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百合知母汤对抑郁症大鼠环磷酸腺苷信号通路的影响
目的:观测百合知母汤对抑郁症大鼠学习记忆功能的影响,探讨其环磷酸腺苷信号转导机制.方法:将50只SD大鼠随机分成正常对照组、模型组、氟西汀组、百合知母汤高、中剂量组5组;除正常组外,其余4组采用慢性温和不可预见刺激结合孤养制造抑郁症模型,共49 d;于第22天各组动物分别灌胃生理盐水、氟西汀及百合知母汤高、中剂量,共计28 d;于第50天采用Morris水迷宫法分别进行定位航行及空间探索实验,分别测定大鼠逃避潜伏期、穿越第4象限时间、路程、第一次穿越时间、穿越次数等;ELISA法、Western-blot、qPCR法分别测定大鼠海马组织环磷酸腺苷(cAMP)、蛋白激酶A(PKA)、cAMP反应元件结合蛋白(CREB)的含量.结果:与模型组比较,百合知母汤高、中剂量组大鼠逃避潜伏期、穿越第4象限时间路程、第一次穿越时间均降低,穿越次数升高(P＜0.05,0.01);海马cAMP、PKA、CREB的含量提高(P＜0.05,0.01).结论:百合知母汤能改善抑郁症大鼠学习记忆功能,其机制可能与激活cAMP-PKA-CREB信号转导通路有关.
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钙超载对PC12细胞活性及p-CREB表达的影响
目的:探讨氯化钾(KC1)所致大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12)内钙超载对其细胞活性及磷酸化cAMP反应原件绑定蛋白(p-CREB)表达的影响.方法:将PC12细胞随机分为对照组与干预组,对照组不作任何药物干预,干预组予以KCl 100mmol/L干预10min.用MTT法检测两组细胞活性,应用Western blot检测PC12细胞内蛋白激酶A(PKA)活性及p-CREB的表达.结果:MTT法检测细胞活性,KCl组较对照组细胞活性下降,有统计学意义(P＜0.05);应用Western blots检测,KCl组PKA活性较对照组明显降低;KCl组p-CREB表达较对照组明显降低.结论:KCl所致钙超载对PC12活性有明显的毒性作用,降低PKA的活性,减少CREB的激活.
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VASP磷酸化对PDGF-BB诱导细胞迁移的影响
目的:探讨血管扩张刺激磷蛋白(VASP)对血小板源性生长因子B(PDGF-BB)诱导的细胞迁移的影响及其机制.方法:通过细胞划痕损伤实验检测ECV304细胞迁移速度,用非放射性酶法检测该细胞中蛋白激酶A(PKA) 的活性,用Western blot检测细胞中磷酸化VASP(P-VASP)表达的变化.结果:经PDGF-BB作用后,ECV304细胞向划痕内迁移的距离较对照组明显增加(P＜0.05),胞内PKA活性明显增加(P＜0.05),细胞内磷酸化VASP的表达显著增强(P＜0.05);而预先给予PKA抑制剂H89 处理能显著地抑制PDGF-BB介导的ECV304的迁移效应(P＜0.01),明显降低PDGF引起的胞内PKA活性升高(P＜0.01),抑制PDGF-BB对VASP的磷酸化作用(P＜0.05).结论:PDGF-BB通过PKA信号传导通路,使其下游底物VASP磷酸化,磷酸化的VASP介导细胞移动.
关键词： 血管扩张刺激磷蛋白 蛋白激酶A 血小板源性生长因子B 细胞迁移 ECV304 -
苦参碱对HeLa细胞粘附和移动的抑制作用及机制
目的:探讨苦参碱(Matrine)抑制HeLa细胞粘附和移动的作用及机制.方法:不同浓度苦参碱作用HeLa细胞24 h后,粘附实验检测细胞粘附率,划痕损伤实验检测迁移速度,Western blotting检测血管扩张刺激磷蛋白(VASP)磷酸化水平,PKA试剂盒检测蛋白激酶A(PKA)活性.结果:5,50,100,250和500 μg/ml苦参碱处理24 h后, HeLa细胞粘附率分别为74.68%,48.97%,45.66%,40.68%和32.61%,总体呈下降趋势,50 μg/ml组分别与5 μg/ml和500 μg/ml组比较差异有显著性(均为P＜0.01);与100 μg/ml和250 μg/ml组比较差异无显著性(P＞0.05).50 μg/ml苦参碱处理24 h后HeLa细胞迁移速度明显降低(P＜0.01),PKA活性明显降低(P＜0.01), VASP处于非磷酸化状态.结论:苦参碱抑制HeLa细胞粘附和运动,并降低其PKA活性及抑制骨架调节蛋白VASP磷酸化,发挥了抑制肿瘤转移作用.
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钙调蛋白激酶Ⅱ和蛋白激酶A信号转导通路在儿茶酚胺敏感性室性心动过速中的作用
目的 研究钙调蛋白激酶Ⅱ和蛋白激酶A信号转导通路在儿茶酚胺敏感性室性心动过速中的作用.方法 日本长耳白兔随机分成正常对照组、模型组、KN93组以及H89组.制备兔左室楔形心肌块灌流模型,正常组灌流蒂罗德液,模型组灌流咖啡因和异丙肾上腺素,KN93组在灌流咖啡因与异丙肾上腺素的基础上加灌KN93,H89组同样在灌流咖啡因与异丙肾上腺素的基础上加灌H89.观察通过程序性刺激后触发活动和室性心律失常的诱发情况.结果 对照组触发活动和室性心律失常的诱发率为0.通过灌流咖啡因与异丙肾上腺素以后,QT间期明显缩短,模型组触发活动的诱发率为12/13,室性心律失常的发生率为8/13;而灌流KN93和H89后触发活动分别减少至4/9和6/11,室性心律失常减少到1/9和2/11.钙调蛋白激酶Ⅱ抑制剂和蛋白激酶A抑制剂可以减少药物灌流儿茶酚胺敏感性室速模型的触发活动和室性心律失常的发生.结论 儿茶酚胺敏感性室性心动过速的发生跟钙调蛋白激酶Ⅱ和蛋白激酶A信号转导通路密切相关.该信号通路有望成为儿茶酚胺敏感性室性心动过速的治疗靶点.
关键词： 儿茶酚胺敏感性室性心动过速 钙调蛋白激酶Ⅱ 蛋白激酶A -
IL-1β和IL-6致痫对大鼠脑内PKAcβ的影响
目的 研究白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)致痫与脑内信号分子protein kinase Acβ(PKAcβ)的关系.方法 将实验大鼠随机分为4组:生理盐水组、IL-1β组、IL-6组、地塞米松组.行侧脑室注射相应试剂60 min后观察大鼠行为学变化,并用SABC法显示各组大鼠大脑皮质及海马区PKAcβ的免疫反应变化.结果 IL-1β组、IL-6组大鼠均有明显的痫性发作,且海马PKAcβ的免疫反应均明显强于对照组,差异具有显著性意义(P＜0.05);地塞米松组大鼠呈抑制状态,且其脑内PKAcβ表达较对照组下降,差异有显著性意义(P＜0.05).结论 在IL-1β、IL-6的致痫活动中,PKAcβ参与了其细胞内信号转导过程.
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慢性复合应激对大鼠学习和记忆功能及海马内PKA-Cβ表达的影响
目的研究慢性复合应激对成年雄性大鼠学习记忆功能和海马内蛋白激酶A(PKA-Cβ)表达的影响. 方法将成年雄性Wistar大鼠随机分为对照组和应激组,应激组动物每天交替暴露于复合应激原中达6周,并测定应激第3周和第6周时两组动物的血清皮质酮水平.应激结束后,用Morris水迷宫和Y-迷宫测试大鼠空间学习记忆成绩,并采用免疫组织化学方法分析海马各亚区PKA-Cβ的表达.结果应激组大鼠的血清皮质酮水平在第3周明显高于对照组,但在第6周两组差别不明显.在Morris水迷宫测试中,应激组动物寻找隐蔽平台的潜伏期明显短于对照组;Y-迷宫测试中,应激组动物寻找安全区的正确率也显著高于对照组.应激组大鼠的海马CA1和CA3区PKA-Cβ的表达水平较对照组明显上调,而齿状回(DG)内PKA-Cβ的表达在两组中无明显差别.结论慢性复合应激可增强大鼠海马依赖的学习记忆能力,PKA可能参与了其增强机制.
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PKA对跨膜型与分泌型TNF-α诱导中性粒细胞功能的影响
为研究PKA(蛋白激酶A)对跨膜型TNF-α(TM-TNF-α)与分泌型TNF-α(S-TNF-α)诱导中性粒细胞呼吸爆发的影响,采用放免法及化学发光法观察两型TNF-α及联合应用腺苷酸环化酶激活剂在体外对中性粒细胞呼吸爆发及环磷酸腺苷(cAMP)水平的影响.结果显示S-TNF-α可明显诱导中性粒细胞呼吸爆发,同时使其cAMP水平降低(P＜0.05);但TM-TNF-α却对之无明显影响.腺苷酸环化酶激活剂Foskorlin(50μmol/L)可明显提高中性粒细胞的cAMP水平(P＜0.01),使S-TNF-a对中性粒细胞呼吸爆发的促进作用受到约15%的抑制(P＜0.05),但对TM-TNF-α的作用无影响.提示PKA途径参与S-TNF-α诱导的中性粒细胞呼吸爆发的信号传导,而TM-TNF-α与之无关.
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慢性吗啡依赖大鼠条件性位置厌恶模型脑腹侧被盖区蛋白激酶A的表达变化
目的 分析慢性吗啡依赖大鼠条件性位置厌恶(conditioned place aversion,CPA)模型脑腹侧被盖区(ventral tegmental area,VTA)蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)蛋白表达的适应性变化,探讨阿片依赖戒断后厌恶动机形成的生物学基础.方法 ①将72只雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠分为研究组(慢性吗啡注射+纳洛酮催瘾组,MN组),对照组(慢性吗啡注射+生理盐水组,MS组;慢性生理盐水注射+纳洛酮组,SN组),每组24只.采用慢性吗啡腹腔注射(10 mg/kg,Bid,ip.)后予1次纳洛酮(0.3 mg/kg)催瘾注射,同时与条件性位置训练箱搭配使用建立大鼠CPA模型.②在CPA建立前后,采用免疫组织化学方法检测VTA内PKA蛋白表达情况.结果 CPA建立前,MN组PKA蛋白表达水平与对照组(MS组和SN组)比较差异无统计学意义(F=0.013,P=0.987).CPA建立后,3组PKA蛋白表达水平比较差异有统计学意义(F=9.853,P=0.018),MN组灰度值(127.500±3.536)显著低于MS组[(140.500±3.697),P＜0.05]和SN组[(138.000±2.944),P＜0.05].结论 ①VTA内PKA蛋白高表达,可能是CPA建立的神经机制之一.②VTA内PKA的适应性变化可能是物质依赖戒断后CPA相关神经可塑性变化的重要分子基础之一.
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分析精液蛋白激酶A与男性不育患者精液参数及精子形态的关系
目的:分析精液蛋白激酶A含量与男性不育患者精液主要参数及精子形态的关系.方法:留取男性不育患者精液标本300份,行精液常规分析、精液蛋白激酶A含量(PKA)及精液形态检测,记录精子密度、精子活力、PKA含量和精子形态.根据精子活力将患者分为活力正常组、轻度弱精组和重度弱精组;另按精子形态将患者分为正常形态组和异常形态组,比较各组PKA含量差异.结果:与活力正常组相比,轻度弱精组和重度弱精组PKA含量明显降低,差异具有统计学意义(P＜0.05).与正常形态组相比,异常形态组PKA含量显著降低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:PKA含量与精子活力关系密切,并影响精子形态.
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cAMP促进成年哺乳动物中枢神经系统再生分子机制的研究进展
近年来神经科学工作者对cAMP促进成年哺乳动物中枢神经系统(cNS)神经再生的分子机制进行了大量的研究,结果表明cAMP通过激活其下游分子PKA、Epac、提高IL-6的水平、磷酸化RhoA以及与ca2+通路相互作用等机制促进CNS再生.本文对cAMP促进CNS再生机制的研究进展进行综述,并探究有效提高神经元内cAMP水平的策略.
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cAMP-PKA信号通路与轴突再生
成年哺乳动物中枢神经系统损伤后轴突不能有效再生是造成功能障碍的主要原因.近年来的研究发现环腺苷酸(cAMP)及其类似物能够促进轴突有效再生,与以下机制有关:cAMP激活蛋白激酶A(PKA),能够拮抗Rho A对轴突再生的抑制作用,而RhoA信号途径是多种神经生长抑制因子抑制轴突再生的共同通路.激活的PKA又激活转录因子-cAMP效应元件结合蛋白,使多胺合成增加,克服了髓鞘相关抑制因子对轴突再生的抑制作用,从而促进轴突再生.还有实验证实cAMP-PKA信号通路参与了神经营养因子促进神经再生的作用,也参与了对生长锥导向的调节.
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SLE患者T细胞PKA活性及患者血清因子对PKA活性的影响
目的研究SLE患者T细胞功能异常是否与T细胞CA/cAMP/PKA信号转导途径存在异常有关,探讨SLE的发病机理.方法用尼龙柱分离肝素化的静脉血得到T细胞悬液,用流式细胞术测定CD3阳性细胞90%以上,用CD3单抗与羊抗鼠二抗IgG相交联和rIL-1α共同刺激T细胞24h,用RT-PCR检测IL-2和IL-2RmRNA的表达,证实T细胞是否活化.用PKA检测试剂盒检测T细胞PKA总体活性变化,用SLE血清或含不同浓度IFN-α的完全培养基和正常人T细胞培养24h,用上述方法激活T细胞,分别测量T细胞PKA的总体活性.结果 SLE患者T细胞活化后PKA总体活性是下降的,SLE患者血清免疫复合物及不同浓度的IFN-α均不能使正常人T细胞的PKA总体活性下降.结论 SLE患者T细胞CA/cAMP/PKA信号传导途径存在异常,SLE患者T细胞功能异常可能是因细胞内生物化学信号途径异常所致.
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Aβ诱发细胞钙失衡中蛋白激酶A的表达变化及二苯乙烯苷的影响
目的 探讨β-淀粉样肽(Aβ)诱发的细胞内钙失衡机制中蛋白激酶A(PKA)的作用及二苯乙烯苷的干预效果.方法 在立体定向仪下大鼠海马部位注射Aβ 1-42造AD模型,大鼠随机分为对照组、手术组、模型组、二苯乙烯苷(TSG)组;免疫荧光法检测的胞内钙离子,在激光扫描共聚焦显微镜观察;磷基转移法测定细胞膜和胞浆的PKA活性,免疫印迹法检测PKA蛋白表达.结果 与对照组比较,模型大鼠细胞内钙离子浓度增高;PKA活性及表达均明显增高,差异有显著性;与模型组相比,二苯乙烯苷干预后,细胞内钙离子降低,PKA活性及表达均下降,差异有显著性.结论 Aβ神经毒性作用引起的细胞内钙失衡机制涉及PKA活化后促进钙内流,并以细胞膜相活化更明显;二苯乙烯苷通过抑制PKA活化及表达,以纠正细胞内的钙超载.
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激活蛋白激酶A信号通路对甲状腺鳞癌SW579细胞株的生长抑制作用
目的 探讨蛋白激酶A(protein kinaseA,PKA)信号通路对甲状腺鳞癌SW579细胞株的生长抑制作用及机制.方法 利用PKA特异性激活剂双丁酰环化腺苷酸(dbcAMP )0.5、1.0和2.0 mmol/L作用于甲状腺鳞癌SW579细胞24、48和72h后用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT法)检测SW579细胞的生长活性；酶联免疫吸附法(ELISA法)检测经dbcAMP 1.0 mmol/L作用48 h后PKA、成熟促进因子(message processing factor,MPF)的活性；免疫印迹法(Western blotting法)检测经dbcAMP 1.0 mmol/L作用48 h CDC25B-pS323 (celldivision cycle 25B-pS323磷酸化水平.结果 MTT法结果显示,在dbcAMP作用下,SW579细胞活力呈逐渐下降趋势,随dbcAMP剂量的增加和作用时间的延长,其作用越明显.ELISA法显示,dbcAMP使PKA活性升高而使MPF活性下降.未加dbcAMP组PKA、MPF活性分别为(32.5±2.49 )nmol/L和(115.5±7.53)ng/L;dbcAMP组PKA、MPF活性分别为(436.33±12.85 )nmol/L和(22.87±2.57)ng/L,两组间比较差异有统计学意义(P＜0.01).、Western blotting显示,dbcAMP能够使CDC25B-pS323磷酸化水平上调.未加dbcAMP组和dbcAMP组比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论 利用dbcAMP激活PKA信号通路,可以抑制甲状腺鳞癌SW579细胞生长增殖,其抑制作用可能与PKA/CDC25B/MPF信号通路的调控有关.
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人体甲状腺癌组织中蛋白激酶C和蛋白激酶A活性水平的测定
目的研究蛋白激酶C(protein KinaseC,PKC)和蛋白激酶A(protein kinaseA,PKA)在甲状腺癌发生过程中的作用.方法利用酶的放射分析方法测定手术切除经病理证实的18例甲状腺癌患者和17例甲状腺癌患者手术切除的肿瘤组织中PKC和PKA活性水平.结果甲状腺癌组织中胞膜和胞浆PKC活性分别为7.280±2.380和7.397±4.065,PKA活性水平为1.716±0.923.甲状腺癌组织中胞膜和胞浆PKC活性分别为0.515±0.676和0.347±0.332,PKA活性水平为0.646±0.324.胞浆部分PKC与PKA活性比值:甲状腺癌组织为4.3;甲状腺癌组织为0.53.结论PKC与PKA均参入甲状腺癌细胞的增殖过程.
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Ach对人胃腺癌细胞内蛋白激酶A及cAMP的影响
目的:探讨乙酰胆碱(Ach)对人胃腺癌细胞内蛋白激酶A(PKA)及环一磷酸腺苷(cAMP)水平的影响.方法:将Ach作用于体外培养的人胃腺癌细胞,利用酶免疫分析法测定癌细胞内PKA活性和cAMP的浓度.结果:10μmol/L Ach使胃腺癌细胞内cAMP水平和PKA活性显著高于空白对照组,该作用可被阿托品(atropine)阻断.结论:Ach对胃腺癌细胞的增殖分化具有一定的调控作用,这种作用是通过毒蕈碱受体实现的.
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激活环磷酸腺苷/蛋白激酶信号对药物诱导足细胞损伤的影响
目的 研究激活环磷酸腺苷(cAMP)信号对药物诱导的足细胞损伤的影响.方法 8周龄雄性BalB/C小鼠被随机分为对照组、阿霉素(ADR)组和腺苷酸环化酶激动剂(Forskolin) +ADR组,采用ADR尾静脉注射的方法制备肾病模型,Forskolin+ADR组小鼠给予腹腔内注射Forskolin.用免疫荧光激光共聚焦法检测小鼠肾组织环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)磷酸化水平,透射电子显微镜观察足细胞形态改变,免疫组织化学法检测肾小球WT-1的表达.分别用嘌呤霉素氨基核苷(PAN),环磷酸腺苷直接激活的交换蛋白(Epac)信号激动剂8-pCPT-2-O-Me-cAMP (2Me),蛋白激酶A(PKA)信号激动剂pCPT-cAMP(pCPT)及其阻断剂H89处理条件永生化的足细胞,Western印迹法检测足细胞Epac、caspase 3及cleavedcaspase 3的表达水平,蛋白激酶检测系统检测足细胞PKA活性,CCK-8试剂盒法检测足细胞毒性,TUNEL法检测足细胞凋亡,JC-1染色法检测线粒体膜电位.结果 (1)与ADR组比较,Forskolin+ADR组小鼠尿白蛋白排泄量减少(P＜0.05),肾小球WT-1阳性细胞数增加(P＜0.05).(2)PAN刺激可致足细胞数量减少,作用呈时间依赖性(均P＜0.05);pCPT可减轻PAN诱导的足细胞数量减少(P＜ 0.05);PKA信号抑制剂H89有阻断pCPT的作用,并呈剂量依赖性(均P＜ 0.05).(3)对照组,PAN组和pCPT+PAN组绿色荧光细胞数所占比率分别是(12.67±2.15)％,(31.35±4.60)％和(16.96±2.51)％,P＜ 0.05.H89预处理有阻断pCPT的作用(P＜0.05).(4)PAN刺激足细胞凋亡细胞数和cleaved caspase3表达水平较对照组显著升高(均P＜0.05),pCPT预处理后足细胞凋亡细胞数和cleaved caspase3表达水平较PAN组显著下降(均P＜ 0.05).结论 激活cAMP信号可减轻ADR肾病小鼠足细胞损伤及PAN诱导的足细胞凋亡,cAMP/PKA信号通路可能介导了cAMP对药物诱导足细胞损伤的保护作用.
关键词： 足细胞 凋亡 环磷酸腺苷 蛋白激酶A 环磷酸腺苷直接激活的交换蛋白 -
癫痫持续状态对发育期大鼠认知功能的影响及cAMP/PKA信号通路所起作用
目的 探讨癫痫持续状态(SE)对发育期大鼠认知功能的影响及环磷酸腺苷/蛋白激酶A(cAMP/PKA)信号转导通路在其中所起的作用.方法 SD大鼠32只按照完全随机数字表法分为SE组、生理盐水(NS)组,每组16只.戊四氮(PTZ)诱导大鼠SE,Morris水迷宫和Y迷宫实验观察大鼠学习记忆功能的改变,放射免疫分析法测定海马组织cAMP的含量,免疫组织化学方法检测海马各区PKA的表达.结果 SE组大鼠在Morris水迷宫中平均逃避潜伏期延长,原平台所在象限的游泳时间缩短,与NS组比较差异有统计学意义(P<0.05).在Y迷宫中达标所需的训练次数增多,24 h记忆保持率下降,与NS组比较差异有统计学意义(P<0.05).NS组大鼠海马cAMP的含量为(280.38±22.66)pmol/g,SE组为(147.25±16.83)pmol/g,差异有统计学意义(P<0.05).SE组CA3区和CA1区PKA的表达较NS组明显减少.结论 SE可以导致发育期大鼠认知功能障碍,其机制可能与cAMP/PKA信号转导通路的功能受损有关.
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PKA信号通路参与高糖介导的THP-1细胞G6PD活性改变及呼吸爆发功能障碍
目的 观察高糖环境下THP-1细胞葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)活性及呼吸爆发功能改变及其可能信号通路.方法 利用蛋白激酶A(PKA)特异性抑制剂PKI和PKA激动剂Forskolin预处理不同浓度葡萄糖培养的THP-1细胞,检测不同处理组的G6PD活性、腺苷酸环化酶(cAMP)含量、ROS产量及磷酸化p47phox的表达变化.结果 与正常对照组相比,高糖组及PKA激动组的G6PD活性、ROS产量及磷酸化p47phox的表达减少,cAMP含量明显增加(P＜001).PKA抑制组的G6PD活性、cAMP含量及磷酸化p47phox的表达未见明显变化,与正常对照组相比无明显差异(P＞0.01).结论 高糖通过激活cAMP-PKA信号通路来抑制G6PD活性,从而影响THP-1细胞的NADPH氧化酶(NOX)的激活,引起呼吸爆发功能障碍,为糖尿病患者白细胞功能低下,抗感染能力降低的可能机制之一.
