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类风湿关节炎患者PBMC中凋亡相关蛋白Bcl-2与c-FLIP的表达及其意义
目的 探讨类风湿关节炎(RA)患者外周血单个核细胞(PBMC)中凋亡相关蛋白Bcl-2与c-FLIP的表达水平及其临床意义.方法 60例类风湿关节炎患者外周血标本按RA疾病活动指数(DAS28)分为低度活动期(DAS28<3.2)、中度活动期(DAS283.2～5.1)与高度活动期(DAS28>5.1),以同期25例健康体检者外周血作为健康对照组(N组).实时荧光定量PCR法检测RA患者PBMC中Bcl-2、c-FLIP、caspase-8凋亡相关蛋白的mRNA表达水平;蛋白免疫印迹法检测PBMC中c-FLIP、caspase-8蛋白表达水平.结果 Bcl-2的低活动组mRNA相对表达量为1.02±0.35,高于健康对照组(0.32±0.18,P<0.05),而中、高活动组分别为0.08±0.01,0.05±0.02,低于健康对照组(均P<0.05).c-FLIP的低、中、高三个活动组mR-NA相对表达量分别为1.27±0.28,1.32±0.34,1.93±0.40,均高于健康对照组(1.08±0.12,均P<0.05);caspase-8的低、中、高组mRNA相对表达量分别为2.77±0.97,4.52±0.85,2.13±0.44,也均高于健康对照组(均P<0.05).中活动组c-FLIP蛋白表达明显高于健康对照组(P<0.05),而低、高活动组与对照组差异无统计学意义(P>0.05);中、高活动组caspase-8蛋白表达明显高于健康对照组(P<0.05),而低活动组表达差异无统计学意义(P>0.05).结论 PBMC中凋亡相关蛋白c-FLIP mRNA表达水平随着RA疾病的进程增高,而Bcl-2只有低活动组有明显增高,此可为类风湿关节炎发病机制的后续研究提供参考.
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碘对人甲状腺细胞凋亡相关蛋白表达影响
目的 探讨有机碘和无机碘对体外培养的人甲状腺细胞凋亡相关蛋白Fas、FasL和p53表达影响.方法 取正常人甲状腺细胞进行培养,实验设对照组(培养液)和碘化钾组及有机碘组(碘浓度分别为0.1、10、1 000 μmol/L),培养48 h,采用免疫组织化学技术测定细胞凋亡相关蛋白表达的情况.结果 10、1 000 μmol/L碘化钾组与有机碘组甲状腺细胞Fas表达量分别为(0.131 8±0.010 0)、(0.217 4 ±0.017 7)、(0.124 5 ±0.0074)、(0.158 5 ±0.010 0),均高于对照组的(0.072 8 ±0.009 3),差异有统计学意义(P ＜0.01);10、1 000 μmol/L碘化钾组与有机碘组甲状腺细胞FasL表达量分别为(0.108 1±0.015 5)、(0.178 4±0.010 4) 、(0.093 8±0.007 0)、(1 382 ±0.008 0),均高于对照组的(0.060 8±0.009 6),差异有统计学意义(P＜0.01),呈剂量效应关系;与相同剂量碘化钾组比较,1 000 μmol/L有机碘组甲状腺细胞Fas表达量较低,10、1 000 μmol/L有机碘组甲状腺细胞FasL表达量较低,差异均有统计学意义(P＜0.01);各组甲状腺细胞p53表达量无明显差异.结论 高碘可促进甲状腺细胞凋亡的发生,且有机碘对甲状腺细胞的影响小于碘化钾.
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白藜芦醇对乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡及Bcl-2蛋白表达的影响
目的 探讨白藜芦醇(resveratrol,Res)对人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡及相关蛋白Bcl-2表达的影响.方法 不同浓度白藜芦醇处理人乳腺癌MDA-MB-231细胞,MTT法检测白藜芦醇对细胞增殖抑制率,流失细胞技术检测细胞凋亡,Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bcl-xl、Mcl-1和Caspase-3的表达.结果 白藜芦醇25、50、100、200 μmol/L处理细胞,增殖抑制率分别为(24.22±1.66)％、(30.79± 1.60)％、( 45.72±1.25)％和(53.31±1.94)％.白藜芦醇0、50、100、200μmol/L处理细胞,凋亡率分别为(3.53±0.25)％、( 28.80±1.34)％、(38.78±1.19)％和(58.96±1.26)％.Western blot结果显示,白藜芦醇处理细胞后,Caspase-3蛋白裂解片段表达增加,凋亡相关蛋白Bcl-2和Bcl-xl的表达减低.结论 白藜芦醇能诱导MDA-MB-231细胞凋亡增加,这可能与白藜芦醇激活Caspase-3蛋白同时抑制凋亡相关蛋白Bcl-2和Bcl-xl表达有关.
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应用细胞培养、流式细胞技术和Western Blot检测氮杂糖化合物SZL在体外抑制人宫颈癌HeLa细胞增殖与诱导凋亡的效应
目的:存在于细胞表面的糖复合物参与细胞的通讯、增殖、迁移、分化等生理过程,在机体中具有复杂的生物学调控作用.探讨氮杂糖化合物SZL在体外对人宫颈癌HeLa细胞生长、DNA损伤、线粒体膜电位以及细胞凋亡的干预.方法:实验于2004-12/2006-12在北京大学医学部细胞生物学系完成.①实验材料:人子宫颈癌HeLa细胞株由北京大学医学部细胞生物学系杜晓娟副教授提供.SZL由北京大学天然药物及仿生药物重点实验室叶新山教授合成.②实验方法:取对数生长期HeLa细胞,消化后制成细胞悬液,按1.5×103/孔的密度接种,培养24 h细胞完全贴壁后,SZL组加入5.10,25,50,100 μmol/L的SZL,空白对照组加入DMEM培养液.③实验评估:SZL作用24,48,72 h后,采用酸性磷酸酶法检测细胞生长抑制情况,瑞氏染色镜下观察细胞形态;AnnexinV-PI染色后,流式细胞仪检测细胞凋亡率;Rhodamine123标记活细胞后,流式细胞仪检测线粒体膜电位的变化;Western Blot法检测SZL作用后凋亡相关蛋白的表达;单细胞凝胶电泳检测SZL作用后细胞DNA损伤情况.结果:①细胞生长抑制:5,10,25,50,100 μmol/L SZL作用24,48,72 h后的半数抑制浓度分别为73.6,43.2,33.6 μmol/L,显著抑制Hela细胞的增殖.镜下空白对照组HeLa细胞分布均匀,胞质透明清亮,呈铺展状态生长;50 μmol/L SZL作用24 h后,HeLa细胞密度变稀,体积变小,胞核染色质呈聚集状态.②细胞凋亡:50,100 μmol/L SZL作用24 h后细胞凋亡率分别为(3.51±0.41)%,(58.46±8.45)%;在24～48 h过程中,凋亡的细胞逐渐坏死,SZL作用48 h后细胞凋亡率分别为(10.51±2.20)%,(17.29±7.52)%.空白对照组24,48 h后细胞凋亡率均为1%.③线粒体跨膜电位的变化:50 μmol/L SZL作用24,48 h后,HeLa细胞的线粒体膜电位平均荧光强度均明显低于空白对照组(P＜0.01).④凋亡相关蛋白的表达:25,50,100 μmol/L SZL作用HeLa细胞48 h后,凋亡相关蛋白pro-caspase3、Bcl-2表达降低,细胞色素c含量升高.⑤细胞DNA损伤;50 μmol/L SZL作用24 h后,受损细胞DNA在电场中迁出,呈现彗星状拖尾.结论:氮杂糖类化合物SZL能够抑制HeLa细胞的增殖,诱导细胞发生DNA损伤,通过干预线粒体途径实现细胞凋亡.
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不同剂量血管内皮生长因子在低氧环境下可保护神经干细胞
背景:血管内皮生长因子是一种可以促进血管形成的细胞因子,近来有动物实验及临床研究显示其在急性缺血性卒中以及脊髓损伤组织中表达增加,可抑制细胞凋亡,但具体作用机制尚不明确.目的:以不同剂量血管内皮生长因子干预低氧环境诱导的神经干细胞,观察其保护作用,并探索其作用机制.方法:分离培养胎鼠大脑皮质神经干细胞,随机分为空白对照组、缺氧组以及低、中、高剂量血管内皮生长因子组.空白对照组在体积分数35％氧气环境培养24 h,缺氧组以及低、中、高剂量血管内皮生长因子组在体积分数3％氧气环境培养24 h,低、中、高剂量血管内皮生长因子组培养基中分别加入20,40和80μmol/L血管内皮生长因子.CCK-8法、TUNEL法检测各组细胞增殖和凋亡情况,Western blot检测神经细胞凋亡相关蛋白的表达水平.结果与结论:与空白对照组相比,缺氧组神经干细胞增殖能力下降,凋亡细胞数量明显增加,且细胞中Bcl-2和核因子κB表达水平下降,Bax和TWIK相关的酸敏感钾离子通道蛋白表达水平增加,而不同剂量的血管内皮生长因子都能抑制上述现象,其中40μmol/L血管内皮生长因子的作用效果为显著.结果说明血管内皮生长因子能通过干预凋亡相关蛋白表达而影响细胞凋亡,进而发挥神经保护作用,且40μmol/L血管内皮生长因子效果强.
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牙科烤瓷合金对金黄地鼠颊囊黏膜中凋亡相关蛋白表达的影响
背景:有研究证实,牙科烤瓷合金具有不同程度的细胞毒性,可导致细胞凋亡,但以往关于牙科烤瓷合金引起细胞凋亡的研究多采用体外实验,无法很好地模拟口腔环境.目的:观察牙科烤瓷合金对金黄地鼠颊囊黏膜中凋亡相关蛋白表达的影响.方法:取60-70 d龄雄性金黄地鼠36只(北京维通利华实验动物技术有限公司提供),随机分6组,分别在颊囊黏膜表面缝合固定镍铬烤瓷合金、钴铬烤瓷合金、纯钛烤瓷合金、钯基烤瓷合金、金铂烤瓷合金及聚丙烯(阴性对照).固定14,28 d,切取与试件接触的颊囊黏膜,Western Blot检测黏膜细胞中Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9蛋白表达情况.结果与结论:①固定14,28 d时,金铂烤瓷合金组Caspase-3蛋白表达量与阴性对照组比较无明显差异(P>0.05),其余4种烤瓷合金组Caspase-3蛋白表达量高于阴性对照组(P<0.05);②固定14 d时,各烤瓷合金组Caspase-8蛋白表达量均高于阴性对照组(P<0.05);固定28 d时,镍铬烤瓷合金组、钯基烤瓷合金组Caspase-8蛋白表达量高于阴性对照组(P<0.05),其余烤瓷合金组Caspase-3蛋白表达量与阴性对照组比较无明显差异(P>0.05);③固定14 d时,各烤瓷合金组Caspase-9蛋白表达量均高于阴性对照组(P<0.05);固定28 d时,钴铬合金组Caspase-9蛋白表达量与阴性对照组比较无明显差异(P>0.05),其余烤瓷合金组Caspase-9蛋白表达量均高于阴性对照组(P<0.05);④结果表明,5种牙科烤瓷合金均不同程度引起凋亡相关信号分子的表达增加.
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急性马尾神经压迫后脊髓前角运动神经元细胞凋亡相关蛋白的表达规律
背景：马尾综合征往往遗留有会阴区皮肤感觉减退，尿便控制功能降低，甚至出现男性功能受损。实验研究发现外周神经纤维损伤后，神经元胞体会发生凋亡，这与损伤的性质、神经元种类、动物种属、年龄、与神经元距离等因素有关。目的：探讨急性马尾神经压迫后脊髓前角运动神经元细胞凋亡及相关蛋白的表达规律。方法：27只家犬随机分为3组，压迫组及对照组制备马尾神经压迫模型，正常组不造模。压迫组又分为水囊压迫持续4，8，12，24，48，72，168 h组，每组3只；对照组只置入水囊，不注水。采用TUNEL标记法检测脊髓前角运动神经元凋亡情况，免疫组化SABC法检测 Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白的表达，用Qwin550Cw型图像采集与分析系统检测 Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达阳性细胞灰度值。结果与结论：急性马尾神经压迫后脊髓前角运动神经元细胞发生凋亡，压迫12 h即有阳性细胞检出，72 h神经元凋亡达到高峰。Bax、Bcl-2蛋白在正常组即有少量表达，Caspase-3蛋白在正常组、对照组无表达。Bax、Bcl-2蛋白表达于压迫持续8 h开始显著增加，72 h达高峰，168 h降至正常；Bax蛋白表达增幅较Bcl-2大。Caspase-3蛋白于压迫持续12 h开始表达，72 h达高峰，168 h仍有少量表达；Bax、Caspase-3蛋白表达在72 h达高峰，Bcl-2蛋白表达则无明显上升。提示急性马尾神经压迫后脊髓前角运动神经元发生凋亡；Bax、Bcl-2蛋白表达呈相互拮抗作用，在Bax/Bcl-2复合体中，Bax蛋白占优势时促进凋亡，诱发Caspase-3蛋白表达，导致神经元凋亡发生。
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胃粘膜PCNA、Fas表达与Hp感染及癌变关系的研究
[目的] 探讨胃上皮细胞增殖、凋亡与幽门螺杆菌(Hp)感染的关系及Hp感染致癌的可能机制. [方法] 应用快速尿素酶试验与W-S银染色法将各种病变分为Hp感染阳性组和阴性组,应用免疫组化SP法对各种病变增殖细胞核抗原(PCNA)、凋亡相关蛋白(Fas)的表达进行检测. [结果] Hp阳性组PCNA表达明显高于Hp阴性组(P<0.005),Fas表达随病变程度的加重而逐渐加重,但只有在浅表性胃炎组中Hp阳性者Fas表达高于Hp阴性者(P<0.02). [结论] Hp感染可促进胃上皮细胞PCNA及Fas表达增加,且Hp的这种作用主要发生在胃粘膜病变的早期.Hp促进增殖和凋亡可能是其致癌的重要机制之一.
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NOD.H-2h4小鼠自身免疫性甲状腺炎中细胞凋亡及凋亡相关蛋白Fas、Fas-L和FLIP的表达
目的 观察NOD.H-2h4小鼠自身免疫性甲状腺炎时甲状腺内细胞凋亡和凋亡相关蛋白Fas、Fas-L和FLIP的表达情况,研究细胞凋亡在自身免疫性甲状腺炎中的作用.方法 7～8周龄的NOD.H-2h4小鼠,饲以0.05%NaI溶液作为实验组,对照组小鼠则饲以自来水.在给碘后8,16,32周处死小鼠,HE染色观察甲状腺的炎症程度,TUNEL方法观察甲状腺内细胞凋亡情况,免疫组化方法观察凋亡相关蛋白Fas、Fas配体(Fas-L)和FLICE抑制蛋白(FLIP)的表达情况.结果 实验组小鼠出现自身免疫性甲状腺炎,对照组无甲状腺炎产生.甲状腺炎时,TUNEL染色阳性细胞主要集中在浸润淋巴细胞中,甲状腺滤泡上皮细胞罕见凋亡;Fas、Fas-L和FLIP主要表达在甲状腺内的浸润淋巴细胞上;部分甲状腺滤泡上皮细胞表达Fas,而Fas-L和FLIP在甲状腺滤泡上皮细胞未见明显表达.结论 NOD.H-2h4小鼠自身免疫性甲状腺炎时甲状腺细胞无明显凋亡,提示细胞凋亡机制未参与甲状腺炎的发病.甲状腺内浸润淋巴细胞虽然表达Fas但并未出现明显凋亡,这可能与其同时表达抗凋亡蛋白FLIP有关.
关键词： NOD.H-2h4小鼠 自身免疫性甲状腺炎 凋亡 凋亡相关蛋白 -
氯沙坦减轻梗阻性肾病大鼠肾间质纤维化及肾小管上皮细胞凋亡机制的研究
目的 探讨氯沙坦对单侧输尿管梗阻大鼠模型肾小管上皮细胞凋亡和肾间质纤维化的影响及其可能机制.方法 通过结扎并离断大鼠单侧输尿管制作梗阻性肾病模型,对照组进行假手术.留取术后第3,5,7及14天肾脏组织及血尿标本.结果 单侧输尿管梗阻使α-SMA和Ⅰ型胶原蛋白的表达水平明显增加,并导致肾小管间质纤维化和肾组织细胞凋亡明显增加.肾间质纤维化的进展伴随着STAT3的磷酸化和2种凋亡相关蛋白(Bax和Bcl-2)的表达改变.氯沙坦干预治疗可以减少这些变化.结论 在单侧输尿管梗阻的大鼠模型中,氯沙坦能缓解肾脏纤维化及肾小管细胞的凋亡程度.这种疗效可能是通过部分阻滞STAT3信号通路完成的.
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云芝糖肽、丹参酮ⅡA对荷瘤小鼠的抗肿瘤及免疫调节作用
目的:研究云芝、丹参有效组分单体以及复方对EAC荷瘤小鼠的抗肿瘤和免疫调节作用,为肿瘤的中药治疗新方剂的临床广泛应用提供一定的实验基础.方法:建立EAC实体型荷瘤小鼠动物模型,随机分为6组:生理盐水对照组(NS)、阿霉素治疗组(ADM)、云芝糖肽组(PSP)、丹参酮Ⅱ组(TanⅡA)、复方组(PSP+TanⅡA)和综合治疗组(PSP+TanⅡA+ADM),并给予相应药物治疗,应用免疫组化法检测小鼠脾脏IL-2、IL-2R和肿瘤组织中周期蛋白CDK4以及凋亡蛋白Bax、Bcl-2表达,并计算抑瘤率、脏器指数,结果与对照组和化疗组进行比较.结果:云芝糖肽组小鼠脾脏IL-2、IL-2R水平高于NS组和化疗组(P<0.05),各药物治疗组肿瘤Bax均高于化疗组,CDK4均低于NS组(P<0.05),复方组Bax高于Ns组(P<0.05),云芝组糖肽、丹参酮ⅡA组、综合治疗组CDK4低于化疗组(P<0.05),云芝糖肽组、复方组与综合治疗组肿瘤Bcl-2低于NS组(P<0.05),各药物治疗组对肿瘤有明显的抑制作用(P<0.05),复方组胸腺指数高于NS组,各药物治疗组胸腺指数均高于化疗组(P<0.05).结论:云芝糖肽、丹参酮ⅡA对EAC荷瘤小鼠有明显的抗肿瘤和免疫调节作用,并能缓解化疗药物所引起的毒副作用,二者联用存在一定协同作用.
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预处理舒芬太尼对缺血大鼠心肌细胞凋亡的影响及相关Bcl-2、Bax蛋白的表达
舒芬太尼以其对血流动力学干扰较轻,起效快,消除半衰期较短.镇痛效能更强的特点倍受临床医生的青睐,广泛应用于临床,尤其适用于心血管手术麻醉.现已证实预处理舒芬太尼可减轻心肌缺血再灌注损伤[1],对心肌有保护作用,但其对心肌细胞凋亡的影响却鲜有报道.本实验旨在通过检测大鼠心肌组织中凋亡相关蛋白的表达情况,以探讨舒芬太尼预处理与心肌细胞凋亡的关系,为心脏手术和心脏病人非心脏手术围术期用药提供参考.
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黏着斑激酶在鼻咽癌细胞系6－10 B中的表达及其对Bcl－2和Bax表达的影响
目的：探讨黏着斑激酶（FAK）在鼻咽癌细胞6－10B中的表达及其对凋亡相关蛋白Bcl－2和 Bax的影响。方法鼻咽癌细胞6－10B培养后利用RNA干扰（RNAi）技术下调FAK在6－10B中的表达水平，通过RT－PCR、Real－time PCR、Western印迹检测其干扰效率，通过 Western 印迹检测干扰后凋亡相关蛋白Bcl－2和Bax的表达水平，通过Hoechst染色观察细胞凋亡形态。结果干扰后 FAK在鼻咽癌细胞6－10B中表达量较低、下调明显（P＜0．05）；鼻咽癌细胞系6－10B干扰FAK后，Bcl－2和Bax的表达量发生较明显改变（P＜0．05）；Hoechst染色结果显示干扰后细胞出现明显的凋亡形态。结论干扰FAK后促进鼻咽癌细胞凋亡，提示可以通过下调FAK表达水平促进肿瘤细胞凋亡，为鼻咽癌的基因治疗提供新的思路。
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五味子多糖对脑肿瘤干细胞的凋亡诱导及生长抑制作用
目的:探讨五味子多糖(SCP)对脑肿瘤干细胞(BTSCs)生长的抑制作用,阐明 SCP抑制 BTSCs生长的抑制机制.方法:培养原代人脑肿瘤细胞,CD133免疫磁珠法分选获得 BTSCs,免疫荧光法鉴定 BTSCs中神经干细胞标记抗原CD133和 Nestin表达情况;将 BTSCs 分为对照组和不同剂量 SCP 组,分别用0、200、400和800 μg·L-1SCP处理;噻唑蓝(MTT)法检测各组 BTSCs的增殖率,Annexin V-PI分析细胞凋亡率,酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组BTSCs培养上清中Bax、Bcl-2和 Cascpase-3蛋白表达水平.结果:免疫荧光染色,CD133和 Nestin在BTSCs中呈阳性表达.MTT检测,与对照组比较,各剂量 SCP组BTSCs增殖率降低,400和800 mg·L-1组差异有统计学意义(P<0.05).Annexin V-PI检测,800 mg·L-1SCP组细胞凋亡率明显升高,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05).ELISA法检测,与对照组比较,各剂量 SCP组 BTSCs中Bax蛋白表达水平升高(P<0.05),800 mg·L-1SCP组 Bcl-2蛋白表达水平降低(P<0.05),各剂量 SCP组Bax/Bcl-2比值明显升高(P<0.05).与对照组比较,800 mg·L-1SCP组BTSCs中Caspase-3蛋白表达水平明显升高(P<0.01).结论:SCP可抑制BTSCs生长,诱导细胞凋亡可能是其作用机制之一.
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针刺“头四关穴”对脑缺血再灌注家兔 Bcl－2、c－fos和 Caspase－3蛋白表达的影响
目的：观察针刺“头四关穴”对家兔局灶脑缺血再灌注损伤后凋亡相关蛋白表达的影响，探讨其对神经细胞的保护机制。方法：将家兔随机分为假手术组、模型组和针刺组，每组又随机分为1天、3天和7天3个时间点。采用大脑中动脉线栓法（ MCAO）建立家兔局灶性脑缺血再灌注模型，在脑缺血2 h后进行再灌注。针刺组家兔在脑缺血6h后采用电针“头四关穴”进行治疗，每日1次。在再灌注后1天、3天和7天分别处死取材。免疫组化法检测脑组织缺血区周围Bcl－2、c－fos和Caspase－3蛋白表达。结果：Bcl－2、c－fos和Caspase－3蛋白在假手术组表达较低，在模型组呈现出高表达，1天时表达高；与模型组相比，针刺组各相应时间点c－fos和Caspase－3蛋白表达均明显降低，而Bcl－2蛋白表达则明显增高（P＜0．01）。结论：针刺“头四关穴”能上调Bcl－2蛋白表达，下调c－fos和Caspase－3蛋白表达，针刺“头四关穴”可能通过抑制脑缺血再灌注损伤后细胞凋亡途径，从而对脑缺血再灌注损伤有保护作用。
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NF-κB/P65信号通路促进子宫内膜癌自噬或凋亡
目的 探讨NF-κB/P65信号通路在子宫内膜癌中与自噬、凋亡以及ER、PR之间的关系.方法 采用免疫组化和Western blot法检测53例子宫内膜癌与癌旁组织中的NF-κB/P65、自噬相关蛋白Beclin-1、LC3及凋亡相关蛋白Caspase-8、Survivin的表达,并与临床资料以及ER、PR的表达进行了统计学分析.结果 与癌旁组织相比,Beclin-1、LC3、Caspase-8在子宫内膜癌组织中表达明显减少,差异具有统计学意义(P ＜0.05,P＜0.01,P＜0.05);而癌组织中,NF-κB/P65和Survivin虽与癌旁差异无统计学意义,但已见明显的升高趋势.且结合临床资料分析发现,Beclin-1、LC3的表达均与ER相关(P＜0.05),Survivin、Caspase-8的表达与ER、PR相关(均为P＜0.05).结论 NF-κB/P65通过抑制自噬与凋亡,促进子宫内膜癌的发生与发展;ER、PR表达结合NF-κB/P65及自噬与凋亡指标的表达,对雌激素依赖性子宫内膜癌的临床治疗及预后判定具有重要意义.
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小鼠肾发育过程中增殖与凋亡相关蛋白在树脂切片上的表达
在石蜡切片或冷冻切片上做免疫组织化学实验经常遇到组织结构不全的问题.树脂包埋的组织可以展示保存良好的形态结构,但树脂包埋所采用的醛类固定剂可以和组织抗原交联,同时环氧树脂也掩盖了抗原的共价键,因此树脂切片上的抗原表达很弱[1].采用适当浓度的强碱溶液(2 g KOH溶于15ml甲醇与环氧丙烷溶液)蚀刻环氧树脂可以充分暴露与固定剂交叉结合并被树脂覆盖的抗原2-4],同时采用高温高压加热可以提高其抗原性[5].但是,在树脂切片上应用强碱溶液或许能极大地影响抗原、固定剂和树脂包埋成分的分子和空间结构.因此,对于形态学和病理学研究者来说,改善树脂切片的免疫显色是一项长期而困难的任务.
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Bcl-2家族与肝再生
Bcl-2家族成员是参与调控凋亡信号通路的重要蛋白质.该家族的抗凋亡和促凋亡成员通过复杂的相互作用来改变线粒体外膜的通透性,诱导或抑制线粒体内容物如细胞色素c、凋亡诱导因子等的释放,从而决定细胞是否发生凋亡.通过研究啮齿类动物手术切除后肝再生模型的基因表达情况,已经发现有多个Bcl-2家族成员参与其中.本文主要阐述目前Bcl-2家族成员对肝再生的影响及其调节机制.一、Bcl-2家族的基本情况凋亡相关蛋白Bcl-2家族参与调控线粒体凋亡途径,在功能上划分为促凋亡(pro-apoptosis)和抗凋亡(anti-apoptosis)两个亚家族.促凋亡和抗凋亡成员之间通过复杂的蛋白质-蛋白质相互作用和双方的比例构成变化,来调控凋亡信号通路的启闭.此外还可根据家族成员拥有Bcl-2同源结构域(BH,Bcl-2homology domain)的多寡,在结构上划分为多BH和单BH(BH3-only)两类分子,目前发现全部BH3-only分子都促进细胞凋亡,而多BH分子却兼而有之(图1).
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急性肝功能衰竭大鼠中凋亡相关蛋白的表达
细胞凋亡为急、慢性肝病的主要特征之一.近来研究表明,Bcl-2家族蛋白在细胞凋亡的胞内信号转导途径中发挥重要作用[1-3].目前发现,Bcl-2家族蛋白有20余种,其中Bcl-2、Bcl-xL蛋白具有抗凋亡作用,而Bad、Bax和Bid等具有促凋亡作用[2-4].
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坐骨神经损伤对背根节细胞凋亡及细胞凋亡相关蛋白表达的影响
目的观察大鼠坐骨神经条件性损伤后对背根节细胞凋亡及细胞凋亡相关蛋白表达的影响。方法将45只成年Wistar大鼠，按手术的不同随机分为3组：正常对照组(A组，n = 5）；坐骨神经压榨伤组(B组,n = 20); 坐骨神经切断组（C组，n = 20）。B、C两组又按术后3 d，2周、1个月和2个月取材时间分为4个时间组，每组5只大鼠。各时间组取鼠的L5背根神经节后，以TUNEL法检测细胞的凋亡数，以免疫组化技术检测Bcl - 2和Bax的表达。结果正常组及B、C两组伤后3 d时未检出凋亡细胞;B、C两组的细胞凋亡率在伤后2周达到高峰，以后随时间的推移而逐渐降低。C组的细胞凋亡率明显高于B组。背根节细胞凋亡相关蛋白Bcl - 2及Bax的表达，伤后2周达到高峰。B组中Bcl - 2和Bax的表达呈现从低到高而后逐渐恢复正常的规律；而C组的表达始终保持在高水平。结论细胞凋亡相关蛋白Bcl - 2和Bax参与外周神经损伤后背根节细胞凋亡的调节。外周神经的不同损伤方式对背根节细胞凋亡及细胞凋亡相关蛋白的表达影响不同。
