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不同中医治法对脑缺血-再灌注损伤大鼠NO/NOS和神经元凋亡的动态比较研究
目的动态比较益气活血法、化痰通腑法、潜阳熄风法3种中医治法对急性缺血性脑血管疾病的动物模型的疗效.方法以健康Wistar雄性大鼠120只,随机分为假手术组、模型组、益气活血组、潜阳熄风组和化痰通腑组,每组24只,不同时点各8只.采用线栓法制作局灶性脑缺血再灌注大鼠模型,动态观察缺血2h再灌注24h、48h和72h,一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)和神经细胞凋亡率的变化.结果 1)脑缺血2h再灌注24h、48h、72h,模型组指标较假手术组均有显著病理性改变;2)缺血2 h再灌注24 h,各治疗组NO含量和NOS活性与模型组相比,均有显著改善;再灌注48 h,各治疗组与模型组相比亦有显著改善,在降低脑匀浆NOS方面,益气活血组优;再灌注72h,在降低脑匀浆NO含量和NOS活性方面,益气活血组优.3)3种不同中医治法在不同时间点均能明显降低脑缺血再灌注后神经元凋亡的发生,抑制缺血半暗带向梗死区发展.各治疗组之间比较,无显著性差异.结论益气活血法在脑缺血再灌注损伤的过程中,可以有效阻止脑组织NO含量和NOS活性的动态上升,拮抗细胞凋亡,保护脑组织.
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通窍活血汤对血管性痴呆大鼠海马神经元凋亡及血清巢蛋白的影响
目的：研究通窍活血汤对血管性痴呆（VaD）大鼠海马CA1区神经元凋亡及血清巢蛋白（Nestin）表达的影响，探讨通窍活血汤改善VaD大鼠空间记忆能力的作用机理。方法选取40只健康雄性SD大鼠，按随机数字表随机分为空白对照组、假手术组、VaD模型组、中药组、安慰剂组各8只，采用Olsson法建立VaD模型，造模成功后，中药组予以通窍活血汤灌胃，安慰剂组予蒸馏水灌胃。Morris水迷宫实验测试其学习记忆能力，TUNEL法检测海马CA1区神经元凋亡情况，ELISA法检测血清Nestin含量。结果中药组VaD大鼠海马CA1区神经元凋亡指数为（37.01±2.23）%，安慰剂组为（55.15±1.54）%，差异有统计学意义（P＜0.05）；中药组血清Nestin含量为（4.47±0.31）ng/L，安慰剂组为（3.42±0.43）ng/L，两组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。中药组VaD大鼠第3、4、5天逃避潜伏期[（32.07±13.43）s、（21.08±6.45）s、（19.53±7.52）s]较VaD模型组[（49.71±18.16）s、（34.37±7.42）s、（30.68±6.67）]明显缩短（P均＜0.01），穿越平台次数明显增多（5.02±1.34对3.77±1.07）次, t＝3.521，P＝0.001）。结论通窍活血汤能改善VaD大鼠空间记忆能力，可能与增加VaD大鼠血清Nestin表达和减少海马CA1区神经元凋亡相关。
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电针对脑缺血再灌注大鼠大脑皮层去甲肾上腺素及细胞凋亡的影响
目的:探讨电针对脑缺血再灌注神经元保护的作用及其机制.方法:SD大鼠随机分为对照组、缺血再灌注组及电针组,以双侧颈总动脉夹闭方法建立脑缺血模型,用流式细胞仪检测细胞凋亡和Bcl-2及Bax蛋白表达的变化,并用荧光分光法检测皮层去甲肾上腺素(norepinephrine, NE)含量的变化.电针穴位选择"水沟""承浆"穴.结果:①大鼠脑缺血再灌注48 h后,细胞凋亡率明显高于对照组(P<0.05),Bcl-2蛋白表达在皮层明显降低, Bax/Bcl-2比值较对照组明显升高(P<0.05);电针治疗后,Bax的表达减少, Bcl-2的表达增加,Bax/Bcl-2比值明显下降(P<0.05),细胞凋亡率受到抑制(P<0.05).②大鼠脑缺血再灌注3 min后NE含量在皮层明显升高,与对照组相比有显著性差异(P<0.05);脑缺血再灌注48 h后,皮层NE含量明显回落,与对照组相比无显著性差异;电针治疗后,脑缺血再灌注早期(即缺血再灌3 min后)脑组织内NE升高的现象出现逆转,与模型组比较有显著性差异(P<0.05).结论:脑缺血再灌注早期大鼠脑NE出现变化,此变化可能与神经元的凋亡发生有关.电针能逆转脑缺血再灌导致的NE的异常变化,并调节Bax/Bcl-2的表达水平,抑制神经元凋亡的发生.
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Aβ损伤人脑微血管内皮细胞培养液对正常神经元凋亡的影响及通心络胶囊的干预作用
目的:通过β淀粉样蛋白(amyloid β-protien,Aβ)损伤人脑微血管内皮细胞(human brain microvascular endothelialcells,HBMEC)培养液对正常神经元凋亡的影响及通心络胶囊的干预作用研究,探讨通心络对HBMEC及脑神经元的保护作用及其可能作用机制.方法:实验分为空白组,正常组,模型组,Aβ损伤组,通心络组,石杉碱甲组,空白组为正常神经元组,正常组为正常HBMEC培养液培养神经元组,其余4组采用20 μmol·L-1Aβ诱导HBMEC损伤,其中通心络组提前干预(400 mg·L-通心络预处理6h),石杉碱甲组提前干预(100 mg·L-1石杉碱甲预处理6h),取其损伤后的细胞培养液加到正常脑神经元中进行培养,实验结束检测神经元的凋亡情况及凋亡蛋白、基因表达.结果:Aβ损伤HBMEC后的培养液可加速脑神经元的凋亡,且较Aβ直接导致脑神经元凋亡严重,提前通过通心络干预的HBMEC培养液诱导脑神经元凋亡细胞减少,凋亡蛋白、基因表达均有降低(P ＜0.05,P＜0.01),且优于西药石杉碱甲组(P＜0.05).结论:老年性痴呆(AD)中HBMEC损伤可以进一步加速神经元的凋亡,而通心络保护HBMEC同时可起到保护脑神经元的作用,通心络胶囊对AD脑神经元及HBMEC具有双重保护作用.
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电针对局灶性脑缺血再灌注大鼠JAK2/STAT3 mRNA及神经元凋亡的影响
目的:观察电针对脑缺血再灌注损伤大鼠JAK2/STAT3 mRNA及神经元凋亡的影响,探讨电针抗神经元凋亡的机制.方法:将90只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组,每组30只,每组按照再灌注时间分为再灌注后2、24、72h 3个亚组,各亚组大鼠均为10只,采取改良大脑中动脉线栓法(MCAO)复制局灶性脑缺血再灌注模型,缺血90min后再灌注.假手术组仅分离暴露右侧颈总动脉不插线栓.模型组和电针组按造模方法造模,造模成功后模型组不进行治疗干预,电针组采用韩氏电针治疗仪,2/15Hz疏密波,刺激百会穴与内关穴,持续30min.各亚组完成相应电针治疗后即断头取脑.运用TUNEL法检测凋亡阳性细胞数,RT-PCR检测JAKmRNA、STAT mRNA表达.结果:再灌注2h后,模型组和电针组之间凋亡阳性粒细胞数、JAK2 mRNA、STAT3mRNA均增高,两组差异无统计学意义,与假手术组比较有显著性差异(P＜0.01);再灌注24h、72h后,电针组较模型组差异有统计学意义(P＜0.05).结论:电针能通过抑制脑缺血再灌注损伤后JAK2/STAT3的过度表达达到脑保护、抗神经元凋亡的作用.
关键词： 电针 脑缺血再灌注 JAK2/STAT3 神经元凋亡 -
补肾方对β淀粉样蛋白所致大鼠海马神经元细胞毒作用的影响
目的:建立Aβ所致的神经细胞毒模型,探讨补肾方的药效及作用机理.方法:原代培养大鼠海马神经元.用25μmol/L聚集状态的Aβ1-42建立神经细胞毒模型.采用LDH释放量来检测神经元存活率,通过透射电镜、流式细胞计判断神经元凋亡,应用免疫细胞化学法研究凋亡相关基因(Bcl-2、Bax、c-Jun)的蛋白表达.结果:神经元经Aβ1-42处理后,LDH释放增加;电镜显示细胞体积缩小、染色质固缩、或浓聚成块状位于核周边、滑面内质网扩张;流式细胞计可见亚二倍体峰;Bcl-2的蛋白表达减少,而Bax与c-Jun表达增加补肾方使LDH释放减少,电镜下具有凋亡形态特征的细胞减少,流式细胞计显示凋亡率下降,Bcl-2蛋白表达增加,c-Jun表达减少,而Bax表达变化不明显.Tacrine组神经元存活率增加,但其它指标的变化不明显.结论:①补肾方对Aβ1-42神经细胞毒有保护作用,可提高细胞存活率,抑制凋亡.②其作用机制可能是通过提高bcl-2、降低c-Jun基因的蛋白表达而实现.③Tacrine对神经元存活率有提高作用.但抑制神经元凋亡的作用似不明显.补肾方对抑制Aβ所致神经元凋亡明显优于Tacrine.
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糖尿病并发抑郁症大鼠海马神经元凋亡情况及潜在机制研究
目的：研究糖尿病并发抑郁症（DD）大鼠海马神经元凋亡情况，探讨其可能的分子机制。方法采用高脂灌胃联合尾静脉注射链脲佐菌素建立糖尿病模型，随机分为糖尿病模型组和DD模型组，另取正常大鼠随机分为空白对照组和抑郁症模型组，抑郁症模型组和DD模型组继续给予28 d慢性不可预见性应激。造模结束后，采用 Open-field 实验和 Morris 水迷宫实验评价大鼠行为活动能力，HE 染色观察大鼠海马病理改变， Western blot检测大鼠海马p-JNK、Bax、Bcl-2、Caspase8、Caspase3蛋白表达。结果 Open-field实验结果显示，各模型组大鼠自主活动能力显著下降，其中DD模型组大鼠较糖尿病模型组明显下降；Morris水迷宫实验结果显示，各模型组大鼠逃避潜伏期延长，其中DD模型组大鼠较糖尿病模型组明显延长；HE染色结果显示， DD模型组大鼠海马损伤为严重；Western blot结果显示，各模型组大鼠较空白对照组p-JNK、Bax、Caspase8、Caspase3表达显著升高，Bcl-2表达显著降低，其中DD模型组差异更显著。结论基于糖尿病，DD引起海马神经元凋亡，其机制可能与细胞凋亡相关蛋白p-JNK、Bax、Bcl-2、Caspase8、Caspase3等异常表达相关。
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左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症大鼠海马神经元凋亡的影响
目的：观察左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症大鼠学习记忆能力以及海马 JNK、Bcl-2、Bax 表达的影响，探讨其对糖尿病并发抑郁症大鼠海马损伤的保护机制。方法采用高脂饲料灌胃联合尾静脉注射链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型，继续给予28 d慢性应激建立糖尿病并发抑郁症大鼠模型。实验大鼠随机分为空白组、模型组、阳性药组及左归降糖解郁方高、中、低剂量组。末次给药后，采用 Morris 水迷宫测试大鼠逃避潜伏期时间，Western blot检测海马JNK、Bcl-2、Bax蛋白表达；RT-PCR检测JNK、Bcl-2、Bax基因表达。结果与空白组比较，模型组大鼠逃避潜伏期明显延长（P＜0.01），JNK、Bax蛋白及基因表达明显上升， Bcl-2表达明显下降（P＜0.05，P＜0.01）；与模型组比较，左归降糖解郁方高剂量组大鼠逃避潜伏期明显缩短（P＜0.01），JNK、Bax 蛋白及基因表达均明显下降，Bcl-2表达明显升高（P＜0.05，P＜0.01）。结论左归降糖解郁方能明显改善糖尿病并发抑郁症大鼠的学习记忆能力，其作用机制可能与抑制海马神经元凋亡有关。
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参麦注射液对脑出血大鼠神经细胞凋亡相关基因表达影响的实验研究
目的:观察参麦注射液对大鼠脑出血后神经细胞凋亡相关基因的影响.方法:采用Rosenberg法复制大鼠脑出血模型,测定脑出血后大鼠海马CA1区神经细胞病理形态结构及其Bcl-2基因、Bax基因表达;结果:参麦注射液减少大鼠脑出血后海马CA1区锥体细胞凋亡数目,显著增加Bcl-2基因表达,降低Bax基因表达,使Bax mRNA/bcl-2 mRNA比率下降.结论:参麦注射液能调节凋亡基因,减少大鼠脑出血后神经细胞的凋亡.
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小鼠小脑皮质发育中的神经元凋亡
目的 探讨小鼠小脑皮质发育中神经元凋亡的规律和机制.方法 用激活型Caspase-3多抗免疫组织化学标记及Hoechst 33258染色液染色,检测从出生至成年小鼠小脑皮质中神经元的凋亡,用Western blotting方法对小脑组织中Caspase-3和Caspase-8的活化片段进行半定量测定.结果 外颗粒层、普肯耶细胞层和内颗粒层凋亡细胞密度高分别在出生后第8d(P8)、P5及P9),P20各层凋亡细胞密度都很低.Caspase-3活化片段的表达量在P5较高,P5以后逐渐降低,至P14消失;Caspase-8活化片段的表达量从P0到P10都较高,P10以后逐渐降低,至P30消失.结论 P0至P14是小脑皮质神经元凋亡的重要时期,通过启动Caspase-8的活化进而激活效应性Cespase-3的细胞凋亡途径存在于小脑皮质的塑型成熟过程.
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左旋四氢巴马汀在大鼠急性脑缺血再灌注时对Bcl-2、Bax蛋白表达的影响
目的观察左旋四氢巴马汀(L-tetrahydropalmatine,L-THP)在脑缺血再灌注时对凋亡相关基因Bcl-2、Bax蛋白表达的影响.方法建立大鼠急性全脑缺血再灌注模型,采用免疫组织化学法、原位末端标记法,分别检测假手术组(S组)、缺血再灌注组(Ⅰ组)、L-THP治疗组(T组)海马CA1区Bcl-2、Bax蛋白表达水平及凋亡细胞数.结果 (1)脑缺血再灌注时,海马CA1区Bcl-2蛋白的表达显著增加(P＜0.01),但随时间的延长,增加幅度逐渐减小;而T组Bcl-2蛋白表达于相应的时间点则明显大于I组(P＜0.01).(2)I组各时间点Bax蛋白表达均大于S组(P＜0.01),且随时间延长增加幅度逐渐增大;而T组Bax蛋白表达在相应时间点则下降(P＜0.01).(3)T组的神经细胞凋亡数与Bcl-2/Bax蛋白阳性细胞数比值的关系为负相关:r＝-0.94173,P＜0.001.(4)神经细胞凋亡数随再灌注时间延长而增加,L-THP可减少细胞凋亡数.结论在脑缺血再灌注细胞凋亡过程中,L-THP可通过上调Bcl-2蛋白表达,下调Bax蛋白表达,减少神经元凋亡,对脑缺血损伤起保护作用.
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滋补脾阴方药含药血清对内质网应激致神经元凋亡的影响
目的 运用中药血清药理学方法研究滋补脾阴方药含药血清对内质网应激致神经元凋亡作用及其机制.方法 实验中体内实验于辽宁省SPF动物重点实验室完成,体外实验于辽宁省脑疾病研究重点实验室完成.SPF级健康雄性SD大鼠(220～250 g)12只,随机分为对照组和滋补脾阴方药(ZBPYR)组,每组6只,制备空白及ZBPYR含药血清.以N-糖链抑制剂农霉素(tunicamycin,Tm,5压计μml)刺激小鼠神经瘤母细胞(Neuro2a)建立内质网应激模型,各浓度滋补脾阴方药含药血清(5%,10%,15%)为干预组,空白血清组为对照组,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)方法观察Neuro2a细胞牛存率;流式细胞技术观察Neuro2a细胞凋亡;蛋白质免疫印迹(Western blotting)法观察葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、凋亡促进因子CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)的蛋白表达.统计结果行SNK-q检验.结果 各浓度ZBPYR含药血清预处理组(生存率:5%0.5295±0.0373,10%0.5843±0.0428,15%0.6274±0.0324;凋亡率:5%47.8733±2.8166,10%46.3366±1.2748,15%39.8833±1.0524)与Tm组(牛存率:0.1673±0.0213;凋亡率:62.7050±1.4056)相比,细胞牛存率明显升高(P<0.05);细胞凋亡率显著降低(P<0.05);各浓度ZBPYR含药血清预处理组GRP 78(5%2.1228±0.2251,10%1.3293±0.9443.15%;15%0.0931±0.1168)及CHOP(5%1.1776±0.2927,10%0.7290±0.1708,15%0.6577±0.1883)蛋白表达与Tm组(GRP 78 2.9149±0.5355;CHOP 1.6611±0.2913)相比,表达水平明显下调(P<0.05).结论 ZBPYR能提高Tm刺激后的Neuro2a细胞生存率,抑制细胞凋亡,具有神经保护作用,其机制可能是减轻内质网应激及抑制内质网应激凋亡通路.
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马尾受压大鼠脊髓圆锥神经元凋亡及有关产物表达的变化
数根以上的马尾神经根受损可导致腰骶髓段所支配的感觉与运动功能造成损害,临床上称为马尾综合征(cauda equina syndrom,CES).其具体的病理机制及诸如鞍区麻痹、下腰痛、膀胱功能障碍、下肢肌无力、麻痹或瘫痪等症状的产生原因仍未完全明了.减压手术,特别是逾期的减压手术的疗效也不甚理想.
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睡眠剥夺大鼠癫痫诱发后CB1受体与脑细胞凋亡的关系
目的 探讨睡眠剥夺大鼠癫痫诱发后海马大麻素CB1受体表达与脑细胞凋亡的关系.方法 48只Sprague-Dawley(SD)大鼠,随机分为癫痫诱发前和癫痫诱发后两组,每组24只.每组大鼠又随机分为空白对照组(CC),睡眠剥夺1 d、3 d、5 d组(SD 1 d、SD 3 d、SD 5 d).用改良多平台睡眠剥夺法建立快速动眼期(REM)睡眠剥夺模型,戊四氮诱发癫痫.应用RT-PCR方法检测癫痫诱发前后大麻素CB1受体mRNA表达,并观察海马超微结构改变.结果 SD 1 d组神经元轻度固缩,染色质轻度边聚,SD 3 d组和SD 5 d组均出现神经元凋亡.癫痫诱发后发现CC组大鼠无抽搐,CB1受体mRNA表达较癫痫诱发前明显升高(P＜0.01).SD 1 d、SD 3 d、SD 5 d组大鼠抽搐严重,CB1受体mRNA表达较癫痫诱发前相比差异无显著性(P＞0.05).结论 睡眠剥夺能造成神经元凋亡,影响大麻素CB1受体表达.CB1受体表达增高对脑损伤有一定保护作用,能抑制癫痫发作.
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神经妥乐平对大鼠坐骨神经损伤后脊髓运动神经元的保护作用
目的 探讨大鼠坐骨神经损伤后早期应用神经妥乐平对相应脊髓运动神经元的保护作用.方法 将108只雄性SD大鼠随机分为A组、B组和C组,每组36只,所有大鼠均行双侧坐骨神经切断后立即行神经外膜端端吻合术.A组为对照组;B组术后予神经妥乐平治疗;C组术后予生理盐水治疗.按术后1 d、4 d、9 d、14 d、21 d和28 d 6个时间点取L4～L6脊髓作Bcl-2、Bax免疫组化检测,以及TUNEL检测.结果 B组术后9 d、14 d、21 d的Bel-2/Bax值较A、C组增高;B组与A、C组相比,9 d的TUNEL阳性细胞数量有显著性差异(P<0.05),14 d的TUNEL阳性细胞达高峰,其中B组的TUNEL阳性细胞数量少于A组和C组(P<0.05～0.01).结论 大鼠坐骨神经切断外膜端端吻合术后,神经妥乐平可以一定程度地保护脊髓前角运动神经元避免其过度凋亡.
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小强度跑台运动对APP/PS1转基因小鼠海马齿状回神经元凋亡的影响
目的:观察小强度跑台运动对APP/PS1转基因小鼠海马齿状回神经元凋亡的影响.方法:3月龄C57野生型小鼠及APP/PS1转基因小鼠随机分为四组:野生型小鼠对照组(WtC组,6只)、野生型小鼠运动组(WtE组,6只)、转基因小鼠对照组(TgC组,6只)、转基因小鼠运动组(TgE组,6只),运动组小鼠进行5个月小强度跑台运动.训练结束后,各组小鼠在麻醉状态下在体灌注固定,取脑,石蜡包埋,取石蜡切片进行Nissl染色与TUNEL染色,观察神经元形态和数量及神经细胞凋亡.结果:与野生型小鼠比较,TgC组小鼠海马齿状回神经元数量明显减少,排列稀疏,胞体塌陷或皱缩,神经元细胞核固缩多见,尼氏小体数量明显减少.相较于TgC组,TgE组小鼠齿状回神经元数量较多,排列较规整,偶见神经元细胞核固缩,仍可见到较多的尼氏小体,形态大致正常.转基因小鼠齿状回可见较多的凋亡细胞,凋亡指数高于野生型小鼠,差异具有显著性(P＜0.05);TgE组齿状回神经细胞凋亡指数低于TgC组,差异具有显著性(P＜0.05).结论:小强度跑台运动对阿尔茨海默病所致的海马齿状回神经元数目的减少具有保护作用;抑制神经元凋亡是小强度跑台运动减少海马结构齿状回神经元丢失的可能原因.
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高压氧对脑出血后血管新生影响的研究进展
脑血管疾病是神经系统常见病和多发病,新的流行病学资料表明,我国的脑血管疾病在人群死因中高居第二位,仅次于恶性肿瘤,且在不少城市中已占首位.而脑出血是脑血管病中的危重类型,至今仍无特别有效的治疗方法,其以较高的发病率、致残率和病死率严重地威胁人类的健康.脑出血的预后受多种因素影响,其中在缺血半暗带诱导新生血管形成,及时恢复受累脑组织的再灌注和供氧,减少神经元凋亡和坏死,是影响脑出血预后的关键因素[1].
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腺苷处理后犬脊髓缺血再灌注损伤中神经元凋亡及相关蛋白表达的变化
目的 探讨腺苷处理后犬脊髓缺血再灌注损伤实验中脊髓神经元凋亡及其相关蛋白Bax、Bcl-2的表达变化,证实腺苷对犬脊髓缺血再灌注的保护作用.方法 16只健康成年杂种犬,雌雄不拘,体质量10 ～20 kg.随机均分为两组,采用胸主动脉、锁骨下动脉阻断法造成脊髓缺血模型(75 min).单纯缺血再灌注组,阻断前30 min颈静脉泵入50 ml生理盐水,300 ml/h,10 min泵完;阻断结束时再以相同的流速和时间泵完(对照组).阻断前30 min颈静脉泵入50 ml腺苷溶液(0.4 mg/ml,50 ml),阻断结束时再以相同的流速相同浓度和时间泵完(实验组).术后继续笼内饲养,采用Tarlov下肢神经功能评分系统评估6、24、48 h神经运动功能评分.再灌注48 h各组分别处死实验动物,迅速取出L2 ～L5及骶段脊髓.采用Tunel法进行细胞凋亡检测,免疫组化法检测Bax、Bcl-2的表达.结果 实验组犬运动功能评分24、48 h高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).实验组脊髓神经元凋亡量明显低于对照组(P＜0.05),较对照组Bax表达减少和Bcl-2表达增多.结论 腺苷处理后可减少犬脊髓缺血再灌注后神经元凋亡,对脊髓缺血再灌注损伤具有明显的保护作用.其保护作用可能与凋亡蛋白Bax表达减少和凋亡抑制蛋白Bcl-2表达增多有关.
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戊四氮诱导大鼠癫痫发作的mGLuR1α表达与神经元凋亡
目的 探讨癫痫发作后mGLuR1α的表达及其与神经元凋亡的关系,并明确mGLuR1α在癫痫活动中的作用.方法 将大鼠随机分为致痫后6、12、24、48、72 h组及对照组,应用免疫组织化学和RT-PCR方法检测戊四氮(PTZ)诱导大鼠癫痫发作后不同时间点脑神经细胞mGLuR1α的表达变化,采用原位末端标记法和流式细胞仪检测其神经元凋亡情况.结果 (1) 致痫后6 h TUNEL染色阳性神经元开始表达,致痫后l2 h明显,24 h开始下降,48 h仍有表达.致痫后12 h细胞凋亡率高,之后随时间延长逐渐下降.(2)致痫后6 h mGLuR1α mRNA转录水平即达高,12 h仍处于较高水平,之后逐渐降低,72 h时仍高于正常水平,而受体的蛋白表达则稍晚,于致痫后l2 h达到高峰,24 h开始下降. (3) 致痫大鼠mGLuR1α受体表达的早和高峰时间与TUNEL反应时间基本吻合. 结论 mGLuR1α表达与致痫大鼠的神经细胞凋亡机制有关,癫痫发作可导致mGLuR1α一过性高表达,从而造成神经元损伤.
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红藻氨酸致痫大鼠海马神经元凋亡及其与caspase-3关系的研究
目的研究大鼠癫痫发作后海马神经元凋亡及其与天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(cysteinyl asparate-specific proteinase,caspase-3)表达的关系.方法采用红藻氨酸(kainic acid,KA)诱导大鼠癫痫模型,以原位末端标记(TUNEL)及透射电镜检测癫痫发作后6 h及1、3、7 d海马神经元凋亡;半定量RT-PCR及免疫组化法检测caspase-3 mRNA及caspase-3阳性表达.结果 KA致痫后1 d,海马CA1、CA3及CA4区开始出现凋亡细胞,3 d时明显增多,7 d时多.3个时间组相应区域间凋亡神经元数比较差异均有显著性(P<0.001).透射电镜观察可见典型的凋亡细胞形态学改变.RT-PCR结果显示,KA致痫后6 h,海马组织caspase-3 mRNA表达较对照组显著增高(P<0.05),1、3、7 d caspase-3 mRNA仍持续高水平表达(P<0.05).免疫组化结果显示, KA致痫后1 d , 海马CA1、CA3、CA4区开始出现caspase-3阳性表达, 3 d时阳性表达进一步增强, 7 d时表达强. 结论凋亡参与KA致痫大鼠癫痫发作后海马神经元迟发性死亡过程,caspase-3可能在癫痫后神经元凋亡过程中具重要的作用.
