应用组织芯片技术检测胃癌组织中抑癌基因、环氧合酶2和CD44的表达

新近的组织芯片技术因具有高通量、快速、多样本等特点已成为肿瘤研究的重要工具[1].我们采用该技术将60例患者的胃黏膜组织制成芯片,并用免疫组化对其进行死亡因子5基因(PDCD-5)、环氧合酶(COX)2、 CD44的检测,以探讨胃癌组织中程序化PDCD-5、 COX-2、 CD44表达的意义.

应用蛋白芯片技术探索乙型肝炎相关肝癌诊断新方法

表面加强激光解析电离飞行时间质谱(surface-enhanced laser desorption-ionization time-of-flight mass spectrometry,SELDI-TOF-MS)技术可将蛋白质沉析在芯片表面,离子化后用飞行时间质谱进行检测[1].这一技术操作简单,可直接检测体液,具有快速、高通量、准确等优点.

基因表达谱芯片对结肠癌相关基因的研究

基因芯片技术是一项低消耗、高灵敏度、高通量地分析细胞内基因表达谱的新技术[1],目前已广泛应用于基因功能的研究,尤其是肿瘤发生的分子生物学方面的研究.结肠癌是消化道常见的恶性肿瘤,发病率在逐年增加,已成为严重危害人民健康的主要疾病之一.结肠癌的发生和发展与许多已知的和未知的基因相关,用基因芯片方法寻找在结肠癌组织中特异性表达差异的基因,会对结肠癌的早期诊断、防治起到积极的作用.

高分辨率熔解曲线分析应用于结直肠肿瘤分子检测现状

高分辨率熔解曲线分析(HRM)是犹他州大学Wittwer实验室与美国Idaho公司联合研制的一种PCR后闭管操作技术:通过高密度荧光数据采集,直接用熔解曲线检测PCR扩增片段中微小序列差别,它是在常规PCR基础上增加一种饱和染料,无需标记探针.具有低成本、高通量、操作简单、不受变异位置影响[1]等优势.自2003年HRM被引入作为检测基因突变与分型的方法以来,随着HRM的不断完善,HRM的应用如"雨后春笋",层出不穷[2].

中药活性成分的高通量筛选新技术

以近年来国内外研究文献为基础，总结概括了近5年来中药活性成分的高通量筛选新技术的进展情况。其中生物色谱技术、芯片技术和计算机辅助虚拟筛选等技术得到了广泛应用。这些新技术在中药活性成分筛选方面，比起传统方法具有效率高、自动化、通量高的优点，可以为中药活性成分的高通量筛选提供新思路。

一种A40926高产菌株的高通量筛选策略

为提高糖肽类抗生素A40926的发酵效价,本研究以野野村放线菌(Nonomuraea sp.) HIPI-H01为出发菌株,采用常压室温等离子体诱变系统进行诱变,并选择链霉素及A40926脂肪酸侧链生物合成前体结构类似物乙酸钠为筛选压力,建立抗性筛选模型,以淘汰大部分不符合要求的突变菌株,使有效性状的突变株得以快速筛选出来,提高正突变率.在建立筛选抗性菌株方法的基础上,以抑菌圈筛选法进行初筛,初步筛得抑菌圈较大的168株突变株.结合出发菌株特性,选取24孔板进行复筛,并比较了微孔培养与摇瓶培养的相关性.结果表明,采用微孔板培养与摇瓶培养具有较好的一致性.与摇瓶培养相比,微孔板筛选体系具有效率高、可有效减少操作步骤及物料的使用量等优点.初筛菌株经微孔板复筛、抑菌圈法检测,筛选出24株发酵液抑菌圈较大的菌株,并以HPLC法检测发酵液中A40926效价,获得1株遗传性能稳定的突变株134#,其合成A40926的能力与原始菌株相比提高了17.6％,A40926效价达到809 mg/L.该菌株命名为野野村放线菌HIPI-M134.

不同通量透析膜对维持性血液透析患者氧化应激状态及血清炎症因子的影响

目的 探讨高通量透析膜和低通量透析膜对维持性血液透析(MHD)患者氧化应激状态及血清炎症因子的影响.方法 选择2016年8月至2017年3月接受治疗的136例MHD患者为研究对象,按随机数字表法将其分为对照组与观察组,每组68例.对照组给予低通量透析膜血液透析,观察组给予高通量透析膜血液透析,治疗28周.检测两组治疗前后的血液毒素指标[尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、血磷(P)、β2微球蛋白(β2-MG)]水平,氧化应激状态指标[丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、总抗氧化能力(TAOC)]水平及炎症反应指标[C反应蛋白(CRP)、肿瘤细胞坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6]水平,并评定两组治疗后临床疗效.结果 治疗后,观察组临床总有效率为92.65％,高于对照组的70.59％ (χ2 = 11.027,P ＜0.01).与治疗前相比,观察组治疗后BUN、Scr、P、β2-MG、MDA、CRP、TNF-α、IL-6水平均降低,而SOD、GSH-PX、TAOC水平均升高,差异具有统计学意义(P均＜ 0.01).与治疗前比,对照组治疗后β2-MG及T-AOC水平比较差异无统计学意义(P均＞ 0.05); 而BUN、Scr、P、SOD、GSH-PX水平均降低,MDA、CRP、TNF-α、IL-6水平均升高,差异具有统计学意义(P均＜ 0.01).治疗后,观察组与对照组相比,BUN、Scr、P、β2-MG、MDA、CRP、TNF-α、IL-6水平降低, SOD、GSH-PX、T-AOC水平均升高,差异具有统计学意义(P均＜ 0.01).结论 采用高通量透析膜对MHD患者进行血液透析,能有效清除患者血液毒素,提高机体抗氧化能力,并降低氧化应激及炎症反应.

高通量血液透析治疗终末期肾衰竭的临床效果分析

目的 观察高通量血液透析治疗终末期肾衰竭的方法和临床效果,为临床救治提供参考.方法 选取2014年6月至2015年6月收治的78例终末期肾衰竭患者,根据患者就诊时间先后,随机将患者分为观察组39例,对照组39例.两组均予以常规饮食及药物治疗,包括低磷、低盐、优质蛋白饮食,给予降压药物、铁剂、钙剂和重组人促红细胞生成素.在常规药物治疗基础上,对照组给予常规血液透析:采用醋酸纤维膜透析器,透析液流量维持在500 ml/min,血流量维持在210 ～ 260 ml/min,每周3次;观察组给予高通量血液透析:采用HI PS高通透性透析器,透析液流量、血流量及透析次数与对照组相同.分别于治疗前、治疗12个月后检测患者血清β2-微球蛋白(β2-MG)、血清白蛋白(ALB)、血红蛋白(Hb)、血清磷(PO43-)和甲状旁腺激素(PTH),并观察分析两组患者不良反应发生率.结果 观察组终末期肾衰竭患者治疗后β2-MG、PTH、Hb、PO43-和ALB水平均优于治疗前和对照组,差异均有统计学意义(P均＜0.05).观察组不良反应发生率显著低于对照组(10.26％ vs 30.77％,x2=5.032,P ＜0.05).结论 与常规血液透析比较,高通量血液透析治疗终末期肾衰竭患者具有更高清除有害物质能力和较低的不良发生率,具有较高的临床应用价值.

阀控多通道微流控芯片高通量快速检测大肠埃希菌O157∶H7

目的 建立一种基于气阀控制的多通道微流控芯片系统,实现高通量、低成本、快速检测大肠埃希菌O157∶H7.方法 采用集成多条反应通道和控制气阀的微流控芯片,用气阀控制芯片通道内反应的顺序,在通道交叉处构建出10个检测区.然后以免疫荧光技术为检测手段,检测水和粪便标本中的大肠埃希菌O157∶H7.结果 成功建立了一种基于气阀控制的多通道微流控芯片系统,并应用于大肠埃希菌O157∶H7的快速检测.此芯片一次可同时检测10个样本,单个样本检测时间少于10min、试剂消耗量仅为0.5 μL,对大肠埃希菌O157∶H7的低检测限为1×103 CFU/mL.检测大肠埃希菌O157∶H7组的荧光信号(4 122±164)与大肠埃希菌ATCC 25922(2.67±0.45)及伤寒沙门菌(3.33±0.94)比较,差异有统计学意义(t分别为35.78和30.79,P均＜0.01).批内精密度为5.2％.将本法用于模拟临床样品中大肠埃希菌O157∶H7的测定,敏感性和特异性分别为62％和100％,与培养法的总体符合率为81％.结论 基于气阀控制的多通道微流控芯片系统可实现高通量、低成本、快速检测大肠埃希菌O157∶H7,有望成为一种高效和快捷的新检测方法.

高、低通量血液透析对尿毒症病人透析质量的比较

目的 比较低通量血液透析(LF-HD)与高通量血液透析(HF-HD)对尿毒症患者不同分子质量毒素的清除及营养情况的评估.方法 22例维持性血液透析患者,先后接受LF-HD及HF-HD各3月,每周均透析3次,每次透析时间为4h.分别于透析前及3月后测定患者血清的肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、β2-微球蛋白(B2-MG)以及血浆白蛋白水平,并进行统计学处理.结果 LF-HD和HF-HD透析治疗后患者的Scr下降率分别为62.5%和61.1%,血BUN的下降率分别为66.9%和65.8%,两种透析方式比较无明显差异(P＞0.05).HF-HD透析治疗后血β 2-MG的下降率为45.1%,明显优于LF-HD透析治疗后β2-MG下降率-1.8%(P＜0.01).结论 HF-HD能有效清除中分子毒素(血β2-MG),LF-HD不能清除中分子毒素(血β2-MG).对于小分子毒素(Scr、血BUN)的清除率以及对血浆白蛋白的影响,两者比较无统计学差异.

食管癌相关基因的表达谱研究

从分子水平探讨食管癌发病机理已成为近几年研究的一个热点.目前RT-PCR、免疫组化和Northern Blot方法已经成为研究基因表达的主要手段,然而这些方法只能针对个别基因进行研究,无法实现高通量基因表达研究.

高通量血液透析的临床应用体会

80年代中期,随着人工合成膜透析器快速发展,出现了高通量血液透析(high-flux hemodialysis,HFHD).这种透析方式是指用高通量血液滤器在容量控制的透析机上进行常规血液透析的一种新技术.由于合成膜高通量滤器具有很高的通透性及溶质扩散性能,因此在透析中能有更多的且分子量更大的溶质从血液中转移至透析液中,若同时提高血液及透析液流速,可以进一步提高透析效果.90年代初,我们首次在国内应用了HFHD,近年来,国内外应用已越来越普遍.

高通量血液透析的临床应用体会

维持性血液透析是慢性肾衰竭的主要治疗方法,但许多长期透析患者仍然出现难以解决的并发症,诸如继发性甲旁亢、肾性骨病、透析相关性淀粉样变等.这些并发症的存在,可能与维持性透析通常使用低通量透析器不能有效清除尿毒症患者的大、中分子毒素有关,因此,国内外学者试图寻找更有效的方法解决这些问题.曾经采用高流量透析提高透析效果,但因患者高流量对心血管影响和透析液流量的特殊要求,而未普及,此后,更多采用高通量透析,效果好,不良反应少.

在线高容量血液透析滤过的临床应用

血液透析滤过(hemodiafiltration,HDF)与高通量透析(high-flux dialysis)同属高效血液净化治疗.HDF联合了弥散、对流及吸附作用,对小分子、中分子溶质及某些低分子蛋白均有较高的清除率.在线HDF(On-line hemodiafiltration,Ol-HDF)技术,使用高通量合成膜,应用超净透析液,置换液量每小时可达12L,进一步提高了对流溶质转运,溶质清除范围显著高于高通量透析,这种高对流转运的HDF治疗又称作高容量Ol-HDF(hgh-volume Ol-HDF).国外尤其欧洲国家有些患者长期采用这种模式替代治疗,国内有些单位也开展了高容量Ol-HDF,积累了一些有益的经验,目前高容量Ol-HDF被认为是有效的血液净化治疗模式.

不同透析膜的生物特性及临床应用

血液透析早应用的纤维素透析膜由天然棉花制成,能够激活补体和白细胞、诱发炎症反应,称为"生物不相容性"(bioincompatibility)生物膜.

目的基因捕获结合二代测序技术诊断遗传性大疱性表皮松解症及COL7A1基因新突变分析

目的:应用目的基因捕获技术诊断遗传性大疱性表皮松解症,探讨其价值及发现致病突变.方法:收集复旦大学附属儿科医院皮肤科临床诊断为遗传性大疱性表皮松解症的患儿临床资料.提取患儿及其父母外周血DNA,采用目的基因捕获结合二代测序技术,并与人类参考基因组hg19进行比对.Sanger测序进行位点及突变来源验证.1000genomes数据库查询变异频率,对于新发变异应用软件预测序列保守性和致病意义.PhastCons软件在物种间比对核苷酸序列保守性,取值范围0～1,接近1提示高度保守.MutationTaster2软件预测突变致病意义.结果:患儿出生后左侧小腿伸侧至足背皮肤缺损.测序发现与临床表型符合的靶基因COL7A1的2个变异位点,c.6900+2T＞G和c.8819-3C＞T,Sanger测序验证存在上述变异,先证者父亲在2个位点均未发生变异,母亲存在c.8819-3C＞T变异.其中c.6900+2T＞G为新发突变,位于经典的前体mRNA剪接区.c.8819-3C＞T在正常人群频率0.04％,为低频突变位点.PhastCons软件计算c.6900+2T序列保守性得分为1,提示高度保守性序列,c.8819-3C得分为0.485,提示保守性较低.MutationTaster2软件预测c.6900+2T＞G和c.8819-3C＞T均为致病性突变.结论:目的基因捕获结合二代测序技术可以对遗传性大疱性表皮松解症进行诊断和分型,发现COL7A1 c.6900+2T＞G新发突变.

国家新药高通量筛选体系建成

胶体金免疫层析法快速检测结核抗体方法的应用研究

结核病是一种古老的传染病,严重威胁着人类健康,全世界约有活动性肺结核患者2000万,每年新增患者800万到1000万,每年大约有300万人死于结核病[1].目前,结核病的诊断主要根据病原学检查、影像学和临床症状进行综合分析,而病原学检查即痰涂片和培养检查结核杆菌仍然是结核病实验室诊断的金标准,但病原学检查阳性率低、分离培养时间较长[2-3].因此,免疫学诊断技术日益受到重视.胶体金免疫层析法是20世纪90年代在免疫层析和单克隆抗体等技术基础上发展起来的一种新型的免疫方法,该法克服了传统仪器检测速度慢和不能高通量或进行现场检测的弱点,而且无需专业技术人员操作,是当前进行高通量或进行现场检测的佳方法.本研究用自行研制的双抗原胶体金免疫层析检测卡对353份结核病患者血清进行检测,并用艾康(ACON)生物技术有限公司生产的检测卡进行同步检测,现将结果报告如下.

高通量血液透析对血清氨基酸谱的影响

目的:观察高通量血透对血清氨基酸谱的影响.方法:选取15例长期血透、病情稳定的患者,测定其普通血透前后的血清氨基酸谱;然后将患者改行高通量血透,持续进行3个月,再测定高通量血透前后的血清氨基酸谱,高通量透析期间嘱患者适当增加蛋白质等营养物质的摄入.另选15例性别、年龄相匹配的健康体检者作为对照.结果:①单次普通血透和高通量血透对血清氨基酸均无显著影响(P值均＞0.05).②高通量血透前患者多种血清氨基酸(包括必需氨基酸、支链氨基酸和总氨基酸)浓度低于健康对照(P值分别＜0.05和0.01);高通量血透3个月后,患者血清氨基酸谱得到明显改善,必需氨基酸、支链氨基酸、芳香氨基酸和总氨基酸水平均有明显升高(P值分别＜0.05和0.01),与健康对照相比差异无显著性(P值均＞0.05).结论:高通量血透不增加血氨基酸的丢失,持续高通量血透可改善维持性血透患者血清氨基酸谱,可能与胃纳改善、营养物质摄入增加及代谢状态改善有关.

维持性血透患者进行高通量血透的临床研究

目的:探讨高通量血透(HFD)的安全性及,岛床应用价值.方法:选取在本院血液净化中心长期维持性血透且病情稳定、透析病程在半年以上的患者15例.测定普通血透(CHD)前后的血尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)、血脂、β2-微球蛋白(β2-MG)、氨基酸谱等,然后将患者改行高通量血透,持续进行3个月,再测定HFD前后的上述相同指标.另外测定15例年龄、性剐相匹配的健康体检者的血清氨基酸谱作为对照.结果:①CHD和HFD对BUN、Scr的清除差异无显著性.②HFD 3个月后,透前血胆固醇无显著性改变,但血甘油三酯有明显下降[(1.53±1.11)vs(2.02±1.41)mmol/L,P=0.035)].③单次HFD使血β2-MG明显下降[(13.44±0.78)vs(10.40±1.26)mg/dl,P=-0.000],CHD不能使血β2-MG下降,反而升高[(13.45±0.50)vs(13.70±0.53)mg/dl,P=0.09].但连续HFD3月后,透前血β2-MG并无显著下降[(13.44±0.78)vs(13.45±0.50)mg/dl,P=0.947].④单次CHD和HFD对血清总氨基酸浓度无显著影响.高通量血透前患者血清总氨基酸浓度低于健康对照[(765.01±304.97)vs(1182.50±295.48)μ mol/L,P=0.0021;高通量血透3月后,血清总氨基酸水平明显升高,与健康对照相比差异无显著性[(1599.41±1131.79)vs(1182.50±295.48)μmol/L,P=0.087].结论:HFD有利于降低血透患者的甘油三酯,对血清β2-MG的清除更明显,单次HFD对血清总氨基酸浓度无显著影响.连续HFD可改善血透患者血清氨基酸谱,可能与胃纳改善,营养物质摄八增加有关.短期观察发现HFD安全有效,比CHD有一定优势.