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Smad7、C-myc、Cox-2在大肠癌中表达的研究进展
Smad7、C-myc、Cox-2 三种蛋白具有抑制细胞分化、促进细胞增殖的作用,与大肠癌的发生、发展、转移密切相关,检测大肠癌组织中三种因子的表达有助于判断大肠癌预后.
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HBx下调miR-16家族表达促进肝癌细胞恶性转化
目的 乙型肝炎病毒X (hepatitisB virusX protein,HBx)蛋白通过调控蛋白编码基因表达而广泛参与人原发性肝细胞癌(简称肝癌)的发生和进展.本研究将HBx的调控功能拓展到非编码RNA领域,探讨HBx能否调控宿主肝癌细胞内microRNA (miRNA)的表达,进而参与肝癌细胞生长及恶性转化.方法 利用高通量芯片分析及实时定量聚合酶链反应(quantitative real time polymerase chain reaction,qRT-PCR)鉴定HBx在肝癌细胞内诱发的miRNA表达变化.通过系列蛋白和mRNA表达分析,细胞周期及凋亡实验以及萤光素酶报告实验来检测miR-16家族表达抑制后HepG2肝癌细胞的生物学变化.结果 芯片分析结果显示,HBx在HepG2细胞内诱发了大量的miRNAs表达变化,其中miR-16家族的低表达能在HepG2、SK-HEP-1及Huh7肝癌细胞中得到重复.同时,HBx显著上调miR-16家族的靶基因CCND1的表达.c-myc介导了HBx相关miR-16家族沉默,外源表达的miR-16/15a能通过阻滞细胞周期进展和诱导凋亡而抑制HepG2-hbx(稳定表达HBx)细胞的增殖、克隆形成及非贴壁生长能力.反之,沉默miR-16表达能促进HepG2细胞的周期进展和生长.结论 HBx能在体外改变肝癌细胞的miRNA表达谱,尤其是沉默miR-16家族表达.c-myc高表达介导了HBx下调miR-15a/16的过程且是HBx促进HepG2细胞恶性转化所必须的.因此,miR-16家族可能成为HBV相关肝细胞癌的治疗靶点.
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沉默c-myc重组腺病毒载体的构建
目的 设计、构建并筛选出转染至人骨肉瘤细胞系OS-9901,对c-myc沉默效果佳的复制缺陷型重组腺病毒质粒pAd-c-myc-短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)包装出表达c-myc-shRNA的重组腺病毒,并测定其滴度.方法 设计有shRNA结构的3对单链寡核苷酸(ss oligos),经变性退火为双链寡核苷酸(ds oligos),插入穿梭质粒pENTR/U6载体,测序正确后,经LipofectamineTM2000阳离子脂质体介导入人骨肉瘤细胞系OS-9901,采用RTPCR筛选对c-myc沉默效果佳的穿梭质粒pENTR/U6-shRNA,然后与腺病毒骨架质粒行同源重组,筛选出正确重组子.采用293A细胞包装出表达c-myc-shRNA的复制缺陷型重组腺病毒,观察其细胞病变效应(cytopathic effect,CPE),采用病毒颗粒法(viral particles,VP)和50%组织培养感染剂量法(50%tissue culture infective dose,TCID50)测定病毒滴度.结果 电泳验证后的ds oligos插入穿梭质粒pENTR/U6载体,测序结果提示构建的pENTR/U6-shRNA质粒正确.从3对ds oligos通过RT-PCR方法筛选出对c-myc沉默效果佳的穿梭质粒pENTR/U6-shRNA,经Pac Ⅰ酶切线性化后同源重组成功构建了介导c-myc-shRNA复制缺陷型重组腺病毒,CPE和空泡现象3 d开始出现,6 d更加明显.采用VP法测定的第1代腺病毒滴度为5.23×109VP/mL,经3～4代扩增后可达2.26×1012 VP/mL.TCID50证实病毒滴度为10-3.8/0.1 mL.结论 通过RNA干扰技术,体外成功构建了介导shRNA-c-myc复制缺陷型重组腺病毒.
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可溶性支架转染c-myc基因反义寡核苷酸对静脉移植物c-myc及PCNA表达的影响
目的采用可溶性支架将原癌基因c-myc反义寡核苷酸转染静脉移植物,观察其对静脉移植物内c-myc蛋白和增殖细胞核抗原(PCNA) 蛋白产物表达的影响. 方法 50只新西兰大耳白兔建立兔颈外静脉颈总动脉旁路移植模型后随机分成5组,每组10只.对照组:无支架;组1:植入单纯可溶性支架;组2:植入正义c-myc寡核苷酸可溶性支架;组3:植入反义c-myc寡核苷酸可溶性支架;组4:植入不匹配c-myc寡核苷酸可溶性支架.于静脉移植后7d、28d和90d取出静脉移植物,采用免疫组织化学方法检测其c-myc蛋白和PCNA蛋白的表达. 结果对照组、组1、组2、组4静脉移植术后7d、28d、90d时静脉移植物内膜和中膜内可见大量c-myc蛋白和PCNA蛋白表达阳性的细胞,与同时间点组3比较差别均有统计学意义(P《0.01).28d、90d时5组静脉移植物内c-myc蛋白的表达与同组7d时比较明显增强(P《0.01). 结论可溶性支架转染c-myc反义寡核苷酸可显著抑制静脉移植物内c-myc蛋白和PCNA蛋白的表达.
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HeLa和SiHa细胞中Skp2、p27和C-myc的表达
目的:检测S期激酶相关蛋白2( Skp2)、C-myc、p27在宫颈癌HeLa及SiHa细胞系中的表达,明确这些指标在宫颈癌细胞系表达的意义.方法:通过细胞免疫组化、Western blot、RT-PCR技术分析Skp2、p27和C-myc在蛋白和mRNA水平表达的差异.结果:免疫组化显示:HeLa细胞中Skp2和C-myc表达强度高于SiHa细胞(P=0.032和P=0.026),而HeLa细胞中p27蛋白表达弱于SiHa细胞(P=0.035).Western blot显示:在HeLa细胞中Skp2和C-myc蛋白表达分别是SiHa细胞表达量的2.8倍和1.5倍；而SiHa细胞中的p27蛋白的表达水平是He-La细胞中表达的2.7倍.RT-PCR结果显示:HeLa细胞中内源Skp2和C-myc的mRNA表达水平高于SiHa细胞(P=0.034和P=0.028),而SiHa细胞中的p27的mRNA表达水平高于HeLa细胞的表达水平(P =0.002).结论:Skp2及C-myc在HeLa细胞中的表达水平高于SiHa细胞中的表达水平,而p27在HeLa细胞中的表达水平低于SiHa细胞中的表达水平.
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Targeting Mnk/eIF4E Signaling for Cancer Therapy
The synthesis of many oncognic proteins such as c-Myc, VEGF, ODC, cyclin D1, HIF-1 and Mcl-1 are regulated by cap-dependent translational mechanism because the mRNAs of these genes possess long and highly structured 5' untranshted regions (5'UTRs).
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基质金属蛋白酶-7和c-myc在口腔鳞状细胞癌中的表达和意义
目的 研究基质金属蛋白-7(MMP-7)与c-myc在口腔鳞状细胞癌组织中的表达及其意义.方法 应用免疫组化:EliVisionTM法分别检测MMP-7和c-myc在49例口腔鳞状细胞癌和5例正常口腔黏膜上皮中的表达情况.结果 1)MMP-7和c-myc在口腔鳞状细胞癌组织中的阳性表达率分别为83.7%和77.6%.2)在不同病理分级、不同临床分期和有无淋巴转移的口腔鳞状细胞癌组织中MMP-7阳性表达率的差异有统计学意义(P<0.05).3)在不同病理分级和有无淋巴转移的口腔鳞状细胞癌组织中c-myc阳性表达率的差异亦有统计学意义(P<0.05).4)口腔鳞状细胞癌组织中MMP-7和c-myc的表达呈正相关(P<0.05).结论 MMP-7和c-myc在口腔鳞状细胞癌组织中均有高表达,在口腔鳞状细胞癌的发病过程中,其高表达具有协同效应,共同促进口腔鳞状细胞癌的发生和发展.
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c-myc与口腔肿瘤和人端粒酶逆转录酶的关系
原癌基因c-myc与多种肿瘤密切相关,近发现c-myc是端粒酶的调节基因,且Mad和Spl也参与了该调节.
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舌癌组织中p53和c-myc的表达及端粒酶活性的实验研究
目的探讨端粒酶和原癌基因c-myc和p53在舌癌组织中的表达以及相互作用,分析它们与舌癌组织临床病理特征之间的可能关系.方法采用原位杂交技术和端粒末端重复放大技术(TRAP)分别检测c-myc和p53在舌癌组织中的表达以及舌癌组织中端粒酶的活性.结果在低分化的舌癌组织中端粒酶活性明显升高(P<0.05),c-myc在低分化1级舌癌组织中阳性表达显著升高(P<0.05);p53在舌癌伴淋巴结转移患者中阳性表达明显降低(P<0.05).结论端粒酶在舌癌的发生发展过程中可能起重要作用,c-myc 和p53在舌癌发生过程中对端粒酶的激活发挥重要影响.
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醋柳黄酮及其单体对培养自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞c-myc表达的影响
探讨醋柳黄酮(TFH)及其单体槲皮素(Que)、异鼠李素(Isor)对培养自发性高血压大鼠(SHR)血管平滑肌细胞(VSMC)原癌基因c-myc表达的影响。结果显示，药物在一定浓度下能有效抑制SHR、VSMC、c-myc、mRNA表达和c-myc蛋白合成。提示醋柳黄酮及其单体的降压机制可能涉及原癌基因c-myc的调控环节。
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原位杂交法检测树舌多糖GF对HepA瘤细胞N-ras、C-myc基因mRNA表达的影响
目的:探明树舌多糖GF对HepA瘤细胞癌基因N-ras、C-myc mRNA水平的影响.方法:应用地高辛标记探针原位杂交技术,检测树舌多糖GF对HepA瘤细胞中癌基因N-ras、C-myc mRNA丰度的影响.结果:树舌多糖组、猪苓多糖组中mRNA表达量均显著低于模型组(P＜0.01),树舌多糖组与猪苓多糖组无显著性差异.结论:树舌多糖GF可通过调节N-ras、C-myc基因mRNA的表达,而抑制HepA瘤细胞的增殖.
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宫颈癌组织中c-myc、bcat1的表达及其临床意义
目的 探究c-myc、bcat1表达与宫颈癌发生发展及临床特征的关系.方法 采用免疫组织化学方法半定量检测30例正常宫颈组织、30例宫颈上皮内瘤变(CIN)组织、80例宫颈癌组织(40例宫颈鳞癌、40例宫颈腺癌)中c-myc及bcat1蛋白的表达情况,并进行Spearman秩相关分析,分析两者表达水平与宫颈癌临床病理因素间的关系.结果 c-myc在正常宫颈组织、CIN组织、宫颈癌组织中的阳性表达率分别为16.7％ (5/30)、43.3％(13/30)、73.8％ (59/80);bcat1阳性表达率分别为10.0％(3/30)、23.3％(7/30)、52.5％ (42/80);c-myc与bcat1在宫颈鳞癌及腺癌组织中的秩相关系数rs分别为0.773(P=0.000)、0.369(P=0.019);c-myc阳性表达率与癌组织病理类型(腺癌/鳞癌)、癌组织分化程度、间质浸润深度、有无脉管浸润有关(P＜0.05);bcat1阳性表达率与癌组织分化程度、有无脉管浸润及Ki67指数有关(P＜0.05).结论 c-myc的高表达可能促进宫颈癌的侵袭及转移,bcat1的高表达可能促进宫颈癌的增殖、侵袭与转移,两者可能在宫颈癌致病过程中存在协同作用.
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桑黄多糖对类风湿性关节炎模型大鼠关节滑膜经典Wnt信号的影响
目的 研究中药桑黄中活性成分多糖(PPS)对类风湿性关节炎(RA)模型大鼠的治疗作用和对RA模型大鼠滑膜组织经典Wnt信号的影响.方法 将SD雄性大鼠随机分为3组:正常组、模型组和PPS组,每组10只.模型组和PPS组于每只大鼠右后足趾皮内注射0.1mL完全弗氏佐剂致炎制作RA模型,正常组于相同部位注射等量PBS;PPS组在造模后第8d给予50 mg/kg PPS灌胃治疗,每日1次,至第32 d,其余两组代之以等量生理盐水灌胃.造模后第16、20、24、28、32 d对各组大鼠进行关节炎评分和足爪肿胀评分,造模后第28 d采用real time qPCR检测各组大鼠滑膜中fibronectin表达,Wnt信号通路上游负调控基因SFRP1、2和通路关键基因β-catenin、C-myc、ccnd1的表达.结果 PPS灌胃治疗后,RA模型大鼠关节炎评分、足爪肿胀评分明显降低;与正常组相比,模型组大鼠滑膜中SFRP1、2表达明显降低,β-catenin、C-myc、ccnd1和fibronectin表达明显升高;但经PPS灌胃治疗后,PPS组滑膜中SFRP1、2表达明显升高,β-catenin、C-myc、ccnd1和fibronectin表达明显降低.结论 PPS对RA模型大鼠滑膜中Wnt信号具有抑制作用,对RA模型大鼠具有一定的治疗作用.
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罗格列酮对人卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的研究
目的 探讨罗格列酮(rosiglitazone,RSG)对人卵巢癌SKOV3细胞生长和凋亡的影响.方法 在SKOV3细胞培养液中加入不同浓度RSG(0.1、1.0、10和100 μmol/L),采用MTT法测定RSG对SKOV3细胞增殖的影响;流式细胞术检测各组细胞凋亡率和细胞周期的变化;Hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡形态学变化;荧光定量RT-PCR技术和免疫细胞化学方法 检测干预前后细胞中PPARγ、c-myc的mRNA和蛋白水平变化.结果 MTT法结果 显示,RSG可抑制SKOV3细胞生长,并呈明显的浓度和时间依赖方式.流式细胞术结果 显示,RSG能明显诱导SKOV3细胞凋亡,在10、100 μmol/L RSG作用于SKOV3细胞24 h后,凋亡率分别为45.75%和51.97%,均明显高于对照组(6.82%,P<0.05);并使细胞周期阻止于G1期,呈浓度依赖方式.Hoechst33258荧光染色显示RSG处理后的SKOV3细胞中出现凋亡小体.免疫细胞化学和荧光定量RT-PCR结果 显示,人卵巢癌SKOV3细胞表达PPARγ,RSG作用于SKOV3细胞24 h后PPARγ的mRNA和蛋白表达水平上调,而c-myc的mRNA和蛋白表达水平下调.结论 RSG具有抑制人卵巢癌SKOV3细胞生长和诱导凋亡作用,使细胞周期阻滞于G1期;并通过活化PPARγ,下调c-myc的mRNA和蛋白表达水平.
关键词： 罗格列酮 过氧化物酶体增殖物激活受体γ 卵巢癌 凋亡 c-myc -
质粒介导靶向c-myc的siRNA对MCF-7乳腺癌细胞增殖的影响
目的 观察靶向原癌基因c-myc的siRNA对MCF-7人乳腺癌细胞c-myc/c-Myc表达及细胞增殖的影响.方法 以原癌基因c-myc mRNA 589-609位碱基为靶序列构建靶向c-myc的siRNA真核表达质粒p-Mat01-1及其错配质粒p-Mis09-1,空质粒pEGFP-C1为对照,用脂质体Lip02000包裹转染MCF-7细胞.采用RT-PCR、Western blot检测c-myc mRNA及蛋白表达,MTT法检测MCF-7细胞增殖.结果 与pEGFP-C1及p-Mis09-1比较,转染p-Mat01-1能够特异性抑制MCF-7细胞c-myc mRNA(24 h:P<0.01)及蛋白(5 d:P<0.01)表达,显著降低MCF-7细胞增殖能力(3 d:P<0.05,5、7 d:P<0.01).结论 采用siRNA表达质粒技术能够有效抑制MCF-7乳腺癌细胞c-myc/c-Myc表达,初步证实下调c-myc/c-Myc表达能够抑制MCF-7细胞增殖,为RNA干扰技术在乳腺癌生物治疗中的应用打下一定实验基础.
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脂质体介导的99mTc标记c-myc mRNA反义寡核苷酸的反义作用效果的研究
目的探讨脂质体介导的99mTc标记癌基因c-myc mRNA的反义寡核苷酸能否抑制癌细胞的生长和癌蛋白的表达.方法合成15 bp的癌基因c-myc mRNA的反义、正义及无义寡核苷酸,用99mTc标记后(简称99mTc-DNA),一部分用脂质体包裹,以不同放射性强度的99mTc-DNA及脂质体包裹的99mTc-DNA转染细胞,于转染后不同时间测定细胞摄取率,在转染后18 h测定细胞返流比率,用四唑盐比色实验检测反义抑制细胞的生长状况,用流式细胞术测定癌蛋白的表达.结果在1～5 h内,细胞的摄取率随时间的延长而增加,脂质体包裹的99mTc-DNA的细胞摄取率明显高于未用脂质体包裹的99mTc-DNA.四唑盐比色实验,随着脂质体介导的99mTc-反义DNA剂量的增加,细胞数量逐渐减少,而正义、无义寡聚核苷酸组,细胞数量则没有减少的趋势.细胞的返流比率,反义、正义、无义寡核苷酸分别为39.51%、44.12%、63.92%.测定癌蛋白的荧光强度,反义寡核苷酸组2.9860±0.3733、正义寡核苷酸组4.2600±0.2218、无义寡核苷酸组5.2620±0.8562,反义寡聚核苷酸组的荧光强度明显低于正义和无义寡聚核苷酸组.结论脂质体介导的99mTc标记的反义寡核苷酸能抑制癌细胞的生长和癌蛋白的表达.
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STAT4Bax、c-myc 在非小细胞肺癌组织中的STAT4与Bax、c-myc在表达及相关性分析
目的:分析信号转导与转录激活因子-4(signal transducer and activator of transcription -4,STAT4)、Bax与c-myc在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织及正常肺组织中的表达,并比较STAT4与Bax、c -myc之间的关系,初步探讨STAT4与NSCLC发生发展的关系.方法:应用免疫组化染色SP法,检测STAT4、Bax与c-myc在40例NSCLC组织和20例正常肺组织中的表达情况.结果:①STAT4在NSCLC组织中的表达明显高于正常肺组织(P＜0.01).②STAT4在腺癌组织中的表达显著高于鳞癌(P＜0.01).③STAT4与Bax在NSCLC组织中的表达比较无相关性（P＞0.05）.④STAT4与c-myc在NSCLC组织中的表达比较无相关性(P＞0.05).结论:①STAT4在NSCLC组织中表达增加,且与肿瘤的组织学类型有关,提示STAT4在NSCLC的发生过程中可能发挥了某种作用.②STAT4在NSCLC组织中的表达与Bax、c-myc无相关性,提示STAT4可能没有从促凋亡及癌基因相关途径发挥其作用.
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miR-145下调c-Myc基因抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖
目的:探讨人乳腺癌细胞MCF-7中miR-145是否通过调控c-Myc参与肿瘤细胞的生长.方法:化学合成miR-145-3p和miR-145-5p并分别转染MCF-7细胞;CCK-8法检测转染后24、48、72 h的细胞增殖情况;RT-PCR检测转染72 h后MCF-7细胞中c-Myc mRNA表达量的变化.结果:与阴性对照组和空白组相比,CCK-8结果显示5p组细胞增殖抑制显著(P<0.05),而3p组抑制效果不明显((P>0.05));RT-PCR结果显示,5p组和3p组细胞中c-Myc mRNA的表达量均下调,且5p组细胞的下调更显著(P<0.05).结论:乳腺组织中miR-145负调控c-Myc的表达,可能参与人乳腺癌的发生过程.
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三阴乳腺癌中C-myc和Skp2的表达及相关性研究
目的 检测三阴乳腺癌(TNBC)组织中C-myc和Skp2的表达情况及其意义.方法 选取2008年1月-2011年12月手术切除的TNBC标本56例,采用免疫组织化学链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法检测它们和30例癌旁正常乳腺组织中C-myc和Skp2的表达情况.结果 TNBC组织中C-myc和Skp2表达定位于细胞核,其表达率分别为57.14％ (32/56)和58.93％ (33/56),明显高于癌旁正常组织(P＜0.05); 56例TNBC组织中,C-myc和Skp2蛋白在组织学分级Ⅲ级表达率高于Ⅰ+Ⅱ级(P＜0.05);C-myc和Skp2的病理分期Ⅲ期的表达率高于Ⅰ-Ⅱ期(P＜0.05);表达率高低与腋窝有无淋巴结转移有关(P＜0.05),而与病理组织类型无关(P＞0.05);相关性分析显示,C-myc和Skp2二者之间呈正相关(P＜0.05).结论 C-myc和Skp2在TNBC中呈明显高表达,与TNBC的发生、发展和转移密切相关.
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非小细胞肺癌中PGSK-3β、CEA、C-myc表达与临床病理因素的相关性研究
目的:研究非小细胞肺癌中PGSK-3β、CEA、C-myc的表达,探讨它们与肺癌临床病理因素的相关性及在肺癌中三指标之间的相关性.方法:运用免疫组化法检测90例肺癌PGSK-3β、CEA、C-myc的表达情况.结果肺腺癌PGSK-3β阳性率明显高于鳞癌(P<0.05),临床Ⅲ-Ⅳ期阳性率显著高于Ⅰ-Ⅱ期(P<0.05).周围型肺癌CEA阳性率显著高于中央型肺癌(P<0.01),有淋巴结转移者阳性率显著高于无淋巴结转移者(P<0.05).肺癌中、低分化组C-myc阳性率显著高于高分化组(P<0.05);C-myc阳性强度表达呈抛物线状趋势,在中分化组显著高于低分化组和高分化组.肺癌中PGSK-3β与CEA表达呈正相关(P<0.05).结论:PGSK-3β促进肺癌的演进过程,与肺癌的分化、分期相关.肺癌高表达CEA时癌组织异质性粘附增加,有利于其浸润与转移.肺癌中C-myc表达增加是肺癌发生中的常见分子事件,与癌细胞分化有关.肺癌中PGSK-3β与CEA表达呈正相关.
