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中国广东地区汉族人群HLA-B基因多态性与IgA肾病易感性关联研究
目的 研究人类白细胞相关抗原(HLA)Ⅰ类B亚型基因多态性与我国广东地区汉族人群IgA肾病易感性的相关性.方法 使用基因克隆及聚合酶链反应.测序分型方法(PCR-SBT)对中国广东地区145例IgA肾病患者(IgA肾病组)和137例健康人(对照组)进行HLA-B基因多态性研究,并比较两组的基因型和等位基因的频率,分析HLA-B基因多态性与IgA肾病的相关性.结果 (1)IgA肾病组和健康对照组共检测到103种HLA-B等位基因,其中以HLA-B*400101、HLAB*4601、HLA-B*1502、HLA-B*1301、HLA-B*5801等位基因频率较高,符合中国广州地区汉族HLA-B等位基因分布特征.(2)HLA-B*5601在IgA肾病组的基因频率明显高于健康对照组(P<0.05),可能与IgA肾病发病相关.结论 HLA-B基因多态性可能与我国南方汉族人群IgA肾病的发病相关,HLA-B*5601可能是IgA肾病的易感基因.
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湖北地区1725例不育男性的外周血染色体核型分析
目的 研究湖北地区不育男性的细胞染色体异常及染色体多态性的发生情况.方法 回顾性分析2006年8月至2011年8月武汉大学人民医院生殖医学中心细胞遗传学实验室1725例不育男性患者的外周血染色体核型分析结果,其中包括严重少精症或无精症患者997例(A组),具有复发性自然流产和反复体外受精/单精子卵泡浆内显微注射-胚胎移植(IVF/ICSI-ET)后结局不良728例(B组).结果 A组男性的染色体异常发生率为3.81%,无精症男性的染色体异常发生率(4.37%)高于严重少弱精症男性(3.69%).相互平衡易位和克氏征是常见的结构和数目异常.其中,88例男性患者被发现为具有染色体多态性,发生率为8.83%.常见的多态性发生于Y染色体.B组男性中共发现11例染色体异常,发生率为1.51%,11例患者均为结构异常.B组男性中发现53例染色体多态性,发生率为7.28%.常见的多态性仍发生于Y染色体,发生率为6.59%(48/728).结论 不育症男性的染色体异常和多态性发生率明显较高.Y染色体多态性对于男性生育力有不良影响.应该鼓励不育男性进行全面的遗传学检查.
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荧光杂交探针实时聚合酶链式反应快速检测甘露聚糖结合凝集素启动子区基因变异方法的建立
目的 建立用荧光杂交探针实时聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测人甘露聚糖结合凝集素(MBL)启动子区基因变异新型的基因分型法--Tm基因分型法.方法 收集30例健康献血员外周抗凝全血,提取基因组DNA.通过Light Cycler实时PCR仪描绘扩增的目标DNA片段的熔解曲线,根据熔解温度(Tm)峰值判定待测标本的基因变异类型.后,用基因测序法检测PCR产物来验证Tm基因分型法的准确性.结果 建立了新型的Tm基因分型法,且测定PCR产物的时间仅180 min,检测结果与测序法完全吻合.结论 Tm基因分型法检测人MBL启动子区基因变异快速、准确,重复性好,具有广泛的临床应用前景.
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2型糖尿病患者FAT/CD36基因启动子区-3489C/T和密码子区478C/T多态性研究
目的 探讨FAT/CD36脂肪酸转位酶基因启动子区-3489C/T和密码子区478C/T多态性与2型糖尿病(T2DM)的相关性.方法 运用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术对196例T2DM患者和120例正常对照者的-3489C/T与478C/T多态性进行检测,并比较各组间基因型频率和等位基因频率以及相关临床资料.结果 (1)所有研究对象均无一例存在FAT/CD36基因启动子区478C→T突变,基因型均表现为478CC之纯合子,478CC和478TT等位基因频率分别为1和0.(2)T2DM组和正常对照组的-3489C/T多态性基因型和等位基因频率比较差异无统计学意义,P值分别为0.682和0.683.结论 昆明地区的汉族人中FAT/CD36基因的启动子区-3489C/T和密码子区478位C/T多态性与昆明地区汉族人群2型糖尿病的发生无显著相关关系.
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线粒体ND2基因C5178A多态性与2型糖尿病患者并发心脑血管病的关系评价
目的 探讨线粒体DNA (mtDNA) ND2基因C5178A多态性与2型糖尿病(T2DM)患者并发心脑血管病的关系.方法 本研究属于病例对照研究.选择2010至2011年期间在浙江省人民医院住院的448例无血缘关系的T2DM患者,男274例,女174例,采用PCR产物直接测序法对所有患者的mtDNA ND2基因5178位点进行测序,同时收集每例患者的临床资料.根据测序结果分为5178C和5178A两组,检测所有患者的体重指数、血压、血脂、血糖,通过t检验和x2检验,分析这些指标在T2DM患者5178C基因组和T2DM患者5178A基因组两组之间的差异以及不同性别的患者中的差异.结果 在448例T2DM患者中共检测出348例5178C,100例5178A,mtDNA 5178A组的'T2DM患者收缩压为(124.6±9.0) mm Hg,高密度脂蛋白(HDL)为(1.3±0.2)mmol/L,而5178C组的患者收缩压为(127.8±10.7)mmHg、HDL为(1.2±0.3)mmol/L,两组之间比较5178A组收缩压降低,HDL升高(=2.700,P=0.007;t =2.968,P=0.003).5178A组脑梗死的发生率为8.0％ (8/100),5178C组脑梗死的发生率为21.0％(73/348),脑梗死的发生率在两组之间的差异有统计学意义(x2=8.832,P=0.003).C 5178A的变异在不同性别之间的分布没有统计学差异(P＞0.05),进一步分析发现在女性T2DM患者中,5178A和5178C组的三酰甘油水平分别为(1.5±0.8)mmol/L和(1.8±1.0) mmol/L,收缩压分别为(123.6±6.6) mm Hg和(128.0±9.0) mm Hg,两组之间比较5178A组女性患者三酰甘油和收缩压明显降低(t=2.601,P=0.011；t=2.887,P=0.004).女性5178A患者脑梗死的发生率为5.3％(2/38),5178C女性患者脑梗死发生率为21.3％(29/136),两组之间的差异有统计学意义(x2 =5.232,P =0.022).在男性T2DM患者中,5178A组和5178C组的脑梗死发生率分别为9.7％(6/62)和20.7％ (44/212),HDL水平分别为(1.4±0.2)mmol/L和(1.2±0.3) mmol/L,两组比较5178A组男性患者脑梗死发生率明显降低,HDL水平明显升高(x2=3.946,P=0.047;t=3.511,P=0.001).结论 在T2DM患者中,mtDNA C5178A为多态性位点,该位点的改变与T2DM患者并发心脑血管病存在相关性,其对血压、血脂等的影响可能有利于抵抗T2DM患者心脑血管并发症的发生发展.
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异源双链和单链构像多态法筛查基因突变
目的比较异源双链、单链构像多态(SSCP)、异源双链-SSCP法筛查突变的效率,寻找简便有效的基因突变筛查方法.方法应用聚合酶链反应(PCR)扩增23个已知的杂合子突变,分别以异源双链、SSCP、异源双链-SSCP法分析突变,对比各方法对突变的检出情况.结果 23个杂合子突变中,异源双链法、SSCP法与异源双链-SSCP法检出突变分别为22个(96%)、20个(87%)和23个(100%).异源双链法结果比SSCP法结果稳定,重复性好,两种方法之间有一定互补性,异源双链-SSCP法兼有两种方法的特点.结论异源双链-SSCP法突变检出率高,经济、简便,值得在基因突变筛查中推广应用.
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轻型β-珠蛋白生成障碍性贫血患者β-珠蛋白基因( AC)n(AT)x Ty多态性分析
目的 探讨轻型β-珠蛋白生成障碍性贫血患者β-珠蛋白基因(AC)n(AT)xTy多态性与其基因突变的相关性.方法 选取2009年2月至2010年7月深圳市宝安区人民医院89例已知基因突变类型的轻型β-珠蛋白生成障碍性贫血患者和110名中国汉族人群健康对照者.抽取所有个体外周静脉血,抽提基因组DNA,通过聚合酶链反应扩增β-珠蛋白基因BP1蛋白结合区序列,经DNA测序确定(AC)n(AT)xTy序列的多态性,分析(AC)n(AT)xTy多态性与其基因突变的关系.轻型β-珠蛋白生成障碍性贫血患者和健康对照者间(AC)n(AT)xTy多态性单倍型频率的比较,以及同一单倍型患者的不同突变类型发生率间的比较采用x2检验.结果 在轻型β-珠蛋白生成障碍性贫血患者的β-珠蛋白基因BP1蛋白结合区存在9种(AC)n(AT)xTy多态性序列,分别是(AC)2(AT)7T7、(AC)2 (AT)8T5、(AC)3 (AT)7T5、(AC)2 (AT)9T5、(AC)2 (AT)8T9、(AC)3 (AT)8T5、(AC)2(AT)10T3、(AC)2(AT)7T5和(AC)2(AT) 11T3,其中(AC)2 (AT)7T7和(AC)2(AT)8T5是常见单倍型.轻型β-珠蛋白生成障碍性贫血患者的(AC)2(AT)7T7、(AC)3 (AT)7T5和(AC)2(AT)8T9单倍型频率分别为38.8％( 69/178)、11.8％( 21/178)、9.0％( 16/178),显著高于健康对照组的24.1％(53/220)、5.4％ (12/220)、3.2％ (7/220),差异有统计学意义(x2=9.966、4.371、6.093,P＜0.05)；(AC)2 (AT)9T5单倍型频率为10.1％(18/178),显著低于健康对照组的33.2％ (73/220),差异有统计学意义(x2=29.691,P＜0.01)；而(AC)2 (AT)8T5单倍型频率在患者组和健康对照组分别为25.3％ (45/178)和29.1％ (64/220),差异无统计学意义(x2 =0.718,P＞0.05).在(AC)2 (AT)7T7单倍型患者中,codon41/42(-TTCT)和IVS-II-654(C→T)的突变率分别为59％( 10/17)和29％(5/17),差异无统计学意义(x2=2.982,P＞0.05)；在(AC)2( AT)8T5单倍型患者中,codon41/42(-TTCT)和IVS-Ⅱ-654(C→T)的突变率分别为29％(4/14)和57％ (8/14),差异无统计学意义(x2=2.333,P＞0.05).结论 β-珠蛋白基因BP1蛋白结合区的(AC)2 (AT) 7T7、(AC)3 (AT)7T5和(AC)2(AT)8T9单倍型与轻型β-珠蛋白生成障碍性贫血存在连锁不平衡.在轻型β-珠蛋白生成障碍性贫血患者中,携带( AC)2( AT)7T7单倍型和(AC)2(AT) 8T5单倍型患者的主要致病突变分别为codon41/42 (-TTCT)和IVS-II-654(C→T).
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糖尿病与非糖尿病性脑梗死患者MTHFR基因多态性C677T与同型半胱氨酸水平相关性研究
目的：探讨脑梗死患者亚甲基四氢叶酸还原酶（ MTHFR）基因 C677T 多态性（rs1801133）特点及其与同型半胱氨酸（Hcy）水平相关性，并进一步分析糖尿病性（DM）与非糖尿病性（ NDM）脑梗死患者rs1801133多态性特点和Hcy水平。方法病例对照研究。选取2014年1月至2015年1月中日友好医院脑梗死住院患者556例及体检中心正常对照者275名，采用焦磷酸测序技术检测MTHFR基因C677T多态性，采用循环酶法检测血清Hcy水平。对不同组别MTHFR基因型分布采用卡方检验进行统计学分析；脑梗死患者不同基因型之间Hcy水平比较采用ANVOA检验，进一步两两比较采用LSD-t检验。结果556例脑梗死患者中TT型202例（36.33％）， CT型257例（46.22％），CC型97例（17.45％），等位基因T频率为59.44％明显高于正常对照组46.91％（χ2＝23.385，P＜0.001）。 TT型脑梗死患者Hcy水平（21.31±17.31）μmol／L，明显高于CT基因型患者（14.88±7.71）μmol／L（P＜0.001）和CC基因型患者（14.48±7.78）μmol／L（P＜0.001）。糖尿病性脑梗死组MTHFR基因TT型频率（36.77％）与非糖尿病性脑梗死组频率（36.44％）相比，差异无统计学意义（χ2＝0.031，P＞0.05）；该基因型糖尿病性脑梗死组Hcy浓度为（18.16±12.90）μmol／L，显著低于非糖尿病性脑梗死组的（23.47±19.53）μmol／L（F＝4.652，P＜0.05）。结论 MTHFR基因TT型与血清高Hcy水平有关，可能是脑梗死发生的危险因素；TT基因型糖尿病性脑梗死患者相对于该基因型非糖尿病性脑梗死患者具有更低的Hcy水平。（中华检验医学杂志，2016，39：205-209）
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分子信标与毛细管电泳--激光诱导荧光检测联合筛查野生型基因
目的利用毛细管电泳--激光诱导荧光检测系统(CE-LIF)和分子信标杂交理论,建立一种新的聚合酶链反应(PCR)产物分析方法,以应用于野生型基因的临床筛查.方法 PCR扩增30例胃癌组织DNA的p73基因第3外显子、p53基因第5外显子和p16基因第2外显子,所得PCR产物与分子信标杂交,利用CE-LIF检测杂交产物,检出野生型基因.对照方法为单链构象多态性(SSCP)分析.结果 CE-LIF分子信标法与SSCP分析相比较,测得p73第3外显子野生型百分率分别为100%和100%;测得p53第5外显子野生型百分率分别为60.0%和63.3%(P=0.99);测得p16第2外显子野生型百分率分别为20.0%和20.0%.结论利用分子信标与CE-LIF联合检测野生型基因,是一种良好的筛选方法,高效快速、简便、成本低,适宜应用于临床.
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结核分枝杆菌耐乙胺丁醇分离株embB基因突变的研究
目的了解结核分枝杆菌耐乙胺丁醇(EMB)分离株embB基因突变情况,研究其应用价值.方法通过聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)、PCR-限制性片段长度多态性(RFLP)和PCR-直接测序技术分析102株结核分枝杆菌临床分离株embB基因.结果以H37Rv标准株为对照,102株结核分枝杆菌临床分离株的16S rDNA SSCP电泳图谱均与结核分枝杆菌标准株相同.41株药物敏感株的embB基因SSCP均泳动正常,RFLP和测序分析与对照株相同.61株耐EMB分离株中,23株(37.7%)embB基因SSCP泳动异常;8株RFLP分析异常;测序分析23株均为306位密码子突变,其EMB MICs均≥20 μg/ml,其中8株为ATG→ATA或ATT突变,13株为ATG→GTG或CTG突变,后者EMB MICs均≥30 μg/ml.结论部分结核分枝杆菌耐EMB是由于其embB基因突变所致,PCR-SSCP技术可能成为测定部分结核分枝杆菌EMB耐药基因型,简便、快速的方法.
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DNA测序法检测华法林用药剂量相关基因多态性的应用价值
目的 评估分析DNA测序法检测华法林用药剂量相关基因——细胞色素氧化酶P4502C9(CYP2C9)和维生素K环氧化物还原酶(VKORC1)多态性指导华法林临床用药的价值.方法 选取2011年7月至2012年7月武汉大学人民医院肿瘤科使用华法林经影像学和病理学检查确诊为肺癌患者140例,按检测CYP2C9和VKORC1基因且使用华法林(试验组70例)和不检测2个基因采取经验用药(对照组70例)分为2组,根据已知CYP2C9和VKORC1基因序列,设计针对CYP2C9和VKORC1基因多态性位点的特异性引物,PCR扩增包含CYP2C9和VKORC1基因多态性位点的DNA片段,并用DNA测序法验证；同时用DNA测序法检测试验组70例肺癌患者不同CYP2C9和VKORC1基因型的分布频率,且与对照组70例肺癌患者比较,以评价两组患者在使用华法林2周和4周后国际标准化比率(INR)的差异.结果 PCR产物凝胶电泳和DNA测序检测结果显示,针对CYP2C9和VKORC1基因的特异性引物可鉴别不同的基因型(CYP2C9*1、CYP2C9*2和CYP2C9*3；VKORC1-1639GG、VKORC1-1639AG和VKORC1-1639AA),其检测的特异度和敏感度均为100％.除CYP2C9*1/*1患者INR为100％外,CYP2C9*1/*2、CYP2C9*1/*3、CYP2C9*2/*2、CYP2C9*3/*3和CYP2C9* 2/*3均为0％.VKORC1-1639AG、VKORC1-1639AA和VKORC1-1639GG患者的INR分别为10％、90％和0％.采用基因型检测指导用药患者的INR值85.7％在第2周达到目标治疗范围,且明显高于对照组(48.6％,x2=21.9,P＜0.01)；第4周试验组患者的INR值均达到目标治疗范围(100％),对照组65例患者INR值达到目标治疗范围(92.9％)；但两组患者均未发生出血和血栓形成事件.结论 设计针对肺癌患者华法林相关基因多态性的特异性引物,通过PCR扩增及DNA测序分析能快速、准确有效检测CYP2C9和VKORC1基因多态性,可靠地指导华法林在临床安全有效的使用.
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血管紧张素转换酶基因多态性与2型糖尿病肾病的相关性研究
目的 采用改进的实验方法研究血管紧张素转换酶(ACE)基因rs1799752多态性与2型糖尿病(T2DM)肾病(DKD)的相关性,并探讨该多态性与环境因素(吸烟、肥胖)的交互作用对DKD的影响.方法 病例对照研究.选择2016年6月至2018年3月中日友好医院收治的T2DM合并DKD患者[DKD(+)组]和T2DM不伴DKD患者[DKD(-)组]各300例为研究对象.采用改进的PCR-毛细管电泳法进行基因分型.统计学分析两组受试者的临床生化指标和ACE基因I/D多态性不同基因型及等位基因频率,进一步按吸烟、肥胖状况分组进行多因素回归分析.结果 DKD(+)组患者DD基因型及D等位基因频率均高于DKD(-)组[DD基因型:15.0％(45例)比7.3％(22例),χ2=10.8,P=0.004;D等位基因频率:36.5％(219例)比28.0％(168例),χ2=9.92,P=0.02].多因素Logistic回归分析显示,在隐性和加性遗传模型中,D等位基因与DKD发病风险显著相关(校正后,隐性模型:OR=1.45,95％CI:1.06～2.00,P=0.022;加性模型:OR=1.41,95％CI:1.04～1.90,P=0.025).在吸烟组和肥胖组,D等位基因在显性和隐性模型中与DKD的发病显著相关(校正后均P<0.05),表明吸烟组和肥胖组的D等位基因携带者有更高的DKD发病风险.而在非吸烟组和非肥胖组,未校正和校正后的3种模型中均未发现基因型及等位基因与DKD相关(均P>0.05).结论 ACE基因I/D多态性与2型糖尿病患者DKD的发病相关,D等位基因是DKD发病的易感基因,DD基因型是2型糖尿病合并DKD的危险因素.ACE基因I/D多态性可能与吸烟、肥胖环境因素协同促进DKD的发病.
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宁夏人群载脂蛋白E基因多态性与血清尿酸水平的相关性研究
目的：探讨我国宁夏人群中载脂蛋白E（ ApoE）基因多态性与血清中尿酸水平的相关性。方法病例对照研究。2011年10月至11月，随机选取宁夏地区528名健康体检人群（男296名、女232名），采集空腹静脉血进行血生化检测，应用等位基因特异性多重PCR（multi-ARMS PCR）技术，对ApoE基因进行分型，分析基因型与血清血脂水平和尿酸水平的关系。非正态分布者比较采用致和检验。结果 ApoE常见的6种基因型均可检出，不同ApoE基因型的总胆固醇（ TC）、低密度脂蛋白胆固醇（ LDL-C ）和尿酸（ UA ）水平差异有统计学意义。 ApoE ε2/3基因型的 TC [（3.50±0.83）mmol/L]、LDL-C[（1.87±0.60） mmol/L]水平低于ε3/3[（3.85±0.84）mmol/L、（2.24±0.69） mmol/L]和ε3/4[（3.89±0.78） mmol/L、（2.34±0.68） mmol/L]基因型，差异有统计学意义，F＝5.619，P＜0.05。 UA水平[（374.9±97.8） mmol/L]则显著高于ε3/3[（328.4±105.5） mmol/L]和ε3/4[（339.2±98.3） mmol/L]，差异有统计学意义，F＝6.052，P＜0.05。进一步对年龄、性别、地区等因素进行校正后ApoE基因多态性对UA水平的影响依然显著。结论 ApoE基因多态性与血清尿酸水平相关，含ε2等位基因者具有更高的血清尿酸水平。（中华检验医学杂志，2014，37：434-438）
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结核分枝杆菌耐多药的基因研究
目的 探讨耐多药结核分枝杆菌耐药基因突变与耐药性的关系。方法 用聚合酶链反应和聚合酶链反应单链构象多态性分析对128株结核分枝杆菌临床分离株耐利福平(rpoB)、链霉素(rpsL)和异烟肼(KatG)基因检测。结果 38株敏感株中，各有1株(2.6%)测出rpoB、rpsL和KatG突变；90株耐多药株中，分别有81株(90.0%)、71株(78.9%)和63株(70.0%)测出rpoB、rpsL和KatG突变；有77株(85.6%)同时测出2种以上耐药基因突变；10株耐其他药物株中，仅有1株测出KatG基因突变。结论 85.6%的耐多药结核分枝杆菌存在2种以上耐药基因突变，且耐药基因突变率与耐药浓度有关。
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检测结核分枝杆菌rpoB基因突变的研究
目的建立聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)检测结核分枝杆菌rpoB基因突变的方法,并评价其临床应用的价值.方法依据结核分枝杆菌rpoB基因的耐利福平决定区设计引物,用PCR从临床分离株和直接从痰标本中扩增rpoB基因片段;对扩得的rpoB基因片段做DNA SSCP分析,并随机测定rpoB片段的序列.结果 PCR从所有212株结核分枝杆菌中均扩得230 bp片段,135份抗酸染色阳性的痰标本中,有113份扩得阳性片段(83.7%).在SSCP分析中,140份经L-J药敏试验检测为利福平耐受的结核分枝杆菌,有130份有rpoB基因突变(符合率为92.9%),72份经L-J药敏试验检测为利福平敏感的菌,有67份的rpoB基因无突变(符合率为93.1%).测序分析发现57份经SSCP检测为突变的rpoB片段均有序列改变,10份经SSCP分析为无突变的有8份无序列改变,SSCP与测序结果的符合率为94.0%.在本研究的菌株中,耐多药结核病(MDR-TB)占76.4%(107/140),有92.5%(99/107)耐多药菌株经SSCP检测有rpoB突变.结论建立的PCR-SSCP分析方法,是一种较准确和稳定的检测结核分枝杆菌rpoB基因突变的方法,可用于临床快速分析患者结核分枝杆菌对利福平的耐药性,并可作为MDR-TB判断的一个重要指标.
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PNPLA3基因rs738409检测方法的建立及其与非酒精性脂肪肝的相关性分析
目的：建立rs738409（C＞G）多态性实时荧光定量PCR分型方法，并探讨rs738409多态性与非酒精性脂肪肝（ NAFLD）的相关性。方法方法学建立及遗传易感性分析。采用等位基因特异性引物，以TaqMan探针作为检测信号，根据Ct值的差值ΔCt（ΔCt＝C等位基因引物反应体系Ct值-G 等位基因引物反应体系Ct值），建立扩增受阻突变体系-TaqMan（ARMS-TaqMan）实时荧光定量PCR等位基因分型方法，并采用所建方法对航天中心医院2014年1至12月健康体检人员618名（男性401名，女性217名）的rs738409进行分型检测。脂肪肝采用B型超声进行检测。 rs738409多态性与NAFLD的相关性采用χ2检验和多变量Logistic 回归分析。结果618名研究对象中NAFLD患病率为30．1％（186例），其中男性147例，女性39例；432名非NAFLD者（男性254名，女性178名）。ARMS-TaqMan方法检测的CC型ΔCt＝-13．1±1．4（243名），CG型ΔCt＝0．01±0．41（282名），GG型ΔCt＝13．0±1．5（93名）。 NAFLD 患者组的 GG 型等位基因（21．5％）显著高于非 NAFLD 组（12．3％）（χ2＝8．677， P＝0．003）。控制性别、年龄、总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、空腹血糖和体重指数后，与CC型比较，CG型和GG型发生NAFLD风险的OR值（95％CI）分别为1．35（0．91～2．00）和2．21（1．32～3．71）（P＝0．013）。肝酶丙氨酸氨基转移酶（ALT）的水平在3组间差异有统计学意义（F＝8．980， P＜0．001），GG型的天冬氨酸氨基转移酶（AST）的水平显著高于CC型（F＝6．491， P＜0．001）。结论 rs738409 ARMS-TaqMan分型方法具有准确、一步检测、高通量等特点。 rs738409 G等位基因是NAFLD遗传易感性的危险因素，并与肝酶ALT、AST升高具有显著相关性。（中华检验医学杂志，2016，39：45-49）
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白细胞介素1α基因启动子-889位点C/T基因型与冠心病严重程度的关系
目的探讨白细胞介素1α(IL-1α)基因启动子-889位点C/T基因型与冠心病(CHD)严重程度的相关关系.方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析的方法,检测118例CHD患者和184名健康者IL-1α(-889C/T)基因型,并用酶联免疫吸附试验检测了所有研究对象血清IL-1α水平.结果 IL-1α(-889)位点各基因型在心肌梗死组和对照组间的分布差异存在显著性(χ2 =5.96,P<0.01), CT基因型患心肌梗死的相对风险度约是CC基因型的2.39倍[比值比(OR)=2.39,95%可信区间(CI)=1.17～4.86];在CHD组,CT基因型患者血清IL-1α水平(13.51±6.85) ng/L显著高于CC基因型患者(8.04±4.47)ng/L ,P<0.001. 结论 IL-1α(-889)位点CT基因型与CHD的严重程度存在相关关系,其机理可能是该位点DNA突变影响了IL-1α的分泌.
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育龄妇女VVC光滑假丝酵母菌基因多态性与药物敏感性相关性研究
目的 分析100例育龄妇女(其中50例为妊娠妇女)外阴阴道假丝酵母菌病(VVC)感染光滑假丝酵母菌的基因分型和药物敏感性结果,以了解贵阳地区育龄妇女VVC感染光滑假丝酵母菌的基因多态性和药物敏感性特征,并探讨基因多态性与妊娠状态、耐药性的相关性.方法 运用多位点序列分型(MLST)技术,对100株光滑假丝酵母菌的6个管家基因进行测序分析,确定菌株序列型(ST).采用MEGA6.0软件中的加权配对组平均法和小生成树法,比较分析不同菌株间的微进化及亲缘关系;采用ATB FUNGUS药物敏感性分析系统进行药物敏感性试验;运用Fisher和Ridit分析方法探究光滑假丝酵母菌的基因型与妊娠状态、耐药性的关系.结果 100株光滑假丝酵母菌经MLST分型,得到34个ST型,其中ST-753株(来自妊娠妇女26株),ST-37株(来自妊娠妇女3株),ST-196株(来自妊娠妇女5株),ST-153株(来自妊娠妇女1株),ST-102株(来自妊娠妇女2株),其余ST型各为1株.100株光滑假丝酵母菌对两性霉素B和氟胞嘧啶均敏感,伊曲康唑抑菌效果较差,仅20%为敏感,对氟康唑和伏立康唑的耐药率为4%和1%;伏立康唑耐药组中,仅ST-X1对伏立康唑耐药,其他基因型均敏感;不同基因型对伊曲康唑耐药性的相关性研究中,以ST-7为标准组,ST-15、ST-19及其他ST组均不包含标准组的平均Ridit值(0.5).使用邻接法(NJ)构建系统进化树,将所有基因型分为3群,记作Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ.其中Ⅰ群44株,Ⅱ群53株,Ⅲ群3株.所有收集的临床菌株在分子进化中遗传距离较小.结论 ST-7为贵阳地区VVC光滑假丝酵母菌中优势菌株;不同基因型与妊娠状态没有相关性;ST-7与ST-15、ST-19及其他ST组的光滑假丝酵母菌对伊曲康唑的耐药性具有差异性;贵阳地区VVC光滑假丝酵母菌呈现出基因的高度多态性,基因多态性的ST之间的遗传距离小.
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PCA3基因启动子多态性快速分型的DHPLC法建立
目的 建立DHPLC技术分析PCa特异性PCA3基因启动子多态性的技术平台.方法 在PCA3基因启动子区域设计1对引物,以本室先前已经建立的11种(C_2T_6、C_2T_5、C_3T_5、C_2T_5/C_2T_6、 C_3T_3/C_3T_4、C_3T_5/C_4T_5、C_3T_5/C_2T_5、C_3T_5/C_2T_6、 C_3T_5/C_1T_8、C_2T_5/C_3T_4、C_2T_6/C_2T_7)已知多态性的PCA3基因启动子的克隆质粒为标准品,通过优化DHPLC检测体系,建立其多态性克隆质粒的标准图谱.采用完全随机设计,从200例病理确诊为PCa患者中选取147例,对其PCA3基因启动子的扩增产物进行DHPLC分析,比较各标本洗脱峰与标准克隆质粒的DHPLC图谱,以判断临床标本PCA3基因多态性类型,并对这些基因型再行克隆测序予以验证.结果 通过克隆质粒优化DHPLC检测体系,适检测体系为:含44.3%A洗脱液(0.1 mol/L TEAA、0.025%ACN)和55.7%B洗脱液(0.1 mol/L TEAA、25%ACN)的起始洗脱梯度,含35.3%A洗脱液和64.7%B洗脱液的终止洗脱梯度,柱温53℃,流速:0.9 ml/min,在该条件下DHPLC用8种杂合型克隆质粒(C_2T_5/C_2T_6、C_3T_5/C_3T_4、 C_3T_5/C_4T_5、C_3T_5/C_2T_5、C_3T_5/C_2T_6、C_3T_5/C_1T_8、 C_2T_5/C_3T_4、C_2T_6/C_2T_7)进行重复性验证,结果 显示,同一多态性色谱峰中2峰的出峰时间之差的批问CV值在0%～6.67%之间.11种克隆质粒多态性标本仪通过1～2次洗脱,就能根据峰型和各峰的出峰时间将其区分开.147例PCa患者中,144例DHPLC检测结果 和克隆测序结果 一致(Kappa=1,P=0.000),并出现3种新的峰型,经克隆测序验证为3种新的多态性(C_3T_5/C_1T_6、C_2T_5/C_1T_8、C_3T_5/C_2T_7).结论 成功建立的DHPLC分析PCA3基因启动子多态性的技术方法 ,可对PCA3基因启动子多态性进行基因型别鉴定.该方法 具快速、准确、经济、高通量、重复性好、自动化等特点,为进一步研究PCa基因多态性提供了技术平台.
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杀伤细胞免疫球蛋白样受体及HLA-Cw基因多态性与强直性脊柱炎遗传易感性研究
目的 探讨杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIRs)2D基因及其配体HLA-Cw等位基因与强直性脊柱炎的遗传易感性是否相关.方法 以PCR-SSP基因分型技术检测105例强直性脊柱炎患者KIR2D基因(KIR2DL1、2DS1、2DL2、2DL3、2DS2)和HLA-Cw01～08等位基因,并将HLA-Cw01～08分成HLA-Cwlys和HLA-Cwan两组,分别计算KIR2D基因、HLA-Cw等位基因及活化性KIR/HLA-Cw组合基因型频率,并与51例骨关节炎患者和120名健康人群比较.结果 强直性脊柱炎组患者HLA-Cwlys基因频率为0.269 7,高于骨关节炎组患者的0.148 2(P=0.024)和健康对照者的0.138 8(P=0.001).强直性脊柱炎组患者KIR2DS1/HLA-Cwlys组合基因型阳性率为26.67%,明显高于骨关节炎组的11.76%(P=0.039)和健康对照组的13.33%(P=0.018).结论 HLA-Cwlys可能与强直性脊柱炎遗传易感性相关;当抑制性受体KIR2DL1的特异性配体HLA-Cwlys存在时,KIR2DS1基因携带者可能是强直性脊柱炎的高危人群.
