首页 > 文献资料
-
提高耐甲氧西林金黄色葡萄球菌肺炎的临床诊治水平
金黄色葡萄球菌(以下简称金葡菌)是一种具有显著耐药性和致病性的革兰阳性球菌,其有大量可移动的DNA片段能实现基因交换,这些特点使其成为主要的病原菌.金葡菌容易在皮肤、黏膜表面定植,一旦定植成功,金葡菌能产生多种毒力因子致病,如胞外酶和毒素.胞外酶包括蛋白酶、脂肪酶和透明质酸酶,可致组织破坏和促使感染播散.毒素包括溶血素、剥脱性毒素、杀白细胞毒素(PVL)、中毒性休克综合征毒素、肠毒素和a-毒素等,这些毒素与特定的疾病相关,可引起严重的局部和全身反应[1].临床上金葡菌常引起皮肤软组织感染、血流感染和肺炎.
-
蛇毒素成分及临床应用进展
蛇毒是从毒蛇的毒腺中分泌出的一种毒液,属于生物毒素.一般蛇毒的新鲜毒液呈蛋清样粘稠液体,弱酸性,常温下易失活.全世界现有蛇类2 700余种,其中毒蛇约470种.我国有毒蛇60多种,其中剧毒蛇10余种[1],可见丰富的毒蛇资源有助与蛇毒研究.蛇毒含多种蛋白质、多肽、酶类和其他小分子物质,具有广泛的生物学活性.近年来,对蛇毒应用研究主要集中在对蛇毒成分的生物学特点上.研究者发现蛇毒具有抗炎,抗肿瘤,止血与抗凝,溶栓,镇痛等作用.此外,蛇毒还被应用到抗异种心脏移植排斥反应的研究中.本文在此对其主要成分及临床作用作一综述.
-
生长抑素受体显像和治疗研究进展
神经内分泌源性及一些非神经内分泌源性的肿瘤细胞表面均有SSTR高表达,利用放射性核素标记的生长抑素类似物(somatostatin analog,SSA)与SSTR特异性结合可使肿瘤显像,并可通过内吞作用进入细胞溶酶体内,进行靶向放疗;细胞毒素与SSA的偶联物同样可以与SSTR特异性结合,通过内吞作用进入细胞,起到靶向化疗的作用.
-
蛇毒抗肿瘤蛋白化学成分的研究
对蛇毒抗肿瘤蛋白的化学成分进行研究.采用RP-HPLC分离蛇毒抗肿瘤蛋白各组分,收集纯化组分Ⅳ.非还原型SDS-PAGE和RP-HPLC鉴定组分Ⅳ的纯度;还原型SDS-PAGE与MALDI-TOF质谱仪测定组分Ⅳ的相对分子质量;测定组分Ⅳ N-末端氨基酸序列并进行Western blot鉴定;MTT法检测组分Ⅳ对体外培养的K562细胞的生长抑制作用.结果表明蛇毒抗肿瘤蛋白组分Ⅳ经SDS-PAGE和RP-HPLC分析为单一成分,MALDI-TOF质谱仪测得其相对分子质量为6714.22,其N-末端前5个氨基酸序列为L-K-C-N-K.经Western blot鉴定蛇毒抗肿瘤蛋白组分Ⅳ为细胞毒素,其对K562细胞的抑制作用呈明显的剂量依赖关系.
-
细胞毒素Gelonin的亚克隆、表达与纯化
将分别含有细胞毒素gelonin基因片断的重组子pUC-gell和pUC-gelⅡ,按照预先设计的酶切位点,通过亚克隆得到含有gelonin全基因的重组子pUC-gel.然后将pUC-gel与pET28a同时用NdeI/EcoRI双酶切,相关片段构建成表达重组子pET-gel,并进行DNA序列测定.工程菌E.coli B121/pET-gel表达产物经两步SP-Seph-rose柱层析,可得电泳纯的重组gelonin,分子质量为28000 u.无细胞体系蛋白质合成实验表明,其IC50(使蛋白质合成抑制50%所需浓度)为35μg/xg/L.酶联免疫实验为阳性.
-
眼镜蛇毒细胞毒素缓释微球制备及体外性质研究
目的 研究眼镜蛇毒细胞毒素(Cytotoxin, CTX)聚乳酸/羟基乙酸缓释微球的制备方法,考察其一般性质、体外释药特性及生物学活性.方法 采用色谱方法纯化眼镜蛇CTX, MTT方法检测细胞毒活性,复乳-溶剂挥发法制备载药微球,考察微球表面形态、粒径、包封率、载药率、体外释药行为及释放眼镜蛇CTX细胞毒活性.结果 纯化眼镜蛇CTX具有明显的细胞毒作用,对肝癌HepG2细胞12,24h的IC50分别为1.43,1.12μg/mL,对L02肝细胞12,24h的IC50分别为1.37,1.01μg/mL.微球表面光滑圆整,粒径2.1～7.8μm,包封率和载药率分别为(74.10±9.92)%和(0.72±0.09)%,30d药物累积释放84.3%,释放眼镜蛇CTX保持较好的生物学活性.结论 采用复乳.溶剂挥发法可制备具有较高包封率,良好缓释效果,保持完整生物学活性的眼镜蛇CTX缓释微球.
关键词： 细胞毒素 聚乳酸-羟基乙酸微球 缓释 -
舟山眼镜蛇毒细胞毒素的分离纯化及其体外抗肿瘤活性
目的从眼镜蛇毒中分离纯化细胞毒素-F(CTX-F)并鉴定其活性.方法应用凝胶过滤、离子交换柱色谱及疏水柱色谱等方法从舟山眼镜蛇毒中分离纯化CTX-F,以SRB法观察CTX-F对体外培养癌细胞的杀伤作用.结果眼镜蛇毒粗毒经凝胶过滤获得4个蛋白峰,将CTX所在第Ⅳ峰用阳离子交换柱色谱获A、B、C、D、E、F和G等7个组分,其中E、F和G具CTX活性,将F组分再经凝胶过滤和疏水色谱进一步纯化得不含磷酯酶A2 (PLA2)的CTX纯品,暂定名为CTX-F,它对多种癌细胞株有杀伤作用.结论应用凝胶过滤、离子交换和疏水色谱等方法可从眼镜蛇毒中获得不含PLA2的CTX,其组分F有抗肿瘤活性.
-
MRSA菌皮肤软组织炎症分离株黏附素与细胞毒素编码基因研究
目的 了解耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA菌)皮肤软组织炎症分离株中黏附素编码基因与细胞毒素编码基因携带状况.方法 收集皮肤软组织炎症病灶部分离的MRSA菌20株,采用聚合酶链反应(PCR)检测10种黏附素编码基因(sasX、fnbA、clfA、clfB、icaA、cna、bbp、ebpS、efb、map)和5种细胞毒素编码基因(pvl、lukE、lukM、psm-mec、psmα).结果 20株MRSA菌经PCR检测,10种黏附素编码基因中sasX、fnbA、clfA、clfB、icaA、cna、efb等7种均呈阳性,阳性率均为100.0％,bbp、ebpS、map等3种均呈阴性;5种细胞毒素编码基因中pvl、lukE、psmmec等3种均呈阳性,阳性率均达100.0％,lukM、psmα等2种均呈阴性.结论 皮肤软组织炎症病灶部分离到的MRSA菌株黏附毒素编码基因和细胞毒素编码基因检出率较高,这可能也是皮肤软组织炎症发生的原因.
关键词： 细胞毒素 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 黏附素 编码基因 -
广西眼镜蛇毒细胞毒素的分离及对人鼻咽癌等细胞抑制作用的研究
目的探讨广西眼镜蛇毒细胞毒素对人鼻咽癌细胞(CNE)等多种癌细胞株的抑制作用.方法经Sephadex G-50,CM-Sepharose CL-6B层析法从广西眼镜蛇毒中分离纯化获得细胞毒素(CTX),采用MTT检测CTX 对癌细胞株体外培养抑制作用,探索量效时效关系.结果从广西眼镜蛇毒中分离到一种细胞毒素单一组分(CTX CM-5)对体外培养的人鼻咽癌细胞株(CNE)、淋巴瘤细胞株(YAC)、人宫颈癌细胞株(HELA)和卵巢癌细胞株(Ho8990)的抑制有明显的剂量依赖关系,作用48 h的IC50分别为1.84,0.75,1.84和2.59 mg·L-1;随作用时间的延长,CTX CM-5对CNE细胞株作用为明显,作用3h和24 h的IC50分别为4.78和1.04 mg·L-1.结论 CTX CM-5对体外培养的癌细胞株有较强的抑制作用.
-
格林巴利综合征相关及单纯腹泻相关空肠弯曲菌细胞毒作用分析
目的 分析格林-巴利综合征(GBS)相关空肠弯曲菌细胞毒素(CDT)作用.方法 9株GBS相关空肠弯曲菌以及4株腹泻患者分离菌株的全菌蛋白分别以0.001 μg ～ 5μg/mL的浓度作用于HeLa细胞,通过观察细胞形态的改变,获得不同菌株对细胞作用的差异.结果 不同菌株间产生细胞毒作用的浓度范围从0.01μg/mL到5μg/mL.结论 GBS相关菌株对HeLa细胞的细胞毒素作用与腹泻患者分离株相比没有显著差异.不同空肠弯曲菌菌株对HeLa细胞的细胞毒素作用具有菌株特异性.
-
RTX毒素的特征及检测
RTX(repeats in toxin)毒素家族是由部分革兰阴性菌所合成的毒素蛋白所组成,包括细胞毒素,金属蛋白酶,脂肪酶和溶血素等[1],代表毒素蛋白氨基酸序列的重复[2],目前RTX毒素家族有20多种毒素蛋白(见表1).
-
RTX毒素及其与靶细胞的相互作用
RTX(repeats in toxin)毒素是革兰氏阴性菌所合成的蛋白质家族的成员.RTX 毒素家族包括细胞毒素、金属蛋白酶和脂肪酶,是革兰氏阴性菌的重要的毒力因子[1].目前已报道RTX毒素有20多种,(见表1),仍有RTX毒素被陆续报道发现.
-
眼镜蛇毒细胞毒素抗肿瘤作用的研究及进展
本文以近年来国内外相关文献为依据,对眼镜蛇毒细胞毒素的分离、理化性质及抗肿瘤方面的研究及进展进行了综述,并对细胞毒素的实用提出展望.
-
舟山眼镜蛇毒细胞毒素的克隆及原核表达
目的 构建舟山眼镜蛇毒细胞毒素(Cytotoxin,CTX)原核表达载体(pET42α(+)-CTX),并在大肠杆菌中表达CTX重组蛋白.方法 从舟山眼镜蛇毒中分离纯化细胞毒素(CTX),测定N-末端氨基酸序列并据此设计引物,以提取的舟山眼镜蛇毒腺总RNA为模板,通过RT-PCR方法扩增细胞毒素基因序列(CTX cDNA).将CTX cDNA定向克隆到原核表达载体pET42α(+)中,双酶切图谱、PCR和DNA测序鉴定,转化宿主菌E.coli BL21(DE3),异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导,SDS-PAGE凝胶电泳分析表达产物,GSTrap FF亲和层析纯化融合蛋白CTX;Western-blotting鉴定.结果 成功合成CTX cDNA,并构建原核表达质粒pET42α(+)/GST-CTX,在大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中表达融合蛋白CTX,SDS-PAGE凝胶浓度扫描显示表达量占菌体总蛋白的28.9%,western-blotting证实纯化蛋白为重组CTX融合蛋白(rCTX).结论 成功构建CTX基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中表达,获得rCTX具有眼镜蛇毒CTX的抗原性.
-
江西眼镜蛇细胞毒素对白血病CEM细胞的抑制作用
目的:研究江西眼镜蛇细胞毒素对白血病CEM细胞的抑制作用及其机制.方法:以急性T淋巴细胞白血病CEM细胞作为研究对象,采用CCK-8比色试验检测江西眼镜蛇细胞毒素对CEM细胞的抑制作用;光镜下观察细胞毒素作用CEM细胞后的抑制情况和细胞形态学改变;Western blotting检测细胞毒素对CEM细胞的凋亡蛋白Caspase-3和Caspase-8表达影响.结果:江西眼镜蛇细胞毒素能明显抑制CEM细胞的增殖,抑制率与剂量成正相关;细胞毒素高浓度(2μM以上)作用下,抑制作用随时间延长呈现先增加后有所降低的趋势,佳的作用时间在24h,此时IC50为1.613μM;细胞毒素在低浓度(0.25μM以下)时,随着作用时间的延长,抑制作用迅速下降.倒置显微镜下观察到各给药组作用24h后CEM细胞数目随药物浓度的增加而减少且折光能力也逐渐降低.光镜下观察到各给药组CEM细胞体积明显缩小,胞膜皱缩,甚至还个别细胞出现核膜裂解、染色质分割成块状.Western blotting检测到眼镜蛇细胞毒素不同浓度组的Caspase-3、Caspase-8蛋白表达比对照组均有增加,以高浓度(2μM)组增加明显.结论:江西眼镜蛇细胞毒素可以抑制CEM细胞增殖,其机制可能与其诱导CEM细胞凋亡有关.
-
广西眼镜蛇蛇毒细胞毒素的抗肿瘤作用
目的了解广西眼镜蛇毒细胞毒素(CTX)的抗肿瘤作用.方法采用MTT法检测CTX对人鼻咽癌细胞株(CNE)、淋巴瘤细胞株(YAC)、S180癌细胞株、人宫颈癌细胞株(HELA)和卵巢癌细胞株(Ho8990)体外细胞毒作用,同时应用动物移植性肿瘤的体内试验法,观察CTX对S180载瘤小鼠(S180)和CNE的抑瘤作用及其生命延长率.结果CTX对上述体外培养的肿瘤细胞有明显的细胞毒效应,作用24 h的半数抑制浓度分别为1.04,0.50,1.82,1.76和1.05 μg/ml;CTX对小鼠肿瘤有明显的抑制作用,抑瘤率为12%～37%,呈明显量效关系.结论CTX对体外培养的癌细胞株有较强的抑制作用,对小鼠移植性瘤有一定抑制作用.
-
生长抑素-细胞毒素靶向作用的研究进展
生长抑素受体广泛表达于各种肿瘤组织.生长抑素及其类似物与毒素或化疗药物偶联,可以选择性结合到肿瘤细胞表面的特异性生长抑素受体上,毒素内化进入靶细胞.其主要优点在于能减轻常规放、化疗的毒副反应并增强抗癌效应.
-
卡介菌多糖核酸联合中药治疗儿童扁平疣82例
扁平疣为米粒大到绿豆大扁平隆起的丘疹，主要发生于青少年，好发于颜面、手背及前臂等处［1］。治疗方法较多，但目前尚无针对性药物，部分患者局部外用细胞毒素、冷冻、电灼后遗留明显皮肤瘢痕、萎缩或色素沉着；儿童患者因治疗方案局限，效果大多不尽如人意。2008年7月～2012年7月我们采用中药配合卡介菌多糖核酸注射治疗儿童扁平疣，效果较好。现报告如下。
-
眼镜蛇毒细胞毒素13诱导人脐静脉内皮细胞凋亡及对Bcl-2家族基因表达的影响
目的 研究眼镜蛇毒细胞毒素13诱导人脐静脉内皮细胞凋亡作用及其对Bcl-2家族基因表达的影响.方法 CCK-8法测定细胞毒素13对人脐静脉内皮细胞增殖的影响;Annexin V-FITC/PI双染法观察细胞凋亡形态学改变;流式细胞术分析DNA倍体及细胞凋亡率;逆转录聚合酶链反应检测Bcl-2、Bax和Bcl-x_L基因表达的变化,Western blotting检测Bcl-2和Bax蛋白表达的变化.结果 细胞毒素13对人脐静脉内皮细胞增殖具有显著的抑制作用,并可诱导其发生凋亡,其抑制作用呈剂量依赖性.细胞毒素13可上调促凋亡蛋白Bax,而对抗凋亡蛋白Bcl-2和Bcl-x_L的表达无明显影响.结论 细胞毒素13可能通过上调Bax表达诱导细胞凋亡,抑制人脐静脉内皮细胞增殖.
-
脑肿瘤靶向毒素治疗的现状和展望
靶向毒素,亦称为免疫毒素或细胞毒素,是一种肿瘤细胞表面特异性抗原或受体相结合的细胞分子.如与EG-FR、IL-13受体等相结合的细胞分子,其毒素成份可杀死肿瘤细胞.目前研究的毒素多为以白喉毒素、假单胞杆菌外毒素等为母基合成的毒素.双重特异性靶向毒素能同时靶向肿瘤细胞和/或其新生血管上的两个过表达受体的毒素,如DTAT13靶向uPAR和IL-13受体,DTATEGF靶向EGFR和uPAR,其较单一靶向毒素具有更高的特异性和更强的毒性,同时免疫源性亦大为降低.寻找特异性的肿瘤细胞表面标志物、降低毒素的免疫源性及研究实体肿瘤毒素的投递方式是靶向毒素治疗脑肿瘤的研究方向.
