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产前诊断技术的研究进展
产前诊断是优生优育和预防缺陷儿出生的重要手段.它是在遗传咨询的基础上,应用现代生物学、生物化学、免疫遗传学、细胞遗传学、分子遗传学等技术,通过母体检查或对胚胎(胎儿)直接检测,了解胎儿在子宫内的生长发育状况,诊断胎儿是否有遗传缺陷及先天畸形.本文就各种产前诊断方法、新技术、存在的不足与困难、以及发展前景综述如下.
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染色体结构异常携带者精子非平衡染色体分析
随着生殖医学和荧光原位杂交技术的发展,染色体异常越来越受到重视.染色体异常导致少弱精或者无精,以及遗传物质异常的精子数量增多,从而降低男性携带者的生育力,影响辅助生育治疗的结局.不同类型的染色体异常生殖细胞进行减数分裂时,形成正常配子的比例不同.本文应用荧光原位杂交( FISH)技术对1例臂间倒位携带者和2例罗氏易位携带者的精子非平衡染色体进行检测,了解其发生情况.
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人精子荧光原位杂交技术与男性不育
研究人类精子染色体非整倍体是当今生殖医学领域的又一热点.早在1978年人们就用去透明带的仓鼠卵做精子穿透试验,进行精子非整倍体的研究,此项研究方法学复杂,不适合大样本量研究.近十年来应用荧光原位杂交(fluores-cence in situ hybridization,FISH)技术可以对成千上万条精子进行检测,大大促进了精子非整倍体的研究.这项技术已用于许多男性不育的非整倍体率的研究.初的研究使用单色探针,其缺陷是不能区分精子染色体二体和二倍体.双色FISH就可鉴别二体和二倍体精子,近来的研究采用多色FISH,同时对精子的多条染色体进行非整倍体的研究,能够更全面地了解非整倍体率与男性不育的关系.
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FISH技术应用于石蜡切片的操作质控要素
荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)技术是根据碱基互补的原则,通过荧光标记的DNA探针与细胞核内待检测的DNA靶序列结合,在荧光显微镜下显示出DNA靶序列杂交信号的一种技术[1].已广泛应用于淋巴瘤、软组织肿瘤、尿路上皮癌等肿瘤的辅助诊断,是乳腺癌、肺癌等肿瘤选择靶向药物的重要检测方法.但该技术的操作相对复杂,易受各种因素影响质量,价格相对昂贵,所以做好一张高质量的FISH片以保证检测结果的准确性,质控显得尤为重要.FISH的主要操作包括:预处理(修复)、酶消化、变性、杂交、洗涤、复染.现根据作者的经验简要概括总结FISH技术操作的各环节质控体会.
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荧光原位杂交技术在儿童急性髓系白血病诊断中的作用
本研究探讨荧光原位杂交技术( FISH)在儿童急性髓系白血病(AML)临床诊断中的作用.对2005年4月至2010年4月于我院就诊的179例儿童AML的临床实验室检查资料进行回顾性分析,分析FISH法与染色体核型分析(CA)、聚合酶链反应(PCR)检测手段对融合基因检测结果的差异性和互补性.结果表明:FISH对细胞遗传学异常的检出率较高,27例AML-M3应用探针检测PML/RARα融合基因,22例为阳性;24例AML-M2b应用探针检测AML1/ ETO融合基因,24例均为阳性;3例AML-M4Eo应用探针检测CBFβ/MYH11融合基因,3例均阳性.结论:FISH法检测儿童AML中融合基因阳性率较高,并且与常规染色体核型分析和PCR检测具有较好的一致性.FISH与传统的细胞遗传学和分子生物学技术相结合,能够使遗传学异常的检测更准确,在儿童AML的诊断和分型中具有值得推广的临床价值.
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利用FISH技术检测多发性骨髓瘤不同类型标本分子细胞遗传学异常
目的:应用荧光原位杂交(FISH)技术,以骨髓细胞涂片和骨髓活检病理组织为标本,检测多发性骨髓瘤(MM)患者分子细胞遗传学异常情况.方法:在确诊的58例初发MM患者中对48例患者取骨髓细胞进行CD138磁珠分选浆细胞后滴片、10例取骨髓制成病理组织石蜡切片,采用多个探针(d13s319、RB1、p53、1q21、IgH、IgH/FGFR3、IgH/MAF)对两种不同类型标本进行HSH检测.结果:对骨髓细胞和病理组织两种标本进行HSH检测后都出现可供分析的荧光信号,58例MM患者中,有30例检测出分子遗传学异常,总检出率为51.7% (30/58),其中d13s319缺失17例(占29.3),RB1缺失17例(占29.3),P53缺失7例(占12%),1q21扩增16例(占27.6%),IgH重排12例(20.7%),对IgH重排患者进一步检测发现IgH/FGFR3融合6例(占10.3%),IgH/MAF融合1例(占1.7%).在这30例遗传学异常患者中,仅有7例患者检出1种异常,占23.3% (7/30),其余23例患者均具有2-5种遗传学异常,占76.7% (23/30).结论:半数以上MM患者都存在染色体改变,而且大部分均为复杂畸变,利用不同类型标本进行FISH检测,可以扩大FISH的应用范围,为MM预后判断提供更多的分子细胞遗传学信息.
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荧光原位杂交技术检测BCR/ABL融合基因的临床应用
本研究探讨应用荧光原位杂交技术( FISH)检测BCR/ABL融合基因在临床中的应用价值.对初诊考虑为慢性骨髓增殖性疾病或骨髓增生异常/骨髓增殖性疾病的患者、急性淋巴细胞白血病患者及异基因造血干细胞移植后的慢性髓系白血病(CML)患者,行骨髓细胞学检查并用FISH法检测BCR/ABL融合基因.结果表明:①46例在初诊时考虑为慢性骨髓增殖性疾病或骨髓增生异常/骨髓增殖性疾病的患者中,有22例患者诊断为CML,应用FISH法检测BCR/ABL融合基因均为阳性(100%),骨髓细胞学检查显示CML者占86.4% (19/22);另24例患者诊断为非CML的慢性骨髓增殖性疾病及骨髓增生异常/骨髓增殖性疾病,FISH法检测BCR/ABL融合基因均为阴性(100%),而骨髓细胞学检查有3例支持CML诊断、1例支持MDS诊断;②7例急性淋巴细胞白血病患者,有3例FISH法检测BCR/ABL融合基因为阳性;③2例异基因造血干细胞移植后的CML患者,应用HSH法检测BCR/ ABL融合基因可检测到阳性细胞(分别为6.5%及1.2%).结论:FISH法检测BCR/ABL融合基因敏感、可靠,对慢性骨髓增殖性疾病及骨髓增生异常/骨髓增殖性疾病的诊断及鉴别诊断有重要价值;可明确Ph+急性淋巴细胞白血病患者的诊断;在CML患者行异基因造血干细胞移植后监测微小残留病灶方面也有重要意义.
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荧光原位杂交技术在组织芯片中的应用
荧光原位杂交( FISH)是原位杂交技术的一种,不仅可以检测多个靶序列存在与否,还可以显示其存在的位置,它具有敏感度高、特异性强、无创性等优点。组织芯片技术具有体积小,信息含量大,一次性实验即可获得大量的结果,因此在建立疾病特别是肿瘤生物分子文库方面是一个强有力的工具,具有广阔的应用前景[1]。我们以检测HER2基因为例将FISH检测技术应用在组织芯片中,希望能为科研及临床工作者提供一些参考价值。
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运用荧光原位杂交技术辅助诊断胆管癌方法初探
胆管癌是指发生于胆道树各部位胆管上皮细胞恶性肿瘤,按照部位一般分为肝内胆管癌( ICC )、肝门部胆管癌(PHCC)和远端胆管癌(DBDC),分别占10%、50%和40%。依靠影像学判断良、恶性胆管狭窄较为困难,胆管癌确诊时往往已是晚期,患者生存期约有6~12个月。早期进行外科手术仍是胆管癌唯一的治愈手段,早期诊断非常重要。超声和肿瘤标志物糖类抗原19-9( CA19-9)的联合检查对于发现早期胆管癌很有帮助。如果这2项检查有可疑的发现,患者一般会被建议再行磁共振胰胆管造影( MRCP )检查和内镜逆行胰胆管造影( ERCP)。在ERCP的结果中获得狭窄处的胆管刷检和活检标本,可进行细胞学和病理检查来诊断胆管癌[1]。由于胆管癌一般是沿着胆管纵向生长而不是显著放射性生长[2],影像学横断面成像并不一定能检测到胆管癌的发生,而且刷检细胞学检查的阳性率仍很低[3]。目前仍缺乏特异、敏感的诊断标志物,因此用更加敏感可行的方法来辅助诊断胆管癌就显得更加重要。
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"三阶梯"联合荧光原位杂交技术在宫颈病变诊治中的应用
宫颈癌发病率居全球妇女恶性肿瘤第2位,2006年报道1'156万,约85%发生在发展中国家.该病近20年发病有增高及年轻化趋势,2006年世界卫生组织(Word Health Organization,WHO)在宫颈癌综合防治实践指南中指出:2005年有超过50万的宫颈癌新发病例,90%来自发展中国家;同年有约26万妇女死于宫颈癌,其中95%在发展中国家;如果不尽快采取措施,在未来10年子宫颈癌的死亡人数将上升25%[1].
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荧光原位杂交技术在尿路上皮肿瘤诊断中的作用
荧光原位杂交(FISH)技术是一种使用荧光标记的DNA探针评估细胞基因改变的技术,其依据为癌症是一种基因缺陷性疾病,大多数癌症伴有染色体的异常改变,采用FISH技术可检测到这些异常改变.目前美国食品药品管理局(FDA)已批准的通过尿液诊断膀胱癌的技术中,包括BTA、NMP22、ImmunoCyt以及FISH等,灵敏度和特异性高的是FISH.
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肽核酸荧光原位杂交技术在临床微生物快速鉴定中的应用进展
肽核酸(peptlde nucleic acid,PNA)探针荧光原位杂交技术是一种诊断新技术,既具有PNA探针杂交的高度专一性,又具备传统染色技术的简便性,可为传染性疾病提供准确的诊断信息.它适用于临床微生物实验室的常规检验,能在短时间内为临床医生提供抗生素使用依据,具有传统微生物检验技术无法比拟的优势.笔者就其在临床微生物快速鉴定领域应用作简要综述.
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荧光原位杂交技术产前诊断先天性心脏病22q11.2微缺失应用价值
目的:探讨荧光原位杂交技术(FISH)检测先天性心脏病22q11.2微缺失产前诊断的临床应用价值.方法:选择70例有高危妊娠指征的孕妇羊水细胞作为病例组,30例临床诊断指征正常、剖宫产分娩的孕妇羊水细胞作为对照组,抽取16~27w孕妇羊水细胞利用21、13染色体位点和18、X、Y染色体着丝粒及22q11.2微缺失3组探针,用FISH技术对未培养羊水细胞进行检测;同时对所有受检者的羊水细胞进行培养,行染色体核型分析.结果:70例病例组FISH检测获得诊断结果,检出10例异常结果,其中5例染色体非整倍体及5例22q11.2微缺失;同时行羊水细胞染色体核型分析,只检出5例染色体非整倍体改变;与5例染色体非整倍体改变FISH检测结果相符;而应用FISH技术检出5例22q11.2微缺失胎儿与其病例的引产前影像学检查结果、尸体解剖结果完全相符.结论:FISH技术检出22q11.2微缺失病例,可明显提高先天性心脏病产前诊断的检出率,作为重要辅助性检查项目,有其临床推广价值.
关键词: 荧光原位杂交技术 先天性心脏病 22q11.2微缺失 -
荧光原位杂交技术在异性间造血干细胞移植后Ph阳性白血病的检测意义
检测Ph染色体相应的融合基因是慢性粒细胞白血病、Ph+急性淋巴细胞白血病诊断、移植后疗效观察,甚至微小残留病灶(MRD)监测的有效指标.我们应用荧光原位杂交(FISH)技术监测性别不同的异基因造血干细胞移植(allo-HSCT) 后Ph+白血病病例融合基因及性染色体变化,探讨其在MRD监测中的价值.
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荧光原位杂交在产前诊断中与无创DNA检测的对比研究
目的 研究荧光原位杂交技术与无创DNA检测在快速诊断胎儿染色体数目异常的价值.方法 使用荧光原位杂交技术(FISH),应用特异性探针对包含5例无创DNA确诊异常病例的372例胎儿羊水细胞进行荧光原位杂交.结果 荧光原位杂交共检出染色体数目异常20例,异常率为5.4%,包括唐氏患儿14例,占全部异常数的70%,18-三体综合征3例,45,X2例,XXY1例,其中无创DNA送检的5例异常病例中有4例均为唐氏患儿,比例为80%,荧光原位杂交检测结果与羊水细胞核型分析结果相比较,在染色体数目异常方面两者符合率为95.2%(20/21).结论 FISH技术用于快速诊断羊水细胞13、18、21、X,Y染色体数目时具有较高的临床价值,但不能作为单独的方法检测染色体异常,而无创DNA检验可作为产前筛查新技术向特定孕妇推广.
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FISH技术检测宫颈组织TERC基因扩增
目的 应用荧光原位杂交技术(FISH)检测子宫颈病变组织中人端粒酶RNA (TERC)基因异常扩增的临床意义.方法 应用双色荧光原位杂交技术(FISH)检测195例宫颈组织TERC基因的异常扩增.结果 ①195例各类宫颈病变中,慢性宫颈炎33例,CIN1 34例,CIN2/3(包括原位癌)37例,宫颈鳞状细胞癌30例,宫颈腺癌61例,用FISH检测TERC基因的阳性表达率分别是3.03% (1/33)、29.41% (10/34)、72.97% (27/37)、100% (30/30)、91.80% (56/61),子宫颈鳞癌与腺癌TERC基因的表达较宫颈上皮内瘤变各组差异有统计学意义(P<0.05).TERC基因的扩增阳性率随着宫颈病变程度增加呈逐渐上升趋势,且TERC扩增在子宫颈鳞癌与腺癌患者中无明显差异性;②TERC基因异常扩增与高危型HPV感染呈正相关.结论 应用F ISH技术检测TERC基因的异常扩增可以作为组织学诊断困难的病变确诊、病变预测及治疗后风险评估的手段.
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人乳头瘤病毒感染的宫颈上皮内瘤变中的hTERC基因分析
目的 探讨人乳头瘤病毒感染的宫颈上皮内瘤变细胞中3号染色体hTERC基因扩增情况.方法 对57例病理诊断为CIN(CIN18例,CIN215例,CIN334例;其中包括HPV感染46例与无HPV感染11例)患者的液基细胞学检测剩余样本应用荧光原位杂交技术检测hTERC基因,同时以20例无HPV感染正常宫颈鳞状上皮作为对照,将结果 与病理诊断进行比较.结果 在正常宫颈鳞状上皮中,3号染色体hTERC基因主要表现为2个杂交荧光信号,宫颈病变与HPV感染的宫颈鳞状上皮中,出现了hTERC基因拷贝数增多,在CIN1~CIN3中,HPV感染率分别为12.5%、86.7%、94.1%,hTERC基因扩增的阳性率分别为25.0%、60.0%、82.3%,46例HPV感染的CIN中,hTERC基因扩增的阳性率为80.4%,而11例HPV阴性的CIN患者中,其扩增阳性率为18.2%,两组间比较,差异具有统计学意义(P<0.05).结论 3号染色体hTERC基因的扩增与HPV感染及宫颈病变程度相关,hTERC基因的扩增可能是HPV感染致端粒酶活性增加的早期事件.
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FISH技术检测宫颈hTERC基因的表达及其临床意义
目的 探讨荧光原位杂交技术检测宫颈上皮细胞hTERC基因的表达及其临床意义.方法 应用荧光原位杂交技术(FISH)检测138例宫颈脱落细胞中hTERC基因的表达情况.结果 118例各级宫颈病变中,CIN1 76例,CIN2 14例,CIN3/原位癌16例,宫颈浸润癌12例,用FISH检测hTERC基因的表达其阳性率分别是13%、64%、81%、100%,子宫颈癌hTERC基因的表达较宫颈上皮内瘤变各组差异有统计学意义(P<0.05). 结论 hTERC基因在各级宫颈病变均有一定的表达.hTERC基因的阳性表达率随着宫颈病变分级呈逐渐上升趋势.且hTERC基因在高度病变中的阳性表达率明显高于低度病变.
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多重连接探针扩增技术在胎儿染色体非整倍体快速检测中的临床应用
染色体异常是临床上通过产前诊断可以预防的常见出生缺陷,染色体异常包括染色体非整倍体异常(如三体综合征、单体综合征、嵌合体等)、染色体非平衡结构异常(包括染色体缺失、重复)等,其临床表型为智力低下、生长发育异常、器官畸形等。细胞培养后进行染色体核型分析技术是诊断染色体异常的“金标准”,但操作复杂、报告周期长、有细胞培养失败风险等。分子诊断技术包括荧光原位杂交技术(FISH)、微阵列比较基因组杂交技术(aCGH)、短串联重复序列分析和荧光定量PCR技术、多重连接探针扩增(multiplex ligation-dependent probe amplification,MLPA)技术等,在很大程度上促进了染色体异常的检测效率,其中,MLPA是2002年由荷兰学者Schouten研究建立的1种分子诊断技术,该技术结合分子杂交、连接和PCR技术半定量检测,于同一反应管内可同时检测出40个不同核苷酸序列的拷贝数变化[1]。与染色体核型分析技术相比,MLPA技术具有快速、高通量、特异度好、敏感度高的特点。本研究通过分析3651例行产前诊断的胎儿,对MLPA技术的临床应用进行评价。
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荧光原位杂交技术用于1;12染色体平衡易位携带者胚胎植入前遗传诊断一例分析
染色体异常已成为不孕、不育的主要原因之一.染色体平衡易位患者因其具有完整的遗传物质,故往往表型正常,但在生殖细胞发生减数分裂时可产生多种不平衡配子而导致反复自然流产、死胎、死产、新生儿死亡、畸形或智力低下的后代.胚胎植入前遗传诊断(preimplantatation genetic diagnosis,PGD)通过选择正常的胚胎植入,从而降低流产风险,获得健康的后代.本例应用荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization, FISH)技术,成功对1例1;12染色体平衡易位的患者进行PGD.现报道如下.