFX 200 mg/kg,1次/d,5 d后,DFXo组HIF-1α mRNA表达水平显著高于Ho和N组(P<0.01).(3)经模拟海拔6 000 m急性低氧24 h后,H1组肺组织NO浓度和Na+-K+-ATP酶活性低于N组(P<0.01),而DFXl较Hl组明显升高(P<0.01).(4)经模拟海拔6 000m急性低氧24 h后,H1组肺出现明显的间质性水肿.而DFX1组则水肿明显减轻.结论:DFX可以促进大鼠肺组织表达HIF-1α mRNA:间断腹腔注射DFX可以减轻大鼠低氧性肺问质水肿并提升肺组织NO浓度和Na+-K+-ATP酶活性.
关键词： 细胞低氧 代谢 低氧诱导因子 一氧化氮 Na+-K+-ATP酶 -
缺氧预处理后急性低氧对大鼠血压及心率的影响
目的探讨经缺氧预处理(HPC)后,急性低氧对大鼠血压和HR的影响.方法以健康大白鼠50只,随机分为空白组、含氧12.5%对照组、8.5%对照组、12.5%实验组和8.5%实验组.对照组分别在含氧12.5%和8.5%的氮氧混合气体下急性低氧5min和10min时记录血压和HR,并且10min时鼠尾取血测Hb含量;实验组进行7天缺氧预处理后同时用同样的方法测相同指标.结果以12.5%氮氧混合气体进行急性低氧的实验组5min时舒张压明显高于对照组(P<0.01或0.05);以8.5%氮氧混合气体进行急性低氧的实验组5min和10min时的收缩压明显高于对照组(P<0.01),5min时的舒张压明显高于对照组(P<0.01或0.05);经过HPC后大鼠的Hb含量明显升高(P<0.01或0.05).结论经HPC后,机体Hb含量升高;急性低氧时实验组与对照组比较收缩压和舒张压有明显变化.
-
急性低氧对家兔微血管及心电图的影响
目的观察不同程度急性低氧对家兔微血管和心电图的影响.方法实验采用两组家兔分别人工吸入12.5%(Ⅰ组)和8.5%氦氧混合气体(Ⅱ组),模拟4000m和6500m高原急性低氧.急性低氧时间分别为5min、10min、15min 、20min,于急性低氧前后观察微血管和QTc与JTc间期变化.结果两组血 流速度减慢,微血管口径变大.Ⅰ组QTc和JTc间期有延长；Ⅱ组QTc间期有延长,而JTc间期 有缩短或不变.结论急性低氧可使微血管血流速度减慢,口径变大,心肌 去、复极化发生改变.
-
间歇性低氧对肝细胞脂代谢的影响及其可能机制
目的 探讨间歇性低氧对肝细胞脂质代谢的影响及其机制.方法 利用三气培养箱(O2、CO2、N2体积分数分别为2％、5％、93％)8 h/d间歇性低氧处理L02和HepG2细胞1、2、3、4、5d,建立间歇性低氧细胞模型,油红O染色及甘油三酯(TG)测定检测肝细胞内的脂滴含量,流式细胞仪及荧光显微镜观察间歇性低氧对肝细胞内活性氧(ROS)的影响,Western blot检测ROS对低氧诱导因子(HIF)-1α和HIF-2 α蛋白表达的调节,Western blot检测HIF-1α下游与脂质代谢相关的固醇调节元件结合蛋白-1c (SREBP-1c)、脂肪酸合成蛋白(FAS)、脂肪分化相关蛋白(ADFP)的表达.各组TG含量测定行2×5的析因方差分析,两个样本均数比较用t检验,多个样本均数的比较用单因素多样本方差分析,多个样本间的两两比较用q检验.结果 实验组L02和HepG2细胞内油红O染色可见橘红色脂滴增多并出现融合现象,TG含量随着间歇性低氧天数的增加逐渐增多(Fl02=61.83,FHepG2=104.19,P值均＜0.01),氧浓度与时间有交互效应,差异有统计学意义(FL02=39.60,FHepG2=76.39,P值均＜0.01).ROS在对照组荧光显微镜下可见有基础表达,与对照组比较,间歇性低氧处理第2天,肝细胞内ROS荧光指数明显增加,差异有统计学意义(0.703±0.129与3.31±0.198,t02=22.0637;0.617±0.156与2.33±0.42,tHepG2=7.2003,P值均＜0.05),随着间歇性低氧处理时间延长,L02和HepG2细胞内ROS的含量增多(FL02=1021.84,FepG2=49.89,P值均＜0.01).Wesem blot结果显示,实验组HIF-1 α、SREBP-1c、FAS和ADFP蛋白相对表达量较对照组增加,并且随时间的延长逐渐增多,差异有统计学意义(L02细胞:FHIF-1α=371.19,FSREBP-1c=204.49,FFAS=38.2,FADFP=154.31,P值均＜0.05;HepG2细胞:FHIF-1α=150.84,FSREBP-1c=107.35,FFAS=279.71,FADFP=352.06,P值均＜0.01),HIF-2α蛋白相对表达量在实验组第1d较对照组增多(tL02=20.76,tHepG2=3.82,P值均＜0.05),此后逐渐降低至第4d低于对照组(tL02=3.18,tHepG2=2.54,P值均＜0.05).结论 间歇性低氧诱导产生的ROS可能调节低氧诱导因子和脂肪分化相关蛋白的表达,通过HIF-1 α-SREBP-1 c-FAS和ADFP途径导致肝细胞脂代谢异常.
-
低氧对L02细胞脂肪代谢的影响及其机制
目的 研究低氧对L02细胞脂质代谢的影响及其可能的机制. 方法 以正常人肝细胞株L02细胞为研究靶细胞,对照组和低氧处理组细胞分别在21％和1％氧浓度下培养.油红O染色、甘油三酯(TG)测定检测肝细胞脂肪变程度；RT-PCR法检测细胞内低氧诱导因子(HIF) 2α、固醇调节元件结合蛋白(SREBP) -lc mRNA的表达情况; Western blot法检测HIF-2α亚基、脂肪分化相关蛋白(ADRP)、脂肪酸合成酶(FAS)蛋白的表达量.各组甘油三酯测定值行2×3的析因设计方差分析；两样本均数间比较采用t检验；其他多个样本均数的比较采用单因素方差分析与NewmanKeulS法检验.结果 与对照组比较,低氧组L02细胞内出现脂质沉积,TG含量增多,且随低氧处理时间延长逐渐增多(F=115.04,P＜0.01).低氧12、24、48 h组SREBP-1c mRNA表达水平校对照组下调(0.236±0.043、0.287±0.044、0.342±0.049与0.503±0.037,F=28.37,P＜0.01),FAS蛋白表达水平较对照组下调(0.562±0.054、0.674±0.062、0.682±0.057与0.857±0.069,F=16.08,P＜0.0l).对照组未检测到HIF-2α表达,而低氧处理3h后HIF-2 α蛋白表达逐渐增加,6h后达高峰,12、24h又逐渐降低,各时间点分别为0.609±0.031、0.973±0.067、0.792±0.056、0.437±0.038(F=85.30,P＜0.01);低氧12、24、48h各组ADRP蛋白相对含量分别为0.319±0.043、0.732±0.056、0.873±0.066,均明显高于对照组0.211±0.019(P值均＜0.05),且随低氧时间延长,表达量逐渐增多(F=167.49,P＜0.01).结论 低氧通过HIF-2 α-ADRP途径诱导肝细胞脂肪沉积.
-
低氧诱导因子-2α—酰基辅酶A去饱和酶-1通路对低氧诱导的肝癌细胞生物学行为的影响
目的 探讨低氧环境下低氧诱导因子-2α(HIF-2α)是否通过调控酰基辅酶A去饱和酶-1 (SCD1)影响肝癌细胞的生物学行为. 方法 用1％ O2诱导HepG2和SMMC-7721细胞建立低氧模型,低氧刺激肝癌细胞0h、3h、6h、12h、24h后,荧光定量PCR及Western blot分别检测HIF-2α、SCD1 mRNA和蛋白表达时间谱.使用HIF-2α干扰质粒和SCD1抑制剂CAY10566,分为空白组(常氧)、低氧组(1％O212 h)、低氧阴性对照组(HIF-2α阴性质粒+1％ O2 12h)、低氧干扰组(HIF-2 α干扰质粒+1％ O2 12 h)、低氧CAY组(CAY10566 10 μmol+1％ O2 12h)、低氧干扰+ CAY组(HIF-2α干扰质粒+CAY10566 10 μmol +1％ O2 12h).用Western blot方法检测各组肝癌细胞HIF-2α、SCD1蛋白表达,CCK8检测各组肝癌细胞增殖能力,Annexin-V/PE流式细胞术检测各组肝癌细胞凋亡情况,transwell侵袭实验检测各组肝癌细胞侵袭能力.多个样本均数比较使用单因素方差分析. 结果 两种肝癌细胞株HIF-2α和SCD1 mRNA及蛋白表达水平随低氧诱导时间延长而表达增加.低氧环境下干扰下调HIF-2α表达后,肝癌细胞表达SCD1蛋白水平明显降低;抑制SCD1表达,对肝癌细胞HIF 2α蛋白表达无明显影响;干扰HIF-2α同时抑制SCD1表达,HepG2及SMMC-7721细胞表达SCD1蛋白水平(0.53±0.04及0.44+±0.10)降低程度较单独抑制HIF-2α或SCD1(1.12±0.04或1.12±0.04及0.90±0.10或0.99±0.13)更为明显(HIF-2α:FepG2=1 026.89,PhepG2=0.00,FSMMC-7721=2186.22,PSMMC-7721=0.00;SCD1:FhepG2=1 347.93,PhepG2 =0.00,FSMMC-7721=46.43,PSMMC 7721=0.00).分别抑制HIF-2 α或SCD1表达,可降低HepG2和SMMC-7721细胞增殖率及侵袭能力,促进凋亡(P＜0.05);干扰下调HIF-2α基础上联合CAY10566抑制SCD1表达,肝癌细胞增殖率、侵袭能力降低和凋亡率增加的水平较单独抑制HIF-2α或SCD1更显著(P＜0.05). 结论 HIF-2α-SCD1途径可能是低氧调控肝癌细胞能量代谢、进而影响其生物学行为的重要机制之一.
-
人类斯钙素与肿瘤相关性研究进展
斯钙素(stanniocalcin,STC)是一种首先在硬骨鱼类中发现,并已被充分阐明的糖蛋白激素,近年来在人和哺乳动物中发现也存在类似的蛋白.根据其蛋白分子中氨基酸序列的差异可以分为STC-1和STC-2,在生物体内发挥着相辅相成的作用.STC以旁分泌和自分泌的方式参与机体的多种生理功能,它不但可以通过肾脏和胃肠道来调节钙和磷酸盐的代谢,而且在促进脑神经元的终末分化[1]、防止因大脑局部缺血造成脑神经元损害[2]以及影响骨骼和肌肉的结构和功能[3]等方面也有重要作用.随着对STC研究的不断深入,越来越多的研究表明STC的表达与人类癌症的发展过程相关,现将相关研究进展综述如下.
-
肺组织低氧代谢中葡萄糖转运蛋白1的表达及其作用
目的 探讨单肺通气对大鼠肺组织葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)表达的影响.方法 30只Sprague Dawley大鼠经10%水合氯醛4.5 mL/kg腹腔注射麻醉后行气管插管术,建立单肺通气模型,将建模后大鼠随机分为对照组(n=6)与实验组(n=24),对照组大鼠采用主支气管插管双肺通气;实验组大鼠均为右主支气管插管通气,左侧肺不通气,按左侧肺不通气时间随机分为实验0.5 h组、实验1.0 h组、实验2.0 h组及实验4.0 h组,每组6只.采用透射电子显微镜观察大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞(AECⅡ)超微结构,半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测大鼠肺组织GLUT1 mRNA的表达情况.结果 对照组AECⅡ细胞核内染色质分布均匀,细胞质内板层小体圆形且密度均匀,微绒毛清晰.各实验组AECⅡ的细胞核染色质、细胞质内板层小体、细胞膜及微绒毛等有不同程度的改变.与对照组比较,实验0.5 h组、实验1.0 h组大鼠肺组织GLUT1 mRNA表达量显著降低(P＜0.05);实验2.0 h组大鼠肺组织GLUT1 mRNA表达量略有降低,但差异无统计学意义(P＞0.05);实验4.0 h组大鼠肺组织GLUT1 mRNA表达量明显增加(P＜0.05).除实验1.0 h组与实验0.5 h组大鼠肺组织GLUT1 mRNA的表达差异无统计学意义外(P＞0.05),其余各实验组两两比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 低氧条件下,肺组织GLUT1 mRNA的上调对AECⅡ具有保护作用.
-
不同低氧分压对SD大鼠骨髓间充质干细胞增殖分化的影响
目的 研究体外不同低氧分压对SD大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)增殖分化的影响.方法 将体外培养的MSCs,分组置于常氧(21%)和低氧(2%、4%、6%、8%)培养箱中培养,用MTT法分别于1、3、5、7、9 d检测细胞的增殖活性;用酶联免疫检测法分别于1、3、5、7、9 d检测细胞碱性磷酸酶(ALP)和Ⅰ型胶原蛋白(COLⅠ)的表达.结果 不同低氧分压对MSCs细胞增殖活性有明显促进作用(P＜0.05);低氧分压抑制MSCs 细胞的ALP和COLⅠ表达(P＜0.05).结论 低氧微环境可促进MSCs的增殖活性,但对细胞的成骨向分化起到抑制作用.
-
米诺环素对缺氧猴脉络膜视网膜血管内皮细胞表达血管内皮生长因子受体的影响
目的 观察缺氧状态下猴脉络膜视网膜血管内皮细胞(RF/6A)血管内皮生长因子受体(VEGFR)-1和VEGFR-2的表达情况及米诺环素的干预效果.方法 培养RF/6A并将细胞分为正常对照组、缺氧对照组、米诺环素低剂量组(0.5 μmol/L)、米诺环素中剂量组(5.0μmol/L)、米诺环素高剂量组(50.0μmol/L).实时定量聚合酶链反应(PCR)和免疫组织化学染色检测VEGFR-1、VEGFR-2的mRNA表达和蛋白表达.结果 实时定量PCR检测结果显示,各组细胞中VEGFR-1 mRNA的表达水平在24(F=0.17)、48(F=1.53)、72 h(F=2.04)各时间点未发生显著变化,差异无统计学意义(P＞0.05).72 h后,米诺环素低(t=4.69)、中(t=20.16)、高(t=17.12)剂量组VEGFR-2 mRNA表达水平与缺氧对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.001).免疫组织化学检测结果显示,各组均可见表达VEGFR-1、VEGFR-2蛋白的阳性细胞.VEGFR-1蛋白表达水平偏低,染色浅或中度棕色,主要位于内皮细胞胞膜和细胞质中,各组细胞中VEGFR-1蛋白的表达水平在各时间点比较,差异无统计学意义(F24 h=0.251,F48 h=0.340,F72 h =0.589；P＞0.05)；VEGFR-2蛋白表达水平较高,各组内皮细胞胞膜上均可见棕黄色染色物质,细胞质中也见少量表达,缺氧对照组染色强度明显比正常对照组强,并且与米诺环素处理各组间VEGFR-2蛋白表达比较,差异有统计学意义(F24 h=19.147,F48 h=14.893,F72 h=11.984；P＜0.05).结论 缺氧RF/6A VEGFR-2表达上调,米诺环素对其有一定抑制作用.
-
缺氧对视网膜Müller细胞促红细胞生成素mRNA和蛋白表达的影响
目的探讨缺氧条件下促红细胞生成素(EPO)mRNA及蛋白在体外培养的Müller细胞的表达情况.方法胰酶消化新生大鼠视网膜组织制成单细胞悬液,机械震荡、吹打法分离纯化视网膜Müller细胞,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫细胞化学方法对缺氧条件下视网膜Müller细胞EPO基因和蛋白的表达进行测定.结果成功获得视网膜Müller细胞,传代后95%以上的细胞呈神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)染色阳性.EPO蛋白的阳性染色位于视网膜Müller细胞的细胞浆及突起上.在正常的视网膜Müller细胞中仅见微弱的EPO mRNA和蛋白表达,而缺氧后表达明显上调,且呈时间依赖性.结论 Müller细胞在缺氧条件下EPO mRNA和蛋白表达增强,EPO表达水平的升高可能是缺氧性视网膜病变的神经保护因素之一.
-
缺氧对牛视网膜色素上皮细胞增生和凋亡基因 bcl-2表达的影响
目的观察缺氧对培养的牛视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞增生和凋亡基因bcl-2表达的影响. 方法用四甲基偶氮唑蓝 [ 3-(4,5-dimethylthiazole-2yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromid, MTT]比色法和免疫组织化学的方法,将培养的RPE细胞接种于24孔板,每孔细胞密度为5×104,分成4组:A组置入缺氧环境中培养(3%O2,5%CO2,92%N2,37℃);B组置入正常环境中培养(5%CO2,95%空气,37℃);C组:将缺氧环境培养24 h的细胞上清液加到正常环境培养的牛 RPE细胞中培养;D组:将正常环境培养24 h的细胞上清液加到正常环境培养的牛 RPE细胞中培养.24 h后分别取出行MTT比色法及抗bcl-2蛋白抗体染色. 结果 A组与B组、C组与D组比较,前者细胞MTT实验吸光度(A)值[旧称光密度(OD)]均高于后者(P＜0.05); 抗bcl-2蛋白抗体染色,A、B组阳性率分别为72.60%、38.64%; C、D组阳性率分别为83.20%、21.80%.阳性染色在细胞浆,近核膜处染色尤深,部分呈细颗粒状. 结论缺氧促进牛 RPE细胞增生及凋亡基因 bcl-2表达.
-
缺氧对人视网膜色素上皮细胞表达缺氧诱导因子-1α及血管内皮生长因子的影响
血管内皮生长因子(VEGF)在眼内新生血管形成中发挥着重要作用[1,2].研究发现,VEGF转录活化受缺氧诱导因子(HIF-1)调节.HIF 1是异源二聚体,由α亚基和β亚基组成.常氧状态时,HIF-1α经泛素-蛋白酶途径不断发生水解;缺氧状态下,HIF-1α稳定表达.HIF-1β属构建型表达,不受缺氧诱导,可稳定存在.因此,HIF-1的活性由HIF-1α决定[3,4].我们检测了缺氧不同时间培养的人视网膜色素上皮(RPE)细胞对HIF-1α及VEGF的表达,以分析RPE细胞内HIF-1与VEGF表达的关系.
-
雌激素对缺氧视网膜Müller细胞色素上皮衍生因子表达的影响
目的 探讨雌激素对缺氧视网膜Müller细胞色素上皮衍生因子(PEDF)表达的影响. 方法 采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blotting印迹分析方法分别测定不同浓度(10-1、10-6、10-5mmol/L)雌二醇(E2)作用于缺氧Müller细胞后,细胞内PEDF mRNA及蛋白表达水平. 结果 缺氧24 h后PEDF mRNA及蛋白表达明显降低,10-5、10-6mmol/L E2作用于Müller细胞后可明显缓解由于缺氧引起的细胞内PEDF mRNA及蛋白表达的降低,并与E2的浓度有关. 结论雌激素可以调控PEDF的表达,其可能在雌激素对视网膜新生血管形成的调控中起重要作用.
关键词： 雌激素类/生理学 视网膜新生血管化/病理学 细胞低氧 Müller细胞 动物实验 -
雌激素对缺氧损伤的人视网膜色素上皮细胞表达血管内皮细胞生长因子的影响
目的 观察雌激素17β-雌二醇(17β-E2)对实验性缺氧损伤的人视网膜色素上皮(RPE)细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达和乳酸脱氢酶(LDH)释放率的影响. 方法 用17β-E2和17βE2拮抗剂三苯氧胺(Tamxifen,TAM)预处理RPE细胞后,氯化钴(CoCl2)制备RPE细胞缺氧损伤模型,分别采用比色法、细胞免疫化学法、逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测定正常对照组、缺氧损伤组、17β-E2预处理组及17β-E2和TAM预处理组LDH释放率、VEGF蛋白表达、VEGF mRNA表达情况. 结果 缺氧损伤组RPE细胞较正常对照组LDH释放率增加,VEGF mRNA及蛋白表达增多(P<0.05).17β-E2预处理组与缺氧损伤组比较,VEGF的表达和LDH释放率明显降低(P<0.05);17β-E2作用被TAM阻断后,VEGF表达和LDH释放率增加,与缺氧损伤组比较差差无统计学意义(P>0.05). 结论VEGF在缺氧损伤的人RPE细胞中表达增强;17β-E2可以抑制缺氧损伤后RPE细胞VEGF的表达,降低其LDH释放率,该作用可以为其拮抗剂TAM所阻断.
