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062 阿尔茨海默病患者ApoE基因多态性和脑脊液β-淀粉样蛋白、Tau蛋白的关系
本文作者应用双抗体夹心ELISA方法测定确诊阿尔茨海默病(AD)、很可能AD患者,其它痴呆患者以及正常对照组脑脊液β-淀粉样蛋白(Aβ40,Aβ42)、Tau蛋白含量,采用PCR方法分析其ApoE基因多态性,旨在探讨三者与AD的关系.
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雷公藤多甙对格林-巴利综合征患者血清和脑脊液IL-6、sIL-2R的影响研究
格林-巴利综合征(GBS)患者血清、脑脊液(CSF)白细胞介素6(IL-6)、sIL-2R的配对研 究国内报道不多。我们用双抗体夹心ELLSA法分别检测了GBS患者经雷公藤多甙(TII)治疗 前后血清、CSF配对标本的IL-6、sIL-2R水平,探讨这些细胞因子在GBS发病中的作用及TI I治疗GBS的作用机理。1 材料与方法1.1 病例组 按Asbury标准选择GBS患者43例(男20例,女23例),年龄:16 ~60岁, 平均:(34.7±10.1)岁[1]。病程1~11 d,平均(6.3±4.1) d。病情严重程度 0~V级 [1];Ⅱ级13例,Ⅲ级23例,Ⅳ级7例。所有患者入院前一月内未使用免疫抑制性药物。 对照组:共59例(男25例,女34例)。年龄15~64岁, 平均(增多34.5±10.5)岁所有对照无神 经系统阳性体征,亦不伴全身感染或免疫性疾病。
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自制NSE单抗的鉴定及其双抗夹心ELISA方法的建立
目的:制备并鉴定NSE(Neuron-specific enolase)单克隆抗体,建立可检测NSE蛋白的双抗夹心ELISA方法.方法:用本实验室已表达纯化的NSE融合蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备单克隆抗体.采用WB、IP、IF、IHC等方法对获得的NSE单抗进行鉴定及亚型检测.利用辣根过氧化物酶标记纯化后的NSE单抗,建立一个可检测NSE蛋白的双抗夹心ELISA法.结果:通过分析和鉴定,选定2株可稳定分泌抗NSE抗体的杂交瘤细胞株,效价达4.2×107~6.5×107,亚型为IgG2b.免疫印迹结果显示,该抗体不仅能识别细胞内源NSE蛋白,还能识别分泌到细胞培养上清液中的NSE蛋白,此外还可用于免疫荧光及免疫组化检测.文中所建立的双抗夹心ELISA法,低检测极限为8.85 ng/ml.结论:成功获得了效价高、灵敏度好及特异性强的NSE单抗,建立了一个双抗体夹心ELISA检测系统,具有良好的临床应用前景.
关键词: 神经元特异性烯醇化酶(NSE) 单克隆抗体 鉴定 双抗体夹心 ELISA -
白细胞介素25与儿童哮喘的关系
支气管哮喘(bronchial asthma)是一种常见的慢性下呼吸道疾病,50%患者在幼年发病[1].哮喘的发病机制极为复杂,遗传、感染、神经和精神、环境、运动、药物等因素均与其有关,免疫功能紊乱与变态反应在哮喘发病机制中至关重要,各种细胞因子间相互促进和制约对哮喘发病扮演了重要的角色.IL-25是2001年发现的Th2细胞衍生的细胞因子,可以诱导Th2细胞因子及嗜酸性粒细胞的产生,在Th2型变态反应性炎症中起重要作用.本实验采用双抗体夹心ELISA方法测定哮喘儿童、正常儿童及应用激素干预后的哮喘儿童血清中IL-25的水平,对比正常儿童与哮喘儿童血清IL-25水平及激素干预前后血清IL-25水平.
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老年多发性骨髓瘤患者血浆白介素-6水平与临床
多发性骨髓瘤(MM)是老年人易患的恶性浆细胞系统疾病.其确切发病机制目前仍未明确.国内外大量研究证实IL-6作为B细胞生长和分化调控因子,对骨髓瘤细胞具有促增殖作用,是骨髓瘤细胞的生长依赖因子之一.IL-6水平增高者常病情重,进展快,化疗反应差,预后不佳.但有关老年MM IL-6水平及其与其他预后相关指标的关系尚未见报道.本文采用双抗体夹心ELISA法对30例老年MM患者血浆IL-6水平进行了检测,就其与β2-MG、CRP、LDH、溶骨性破坏及贫血状态等5个参数进行相关性分析,进一步探讨IL-6在MM中的临床意义.
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急性心肌梗死预后与转化生长因子β1的相关性研究
目的观察急性心肌梗死(AMI)病人预后与TGF-β1含量表达的相关性.方法应用酶联免疫吸附实验(双抗夹心法)检测AMI病人发病第1天和第7天血清中TGF-β1的含量及与心肌梗死发病的相关酶谱分析.结果 AMI病人发病第1天与第7天相比,TGF-β1含量两组间差异非常显著(P<0.01),而血清中心肌酶活力与TGF-β1含量呈负相关.结论 TGF-β1含量升高有助于心肌损伤的修复,促进微血管再生,测定血清TGF-β1与心肌酶活力可用于估价心肌梗心后心肌的修复与预后.
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慢性肺心病患者肿瘤坏死因子-a及可溶性肿瘤坏死因子受体Ⅱ的测定及分析
近年来研究表明慢性肺心病(CPHD)患者体内存在免疫调节障碍,为探讨急性加重期血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及其对应的可溶性受体在CPHD急性发作期的变化,本研究用双抗体夹心ELISA法测定了CPHD急发期患者血清TNF-α及可溶性肿瘤坏死因子受体Ⅱ(sTNFRⅡ)的水平,并探讨其临床意义.
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慢性乙型肝炎患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞、白细胞介素-10水平及其临床意义
为探讨HBV感染者外周血CD4+ CD25+调节性T细胞(Tr)的表达水平,本研究采用流式细胞仪检测慢性乙型肝炎患者轻度、中度及重度外周血中CD4+CD25+Tr表达水平, 用双抗体夹心ELISA法检测IL-10表达水平.
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急性感染性腹泻患儿血清细胞因子测定的临床意义
为探讨急性感染性腹泻患儿体内细胞免疫功能状态,我们测定了33例患儿血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)的含量.本组男19例,女14例;年龄4月~9岁,平均2.7岁;病程半天~3天,平均1.9天;病原学检查大便轮状病毒RNA阳性21例,痢疾杆菌阳性10例,大肠杆菌阳性2例.对照组为同期健康小儿共15例,其中男9例,女6例;年龄1岁~14岁,平均5.2岁.两种细胞因子均采用双抗体夹心酶联免疫吸附法测定,结果以χ2检验行统计学处理.
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免疫抑制剂对原发性肾病综合征患儿白介素2、血清可溶性白介素2受体的作用研究
原发性肾病综合征(INS)的发生、发展与细胞免疫密切相关,许多研究结果认为T淋巴细胞功 能紊乱与淋巴因子的异常,在NS发病中起重要作用,采用免疫抑制剂治疗,临床取得较好的 效果。但免疫抑制剂对白介素2(IL-2)及血清可溶性白介素2受体(SIL-2R)的影响变化报道 甚少 。我们通过INS患儿血清IL-2、SIL-2R在不同免疫抑制剂作用下的变化,探讨IL-2及SIL -2R在INS发病中的作用,及免疫抑制剂的应用价值。资 料 和 方 法 一、 对象 观察组20例,男14例,女6例,平均年龄7岁2个月,全部病例诊断 均符合全国小儿肾脏病协作组拟定的诊断标准,为初发活动期,均未用激素及其它免疫抑制 剂。对照组为健康儿童15例,男10例,女5例,平均年龄8岁4个月。 二、 方法 3H-Tdr掺入法测定IL-2浓度[1],双抗体夹心ELISA法 测定SIL-2R的浓度[2]。免疫抑制剂:环磷酰胺(CTX)、长春新碱(VCR)、氢化考的 松(H)。同一患儿标本分为加免疫抑制剂组及对照组,分别检测IL-2及SIL-2R浓度。 检测结果以眘
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急性脑血管病患者血清TNFα测定的探讨
肿瘤坏死因子(Tumor Necrosis Factor, TNF)是近年来研究较多、较深入的细胞因子,它有α、β、γ三个亚型.TNF-α为主要亚型,在中枢神经系统中具有神经毒性作用[1],其表达增加可加速细胞死亡[2].我们用双抗体夹心ABL-ELISA法测定了急性脑血管病患者TNF-α值,并对其临床意义进行了探讨.
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小儿急性肾病患者血清IL-6、SIL-2R检测的临床意义
本文对小儿急性肾病患者血清IL-2、SIL-2R水平检测,探讨对临床诊断的意义对象和方法一、对象:正常对照组36例,均为我院体检合格的健康儿童.无心、肝、肺、肾等脏器疾患,肝肾功能均正常.小儿急性肾病组33例,经临床明确诊断(包括体症、实验室系列检测).二、方法:SIL-2R,采用双抗体夹心ELISA法(u/m1),kit 由比利时Innogenties公司提供,IL-6 RIA kit(μg/L)由北方生物技术研究所提供,均按说明书操作.统计学处理:数据以x±s表示,两样本均数显著性检验采用t检验.
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狂犬病毒核蛋白抗原ELISA定量法的建立及初步验证
目的 建立检测狂犬病疫苗各工序产品中核蛋白抗原含量的双抗体夹心ELISA法.方法 以免抗狂犬病毒多抗为包被抗体.辣根过氧化物酶标记的抗狂犬病毒核蛋白单抗作为酶标记抗体,对狂犬病毒核蛋白抗原含量进行定量测定,并对该方法 进行初步验证.结果 此方法 线性相关系数大于0.97;佳线性范围为0.000625~0.01 IU/ml,定量限度为0.000625IU/ml:准确性为102%~109%;变异系数(CV)为7.2%~9.4%;与小牛血清、牛血清清蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA)、流感疫苗纯化液、乙脑疫苗纯化液、甲肝疫苗纯化液等均无交叉反应.结论该方法 特异性强,灵敏度高,准确性、重复性和稳定性好.可用于狂犬病疫苗各工序产品中核蛋白抗原的定量检测.
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血浆凝血因子XⅢ抗原及活性的测定
目的:建立血浆FⅧ抗原及活性定量测定的方法.方法对46例正常人及两个遗传性FⅧ缺陷症家系部分成员采用双抗体夹心法检测FⅧ抗原,生物素化戊胺测定FⅧ活性,以FⅧ标准品建立标准曲线.结果 3例患者FⅧA:Ag均为0%,FⅧB:Ag分别为正常人的78.46%、66.43%、57.29%.46例正常人血浆FⅧ活性FⅧ:C平均值为86.34%±17.98%,范围在56.5%~165.17%之间,3例患者为0%,家系中杂合子范围为29.60%~104.86%.结论: 双抗体夹心法和生物素标记法均为简捷、灵敏而且特异的FⅧ测定方法.
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血吸虫病时间分辨免疫荧光检测试剂盒的研制和效能评价
目的:研制日本血吸虫SjP38的时间分辨免疫荧光分析(Time?resolved fluoroimmunoassay,TRFIA)试剂盒,并评价其效能。方法将抗SjP38的9G7单克隆抗体作为捕获抗体包被96孔板,用Eu3+标记1A6单克隆抗体作为检测抗体,研制SjP38 TRFIA试剂盒,并评价试剂盒的准确度、灵敏度、精密度、稳定性以及与病原学检测方法的符合率等指标。结果自制试剂盒准确度好,线性范围为2~1250 ng/ml,低检出浓度为0.14 ng/ml;精密度良好,分析内精密度为3.6%~4.6%,分析间精密度为5.1%~6.7%。定性试验表明该试剂盒可在4℃稳定半年,37℃稳定7 d。自制试剂盒与病原学检测方法的阳性符合率为95%,阴性符合率为100%。结论所研制试剂盒的各项性能及检测指标均达到临床检验的要求,但临床推广使用还有待进一步的验证。
关键词: 日本血吸虫 重组蛋白SjP38 双抗体夹心 时间分辨免疫荧光分析 -
白癜风患者白介素-17和转化生长因子-β水平的检测
目的 探讨白介素-17(IL-17)和转化生长因子-B(TGF-β)与白癜风发病之间的关系.方法 双抗体夹心酶联免疫吸附试验( ELISA)检测120例白癜风患者和60例健康对照血清中IL-17和TGF-β水平.分析两种因子与白癜风患者性别、病期、病程、白斑面积、家族史的关系.结果 进展期白癜风患者血清IL-17水平显著高于健康对照组和稳定期患者(P值均<0.05),随着白癜风患者白斑面积增大,IL-17水平逐渐升高(x2=12.656,P< 0.05);而进展期白癜风患者血清TGF-β水平也高于健康对照组和稳定期患者,但差异无统计学意义(P值均> 0.05).结论 白癜风患者血清IL-17和TGF-β水平与病情有一定关系,两者可能在白癜风发病中发挥作用.
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基于免疫层析的CRP定量检测试剂研制
目的:基于免疫层析技术,研制一种C反应蛋白(C reactive protein,CRP)定量检测试剂。方法采用双抗体夹心法,通过严格的原辅料筛选和生产工艺控制研制试剂,用基于光学定量的免疫层析结果判读记录仪进行定量检测,后进行性能分析和临床试验。结果研制出了定量检测试剂,功能灵敏度≤1 mg/L,CV≤15%,线性范围1~200 mg/L,室温稳定性12个月;经对220份临床样本进行验证,总符合率为98.6%,Pearson相关系数r=0.987,和对照试剂性能无显著性差异。结论基于免疫层析技术,研制出一种操作简便、稳定性好的CRP定量检测试剂,可运用于现场或临床对CRP的快速定量检测。
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血小板数量与血清sCD40L浓度变化的关系
近,我们发现苏州地区健康人群血小板参考范围比目前的正常参考范围偏低,而其功能未见异常[1].CD40L是近年来证实为活化的血小板表达的Ⅱ型膜传递蛋白分子,活化后血小板性CD40L以可溶性CD40L(sCD40L)方式释放进入血液 [2].血小板偏低的健康人和血小板生成低下的再生障碍性贫血(再障)病人,其sCD40L浓度变化特点尚未见报道.本文采用双抗体夹心(ELISA)法对健康人血小板低值组,健康人血小板高值组和再障患者血清sCD40L进行了检测,结果如下.
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心房颤动患者血浆C反应蛋白浓度测定及其意义
心房颤动(房颤,AF)是临床实践中常见的心律失常,大多数发生于器质性心脏病的患者,少数患者没有可发现的心脏病,称为孤立性房颤.本文用敏感性较高的双抗体夹心hsCRP ELISA法测定孤立性房颤患者血浆中C反应蛋白(CRP)浓度的变化,初步探讨和房颤发作的关系.
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垂体腺瘤侵袭性与IL-8分泌有关
第四军医大学西京医院全军神经外科研究所完成的一项国家自然科学基金资助项目证实,垂体腺瘤的侵袭性与白细胞介素8(IL-8)的表达和分泌有关,可作为检测垂体腺瘤侵袭性高低的指标之一。该所研究人员用免疫组织化学检测32例垂体腺瘤标本中IL-8的表达水平。酶消化法对手术切取的垂体腺瘤组织作原代培养,收集细胞培养上清,双抗体夹心ELISA法测定IL-8含量。对组织学染色进行图像分析,结合肿瘤的侵袭性、病理分级等进行统计学检验。结果显示,所有垂体腺瘤标本均为IL-8阳性,侵袭型垂体腺瘤的IL-8阳性细胞明显多于非侵袭型垂体腺瘤,IL-8阳性染色强度也明显高于非侵袭型垂体腺瘤。所有原代培养的垂体腺瘤细胞均有IL-8分泌,侵袭型垂体腺瘤细胞上清液中IL-8的含量明显高于非侵袭型垂体腺瘤。IL-8的表达和分泌水平与患者性别、年龄以及分级无明显相关性。研究结果说明,垂体腺瘤侵袭性与IL-8的合成和分泌有关。提示IL-8的表达和分泌水平在垂体腺瘤的侵袭性和预测复发方式方面提供了有用的分子标记,对患者预后判断以及术后辅助治疗方案的制定具有重要的参考价值。