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儿童急性淋巴细胞白血病微小残留病技术方案
微小残留病(MRD)是急性淋巴细胞白血病(ALL)患儿经过治疗,并按目前所确定的疗效标准(骨髓中原始或幼稚肿瘤细胞在5%以下,患者的病情完全控制)达到临床完全缓解状态后,体内残留微量白血病细胞的状态.是ALL的重要的独立预后指标[1],已经证实患儿体内的MRD水平在ALL的疗效评价、预后判断和复发监测以及造血干细胞移植时净化移植物等方面均有十分重要的意义,多家国外先进治疗组采用MRD水平进行儿童ALL的危险度分层和预后评估,取得了良好的效果[2-8].目前国内外儿童白血病协作组已经将MRD的检测作为重要的危险因素评价指标之一,以诱导治疗早期、结束时MRD水平进行危险度分层,将调整治疗纳入到治疗方案中[9-10],在获得大的疗效同时减少化疗药物的毒性,对易复发的患儿予以强化治疗,提高患儿的生存率以及生活质量.
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儿童急性淋巴细胞性白血病微小残留病监测的预后意义
目的 研究儿童急性淋巴细胞性白血病(ALL)化疗过程中,不同时间点监测的不同微小残留病(MRD)水平的预后意义.方法 对102例ALL患儿进行MRD监测研究,分别在患儿诱导化疗开始后第15天、第29天、第3个月、第6个月、第12个月进行MRD监测.根据患儿初诊时免疫表型特征,采用流式细胞术检测不同的四色单克隆抗体组合.常用的抗体组合包括CD45CD19CD34CD10和CD45CD19CD34CD20等.结果 102例ALL患儿的5年总体生存(OS)率和无事件生存(EFS)率分别为(86.9±3.4)%和(79.9±4.0)%,共12例患儿复发.在第15天、29天、3个月、6个月和12个月,分别有14.3%、43.9%、39.1%、39.7%和45.6%的患儿处于MRD阴性(MRD<10~(-4)).其中MRD水平能在1年内达到阴性的患儿的长期存活率明显高于MRD持续阳性的患儿[5年EFS:(92.5±3.2)% vs. (58.3±8.6)%,P<0.001].各时间点上,化疗后第15天时MRD≥10~(-2)[(79.8±10.3)% vs.(28.6±17.1)%,P<0.001]、第29天时MRD≥10~(-3)[(88.3±4.9)% vs.(51.3±14.4)%,P<0.003]、第3个月[(92.4±5.1)% vs.(65.5±7.5)%,P<0.015]、6个月[5-year EFS rates(96.3±3.6)% vs.(65.4±7.5)%,P<0.003]及第12个月[(100.0±0.0)% vs.(67.7±8.4)%,P<0.002]时MRD≥10~(-4)的患儿的5年EFS率明显较差.而第15天时MRD≥10~(-2)是独立的不良预后因素.结论 采用流式细胞术动态监测MRD水平能有效地评估ALL患儿的预后,而不同时间点上具有预后意义的MRD水平并不相同.
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残留白血病检测基因标志的研究进展
残留白血病检测的基因标志可大致分为融合基因、变异基因和一些白血病中行表达增高的基因.这些基因标志在形成机制、临床作用等方面各不相同.本文总结其中大部分基因标志的研究进展,在全面的基础上重点阐述几种新的检测基因标志,如NPM1、PRAME、STC-1等,同时总结了研究较成熟的WT1、FLT3基因新的应用进展,以期为临床实验室建立检测方法时提供初步参考.
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急性髓细胞白血病微小残留病的不同检测方法及临床意义的研究进展
急性髓细胞白血病是一大类异质性疾病，预后差别较大，微小残留病检测对该病的预后判断有重要意义。近年来，采用定量PCR方法检测融合基因和基因突变、采用流式细胞术方法检测异常抗原表达及染色体异常等指标判断微小残留病的研究取得了一定进展。尽管目前对于具体的检测方法和检测结果的临床意义评估尚有争论，但多数研究显示微小残留病与疾病的复发高度相关。本文综述了不同检测方法的优缺点及不同时机不同检测结果的临床意义，并进一步探讨了未来的研究方向及这些研究结果在我国的应用前景。
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急性淋巴细胞白血病患者中T细胞受体基因重排的检测
目的 为了解急性淋巴细胞白血病(ALL)患者T细胞受体(TCR)基因重排情况,明确TCR基因重排在ALL患者微小残留病(MRD)检测中的临床意义.方法 构建实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测TCRVγI -Jγ基因重排技术,并定量分析36例ALL患者,观察治疗前、完全缓解后以及干细胞移植后等不同疾病状态下TCRVγI -Jγ基因重排情况.结果 建立实时荧光定量PCR方法的灵敏度为10-4水平.36例患者荧光定量PCR方法检测结果为初治组为(7.38±6.65) ×10-2水平,完全缓解(CR)组为(1.08±1.02) ×10-2水平,造血干细胞移植术(HSCT)组为(5.65±3.89)×10-3水平.CR组和HSCT组TCRVγI - Jγ基因重排水平显著低于初治组(P＜0.01),HSCT组MRD水平显著低于CR组(P＜0.05).6例HSCT后检测阳性病例中2例MRD水平＜1 ×10-3,此2例获长期无病生存,另4例MRD水平较高患者1年内均出现复发.结论 所建立实时荧光定量PCR方法简便、快速、灵敏及特异；实时荧光定量检测缓解期ALL患者MRD对判断预后具有重要意义.
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恶性肿瘤的综合治疗
恶性肿瘤可发生于人体的各个部位,大家熟知的包括肺癌、胃癌、肠癌、肝癌、胰腺癌、肾癌、骨癌、乳癌、卵巢癌、宫颈癌及白血病、骨髓瘤、恶性淋巴瘤等,虽然各种恶性肿瘤的发病机制还不十分明确,但人体免疫监测功能的降低是肿瘤发生、发展的重要因素.对于恶性肿瘤的治疗,要想取得满意的治疗效果,即避免复发、争取治愈,至少要从以下几方面去努力:(一)早发现、早诊断、早治疗;(二)综合治疗;(三)检测微小残留病的敏感方法.
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染色体原位杂交检测28例急性早幼粒细胞白血病残留病变
目的:应用荧光染色体原位杂交(FISH)方法检测急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia,APL)患者完全缓解(complete remission,CR)期微小残留病变(minimal residual disease,MRD),并探讨MRD的动态变化与复发的关系.方法:对28例具有t(15;17)的APL患者在CR期应用中期分裂相FISH方法,进行了监测.结果:11例在CR的不同时期检出了不同比例的t(15;17)细胞,其中3例复发.17例在追踪的标本中均未检出异常细胞,目前均持续缓解.观察时间分别为10～33个月和15～44个月.结论:FISH追踪MRD较传统细胞遗传学更加快速和敏感,并具有可定量的优点,可作为APL患者CR期监测MRD的常规手段.FISH检测到MRD有增长趋势时,更有预示复发的价值.
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CIK细胞对G0 期急性髓系白血病细胞的杀伤作用
对于血液系统恶性肿瘤,化疗缓解后的微小残留病是患者长期生存的主要障碍.由于只有处于细胞周期白血病细胞对化疗敏感,有研究[1]表明残留白血病细胞多为G0期细胞.近年来诸多研究表明细胞因子诱导杀伤(CIK)细胞对多种肿瘤细胞均有杀伤作用,但CIK细胞对急性髓系白血病(AML)中G0期白血病细胞杀伤作用的研究尚未见报道.本实验从完全缓解的白血病患者外周血中诱导培养CIK细胞,测定其扩增数量,观察其对自体G0期CD34+白血病细胞的细胞毒作用,为临床应用自体CIK细胞清除残存白血病细胞提供了理论依据.
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IgH基因重排在B淋巴瘤微小残留病中的应用
目的探讨IgH基因重排在B细胞淋巴瘤临床诊治中的应用.方法应用半巢式PCR技术对IgH基因的CDRⅡ区和CDRⅢ区进行基因重排检测.共检测45例骨髓标本.其中正常标本8例,淋巴瘤标本37例(B细胞淋巴瘤27例,T细胞淋巴瘤10例).结果 8例正常标本未检测到FR2A或FR3A的重排;27例B细胞淋巴瘤中,23例(85.2%)可检测到FR2A或FR3A重排,其中FR2A重排16例(59.3%),FR3A重排20例(74.1%),FR2A、FR3A均有重排者13例(48.1%);10例T淋巴瘤中FR2A重排1例,FR3A重排3例.骨髓穿刺检查:27例B淋巴瘤中5例原幼淋细胞>5%,FR2A和FR3A阳性各4例;22例原幼淋细胞<5%者,FR2A阳性12例,FR3A阳性16例.结论单克隆性IgH重排对鉴别淋巴系统肿瘤及检测骨髓中的微小残留病变有一定参考价值.
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TEL/AML1融合基因阳性的急性淋巴细胞白血病患儿的临床特点及预后
目的：研究急性淋巴细胞白血病（ALL）中融合基因TEL/AML1阳性患儿的预后。方法采用套式逆转录聚合酶链反应(PT-PCR）技术检测TEL-AML1融合基因，治疗过程中定期监测骨髓中微小残留病（MRD），根据对此类患儿治疗的随访，联合基础危险度分层方法及动态微小残留病检测，评估TEL-AML1融合基因阳性患儿的临床特点及预后。结果与结论 t（12；21）B系ALL是儿童急性淋巴细胞白血病中预后较好的一种亚型。
关键词： 急性淋巴细胞白血病 TEL/AML1基因 微小残留病 预后 -
白血病的细胞免疫治疗
白血病的免疫治疗是通过补充或刺激机体自身的生物反应调节物质来调动、完善和增强宿主免疫机能,以便消除白血病微小残留病.目前白血病的细胞免疫治疗主要有以下几类,本文介绍如下.
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自体造血干细胞移植联合利妥昔单抗治疗B细胞非霍奇金淋巴瘤
自体造血干细胞移植(AHSCT)支持下的高剂量治疗(HDT)已成为近年来治疗难治或复发的非霍奇金淋巴瘤(NHL)的重要方法之一.因为AHSCT的并发症少,对NHL效果可靠,所以在移植的数量上甚至超过了异基因造血干细胞移植(allo-HSCT).然而NHL的复发是影响AHSCT疗效的主要因素,移植后的微小残留病(MRD)是其复发的根源.如何将利妥昔单抗(CD20单克隆抗体)用于AHSCT,从而减少移植后的复发,是目前淋巴瘤临床治疗的研究热点之一.现就AHSCT联合利妥昔单抗治疗NHL的相关问题进行综述,以提高利妥昔单抗在治疗NHL中作用和地位的认识,进一步提高AHSCT的疗效.
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四川省1999年医学科研进展(上)
1999年我省共有32项医学科学研究成果获四川省科技进步奖,27项获四川省卫生厅科技进步奖.这些成果反映了我省1999年在基础医学、内科学、外科学、儿科学、临床医学、预防医学、口腔医学等方面的科研进展.现分述如下:1.基础医学:中国人群血液蛋白质遗传多态性及其应用研究;中线恶性网络细胞增生症的临床病理、免疫表型、基因重排与EB病毒关系的研究;时间生物钟-下丘脑视交叉上核形态学系列研究;急性白血病微小残留病的检测和P10基因突变的研究;急性结核性心血管病变的实验研究;无唾液酸糖蛋白受体介导肝靶向给药系统的研究;抗癌药物和抗乙肝病毒药物肝靶向给药系统.
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急性白血病遗传学改变的预后分析及微小残留病检测
随着化疗、靶向治疗等技术的进展,白血病的治疗效果日益改善,但复发仍是一大难题.白血病微小残留病(MRD)是指患者达血液学完全缓解后体内仍残留106～109/L白血病细胞计数的状态,为白血病复发的主要原因.因此,监测MRD具有重要的临床意义.近年来发现越来越多的异常表达基因有望用于MRD的检测,从而监测复发,提示预后.该文选取WT1(Wilms's tumor-1 gene)、尾型同源盒基因2和表皮生长因子受体通路底物8基因的临床意义予以综述.
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急性早幼粒细胞白血病的治疗进展
急性早幼粒细胞白血病(APL)的治疗取得了新的进展.在提高疗效的基础上进一步降低治疗的不良反应是近年来主要的研究方向之一,包括诱导方案的改进和巩固治疗策略的优化.以全反式维甲酸联合化疗为基础的治疗方案用于APL患者的治疗取得了良好的预后,提高了APL的完全缓解率.根据危险度不同进行分层治疗可以提高巩固治疗的疗效,而将微小残留病监测技术与抢先治疗相结合大大减少了血液学复发风险,使APL的治疗成为个体化治疗的典范.
关键词： 急性早幼粒细胞白血病 全反式维甲酸 微小残留病 复发 -
白血病微小残留病
近20年来白血病的治疗有了很大进展,长期生存病例越来越多,据统计在儿童急性白血病中,急性淋巴细胞性白血病(ALL)的5年无病生存率(EFS)已达70%～90%,急性髓细胞性白血病(AML)的5年EFS也达40%～60%.包括移植治疗在内的分型、规律、序贯性化疗措施的开展,使急性白血病的治愈成为可能.现已知白血病治愈的关键是如何控制治疗后的复发问题,由于多数白血病治疗后的复发是由原来的白血病细胞克隆增殖的结果,因此检测微小残留病(minimal residual disease,MRD)对疗效评价、预后判断和复发监测以及造血干细胞移植时移植物净化等都有十分重要的意义.
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WT1基因在急性白血病中的表达及其意义
目的 探讨WT1基因在急性白血病(AL)患者骨髓内的表达情况及其临床意义.方法 收集我院2013年1月至2016年1月就诊于吉林大学第一医院的100例急性白血病患者,统计其体内WT1基因表达情况,观察其表达水平与预后的关系.结果 100例急性白血病患者中77％的患者WT1基因表达阳性,WT1在急性髓系白血病(AML)和急性淋巴细胞白血病(ALL)均高表达,并且在二者间无统计学差异.其中在AML中M3和菲M3型AML间有统计学差异.结论 WT1基因在AL患者内表达水平可代表微小残留病灶(MRD),与预后密切相关.
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急性白血病造血干细胞移植后WTl基因检测与临床预后的相关性
目的 初步探索在急性白血病(AL)造血干细胞移植术(HSCT)后,Wilms瘤基因(WT1)水平对监测微小残留病(MRD)及预测临床预后的意义.方法 采用实时定量PCR技术动态检测2001年12月至2009年9月苏州大学附属第一医院血液科63例HSCT后患者的WTl基因及管家基因ABL mRNA表达水平(共326份骨髓标本).比较移植后不同转归组患者的WT1表达水平,依据受试者工作特征(ROC)曲线确定出可预测临床复发的WT1阈值,根据阈值对WT1阳性与阴性患者预后以及干预治疗效果进行分析.结果 19例复发患者WT1中位表达水平为1270(55-47 596),44例未复发患者WT1中位表达水平为132(0～2959),复发组WT1表达水平高于未复发组,差异有统计学意义(P<0.01).19例复发患者中,除1例在复发后末继续检测WT1外,10例因复发导致死亡的患者WT1中位表达水平略高于其他8例患者,但差异无统计学意义(P>0.05).采用ROC曲线以wn=585为界将63例患者分为WT1阳性组(>585)和阴性组(<585)两组.WT1阴性组患者较阳性组患者具有更高的无复发生存(RFS)及总生存(OS)率(均P<0.01).随访21例WTl阳性的患者,发现在移植后3个月内、4～6个月、7～9个月和9个月后检测到WT1表达阳性的患者的累积复发率分别为:8/8,2/4,2/4,3/5(P=0.063),并且干预治疗效果欠佳.结论 WT1基因可以作为AL患者HSCT后独立的MRD监测指标,WT1>585为移植后患者的预后不良因素.
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急性髓系白血病患者诱导化疗后第七或第八天微小残留病检测的预后意义
目的 探讨急性髓系白血病(AML)患者诱导化疗后骨髓抑制期,采用多参数流式细胞术(MPFC)检测的骨髓微小残留病(MRD)在疗效判断及预后中的价值.方法 回顾性分析85例初诊并于诱导化疗后第7～8天采用八色MPFC检测了骨髓MRD的AML(非急性早幼粒细胞白血病)患者临床资料,对其与疗效及预后的关系进行统计学分析.结果 在85例患者中,男42例(49.4％),女43例(50.6％),中位年龄35(15 ～ 54)岁,诱导化疗后第7～8天MRD中位数0.58％(0～ 81.11％),1个疗程诱导治疗后完全缓解(CR)患者70例(82.4％).根据受试者工作特征曲线(ROC曲线)得到MRD的阈值为2.305％(Se=0.867,Sp=0.800).MRD＜ 2.305％的患者1个疗程CR率为96.6％(56/58),MRD≥2.305％的患者1个疗程CR率为51.9％(14/27),两组CR率差异有统计学意义(x2=22.348,P＜ 0.001);两组无复发生存率差异无统计学意义(x2=1.08,P=0.299);两组总生存率差异无统计学意义(x2=0.42,P=0.516).多因素分析结果显示,以2.305％为界的MRD(OR=21.560,95％ CI 4.129～112.579,P＜0.001)是第1个疗程诱导疗效的唯一独立预后因素.结论 AML患者诱导化疗后骨髓抑制期,采用MPFC检测骨髓MRD以2.305％为界能够预测诱导化疗疗效.
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流式细胞术检测儿童B细胞急性淋巴细胞白血病微小残留病
目的建立流式细胞术检测白血病微小残留病(minimal residue disease, MRD)的方法,初步探讨其临床价值.方法用多种四色荧光抗体组合对患儿初发时的白血病细胞进行检测,同时对照多份正常骨髓标本的检测结果,以能够使白血病细胞在双参数点图上出现的位置完全不同于正常骨髓细胞的位置的抗体组合作为有效组合,以这些有效抗体组合对患者诱导治疗结束后的骨髓标本进行监测.对58例B细胞急性淋巴细胞白血病(B-ALL)患儿初诊时的骨髓标本进行了抗体组合有效性的筛选,并对其中的30例患儿诱导治疗结束后的骨髓细胞进行了监测.结果有52例(89.7%)B-ALL患儿都可找到适用于MRD检测的抗体组合.四色组合由CD10/CD34/CD19外加一个有效标志如CD38、CD65、CD66c、CD21等组成.该方法的敏感度为0.01%,远高于形态学检测法.实验中8例患儿诱导治疗结束后的骨髓细胞形态学检测未见白血病残留细胞,但该方法检测结果白血病残留细胞分别为0.028%,1.430%,3.050%,0.015%,5.660%,2.700%,0.027%和0.069%.结论流式细胞术检测MRD能提高对临床缓解期间患者体内残存白血病细胞数量的评估能力.
