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胰岛素和生长抑素在生后发育期家兔胰腺中的表达
目的:探讨生后发育期家兔胰岛内胰岛素(insulin,Ins)和生长抑素(somatostatin,SST)的表达及分布特点.方法:生后5、25、35、60、90d家兔共50只,取胰腺组织制成连续切片,用SABC法和图像分析法对Ins和SST免疫反应(immunoreactive,IR)细胞的定位表达进行研究.结果:家兔生后5d,Ins-IR和SST-IR细胞团数量多染色深；25 ～90 d,Ins-IR细胞平均灰度值呈升高(P＜0.05)又降低的变化,SST-IR细胞生后25d时平均灰度值高(P＜0.05),此后平均灰度值降低；胰岛内Ins-IR和SST-IR细胞面数密度值(NA)在25 d时高(P＜0.05).结论:Ins和SST在胰腺中的表达随家兔生长发育而变化,提示Ins和SST参与调节生后发育期家兔胰腺内分泌功能的成熟过程.
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海洛因依赖大鼠胰岛D细胞免疫组织化学研究
目的:探讨海洛因依赖对大鼠胰岛生长抑素(somatostatin,SS)免疫反应(IR)细胞(D细胞)的影响.方法:用免疫组织化学SABC单染法、形态计量法,观察海洛因依赖大鼠胰岛SS-IR细胞免疫组织化学反应及平均灰度值的变化.结果:与正常组和盐水对照组比较,海洛因依赖大鼠胰岛SS-IR细胞免疫染色增强,平均灰度值降低,差异有显著性.结论:胰岛SS-IR细胞参与了海洛因依赖期间机体的调节过程.
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胰岛细胞移植治疗成人Ⅰ型糖尿病的临床应用初探
目的 初步探讨成人胰岛细胞移植治疗成人Ⅰ型糖尿病的临床应用价值.方法 自2006年开始经不断探索和反复的动物实验,初步掌握了成人胰岛细胞移植技术,并应用于1例临床Ⅰ型糖尿病伴严重肠系膜血管病变患者.结果 利用胶原酶灌注消化以及Ficoll分离液分层纯化技术的方法能够成功获得纯化的成人胰岛细胞;经胰岛素释放实验表明,实验中收获的胰岛具有良好的胰岛素分泌功能;经临床实践,该例糖尿病患者输注此胰岛后,血糖和糖化血红蛋白较移植前下降(P<0.05),腹泻症状较术前明显改善,体重增加了4.5 kg,移植后无特殊并发症发生.结论 成人胰岛细胞移植治疗Ⅰ型糖尿病安全有效,此例为云南省成人胰岛细胞移植平台的建立和应用提供了理论和实验依据.
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半自动纯化法分离纯化成年猪胰岛细胞的实验研究
目的 探索大规模猪胰岛细胞分离纯化的方法.方法 采用胶原酶消化法和Ficoll液不连续密度梯度离心进行分离纯化；采用双硫腙染色、AO-PI染色、胰岛素释放试验检测胰岛的纯度和活性.结果 消化后平均获取的胰岛细胞团数量为(4 387±617)IEQ/g胰腺组织；纯化后平均为(3 192±756)IEQ/g胰腺组织；获取的猪胰岛细胞平均纯度为(60.15±2.35)％,活率为(80.00±0.47)％.结论 所获得的胰岛细胞有较好的纯度和良好的生物活性,显示半自动纯化法分离纯化成年云南小耳猪胰岛细胞是成功可行的,可以满足进一步异种移植的研究需要,可为大规模分离纯化猪胰岛细胞提供技术支持.
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母乳喂养可降低易感儿童糖尿病风险
挪威一项新研究表明，持续1年多的母乳喂养可降低有遗传倾向的儿童从胰岛自身免疫向1型糖尿病进展的风险。来自奥斯陆大学医院的Nicolai A．Lund-Blix及其同事对2001－2007年间的近50000例新生儿进行了筛查，从中入选908例高危HLA基因型有1型糖尿病遗传倾向者。起初每隔3个月后来每隔1年采集其血样并对家长进行问卷调查，平均随访达7．7年。结果发现，随访期间，共计7．7％的受试者存在胰岛自身免疫，3．4％患1型糖尿病。进一步分析发现，患及未患1型糖尿病者的母乳喂养持续时间并无明显差异。母乳喂养持续时间与胰岛自身免疫风险之间也无显著相关性。但是，对726例饮食数据可用的婴儿之分析发现，母乳喂养持续时间≥12个月可降低1型糖尿病风险；校正一级亲属患有糖尿病等因素后仍是如此。此外，母乳喂养持续时间≥12个月还可降低胰岛自身免疫向1型糖尿病进展的风险。
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糖尿病患者如何看化验单
糖尿病的实验室检查主要用于糖尿病的筛查、诊断、分型,并了解患者胰岛功能状况、评价治疗效果以及早期发现糖尿病并发症.
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甜食吃的多会得胆结石
日常生活中,越来越多的人们发现自己或者周围的许多人都在不知不觉中患上了胆囊结石这种疾病.众所周知,长期不吃早餐是导致胆囊疾病的重要原因.1985年英国奥克兰学斯克蓝格先生报道,日常生活中精制糖摄人过,也是导致胆石症的重要因素,专家经过动物实验得出证明,糖摄入过量,会增加胰岛紊的分泌,加速胆固醇的积累,造成胆汁内胆固醇、胆汁酸、卵磷脂三者之间的比例失调.
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黄芪竹叶汤治疗消渴病气阴两虚证及对改善胰岛β细胞功能和胰岛素抵抗的作用研究
目的：分析消渴病气阴两虚证治疗中黄芪竹叶汤对胰岛β细胞功能及胰岛素抵抗的作用。方法：应用随机数字表法，将80例消渴病气阴两虚症患者分为两组，每组40例。对照组接受西药治疗，治疗组接受在西药联合黄芪竹叶汤治疗。分析两组治疗前后胰岛β细胞功能及胰岛素抵抗情况。结果：在完成8周治疗后，治疗组 FINS 、2hINS 、空腹 C 肽、2hC 肽及HOMA-β高于对照组，HOMA-IR 低于对照组（P＜0．05）。治疗期间两组间不良反应发生率比较，差异无统计学意义（P＞0．05）。结论：在消渴病气阴两虚症的治疗中黄芪竹叶汤可有效的改善患者的胰岛β细胞功能及胰岛素抵抗情况。
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共表达sCD40L-Ig和CTLA4-Ig双基因修饰原代人内皮细胞包被大鼠胰岛模型的建立
目的:建立以分离培养的原代人脐静脉内皮细胞包被大鼠胰岛细胞模型.方法:分离培养原代人脐静脉内皮细胞,并分别通过免疫组化试验检测人Ⅷ因子相关抗原,透射电镜观察Weible-palade小体,荧光显微镜观察DiI-Ac-LDL的吞噬效果,对所分离的人脐静脉内皮细胞进行鉴定.分离大鼠胰岛细胞,然后在肝素化培养皿中进行共表达sCD40L-Ig和CTLA4-Ig双基因的内皮细胞包被.对包被后的胰岛细胞进行形态学观察并检测其包被前后的功能.结果:分离培养的内皮细胞表达人Ⅷ因子相关抗原,电镜下可以观察到Weible-palade小体,荧光显微镜下可以观察到内皮细胞对DiI-Ac-LDL的吞噬.共表达sCD40L-Ig和CTLA4-Ig双基因的内皮细胞包被胰岛模型可以观察到内皮细胞的绿色荧光,未包被胰岛和内皮细胞包被胰岛的胰岛素释放指数分别为4.09和3.94,与未包被胰岛实验组相比,内皮细胞包被胰岛对高糖刺激反应无明显差异,但胰岛素释放量有所减少.结论:成功分离培养并鉴定了原代人脐静脉内皮细胞,并成功建立内皮细胞包被胰岛细胞模型,包被后胰岛功能正常.
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大鼠实验性牙周炎对胰岛的影响
目的:通过观测实验性牙周炎大鼠胰岛组织形态、检测外周血胰岛素水平和胰岛环氧化酶(cyclooxygenase,COX-2)表达情况,探讨慢性牙周炎对胰岛的影响.方法:将25只SD大鼠随机分为对照组10只和慢性牙周炎组15只,慢性牙周炎组行双侧上颌磨牙结扎法建立牙周炎模型.基线和12周采集外周血,12周处死大鼠,取颌骨和胰腺组织标本做切片,观察牙周和胰腺的组织学改变,测量牙槽骨吸收高度,并采用免疫组织化学法检测胰岛COX-2表达情况.结果:12周时牙周炎组外周血中肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-a,TNF-a)达(10.02±2.16)pg/mL,较对照组(7.64±1.59)pg/mL有明显升高(P<0.05).但牙周炎组的血清胰岛素水平、胰岛形态和COX-2的表达水平均未见明显差异.结论:中等程度慢性牙周炎尚不足以造成大鼠胰岛组织形态和功能的改变.
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胰腺非功能性内分泌肿瘤的CT表现及鉴别诊断
胰腺内分泌肿瘤(pancreatic endocrine tumors, PETs)主要由高分化的胰岛细胞组成.根据临床表现,它们被分为功能性内分泌肿瘤(functioning PETs)和非功能性内分泌肿瘤(nonfunctioning pancreatic endocrine tumors, NF-PETs).NF-PETs在临床上相对少见,但随着影像学的发展,其发生率有所上升,占PETs的比例上升到50%左右[1].现总结8例胰腺NF-PETs的螺旋CT表现,旨在提高对该类肿瘤的重视及术前的确诊率.
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微囊化成人胰岛细胞治疗大鼠糖尿病
1 临床资料成人胰岛采用传统的胰腺导管内注射胶原酶消化方法,应用新型胶原酶-Liberase酶分离胰岛,Ficoll纯化胰岛. 用静电微囊发生器进行海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠(APA)微囊成囊,并用APA微囊包裹成人胰岛细胞. 健康SD大鼠按65 mg/kg剂量肌肉注射链脲菌素(美国Sigma公司),以尿糖强阳性、非禁食血糖>16.5 mmol/L且病程>14 d者作为糖尿病动物模型. 将合格糖尿病大鼠模型27只随机分成3组(空囊组、游离胰岛组、微囊组),每组各9只,以体质量及血糖作为观察指标.
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大鼠胰岛分离与纯化的实验研究
0 引言目前临床胰岛移植的效果仍不理想，提供理想的胰岛或胰岛细胞是发展胰岛移植的基础. 长期以来收获高纯度和高活力的胰岛或胰岛细胞是人们研究的目标. 本文采用胶原酶分次消化与葡聚糖间断密度梯度离心法来探讨大鼠胰腺胰岛的分离与纯化.
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过氧化氢对胰岛微血管内皮细胞钙非依赖型磷脂酶A2表达的影响
目的:研究过氧化氢(H2O2)对胰岛内皮细胞钙非依赖型磷脂酶A2(iPLA2)mRNA表达的影响.方法:用0,30,100和300 μmol/L H2O2诱导IMECs 8 h后进行RT-PCR检测;用300 μmol/L H2O2分别诱导0,4,8和12 h后应用RT-PCR技术进行iPLA2基因表达的检测.采用Annexin V-FTTC/PI双染色检测细胞的凋亡率;采用DIOC6(3)染色检测细胞线粒体膜电位.结果:①300 μmol/L H2O2作用12 h的电泳条带亮度与其他组(0,30,100μmol/L)相比明显减弱,300μmol/L H2O2作用8 h及12 h的电泳条带亮度与0,4 h相比明显减弱.②各浓度H2O2处理组(0,30,100和300 μmol/L)IMECs凋亡率差异具有统计学意义[分别为(2.0±0.5)%,(19.1±5.8)%,(28.4±4.9)%,(40.1±5.1)%,P<0.01];300 μmol/L H2O2处理0,4,8,12 h后,各时间点IMECs凋亡率差异具有统计学意义(P<0.01);③各浓度及各时间点H2O2处理组IMECs细胞内DIOC6(3)的荧光强度差异具有统计学意义(P<0.01).结论:H2O2对IMECs iPLA2的表达具有抑制作用,其抑制作用呈量效及时效关系.
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胰岛素作用对胰岛β细胞磷脂酶Cγ1表达的影响
目的:观察胰岛素对大鼠胰岛β细胞内磷脂酶Cγ1(PLCγ1)表达的影响.方法:大鼠胰岛分离纯化.通过HE染色观察纯化胰岛的形态特征,采用免疫组织化学方法并结合激光扫描共聚焦显微镜和图像分析技术对胰岛β细胞表达不同时间(0,30,60,120,240 min)内的PLCγ1进行半定量分析.结果:PLCγ1在胰腺的内外分泌部均有表达.与0 min比较,胰岛素作用30,60 min时胰岛β细胞表达的PLCγ1荧光强度有明显降低(P<0.05);而在240 min时PLCγ1荧光强度与0min比较无明显差别.结论:胰岛素作用60 min内可使PLCγ1表达下调;胰岛素-PLCγ1途径参与了胰岛素的信息传递.
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外源性胰岛素对于胰岛素一相分泌的影响
目的:探讨外源性胰岛素对离体大鼠胰岛第一时相胰岛素分泌的影响.方法:雄性SD大鼠胰腺采用Ⅴ型胶原酶经胰管灌注消化分离得到胰岛,用100 μU/mL外源性胰岛素分别孵育0,60,120和240 min(n=8)后,给予葡萄糖刺激,分别测定0,3,5,10和30 min胰岛素分泌量.结果:不同时间胰岛素预处理后,各组在葡萄糖刺激时均产生胰岛素第一时相分泌(P＜0.05),但随着胰岛素孵育时间的延长,胰岛素第一时相分泌峰值降低(P＜0.01).结论:100 μU/mL外源性胰岛素损害胰岛素第一时相分泌,且孵育时间越长,抑制程度越明显.
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大鼠胚胎发育后期胰腺中Mesothelin的表达
目的: 探讨大鼠胰腺胚胎发育后期胰岛形成及β细胞功能完善相关的基因表达调控. 方法:采用高密度寡核苷酸芯片(Affymetrix芯片)对孕15.5(E15.5)和E18.5胰腺进行基因转录水平分析并用RT-PCR验证基因在大鼠胰腺E12.5,E15.5,E18.5,初生和成年这五个不同发育时期的表达情况. 结果:在差异或特异表达的基因中与胰腺细胞分化相关的转录因子和信号分子表达均下调,而与胰岛结构形成及β细胞代谢功能完善相关的基因表达上调,其中细胞黏附分子Mesothelin是在E18.5特异表达的基因,RT-PCR亦显示Mesothelin在大鼠胰腺胚胎发育后期特异性高表达. 结论: Mesothelin可能对胰岛结构的形成和功能的完善及维持有重要作用.
关键词： mesothelin 胰岛 RT-PCR 高密度寡核苷酸芯片 -
表皮生长因子对体外长期孵育保存的人胎胰岛的支持作用
目的: 研究表皮生长因子(EGF)对促进人胎胰岛增殖与分泌功能.方法: 12个人胎胰岛分别在含有EGF(实验组)和不含有EGF(对照组)的培养基中孵育,观察胰岛B细胞的分布,测定培养基中和细胞内胰岛素浓度和胰岛素释放量.结果: 培养结束后实验组胰岛B细胞明显高于对照组;培养基和胰岛B细胞中胰岛素释放量实验组高于对照组.结论: 培养液中加入EGF能延长胰岛细胞存活期、促进胰岛细胞增殖和分泌功能.
关键词： 胰岛 保存 生物学 表皮生长因子-尿抑胃素 -
成人脂肪源Flk1+CD31-CD34-细胞体外定向诱导分化为胰岛样细胞
目的 体外定向诱导成人脂肪源Flk1+CD31-CD34-细胞向胰岛样细胞分化.方法 首先将成人脂肪源Flk1+CD31-CD34-细胞培养在含适当浓度的B27、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)及表皮生长因子(EGF)的培养基中诱导,接着更换诱导培养基,用含适当浓度的β细胞调节素、尼克酰胺等高糖无血清培养基诱导细胞向胰岛样细胞分化.用RT-PCR法检测诱导前后nestin、ngn3、胰岛素启动子因子1(IPF-1)、胰岛素及胰高血糖素基因的表达;免疫荧光染色法检测诱导前后nestin、胰岛素及胰高血糖素的表达;放射免疫分析法检测诱导前后细胞分泌胰岛素情况.结果 成人脂肪源Flk1+CD31-CD34-细胞经第一阶段的诱导后可分化成nestin 阳性的祖细胞,继续诱导6d后变圆的细胞逐渐增多,并终聚集成团.免疫荧光实验证明经诱导后的细胞表达胰岛素、胰高血糖素、生长抑素等内分泌激素;放免分析结果表明,诱导的胰岛样细胞团可以分泌胰岛素.结论 成人脂肪源Flk1+CD31-CD34-细胞具有胰腺干祖细胞的固有特征,极有可能作为种子细胞用糖尿病的细胞治疗.
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成人胰岛分离纯化的实验研究
目的研究成人胰岛分离纯化方法.方法在传统的胰岛分离纯化方法的基础上,就供体选择、消化条件及方法、胰岛保护等方面作了一些改进,并在消化液和Ficoll分离液中加入大豆胰酶抑制剂(STI)、牛血清白蛋白(BSA).结果分离纯化后胰岛产量由原来的(991±144)个胰岛*g-1组织提高至(2 043±249)个胰岛*g-1组织(P<0.01);纯度由40%提高到60%.结论改进后的方法简单易行、经济实用,成功解决了传统方法中凝胶样物形成的难题;证实STI、BSA在成人胰岛分离纯化中同样具有保护作用;所获胰岛产量、纯度提高,并具良好的生物学活性.
