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具有双向分化潜能的鼠胎肝干细胞的分离、培养及鉴定
目的：优化体外分离、培养和筛选胎鼠肝脏干细胞（LSC）的方法，并鉴定其双向分化的潜能。方法通过密度梯度离心和细胞差异性贴壁法分离小鼠胎肝干细胞（FLSC），以细胞平板克隆技术和四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定FLSC的增殖，通过添加二甲基亚砜（DMSO）和 HGF等诱导干细胞分化。结果分离后的FLSC 24 h内贴壁，卵圆形，排列紧密，1～2周内活化， CD133、CD49f、EPCAM的阳性率分别为（97．95±1．21）％、（92．71±3．49）％、和（50．73±3．45）％，表达甲胎蛋白（AFP）、细胞角蛋白19（CK19）；诱导分化后糖原染色（PAS）法染色可见红色糖原颗粒，表达清蛋白（ALB）、肝细胞核因子4α（HNF‐4α）。结论联合密度梯度离心和差异性贴壁法成功分离FLSC ，分离后的FLSC干性强，增殖能力强，具有向肝细胞和胆管上皮细胞双向分化的能力。
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密度梯度离心法结合上游法优化精液对体外受精-胚胎移植临床结局的影响
目的 评价密度梯度离心(DGC)法、上游法及DGC结合上游法处理精液对体外受精-胚胎移植(IVF-ET)的临床效果.方法 以解放军第101医院生殖医学中心2013年12月至2016年3月206个IVF-ET治疗周期的患者为研究对象,其中104个周期采用DGC法处理精液,30个周期采用上游法处理精子,72个周期采用DGC法结合上游法处理精子,比较3种精液优化处理方法的受精率、优质胚胎率、胚胎种植率、临床妊娠率.结果 DGC结合上游法的受精率显著高于单独DGC法,差异有统计学意义(P<0.05),高于上游法,但差异无统计学意义(P>0.05);3种精液处理方法的优质胚胎率、胚胎种植率和临床妊娠率比较,差异均无统计学意义(P>0.05).结论 与单独DGC法或上游法比较,DGC结合上游法有助于提高受精率,值得在IVF-ET治疗中应用.
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双岐杆菌胞壁蛋白诱导人肠上皮细胞β-防御素-2基因的表达及NF-κB的活化
本研究应用超声破碎和离心法分离获得双岐杆菌胞壁,2%SDS提取其胞壁蛋白,superdex-200柱层析获得多个蛋白组分.RT-PCR和Northern杂交检测到双岐杆菌全菌、胞壁、胞蛋白均可诱导人肠上皮细胞株HT-29 and Caco-2细胞表达人β-防御素-2(HBD-2)mRNA的显著表达.为了在蛋白质水平上检测其基因的增强表达,构建了HBD-2基因原核表达载体,并制备获得其重组制品的多克隆抗体,ELISA、Western blot和免疫细胞化学等技术均检测到双岐杆菌胞壁组分可刺激肠上皮细胞高效表达HBD-2.P65免疫细胞化学染色检测到在双岐杆菌胞壁蛋白刺激下NF-κB向细胞核移位,IκB和磷酸化IκBwestern blot检测到IκB发生磷酸化和降解,表明基因转录因子NF-κB的活化,提示双岐杆菌胞壁蛋白信号可能通过NF-κB信号转导通路诱导肠上皮细胞β-防御素-2基因的表达.
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离心法制备冷沉淀凝血因子的影响因素控制
目的 通过对离心法制备冷沉淀凝血因子过程中影响因素的控制,减少凝血因子含量的损失.方法 从2013年7月至2014年6月荆门市红十字中心血站采用严格控制影响因素离心法制备的冷沉淀凝血因子制剂中,采用简单随机抽样方法抽取60袋冷沉淀凝血因子制剂标本作为研究对象,纳入研究组(n=60);从2012年7月至2013年6月采用一般离心法制备冷沉淀凝血因子制剂中,采用简单随机抽样方法抽取54袋纳入对照组(n=54).对两组冷沉淀凝血因子制剂中因子Ⅷ(FⅧ)与纤维蛋白原(Fib)含量进行检测.回顾性对比研究组与对照组冷沉淀凝血因子制剂中FⅧ与Fib含量.结果 研究组与对照组的FⅧ含量与Fib含量检测结果均值均为合格.研究组FⅧ含量[(102.8±12.3)IU/袋]显著高于对照组FⅧ含量[(90.4±4.2) IU/袋],差异有统计学意义(t=8.04,P＜0.001);研究组Fib含量[(179.9±6.7)mg/袋]显著高于对照组Fib含量[(170.2±8.3)mg/袋],差异亦有统计学意义(t=7.72,P＜0.01).结论 对离心法制备冷沉淀凝血因子过程中影响因素加以严格控制,可减少FⅧ与Fib含量的损失.
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储存的血小板中血小板微粒的获取及其止凝血功能研究
目的 从储存的手工浓缩血小板中获得具有止血功能的血小板微粒(PMP).方法 流式细胞仪检测常规储存1、3、5、7、9、11d浓缩血小板中PMP的含量;2 500 g离心30 min处理浓缩血小板,下层血小板沉淀用于检测离心剪切力对血小板CD62p及磷脂酰丝氨酸(PS)表达的影响,上层液离心获得PMP,流式细胞术及荧光底物法等分析评价所获取PMP颗粒的理化性质和生理功能,包括颗粒大小、表面蛋白受体和PS、凝血酶生成能力.结果 常规储存9d的浓缩血小板中PMP含量(2.51±0.47)％较储存1d的(1.79±0.29)％明显增加(P＜0.05);离心剪切力对储存＞8d的血小板CD62p及PS的表达无明显影响;离心获得储存9d浓缩血小板中的PMP直径为(619.81±196.15)nm,表面合有GP Ⅰ b(CD42b)、GPⅡb-Ⅲa(CD41/CD61)、P-选择素(CD62p)及PS;凝血酶生成试验证实PMP促进凝血酶生成的能力:总蛋白含量分别为0.1、0.4、0.8 mg/mL的PMP溶液对应的TTP值(min)分别为68.4±4.6、45.8±2.7、38.8±3.4,均明显低于对照组80.0±2.8(P＜0.05).结论 储存9d的浓缩血小板释放的PMP明显增加;通过离心方法可直接获这一储存时间段的PMP;所获得的PMP表面保留了与止凝血功能相关的糖蛋白和PS,初步表现出止血功能.
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密度梯度离心法分离和纯化视网膜色素上皮细胞
目的观察密度梯度离心法分离、纯化原代及传代视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞的效果. 方法将原代及传代后仍有成纤维细胞污染的人RPE细胞分别各分为实验组和对照组,实验组用聚蔗糖(ficoll)-泛影葡胺(ficoll hypaque, F/H )(d=1.077 g/ml)进行等密度梯度离心分离,对照组用常规离心分离纯化,0.4%台盼蓝拒染活细胞计数;抗人细胞角蛋白(cytokeratin,CK)间接免疫荧光染色,流式细胞术分析;荧光显微镜观察细胞形态;观察细胞的生长状态和初步克隆形成率;共聚焦显微镜观察细胞纯化结果及其生长状态. 结果实验组细胞存活率均高于对照组(P＜0.001),但是细胞数量减少;流式细胞术分析结果显示实验组CK阳性细胞率高于对照组(P＜0.001); ficoll 离心组涂片细胞呈圆形,边界清晰,荧光染色均匀,活力好;实验组RPE细胞形态较均一,贴壁时间短,进入分裂期快,初步细胞克隆形成率高于对照组(P＜0.001);爬片生长的RPE细胞CK阳性细胞率两组组间比较差异有显著性的意义(P均<0.001). 结论 ficoll密度梯度离心法分离的RPE细胞形态均一,生长一致性好,进入细胞倍增期时间短,细胞活力保持好;细胞纯化效果较好.
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应用磁珠分离和荧光显色法对单克隆抗体干板检测HLA-B27的方法改进
美国莱姆德公司(One lambda,Inc)的单克隆抗体干板法,是目前检测HLA-B27常用方法,其中淋巴细胞的分离普遍采用淋巴细胞分离液离心法分离,染料一般为1～4 g/dl的曙红或2 g/dl的胎盘蓝溶液,我们在没有相差倒置显微镜的情况下,应用国内王厚照等的改进方法[1]进行检测,发现仍存在着不少缺点.今年来,我们利用开展单克隆抗体干板法(莱姆德公司)进行HLA组织配型的有利条件,将其中的免疫磁珠分离技术和荧光显色技术,应用到HLA-B27检测上,取得满意的效果,现报告如下:
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自然沉淀法与离心法在自体脂肪移植隆乳术中的应用效果对比研究
目的:观察不同脂肪处理纯化方法在自体脂肪移植隆乳术中的应用效果.方法:选取2015年3月-2018年3月在笔者医院接受自体脂肪移植隆乳的就医者为研究对象,并根据其脂肪处理纯化方法的不同分为自然沉淀组和离心组.观察两组就医者治疗满意率、并发症发生率,比较两组就医者移植前后乳房胸围和体积的差异.结果:术前两组就医者胸围和乳房体积比较,差异无统计学意义(P＞0.05).术后两组就医者胸围和乳房体积均较手术前增大,但两组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).两组就医者囊肿、肿块和脂肪坏死等并发症发生率比较差异无统计学意义(x2=0.910,P=0.340);两组就医者治疗满意率分别为96.00％和97.78％,差异无统计学意义(x2=0.245,P=0.621).结论:自然沉淀法与离心法用于自体脂肪移植隆乳的美容效果相当,可明显改善就医者的胸围和乳房体积,且无明显并发症发生,具有良好的应用价值.
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几种微生物限度检查方法的比较
目的 比较了几种微生物限度检查方法.方法 按中国药典2005年版微生物限度检查法进行试验.结果 通过对各方法进行实验比对及其操作的简便性得出优先采用的顺序:常规法＞培养基稀释法＞高速离心集菌法＞静置上清液法＞低速离心集菌法或低速离心集菌结合薄膜过滤法＞低速结合高速离心集菌法.结论 此顺序对开展微生物限度检查尤其是对有抑菌作用的药品微生物限度检查有一定的参考价值.
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拨云锭控制菌检查的实验方法研究
采用常规法、离心法、离心-薄膜过滤法对拨云锭控制菌检查方法进行了考察。实验结果表明：常规法和离心法都不能同时检出控制菌。离心-薄膜过滤法能完全消除该药品的抑菌作用，但又有污染菌丢失的可能，宜因控制菌的不同而采用不同的处理方法来消除抑菌作用。
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过滤法取代离心法分离血浆探讨
我国采用传统的酒精沉淀离心机分离法,自血浆中可分离白蛋白约20～22g/L,生产周期为6～7d.为了缩短生产周期,节省人力,提高白蛋白收量,保证产品质量,有些血液制品生产单位引进压滤机,压滤法可使白蛋白收量提高到24～25g/L.
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PEG6000沉淀结合差速离心方法浓缩水中脊髓灰质炎病毒
目的建立一种简便、有效的从细胞培养物中纯化PV1病毒的方法用于水病毒消毒实验. 方法 PV 1 Henan株在Hep-2细胞中增殖后用聚乙二醇(PEG)6000沉淀结合差速离心的方法纯化病毒. RT-PCR和透射电镜(TEM)鉴定提纯病毒的形态学和分子生物学特性. 结果 pH值7.5时终浓度70 g.L-1的PEG 6000沉淀病毒的感染性回收率(PFU计数)为79.2%,提纯系数(PF)为106,再经差速离心(16 000 g 30 min,100 000 g 4.5 h)浓缩病毒的感染性回性率和提纯系数分别为29.0%和168. RT-PCR和TEM终鉴定提纯物为PV 1 Henan株. 结论 PEG 6000结合差速离心的方法较之蔗糖密度梯度区带离心方法易于操作,且比单独PEG沉淀有更高的纯化系数,是一种简便、有效的方法.
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浓集脑脊液中细菌的方法学研究
目的: 探讨浓集急性细菌性脑膜炎患者脑脊液中细菌的方法.方法: 采用高速离心法浓集脑脊液中的细菌.将肺炎链球菌,脑膜炎双球菌,流感嗜血杆菌分别加入到蛋白含量不同及白细胞数不同的脑脊液中,在不同离心力下离心,比较脑脊液中蛋白含量及白细胞数量对离心力的影响.将离心后的上清液和沉淀分别进行培养及细菌涂片,根据培养皿中菌落形成数对细菌计数.在显微镜下观察离心前后细菌的形态变化.结果: 离心力为5753 g,离心15 min时,肺炎链球菌,脑膜炎双球菌,流感嗜血杆菌均达到佳浓集效果;随着脑脊液中蛋白含量的升高,浓集细菌所需离心力也相应增加;白细胞数量不同时,细菌浓集量之间的差异无统计学意义(P＞0.05);离心力低于或等于5753g的情况下,离心前后细菌的镜下形态保持不变.离心力大于5753 g时,培养结果阴性,镜下未见完整细菌形态.结论: 离心不能使浓度低于102/mL的细菌浓集,但采用离心法能使脑脊液中浓度大于等于102/mL的细菌浓集,为临床早期诊断和针对性的治疗提供及时准确的实验室依据.
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人力短臂离心机锻炼后心率变异性的改变
目的: 观察经人力短臂离心机锻炼后心率变异性(HRV)参数的变化. 方法: 选取8名健康男性志愿者进行了连续7 d的人力离心机锻炼,每天锻炼时间为20 min,分别于锻炼前、锻炼3次和7次后,各记录静息心电一次,每次记录的时间为20 min,然后利用计算机分析得到HRV的各项指标. 结果: 与锻炼前相比,锻炼3次和7次后受试者心电的HRV高频成分(HF)能量显著增加(P<0.05),低频成分(LF)能量显著降低(P<0.05),低频成分与高频成分之比(LF/HF)显著降低(P<0.05). 结论: 通过对心率变异性指标的分析,证明人力短臂离心机锻炼可明显改善心血管系统的调节能力,增强心脏的泵血功能.
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兔骨髓间充质干细胞的分离、培养与鉴定
目的 优化获取兔骨髓间充质干细胞并对其进行纯化、鉴定,同时对其生物学性状进行研究.方法 取新生新西兰大耳白兔骨髓5.0 mL,采用密度梯度离心法、贴壁筛选法并结合传代对其进行纯化,观察细胞形态、超微结构和表面标志物的表达,从而对其进行鉴定.观察第1、3、5、8、10代细胞的增殖情况,并绘制出生长曲线.结果 经密度梯度离心、贴壁筛选并结合传代所得到的间充质干细胞很纯,第3代和第5代细胞形态单一,细胞排列具有典型的漩涡状结构.第1、3、5代细胞增殖能力强,生长旺盛;而第8、10代细胞增殖明显减弱.所分离培养的细胞表达CD44、CD90,不表达CD34,电镜观察为低分化细胞.结论 分离培养的细胞为间充质干细胞且成分单一,具有干细胞特性,第3、5代细胞很纯且其增殖能力强,适用于做以后的研究.
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不同制备方式对冷沉淀质量的影响
目的：通过检测不同方式所制备冷沉淀的各项指标，探讨适合的制备方法。方法：抽取Ⅷ因子含量和纤维蛋白原含量符合要求的新鲜冰冻血浆90袋，以三种不同方式进行制备，检测其Ⅷ因子含量和纤维蛋白原含量。结果：虹吸法合格率83.6%，离心法93.3%，制备仪100%。结论：冷沉淀凝血因子制备仪具有温度控制精准、称重温度、虹吸结束后能自动截流等特点，值得推荐。
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再次离心血清分离胶管对常规生化指标的影响
血清的分离对常规生化指标的准确性至关重要。目前，血清分离胶促凝管已广泛用于临床实验室，其中离心是用分离胶促凝管制备高质量血清样本的重要环节。我们对存放于室温的30份血清标本与存放于4℃冰箱中的30份血清标本的9项常规生化指标分别进行分析，结果表明，不管是存放于室温的血清还是存放于4℃冰箱中的血清，再次离心后，有7项生化指标与首次离心测的数值比差异显著，其中再次离心后检测结果升高的生化指标有：ALB、ALP、AST、K+、LDH和TP，再次离心后检测结果明显下降的有GLU一项。另外两项Na+和Cl－无显著变化。本文的检测结果显示，对血清分离胶管再次离心会导致部分生化指标的结果发生改变。
