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辛伐他汀诱导K562细胞凋亡过程中细胞内钙离子浓度、Calbindin-D28K和calpain基因的变化
目的:观察辛伐他汀诱导K562细胞凋亡时细胞内Ca2+浓度、Ca2+调节蛋白(Calbindin-D28K,D28K)和Ca2+激活蛋白(calpain)基因变化,以探讨K562细胞凋亡机制.方法:常规培养细胞24h,20 μmol/L辛伐他汀处理K562细胞48 h;流式细胞技术检测细胞凋亡率和Ca2+浓度,PCR技术检测D28K和calpain基因.结果:20 μmol/L辛伐他汀作用K562细胞24、48、72 h凋亡率改变分别为(6.10±0.35)%、(14.15±0.42)%、(30.70±0.65)%,随药物作用时间延长细胞凋亡率增加;辛伐他汀作用K562细胞12、24、48、72 h,游离钙荧光强度变化为52.93±2.85、19.63±1.56、13.81±1.05、7.84±0.98,各处理组荧光强度与对照组相比升高(P<0.05);与相同时间对照组比较,calpain和D28K基因分别在辛伐他汀作用K562细胞24 h和48 h后上调(P<0.05).结论:辛伐他汀诱导K562细胞凋亡时细胞内Ca2+浓度显著升高,细胞内Ca2+浓度调节蛋白D28K和calpain基因上调,这些改变可能是辛伐他汀诱导K562细胞凋亡的机制之一.
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吗啡对大鼠海马星形胶质细胞[Ca2+]i的影响
目的研究吗啡对大鼠海马星形胶质细胞[Ca2+]i的影响,探索吗啡对星形胶质细胞的作用效应.方法运用荧光探针Fluo-4,利用激光共聚焦显微镜研究培养纯化大鼠海马星形胶质细胞[Ca2+]i的变化.结果经0.5、1、2、10 μmol/L浓度的吗啡短期处理3 d后,细胞内Ca2+浓度与正常细胞比较差异无显著性(P>0.05); 吗啡急性作用于正常星形胶质细胞后,[Ca2+]i呈单峰样升高;而作用于吗啡处理后的细胞,作用浓度需高于处理浓度出现[Ca2+]i呈单峰样升高的现象,纳络酮可阻断上述效应,NMDA受体阻断剂MK-801则不能.结论星形胶质细胞[Ca2+]i对吗啡的反应性变化可能参与吗啡耐受的形成.
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Kv1.1及Kv1.3通道亚型对小鼠肠系膜微细动脉的调节作用
目的 研究Kv1.1及Kv1.3通道亚型对小鼠肠系膜微细血管的调节作用.方法 以健康6~8周C57BL/6雄性小鼠肠系膜微细动脉作为研究对象,应用丹麦DMT520A离体微血管张力测定系统记录血管张力变化.应用广谱电压依赖性钾通道(Kv)阻断剂4-AP,Kv1.3通道选择性阻断剂PAP-1,Kv1.1通道选择性阻断剂TEA分别作用于静息状态,KCl及NE预收缩动脉,记录血管张力变化情况.应用Kv通道阻断剂4-AP,Kv1.3通道选择性阻断剂PAP-1作用于血管,观察Kv及Kv1.3通道在0 mmol/L Ca2+及2 mmol/L Ca2+ K-H液中对NE收缩曲线的作用.结果 Kv通道阻断剂4-AP可引起静息状态的血管收缩,并进一步收缩KCl预收缩的血管,但浓度依赖性舒张NE预收缩的动脉,并且与对照组相比,4-AP能明显抑制NE在0 mmol/L Ca2+液中所致的血管收缩[(3.45-±0.24)mN vs(0.11±0.02) mN,P<0.01].Kv1.3通道选择性阻断剂PAP-1未能收缩静息状态的血管,但可使KCl预收缩的血管发生轻微舒张反应,却明显舒张NE预收缩的动脉,而且PAP-1既可抑制NE在0 mmol/L Ca2+ K-H液中所致的血管收缩[对照组vs PAP-1组:(4.28 ±0.53)mN vs(2.75 ±0.49)mN,P<0.05],又可抑制在2 mmol/L Ca2+液中的收缩张力[对照组vsPAP-1组:(7.08 ±0.58)mN vs(5.90 ±0.80)mN,P<0.05].Kv1.1通道选择性阻断剂TEA可引起静息状态的血管收缩,但在0 mmol/L Ca2+液中该作用消失,同时对KCl或NE预收缩的动脉均无明显作用.结论 Kv通道可调节小鼠肠系膜动脉的舒缩反应.其中Kv1.1通道主要发挥血管收缩调节作用,可能与促进血管平滑肌细胞外钙内流有关,而Kv1.3通道主要发挥血管舒张调节作用,可能同时抑制平滑肌细胞内钙释放和细胞外钙内流.
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房颤病人钙超载机制与电重构的关系
心房纤颤(Atrial Fibrillation,AF)是常见的心律失常,随着年龄的增加其发病率增加.目前对AF的病理生理机制尚不完全清楚,现认为其发生与电重构有关.电重构以有效不应期(ERP)缩短,ERP频率适应性下降为主要特征.现认为其与心肌细胞内钙离子的超载有关,在介导房颤短期或长期的电生理重构方面钙超载是首要因素[1],同时,钙超载也与组织重构、房颤持续有关系.
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冬凌草甲素诱导SHEEC细胞凋亡过程中线粒体和细胞内[Ca2+]浓度的变化
目的:研究冬凌草甲素诱导食管癌细胞凋亡的过程中细胞内[Ca2+]和线粒体结构、功能的变化.方法:采用倒置相差显微镜观察细胞形态;末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法检测细胞凋亡;透射电镜法观察线粒体超微结构改变;罗丹明123荧光探针标记流式细胞仪检测和分析线粒体跨膜电位(△Ψm);激光扫描共聚焦显微镜测定细胞内[Ca2+]浓度.结果:冬凌草甲素剂量和时间依赖性的抑制SHEEC细胞生长;32μg/ml冬凌草甲素作用2h后电镜下BGC-823细胞线粒体增殖,4h后线粒体肿胀空泡化、内部结构消失,8h后细胞核染色质成块状边集,细胞凋亡;冬凌草甲素作用24h后,代表线粒体膜电位的Rho123荧光强度降低;经冬凌草甲素刺激后SHEEC细胞内[Ca2+]水平显著升高.结论:在冬凌草甲素诱导SHEEC细胞凋亡过程中,SHEEC细胞线粒体有明显的形态和功能改变伴随线粒体△Ψm降低,同时SHEEC细胞内[Ca2+]水平显著升高,提示线粒体改变和细胞内[Ca2+]升高可能是冬凌草甲素诱导食管癌细胞凋亡过程的重要环节.
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N-甲基-N-顺式-苯乙烯基-桂皮酰胺对青霉素诱发惊厥大鼠神经细胞内钙离子含量的影响
目的:检测黄皮核提取物N-甲基-N-顺式-苯乙烯基-桂皮酰胺(N-methyl-N-cis-styryl-cinnamamide,s-MSC)对皮层定位注射青霉素( Penicillin,PNC)诱发惊厥大鼠脑神经细胞内钙离子含量的影响,初步探讨其抗惊机理.方法:20只大鼠分为5组:正常对照组(20 ml/L吐温80+生理盐水)、模型对照组(20 ml/L吐温80 +PNC)、丙戊酸钠120 mg/kg+ PNC、75 mg/kg s-MSC组(s-MSC 75 mg/kg+ PNC)、150 mg/kg s-MSC组(s-MSC 150 mg/kg+ PNC).建立皮层定位注射PNC诱发大鼠癫痫模型,流式细胞术检测各组大鼠左侧大脑初级、次级躯体运动皮层及左侧海马神经细胞内钙离子含量.结果:皮层定位注射PNC后大鼠脑神经元内钙离子含量增加(P<0.01),丙戊酸钠及150 mg/kg的s-MSC均可使致癫大鼠脑神经元内钙离子含量降低(P<0.01),75 mg/kg s-MSC对于细胞内钙离子的降低无统计学意义.结论:黄皮核提取物N-甲基-N-顺式-苯乙烯基-桂皮酰胺对抗大鼠皮层定位注射PNC诱发的惊厥可能与其降低神经元内钙离子含量有关.
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钠钙交换蛋白在慢性心衰室性心律失常中的作用
慢性心衰患者死因中一半是心源性猝死,其原因是致命性心律失常.心律失常的发生是由于慢性心衰的心室肌电生理特性发生了改变,即电重构[1].它包括动作电位时程(APD)延长,APD在时空上离散度增加,细胞膜离子流如K+电流,起搏电流,If,Na+-K+-ATP酶所致外向电流及细胞内钙离子稳态(Ca2+hemeostasis)都发生了改变.钠钙交换蛋白(NCX)作为细胞内钙离子排出的主要途径.
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二氢吡啶类钙拮抗剂作用的双重模式:对NO的作用
钙通道拮抗剂已被广泛地应用于心律失常、心绞痛以及抗高血压的治疗.根据其化学结构分为五类:苯烷胺类,苯二氮类,二苯哌嗪类、二苯丙胺类和1.4二氢吡啶类.其中以二氢基吡啶类常用.理论上本类药物的作用基于机制抑制血管平滑肌细胞的L一型钙通道,降低细胞内钙离子而致血管平滑肌舒张.
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钙与妊高征的关系探讨
钙是人体重要的营养素,在组成人体元素中居第5位,有第二信使之称.通过流行病学和动物实验[1],表明钙摄取量不足,血钙水平低,细胞内钙离子增加可致高血压.妊高征是妊娠特有的疾病,是严重威胁母要健康的并发症,其病因迄今不明.近年来不少学者认为妊高征的发生可能与缺钙有关.为了解钙与妊高征的关系,我们对56例在我科住院的妊高征病人进行回顾性研究,还对妊娠中期补钙与未补钙孕妇各50例的妊高征发生率进行比较,现报道如下.
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脑外伤时即刻早基因的表达及其调控机制
神经细胞受到外伤刺激时,其兴奋性和可塑性赋予它接受、整合和传递信息的基本功能。跨膜信号引起并通过快速的细胞内钙离子等第二信使的变化,介导一系列生化反应而导致细胞代谢、功能及表型的调整。然而,长期以来对这一过程的分子基础却缺乏了解;直到近年来与正常细胞生长、分化有关的原癌基因c-fos、c-jun、c-myc及它们编码的核蛋白作为转录因子的发现,才明确了神经细胞对外界刺激应答中依赖c-fos等核内原癌基因的表达这一事实。这对于从基因水平研究神经功能通路,阐明高级脑功能,以及提示脑损伤的病理生理过程的本质具有重要意义。
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大电导钙激活型钾通道的调节
在细胞膜上存在一大类对钾离子有高度选择性并且能被细胞内钙离子激活的离子通道,称为钙激活型钾通道.根据离子通道电导的大小,钙激活型钾通道分为3种:小电导钙激活型钾通道(10~14pS),中等电导钙激活型钾通道(20~120pS),大电导钙激活型钾通道(180~350pS,称BKCa通道或Maxi-K通道).BKCa通道存在于体内绝大多数组织内,而且在细胞膜上的密度很高.本文概述BKCa通道的特性、生理功能及其调节.
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游离亚油酸对胰腺腺泡细胞的影响及其机制的探讨
目的 探讨游离亚油酸对胰腺腺泡细胞的影响及其可能的机制.方法 分离胰腺腺泡细胞,分别与0.1、0.5、1.0 mmol/L亚油酸共同孵育30、60、90 min,测定细胞的LDH释放率,DNA片段梯度分析腺泡细胞凋亡,流式细胞仪测定细胞凋亡率,Western blot检测腺泡细胞PKC的膜转位,激光共聚焦测定细胞内钙的变化.结果 腺泡细胞与亚油酸共同孵育后,台盼蓝染色显示存在细胞损伤,LDH释放率与亚油酸呈时间和剂量依赖关系.细胞总DNA凝胶电泳结果显示1.0 mmol/L亚油酸可出现DNA梯状条带,证明存在细胞凋亡.同时,腺泡细胞凋亡率及PKC的膜转位率,均与亚油酸呈剂量和时间依赖关系.另外,钙离子是参与细胞损伤和PKC激活的因子之一,采用激光共聚焦方法检测腺泡细胞内钙浓度,发现其升高与亚油酸呈浓度依赖性.结论 亚油酸对胰腺腺泡细胞损伤存在剂量和时间依赖关系.游离亚油酸刺激腺泡细胞内钙升高和活化PKC诱导细胞凋亡可能是高脂血症性胰腺炎的发病机制之一.
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茶碱与其他药物合用时应注意其血药浓度
茶碱类为甲基黄嘌呤类衍生物,是临床常用的止喘药之一.其通过促进内源性肾上腺素与去甲肾上腺素的释放,通过阻抑腺苷受体来拮抗内源性腺苷诱发支气管收缩的作用.茶碱也可以抑制磷酸二酯酶,减少呼吸道平滑肌细胞内cAMP的分解,从而提高cAMP的水平,使得支气管平滑肌张力降低.茶碱还能抑制钙离子由平滑肌内质网的释放,使细胞内钙离子减少,以上综合机制可达到松弛气管平滑肌的作用.但为获得满意的茶碱药物效应,需保障其有效的血药浓度,好维持在10~20μg/ml.
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大鼠烫伤后补锌对血清及组织钙离子的影响
近几年来,人们对组织损伤所致细胞内钙离子(Ca2+)的变化进行了研究,认为细胞内钙超载是组织损伤及细胞凋亡的一个共同特征,并应用钙通道阻滞剂和Na+-H+交换系统抑制剂HOE642(Cariporide)等降低细胞内钙超载以减轻组织损伤[1],但烧伤后及补Zn2+对组织Ca2+的影响尚未见报道,笔者观察了大鼠烫伤后补Zn2+对血清、肝脏、骨骼、皮肤Zn2+和Ca2+的影响.