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拉沙病毒IgG抗体间接免疫荧光检测方法的建立
目的 建立简便、快速的拉沙病毒IgG抗体检测方法.方法 利用293F细胞表达重组拉沙病毒糖蛋白GP1,固相化在腔室玻片上,加入GP1抗血清,后加入荧光标记的二抗,利用间接免疫荧光法检测拉沙病毒IgG抗体.结果 制备了重组拉沙病毒糖蛋白GP1,GP1抗血清效价>1∶1000000;拉沙病毒IgG抗体间接免疫荧光方法具有专一性强(检测20份健康人血清,无交叉反应),灵敏度较高(抗血清在1∶1000稀释时仍有较强信号)的特点.结论 建立了拉沙病毒IgG抗体的快速间接免疫荧光检测方法,可用于口岸拉沙病毒的快速筛查.
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支原体临床检测分析
关于支原体检验问题支原体的检查方法很多,有免疫荧光法、间接血凝法、DNA探针法、PCR法、培养法等,国家规定的"金标准"方法是培养法.
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孕妇弓形体感染情况调查
弓形体感染所造成的危害，已逐渐受到人们的重视。目前有关部门专家已将弓形体感染致畸列为弓形体、风疹病毒、巨细胞病毒、单纯疱疹病毒等4种主要生物致畸之首。在我国的部分地区弓形体感染率为5.2%，仅次于乙型肝炎感染率(8.8%)［1］。因此，对金水区孕妇弓形体感染情况进行了调查，旨在预防胎儿感染及畸形的发生。 一、资料与方法 资料来自门诊建卡孕妇1 803名。常规进行弓形体检测，并详细询问病史、既往史以及动物接触史和食肉习惯等。取孕妇手指静脉血，分离血清备用。采用免疫荧光法间接抗体试验(IFAT)，试剂由卫生部上海生物制品研究所提供。对IFAT阳性者进行聚合酶链反应(TOX-PCR)，了解近期感染情况。对TOX-PCR阳性者，根据孕周劝其做人工流产或引产，并服用螺旋霉素(4 g/d)分4次口服，2周为一疗程，转阴后可再次妊娠。对抗体阳性者以及不愿终止妊娠者，要重点监护，用B超监测胎儿发育情况。
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肾综合征出血热灭活疫苗大鼠效力试验模型
目前肾综合征出血热灭活疫苗效力试验采用家兔作为免疫动物,对疫苗免疫能产生较好的中和抗体和免疫荧光法(IFA)抗体应答,但购买和饲养家兔成本较高.实验用大鼠为汉坦病毒的敏感动物,我们已经报道汉滩病毒(HTNV)型(Ⅰ型)肾综合征出血热灭活疫苗免疫大鼠,观察表明大鼠对Ⅰ型疫苗的反应性良好,同型中和抗体应答类似于家兔,异型中和抗体和IFA抗体应答较家兔为好.我们继续研究汉城病毒(SEOV)型(Ⅱ型)和双价肾综合征出血热灭活疫苗在大鼠的免疫反应,并观察了疫苗的稳定性.
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逆转录聚合酶链式反应检测某些动物性产品中冠状病毒初探
对于引起人类严重急性呼吸综合征的冠状病毒(SARS-associated coronavirus)[1]检验方法有免疫荧光法、ELISA法和分子生物学方法,这些方法全部针对临床标本.目前食品中检测的病毒种类仅限于甲肝病毒、轮状病毒、诺瓦克病毒、柯萨奇病毒等肠道病毒.由于环境样品不同于医学标本,样品中病毒数量极少,传统方法需要从大量样本中富集、分离病毒,再经过如组织培养等方法检测,这些方法因细胞病变不明显、重复性差、时间太长等均不适用.
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免疫荧光法在结直肠肿瘤自身抗核抗体检测中的临床价值
目的 探讨免疫荧光法在结直肠肿瘤自身抗核抗体检测中的临床价值.方法 选取我院2015年1月至2016年1月85例结直肠癌患者为恶性肿瘤组,85例结直肠良性肿瘤患者为良性肿瘤组,85例健康体检者为对照组.采用间接免疫荧光法对受试者的抗核抗体进行检测,对比3组抗核抗体检测及在细胞内荧光定位的结果.结果 ①恶性肿瘤组中转移组抗核抗体阳性率和无转移组阳性率比较无明显差异(P＞0.05);恶性肿瘤组抗核抗体阳性率明显高于良性肿瘤组和对照组x2=16.940、37.531,P=0.000、0.000;良性肿瘤组抗核抗体阳性率高于对照组,x2=5.328,P=0.021.②恶性肿瘤组和良性肿瘤组、对照组抗胞质抗体荧光阳性率无明显差异(P＞0.05).和对照组比较,恶性肿瘤组、良性肿瘤组抗核抗体荧光阳性率明显升高x2=5.221、20.299,P=0.022、0.000;恶性肿瘤抗胞质抗体荧光阳性率明显升高,x2=13.523,P =0.000.和良性肿瘤组比较,恶性肿瘤组抗核抗体和抗胞质抗体荧光阳性率明显升高,x2=5.842、8.947,P=0.016、0.003.③恶性肿瘤转移组和无转移组抗核抗体和抗胞质抗体荧光阳性率无明显的差异,不具有统计学意义(P＞0.05).结论 采用免疫荧光法对消化系统恶性肿瘤患者的自身抗核抗体进行检测具有重要的意义,能够有效地判断肿瘤的病情和治疗效果,为临床免疫性治疗提供一定的依据.
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免疫荧光法检测奈瑟氏淋球菌方法的建立及其临床应用评价
通过试验研究,确定了抗体荧光标记的佳条件、免疫荧光法检测的适抗体浓度及佳反应条件,从而研究免疫荧光法检测奈瑟氏淋球菌方法的建立,并对奈瑟氏淋球菌免疫荧光法检测试剂盒进行临床试验,评价其检测效果.采用分离培养法和奈瑟氏淋球菌免疫荧光法检测试剂盒对1100例临床样本进行平行检测,并以分离培养法检测结果为对照,统计免疫荧光试剂盒与分离培养法检测结果的总符合率及阴、阳性符合率.试验结果统计分析显示,受测免疫荧光试剂盒检测与分离培养法检测的总符合率为97.64%,阳性符合率为93.28%,阴性符合率为98.17%,Kappa值＞0.8,表明受测免疫荧光试剂盒与分离培养法的临床检测结果无显著性差异.受测免疫荧光法检测试剂盒检测快速、简便、经济、准确,可用于奈瑟氏淋球菌的临床快速诊断.
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两种不同方法检测血清降钙素原的相关性分析
目的 采用快速上转发光法与免疫荧光法检测血清中的降钙素原,比较两种不同方法学的相关性.方法 随机选取100例常规送检血清样本,同时用降钙素原上转发光试剂和免疫荧光试剂进行检测,比较两组结果的一致性.结果 上转发光法降钙素原检测试剂与免疫荧光法降钙素原检测试剂的相关性为0.997,符合率为98％,相关性良好.结论 POCT上转发光快速试剂与荧光免疫试剂达到高度一致的检测结果,可以广泛应用于临床、急诊、移动救护领域等.
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免疫荧光法和电化学发光法快速测定脑钠肽含量的评价
B型尿钠肽又称脑钠肽(BNP),1988年由日本学者从猪脑中发现和分离,随后研究发现它是心脏的产物,并在心力衰竭中起重要作用[1-2].B型尿钠肽是一种心脏神经激素,只有在血容量增加和压力超负荷的情况下才反应性地从心室分泌.近年来的研究表明,BNP具有病理生理学意义,可作为心力衰竭的血浆标志物,用于心力衰竭的诊断、治疗、预后评估和治疗.因此即时准确地测定BNP在心力衰竭的诊断治疗中尤其重要.
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人参皂苷Rb1对缺氧诱导N9细胞应激活化反应的影响
目的 探讨人参皂苷Rb1对缺氧诱导的小胶质细胞活化的的影响. 方法 通过人参皂苷Rb1对缺氧状态下N9细胞的干预,检测细胞形态、增殖活力改变.采用ELISA法、荧光探针DAF-FM DA、Griess Reagent法检测细胞TNF-α、O-2产量以及NO含量改变的影响.借助化学发光法、免疫荧光法分别检测各组细胞线粒体膜电位、细胞色素C含量. 结果 无论是预防性给药还是治疗性给药,人参皂苷Rb1能明显降低缺氧诱导活化的N9细胞NO、O-2以及TNF-α产量,抑制线粒体膜电位的降低,缓解细胞内细胞色素C含量的改变程度. 结论 人参皂苷Rb1均能在一定程度上下调由于缺氧活化导致神经毒性因子的高表达,稳定细胞线粒体的结构和功能,抑制缺氧诱导的N9细胞活化.
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孕期酒精暴露诱导仔鼠胰岛素抵抗与海马应激损伤
目的 探讨在孕期酒精暴露模型中胰岛素抵抗与海马应激损伤的相关性及其机制.方法 利用C57BL/6J小鼠建立孕期酒精暴露模型,分为对照组、中剂量组和高剂量组;对各组出生第7天(P7)、P14、P30仔鼠进行空腹血糖和空腹血胰岛素测定并计算胰岛素抵抗指数;利用免疫荧光染色法观察各组年龄点仔鼠海马CA1区细胞应激损伤指标c-Fos、核因子-κB(NF-κB)及炎症因子环氧合酶-2(COX2)的阳性细胞数;免疫印迹法检测P7、P14仔鼠海马组织c-Fos、NF-κB激活蛋白的相对表达量以印证免疫荧光染色结果.结果 酒精暴露后仔鼠胰岛素抵抗指数升高,且具有酒精剂量依赖性(P ＜0.05,n=90);酒精暴露后各年龄点仔鼠海马组织CA1区应激损伤指标c-Fos、NF-κB和炎症因子COX2阳性细胞数增多,存在酒精剂量依赖性(P ＜0.05,n=90)和长时程效应;孕期酒精暴露后海马组织c-Fos、NF-κB激活蛋白表达量增多(P＜0.05,n=30),同时存在酒精剂量依赖性和长时程效应,与免疫荧光结果一致.结论 孕期酒精暴露可诱导仔鼠产生胰岛素抵抗,其原因可能是氧化应激的结果;胰岛素抵抗可能参与胎儿酒精综合症大脑损伤及其发病机制,c-Fos、NF-κB通路可能是胰岛素抵抗损伤大脑的分子机制之一.
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3种方法诱导猪去分化脂肪细胞成肌分化效果的比较
目的 采用3种方法比较诱导猪去分化脂肪细胞(DA) 成肌分化的效果,旨在筛选诱导猪DA成肌分化的较优方法.方法 采用糖皮质激素、半乳糖凝集素-1(galectin-1) 法、5-氮胞苷(5-aza) 分别诱导猪DA成肌分化,于培养6 d、15 d和21 d后,并分别用倒置显微镜观察分化的细胞形态;诱导21 d后用间接免疫荧光法检测成肌特异蛋白结蛋白(desmin) 和肌球蛋白重链(MyHC) 的表达,用Real-time PCR检测肌细胞生成素(MyoG) mRNA的表达,每种方法诱导3组,每组重复检测3次.结果 诱导细胞的形态学观察显示, galectin-1法诱导的肌管形态佳,多核细胞数量也多;5-aza法次之,但诱导过程中细胞死亡率较高;糖皮质激素法诱导的细胞形态不规则,多形成放射状突起,而且出现较多成脂分化细胞.间接免疫荧光分析显示, galectin-1法和糖皮质激素法诱导的细胞Desmin、MyHC和MyoG mRNA都呈强阳性表达,而在5-aza法诱导的细胞这两种蛋白和基因都呈弱表达.结论 从诱导细胞的肌管形态,分化的纯度,生存能力,特异蛋白和基因的表达量等综合判断,诱导猪DA成肌分化, galectin-1法优于糖皮质激素法和5-aza法.
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小鼠脂肪源和骨髓源间充质干细胞表面标记表达的比较
目的 探讨小鼠脂肪源间充质干细胞(ADMSCs)和骨髓源间充质干细胞(BMSCs)表面标记表达的差异.方法 分别对小鼠脂肪源和骨髓源间充质干细胞进行成骨、成脂、成心肌分化诱导、鉴定;流式细胞术与细胞免疫荧光法检测CD29、CD44、CD45和CD73的表达并进行比较.结果 BMSCs形态均一,呈长梭形;ADMSCs形态多样,呈梭形、星形、多角形等,胞体较大,表面分泌物较多;两者均可诱导分化为成骨细胞、脂肪细胞和心肌样细胞.流式细胞术检测显示,BMSCs表面分子CD29、CD44和CD73表达率分别为(83.43±1.97)％、(90.33±0.81)％、(2.63±0.42)％;ADMSCs表面分子CD29和CD44的表达率分别为(53.1±1.05)％、(34.8±2.1)％,CD73表达不稳定,在1.8％～19.7％之间波动.两种细胞均不表达造血干细胞标记物CD45.免疫荧光显示,CD73分子与部分CD29、CD44阳性细胞共表达.结论 小鼠BMSCs和ADMSCs均具有成脂、成骨、成心肌分化能力,但是在形态上和分子表达上均存在差异.BMSCs的CD44和CD29表达高于ADMSCs;而CD73的表达则相反,CD73在两种细胞的表达均较低,在ADMSCs的表达不稳定.
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红毛五加多糖对人乳腺癌细胞系MDA-MB-231增殖和核转录因子p53、c-myc蛋白表达的影响
目的 探讨红毛五加多糖(AGP)对人乳腺癌细胞系MDA-MB-231增殖以及对细胞核转录因子p53、c-myc表达的影响.方法 在DMEM培养基内加入不同浓度AGP(0.15625、0.3125、0.625、1.25、2.5 g/L)体外培养人乳腺癌细胞系MDA-MB-231 1d、3d、5d、7d后,用细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒WST-1测定人乳腺癌细胞的增殖,倒置显微镜观察其形态变化；用免疫荧光法、免疫印迹法检测人乳腺癌细胞凋亡相关蛋白p53、c-myc的表达.结果 WST-1法显示,不同浓度AGP作用3d、5d、7d后对人乳腺癌细胞系MDA-MB-231的增殖具有抑制作用,与阴性对照组相比差异有显著性(P＜0.05)；抑制率与AGP剂量、作用时间呈依赖性.免疫荧光法及免疫印迹法显示,AGP作用于人乳腺癌细胞系MDA-MB-231后,其细胞的c-myc表达明显减弱,并向细胞质内聚集；而免疫印迹法显示p53表达显著增强.结论 AGP具有抑制人乳腺癌细胞系MDA-MB-231增殖的作用,这可能与AGP下调c-myc表达、上调p53表达有关.
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BHD基因在人肺腺癌A549细胞的表达及其对A549细胞转移能力的影响
目的 了解BHD基因在肺癌细胞中的表达部位及其在影响肺癌细胞转移、运动方面的作用. 方法 制备BHD真核表达质粒,转染肺腺癌细胞,用免疫荧光法检测Folliculin蛋白在肺癌细胞中的表达位置;筛选sRNAi片段,选取有效抑制片段转入肺癌细胞,与转入BHD质粒的肺癌细胞对比,用Transwell实验了解BHD基因对肺癌细胞运动方面的影响. 结果 转入BHD质粒后,A549细胞质内出现明显的Folliculin蛋白表达,Transwell实验显示,转入BHD质粒能抑制A549细胞的侵袭能力,而转入BHD siRNA片段的A549细胞运动迁移能力升高.结论 BHD表达产物Folliculin蛋白在肺癌细胞的胞质内表达,BHD可能是肺癌转移抑制基因.
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一种新型诊断方法——比色法免疫学实验在检测风疹病毒中的应用研究
目的 尝试建立一种新型的、可以推广应用于中国麻疹实验室网络的诊断风疹病毒感染的方法.方法 来自山东、河南、安徽省疾病预防控制中心麻疹实验室送检的咽拭子标本38份,同时分别用病毒分离[通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)判断]、免疫荧光(IFA)法和比色法免疫学实验进行风疹病毒检测,并将三种方法的敏感性、特异性进行比较和评价.结果 三种方法分别检测38份咽拭子标本,阳性均为22份,阳性检出率均为57.9%,检测结果完全一致.结论 与RT-PCR和IFA两种方法相比,比色法免疫学实验更快速简便,不需要昂贵的仪器,通过肉眼即可判断结果,而且结果敏感可靠.因此作为检测风疹病毒感染的方法,更适合在中国麻疹实验室网络推广应用.
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双重免疫组化技术在乳腺癌组织芯片中的应用
在生物医学和临床研究实践中,经常需要检测两种不同物质是否在同一样品或同一种细胞中共存,好使用双重染色法在同一个组织样本上进行杂交.双重染色的方法有两种类型,免疫酶组织化学和免疫荧光化学法.目前,在实体肿瘤中,由于甲醛固定石蜡包埋组织过高的荧光信号,免疫荧光法更适合用于冰冻保存的组织[1].双重免疫酶组织化学需要选择不同显色底物、不同的抗体、不同修复方法进行搭配,操作繁琐,在科研使用比较广泛,但临床操作要求稳定性高、操作简单,所以在临床不常规使用.
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磁珠分离在微生物聚合酶链反应检测中的应用
培养检测法只能适应于那些可以培养的微生物.有些微生物是活的,但在实验室中较难培养.临床样本、食物、地表水和空气等中的细菌和病毒通常需要几天的培养,才能用于免疫荧光法、酶联免疫吸附试验法等几种方法检测出来.因此,需要一种不需培养的检测方法.聚合酶链反应(PCR)技术可以检测可培养的微生物、活的而不能培养的微生物、死的微生物或微生物细胞外的DNA等.
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人鼠嵌合Fab抗体通用表达载体的构建和抗人肝癌相关抗原HAb18G嵌合Fab抗体的表达
目的:构建一个在大肠杆菌中表达人鼠嵌合Fab抗体的通用载体,并用于抗人肝癌相关抗原HAb18G人鼠嵌合Fab抗体的表达.方法:利用特异引物PCR扩增人IgG3的CHl和Ck基因,分别克隆到表达载体pComb3中,从而构建成人-鼠嵌合Fab抗体的通用表达载体pComb3C.然后将扩增的mAbHAbl8的VL和VH基因分别组装到通用表达载体中,酶切去除gⅢ片段后,连接成为HAb18嵌合Fab抗体的分泌型表达载体pComb3C/cFab.转化大肠杆菌后诱导其表达,通过ELISA检测产物的表达和定位.后,利用亲合层析纯化表达产物,进行SDS-PAGE电泳和Western-blot检测,同时采用ELISA和免疫荧光法检测表达产物的亲和力和特异性.结果:测序及酶切鉴定表明,人IgG3的CHi和Ck基因正确插入到pComb3中,大小分别为324bp和333 bp,同时mAb HAb18的嵌合Fab基因也分别获得正确组装和表达.表达产物的分子质量约为45 ku,主要位于周质腔中.另外,ELISA和免疫荧光检测证实,表达产物含有人的抗体片段,并具有与相应抗原特异结合的活性,亲和力约为亲本抗体的10%.结论:成功构建了人鼠嵌合Fab抗体的通用表达载体并制备了抗人肝癌小分子嵌合Fab抗体,为其进一步在肝癌诊断与治疗中的应用奠定了基础.
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北京地区肾综合征出血热96例临床特征分析
一、对象与方法1.对象: 96例均为我院2001年1月1日至12月31日收治的肾综合征出血热(HFRS)病人,根据潜伏期计算,均为在北京地区感染发病.全部病人血清学检查出血热抗体阳性(免疫荧光法),诊断均符合1995年卫生部<流行性出血热防治方案>[1]中诊断标准.其中,男性81例,女性15例.
