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荔枝核总黄酮改善胆总管结扎大鼠胆汁淤积症状的研究
目的：观察荔枝核总黄酮（TFL）对胆汁淤积性肝纤维化大鼠肝功能p16蛋白、3型胶原（PC3）和Ⅰ型胶原（PCⅠ）的影响。方法40只大鼠随机分为假手术（SO）组、胆总管结扎（BDL）组、TFL组和水飞蓟宾胶囊（SIL）组。SO组、BDL组生理盐水灌胃5 mL/(kg·d)，TFL组TFL灌胃200 mg/(kg·d)，SIL组SIL灌胃5 mL/(kg·d)，均持续4周。取血清检测血清丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）、直接胆红素（BILD）、总胆红素（BILT）。取肝组织行HE、Masson染色；Western blot检测p16、PC3、PCⅠ的表达。结果 SO组ALT（IU/L：44.6±8.0）、AST（IU/L：103.8±18.1）、BILD（μmol/L：0.76±0.28）、BILT（μmol/L：1.48±0.35）值低；BDL组ALT（147.4±86.3）高于TFL组（92.9±47.3）， AST（362.7±106.6）高于TFL组（290.1±171.7）和SIL组（250.2±54.9），BILD（99.71±40.87）低于SIL组（137.01±38.86）；TFL组BILD（81.48±47.50）、BILT（106.64±61.04）均低于SIL组（均P＜0.05）。TFL组存在少量新生胆管，细胞水肿变性不明显，少量炎细胞浸润及胶原沉积，较BDL组肝纤维化程度明显改善。SIL组肝汇管区新生胆管较TFL组明显，有细胞变性水肿，炎细胞浸润，汇管区有纤维间隔，程度较BDL组轻，汇管区有胶原沉积。BDL组p16、PC3、PCⅠ蛋白表达高于TFL组，PC3蛋白低于SIL组，PCⅠ蛋白高于SIL组（均P＜0.05），p16蛋白与SIL组差异无统计学意义；TFL组PC16、PC3蛋白表达低于SIL组（P＜0.05），PCⅠ蛋白与SIL组差异无统计学意义。结论 TFL可改善胆汁淤积性肝纤维化大鼠肝功能，减轻肝组织纤维化；其机制可能与抑制肝组织p16、PC3、PCⅠ蛋白表达有关。
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养目平突汤含药血清对人眼球后成纤维细胞的影响
目的 观察养目平突汤含药血清对人眼球后成纤维细胞(RFS)增殖以及合成透明质酸、Ⅰ型胶原蛋白的影响.方法 体外培养正常人RFs,予养目平突汤含药血清孵育后,MTT比色法检测RFs的增殖;放免法检测透明质酸(HA)和Ⅰ型胶原蛋白的合成状况.结果 正常组A值为(0.39±0.05)D,而养目平突汤含药血清各剂量组A值均减少,分别为(0.37±0.06)D、(0.30±0.05)D和(0.22±0.06)D(P均<0.05);正常组HA和Ⅰ型胶原蛋白的浓度分别为(1.64±0.12)mg/L、(1.72±0.11)mg/L;养目平突汤含药血清各剂量组HA和Ⅰ型胶原蛋白的合成均显著减少(P均<0.05),HA的浓度分别为(1.47±0.16)mg/L、(0.94±0.12)mg/L、(0.89±0.14)mg/L,Ⅰ型胶原蛋白的浓度分别为(1.55±0.12)mg/L、(0.98±0.13)mg/L和(0.90±0.10)mg/L.结论 养目平突汤含药血清治疗Graves'眼病的作用途径部分是通过抑制RFs的增殖和HA、Ⅰ型胶原蛋白的合成,降低RFs生物活性,从而减少Graves'眼病的免疫损伤.
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生脉成骨方对股骨头坏死Ⅰ型胶原表达的调节作用研究
目的研究生脉成骨方对股骨头坏死Ⅰ型胶原mRNA表达的影响以揭示其作用机制. 方法以内毒素加甲基强的松注射制备兔骨坏死模型, 分为模型组及生脉成骨方组, 分批于用药后4, 8, 12周处死, 于原位杂交法测定骨Ⅰ型胶原表达, 进行病理学检查, 并与正常对照组比较. 结果模型组各时段成骨细胞及骨髓基质细胞内的Ⅰ型胶原mRNA的阳性表达减少; 中药组4周时mRNA的表达信号强度和量稍弱于正常组而稍高于模型组, 8周和12周时其信号强度和量以及阳性表达的骨髓基质细胞分布进一步改善, 接近于正常组. 结论生脉成骨方在股骨头坏死的治疗中能促进成骨细胞功能活跃, 增加骨髓基质细胞向前成骨细胞的分化, 促进Ⅰ型胶原的合成.
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红霉素预防兔气管损伤后气管狭窄研究
目的 探讨红霉素在预防兔气管损伤后气管狭窄的作用及机制.方法 18只新西兰大耳白兔随机分为阴性对照组、模型对照组、红霉素治疗组,每组均行气管切开,阴性对照组气管切开后直接缝合气管,其余2组气管切开尼龙刷刮除气管黏膜后缝合气管.红霉素治疗组术前7d开始给予红霉素13.6mg/kg,每日灌胃至术后10 d,阴性对照组、模型对照组每日灌胃等量生理盐水.术后10 d处死兔子,收集气管组织,HE染色检查气管组织病理学改变并测量气管狭窄率;实时定量PCR检测各组气管组织转化生长因子β1 (TGF-β1) mRNA表达;免疫组化法检测气管组织Ⅰ型胶原蛋白、Ⅲ型胶原蛋白的表达.结果 红霉素治疗组气管狭窄率为(35.11±4.50)％,阴性对照组气管狭窄率为(11.96±3.26)％,模型对照组气管狭窄率为(53.95±7.09)％,红霉素治疗组气管狭窄率低于模型对照组(t=13.98,P＜0.05).组织病理学结果显示,模型对照组气管狭窄组织中较多炎性细胞浸润,成纤维细胞大量增殖,大量小血管生成,而红霉素治疗组炎性细胞浸润、成纤维化细胞增殖、小血管生成均减少.红霉素治疗组TGF-β1 mRNA相对表达量较模型对照组减少(t=4.55,P＜0.05).免疫组化结果显示,红霉素治疗组的工型胶原蛋白、Ⅲ型胶原蛋白的表达量均较模型对照组明显降低(P值均＜0.05).结论 红霉素可能通过抗炎,下调TGF-β1、Ⅰ型胶原蛋白、Ⅲ型胶原蛋白表达,减轻兔气管损伤后气管狭窄.
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血管紧张素Ⅱ对人肺成纤维细胞Ⅰ型胶原蛋白表达的影响
目的：探讨血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ)对人肺成纤维细胞(human lung fibroblast,HLF)细胞株 HLF-1Ⅰ型胶原蛋白表达的影响。方法体外培养 HLF-1细胞。采用 Masson染色法检测 HLF-1细胞总胶原蛋白的表达,采用 Western blot 法检测 HLF-1细胞Ⅰ型胶原蛋白的表达。结果 AngⅡ呈时间依赖性地促进 HLF-1细胞总胶原蛋白及Ⅰ型胶原蛋白的表达,并且在 AngⅡ作用24 h 时达到峰值。结论 AngⅡ参与了 HLF-1胶原合成的调控,并可能在肺纤维化的发生、发展中起重要作用。
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脑梗塞大鼠膀胱β-actin和Ⅰ型胶原蛋白表达的变化
目的:观察脑梗塞后大鼠膀胱肌动蛋白β-actin、Ⅰ型胶原蛋白表达的变化.方法:线栓法制备大鼠大脑中动脉脑缺血模型,SP免疫组化方法检测脑梗塞大鼠梗塞后10d、30d、60d膀胱β-actin和Ⅰ型胶原蛋白的表达情况.结果:脑梗塞后随着时间的延长,膀胱β-actin和Ⅰ型胶原蛋白的表达均逐渐升高(P＜0.05).结论:脑卒中后膀胱功能障碍与肌源性损伤有关,β-actin和Ⅰ型胶原蛋白作为评估膀胱顺应性的指标,二者表达的改变对指导临床治疗具有一定的意义.
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成骨不全遗传学研究进展
成骨不全是一种遗传性全身结缔组织疾病,以编码Ⅰ型胶原蛋白的基因(COL1A1和COL1A2)突变为主要致病机制,导致Ⅰ型胶原合成障碍,骨脆性增加.本文就成骨不全的临床分型、分子遗传学及治疗进展做一综述.
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金银花黄酮类提取物对血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠心肌成纤维细胞增殖和胶原合成的影响
目的 观察金银花黄酮类提取物对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌成纤维细胞(CF)增殖和胶原合成的影响.方法 分离、培养大鼠心肌成纤维细胞,分为空白对照组、AngⅡ模型组及 AngⅡ+金银花黄酮类提取物低剂量、中剂量、高剂量组,培养 48 h后,采用细胞计数(CCK-8)试剂盒检测 CF的增殖能力,流式细胞仪检测 CF周期,免疫印迹法检测Ⅰ型胶原蛋白表达,实时定量 RT PCR检测Ⅰ型胶原蛋白 mRNA的相对表达.结果 AngⅡ干预 48 h后 AngⅡ模型组与空白对照组比较,CF增殖率和 S期及 G2/M期细胞比例显著增加,Ⅰ型胶原蛋白和 mRNA的表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);AngⅡ+金银花黄酮类提取物低剂量、中剂量、高剂量组与AngⅡ类型组比较CF增殖和S期及G2/M期细胞比例显著减少,Ⅰ型胶原蛋白和mRNA的表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.01);金银花黄酮类提取物对 CF作用呈剂量依赖性,高剂量组与中剂量组、低剂量组比较 CF增殖和 S期及 G2/M期细胞比例显著减少,Ⅰ型胶原蛋白和 mRNA的表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.01).结论 金银花黄酮类提取物通过抑制 AngⅡ诱导的 CF增殖和胶原蛋白合成,进而发挥抗心肌纤维化作用.
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活血潜阳方对自发性高血压大鼠心肌间质胶原Ⅰ、Ⅲ蛋白表达的影响
目的观察活血潜阳方对自发性高血压大鼠(SHR)左心室心肌间质胶原Ⅰ、Ⅲ蛋白表达的影响,探讨其改善左心室肥厚的可能机制.方法以自发性高血压大鼠为模型,同时以年龄和性别相匹配的WKY作为正常对照组.用免疫组化法检测胶原Ⅰ、Ⅲ的蛋白表达,观察中药对其的影响.结果 24周龄SHR心肌间质胶原Ⅰ、Ⅲ的蛋白表达显著增加,活血潜阳对其有干预作用.结论降低心肌间质胶原Ⅰ、Ⅲ的蛋白表达,是活血潜阳中药改善左心室肥厚的重要机制之一.
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屏哮饮对哮喘小鼠气道重塑的影响
目的:观察屏哮饮对哮喘小鼠α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA),Ⅰ型胶原蛋白,及对IL-4的影响.方法:采用免疫荧光法观察哮喘小鼠肺组织α-SMA及Ⅰ型胶原蛋白的沉积,并对其进行计算机图像半定量分析.用ELISA法检测支气管肺泡灌洗液中IL-4.结果:屏哮饮组小鼠肺内细支气管壁α-SMA及Ⅰ型胶原蛋白沉积较孟鲁司特钠及模型组明显减少,图像半定量分析结果与模型组及孟鲁司特钠组比较有统计学意义.屏哮饮组IL-4水平显著低于模型组,差异有统计学意义.结论:屏哮饮可以改善哮喘小鼠早期气道重塑.
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龟鹿二仙胶治疗骨质疏松症的机制研究
目的:研究龟鹿二仙胶对成骨细胞Ⅰ型胶原及TGF-β表达的影响,探索龟鹿二仙胶治疗骨质疏松症的机制.方法:SD大鼠随机分为对照组、龟鹿二仙胶低剂量组、中剂量组、高剂量组、骨化三醇组,每天灌胃1次,持续7d,末次给药2h后腹主动脉采血,制成含药血清作用于大鼠成骨样细胞ROS17_2.8株.用MTT法及活细胞形态观察含药血清对成骨细胞增殖及凋亡的影响.用各组合药血清条件培养基培养成骨细胞,应用West-em Blot法检测各组成骨细胞Ⅰ型胶原及TGF-β蛋白表达水平,采用RT-PCR法检测各组成骨细胞Ⅰ型胶原及TGF-β mRNA的表达.结果:(1)MTT结果显示:龟鹿二仙胶各组的成骨细胞无明显增殖.骨化三醇组的成骨细胞有明显增值(P＜0.05).细胞染色提示:骨化三醇组及龟鹿二仙胶组的成骨细胞无显著的凋亡.(2)RT-PCR法结果显示:骨化三醇组与龟鹿二仙胶各组COL1A1及COL1 A2mRNA的水平均有增加(P＜0.01);龟鹿二仙胶中、高剂量组COL1A1及COL1 A2mRNA水平增加较明显(P＜0.05),龟鹿二仙胶高剂量组较中剂量组COL1A1及COL1A2mRNA水平增加不明显(P＞0.05);骨化三醇组TGF-β1及TGF-β2 mRNA水平无明显变化(P＞0.05);龟鹿二仙胶各组TGF-β1及TGF-β2mRNA水平均有增加(P＜0.01);且龟鹿二仙胶中、高剂量组TGF-β1、TGF-β2mRNA水平增加差异无统计学意义(P＞0.05).(3)Western blot结果提示:第24 h,龟鹿二仙胶高剂量组能使成骨细胞COL1A1及COL1A2蛋白合成增加(P＜0.05).第48 h,骨化三醇组、龟鹿二仙胶各组均能使成骨细COL1A1及COL1A2蛋白合成增加(P＜0.01);龟鹿二仙胶高、中剂量组之间比较差异没有统计学意义(P＞0.05);第24、48 h,骨化三醇组TGF-β1及TGF-β2蛋白合成无明显变化(P＞0.05);在24 h,龟鹿二仙胶高剂量组TGF-β1及TGF-β2蛋白合成有显著增强(P＜0.01),龟鹿二仙胶低剂量和中剂量组TGF-β1及TGF-β2蛋白合成无明显变化(P ＞0.05);48 h,龟鹿二仙胶各组TGF-β1及TGF-β2蛋白合成增加(P＜0.01).龟鹿二仙胶高中剂量组之间无显著差异(P＞0.05).结论:龟鹿二仙胶治疗骨质疏松症机制可能通过调节细胞因子TGF-β,促进Ⅰ型胶原的表达,为探讨中药促胶原形成治疗骨质疏松提供细胞及分子生物学依据.
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过氧化物酶体增殖物激活受体γ激动剂对转化生长因子β1诱导体外血管外膜成纤维细胞表型的改变
背景:近年来的研究表明,血管外膜成纤维细胞在血管损伤后新生内膜的增生中起重要作用,但对于引起血管外膜成纤维细胞表型转化的机制尚不十分清楚.目的:观察过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferators-activated receptor,PPAR)γ激动剂对转化生长因子β1诱导体外血管外膜成纤维细胞表型改变,同时检测对Ⅰ胶原蛋白表达的作用.设计、时间及地点:随机分组设计,对比观察,于2007-07/2008-10在上海交通大学医学院附属第九人民医院组织工程实验室完成.材料;鼠龄2个月的健康雄性SD大鼠,体质量约120 g,用于体外培养大鼠胸主动脉外膜成纤维细胞;转化生长因子β1由美国GenWay Biotech公司提供;罗格列酮粉剂为北京高盟化工有限公司产品.方法:实验分为3组:转化生长因子β1诱导组:以不同质量浓度的转化生长因子β1(3,5,10,15 μg/L)诱导成纤维细胞48 h;罗格列酮干预组:用不同浓度的PPAR-γ激动剂罗格列酮(5,10,30,50 μmol/L)干预成纤维细胞45 min后,加入转化生长因子β1 10 μg/L共同培养48 h:对照组:不添加任何干预措施.主要观察指标:①免疫组织化学α-平滑肌肌动蛋白检测不同浓度转化生长因子β1、罗格列酮干预后成纤维细胞的表型改变.②蛋白免疫印迹检测成纤维细胞中平滑肌α2肌动蛋白及Ⅰ型胶原蛋白的表达.结果:不同质量浓度转化生长因子β1诱导成纤维细胞48 h后,与对照组相比,5μg/L转化生长因子β1可明显刺激成纤维细胞表型改变及细胞中平滑肌α2肌动蛋白和Ⅰ型胶原蛋白的表达,10μg/L转化生长因子β1刺激细胞表型改变及平滑肌α 2肌动蛋白和Ⅰ型胶原蛋白的表达明显(P<0.05),随后转化生长因子β1再增加至15μg/L,与10μg/L转化生长因子β1浓度组相比,其刺激细胞表型改变及平滑肌α2肌动蛋白和Ⅰ型胶原蛋白的表达不再增加(P>0.05).不同浓度罗格列酮干预10 μg/L转化生长因子β1诱导的成纤维细胞48 h后,与对照组相比,30 μmol/L可明显抑制成纤维细胞表型改变及细胞中平滑肌α2肌动蛋白和Ⅰ型胶原蛋白的表达(P<0.05).结论:PPAR-γ激动剂罗格列酮能抑制转化生长因子β1诱导体外血管外膜成纤维细胞表型改变及平滑肌α2肌动蛋白和Ⅰ型胶原蛋白的表达.
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小鼠胚胎成纤维细胞成熟化过程中肿瘤坏死因子α的作用
背景:近年的研究表明,肿瘤坏死因子α对不同组织成纤维细胞的作用具有组织特异性及浓度依赖性.目的:观察肿瘤坏死因子α及其信号传导途径中特异性激酶抑制剂对小鼠胚胎成纤维细胞成熟化所起的作用.方法:体外培养小鼠胚胎成纤维细胞,将细胞分为3组:第1组用含体积分数2%血清的DMEM高糖培养基培养作为空白对照组;第2组用含100 μg/L肿瘤坏死因子α的培养基培养;第3组先加入质量浓度为50 μg/L的Anti-TNFRSF1B作用1 h后,倒出培养基再加入含有肿瘤坏死因子α的培养基继续培养.采用RT-PCR法测定各组Ⅰ型胶原蛋白和基质金属蛋白酶3 mRNA表达、Western Blot法测定各组Ⅰ型胶原蛋白和基质金属蛋白酶3蛋白表达.结果与结论:小鼠胚胎成纤维细胞在一定质量浓度肿瘤坏死因子α作用下,其信号传导途径特异性激酶发生磷酸化或蛋白被激活,信号通路被激活,促进基质金属蛋白酶3的活化,明显降低Ⅰ型胶原的表达.加入其信号传导途径的抑制剂Anti-TNFRSF1B后,肿瘤坏死因子α的效应得到了一定的抑制,但并未完全消除,这更进一步证明肿瘤坏死因子α对小鼠胚胎成纤维细胞活化的作用.
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枸杞多糖含药血清对MC3T3-E1细胞内Ca2+及Ⅰ型胶原蛋白合成的影响
背景:前期实验发现枸杞多糖对成年去势雌性大鼠骨质疏松有明显的骨质改善作用.目的:观察含枸杞多糖大鼠血清对成骨细胞株MC3T3-E1细胞内Ca2+及Ⅰ型胶原蛋白合成的影响.方法:将20%空白血清(对照组),5%,10%,20%含枸杞多糖血清分别加入成骨细胞株MC3T3-E1细胞培养液中,通过MTT法测定细胞增殖,激光扫描共聚焦显微镜测定胞内游离钙离子浓度,免疫细胞化学方法检测Ⅰ型胶原蛋白表达.结果与结论:与对照组比较,5%,10%含枸杞多糖血清可明显促进成骨细胞株MC3T3-E1细胞增殖(P < 0.05,P < 0.01);10%,20%含枸杞多糖血清组成骨样细胞株MC3T3-E1内细胞内Ca2+水平及Ⅰ型胶原蛋白合成明显升高(P < 0.05,P < 0.01).说明含枸杞多糖血清可能通过影响细胞内Ca2+水平及Ⅰ型胶原蛋白合成防治骨质疏松症.
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白细胞介素13刺激成纤维细胞胶原基因转录和胶原蛋白的合成
目的:以成纤维细胞株3T3为实验对象,观察白细胞介素13对成纤维细胞株3T3胶原合成作用,探讨白细胞介素13对纤维化形成的作用机制.方法:实验于2005-03/2006-10在江西医学科学研究所江西省医学生物高技术重点实验室进行.实验材料:成纤维细胞株3T3细胞为江西省医学科学研究所江西省医学生物高技术重点实验室保存.白细胞介素13购自Peprotech公司.实验方法:①3T3细胞培养:3T3细胞常规培养在含体积分数为0.15胎牛血清、100 U/mL青、链霉素的DMEM培养液中,置于37 ℃、含体积分数为0.05的CO2孵箱中培养,并分为实验组和对照组,两组细胞均用无血清DMEM培养12～16 h,实验组加入100 μg/L白细胞介素13,作用24,48,72 h后进行以下实验.②应用Van Gieson胶原纤维特殊染色观察白细胞介素13作用下,3T3细胞体外合成胶原纤维情况.细胞培养上清液采用羟脯氨酸实验检测细胞分泌的总胶原蛋白含量.采用RT-PCR检测3T3细胞Ⅰ型胶原α1基因(COL1A1)mRNA的表达.采用Western blotting检测白细胞介素13作用后成纤维细胞Ⅰ型胶原蛋白的表达.结果:①Van Gieson胶原纤维特殊染色观察白细胞介素13对成纤维细胞体外合成胶原纤维的影响;有胶原纤维地方被Van Gieson液染成红色,细胞核则为灰黑色.显微镜下可见成纤维细胞呈放射状、编织状或旋涡状排列,细胞体呈梭形或不规则三角形,胞质向外伸出大小不等的突起,核为椭圆形,位于胞浆的中央,在白细胞介素13孵育的3T3细胞中可观察到较多的胶原纤维.②羟脯氨酸实验检测白细胞介素13对成纤维细胞分泌总胶原含量影响:白细胞介素13刺激3T3细胞分泌的总胶原含量24 h后即明显增高,持续至72 h(t=6.751,P＜0.01),明显高于对照组(t=3.019,P＜0.05).③RT-PCR检测白细胞介素13作用下3T3细胞Ⅰ型胶原α1 mRNA水平:在511 bp(β-actin)和378 bp处(COL1A1)均可见一明显条带.④Western blotting检测白细胞介素13作用下Ⅰ型胶原蛋白表达情况:白细胞介素13作用3T3细胞0,24,48,72 h后,Ⅰ型胶原蛋白表达逐渐增强,与actin蛋白相比,差异显著(P＜0.05).结论:白细胞介素13可促进3T3细胞胶原基因的转录和胶原蛋白的合成,可能在纤维化疾病发病机制中发挥重要作用.
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左、右归丸对大鼠骨髓间充质干细胞成骨诱导中转化生长因子β1及Smad2/3的影响
背景：滋补肾阴左归丸、温补肾阳右归丸均可协同诱导剂诱导骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化，但其机制尚有待探讨。
目的：观察左、右归丸含药血清对体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化过程中转化生长因子β1及其信号转导蛋白Smad2/3表达的影响。
方法：运用全骨髓贴壁法分离和培养大鼠骨髓间充质干细胞；分别以空白血清对照组，左归丸、右归丸、阳性对照药补佳乐制备的大鼠含药血清加诱导剂(地塞米松、维生素C、β-甘油磷酸钠)，以及诱导剂组为对照共5组对骨髓间充质干细胞进行干预。采用Western blot法检测Ⅰ型胶原蛋白表达，用免疫组化法检测转化生长因子和Smad2/3在细胞内的表达。
结果与结论：左归丸、右归丸含药血清诱导骨髓间充质干细胞成骨后Ⅰ型胶原蛋白、转化生长因子β1、Smad2/3蛋白表达高于空白组、诱导剂组，差异有显著性意义(P <0.05)，且左归丸优于右归丸(P <0.05)。提示左、右归丸含药血清能通过转化生长因子β1调节Smad2/3信号通路促进骨髓间充质干细胞成骨分化，且左归丸组效果更好，表明中医“滋肾阴”法更能有效的促进骨髓间充质干细胞的成骨分化。 -
中药川芎对成骨细胞作用佳浓度的体外实验
背景：已有研究报道中药川芎具有促进成骨细胞增殖及分化的作用。
目的：进一步观察中药川芎中川芎嗪成分对成骨细胞增殖及Ⅰ型胶原蛋白表达的作用。
方法：以小鼠成骨细胞株MC3T3-E1为研究对象，在1，5，10，15，20 mg/L 5个不同质量浓度川芎嗪干预下分别应用CCK-8方法测定成骨细胞增殖能力，酶联免疫法测定碱性磷酸酶活性及Ⅰ型胶原蛋白表达。
结果与结论：①1，5，10，15，20 mg/L川芎嗪对成骨细胞的增殖均有促进作用，与空白对照组比较差异有显著性意义(P<0.005)；②1，5，10，15，20 mg/L川芎嗪可以提高成骨细胞内碱性磷酸酶活性，其中1，5，10 mg/L川芎嗪组与空白对照组比较差异有显著性意义(P<0.005)，15，20 mg/L川芎嗪组与空白对照组比较差异无显著性意义(P>0.005)；③1，5，10，15，20 mg/L川芎嗪均促进Ⅰ型胶原蛋白表达，与空白对照组比较差异有显著性意义(P<0.005)；④结果表明，中药川芎提取物川芎嗪对成骨细胞增殖及Ⅰ型胶原蛋白表达均有促进作用，质量浓度为10 mg/L效果理想。 -
Sema7A干预钛微粒诱导鼠MC3T3-E1成骨细胞的凋亡
背景：Sema7A 是一种细胞表面蛋白，它可以促进破骨细胞的融合同时促进成骨细胞的迁移，从而影响骨的动态平衡。推测，Sema7A siRNA可能减弱钛微粒成骨细胞分化。目的：分析信号素7A(Sema7A)对钛颗粒抑制鼠MC3T3-E1前成骨细胞活性过程的影响。方法：取第六七代生长状态良好的小鼠颅骨前成骨细胞(MC3T3-E1)，分为4组培养。其中空白对照组为单独培养的细胞；标准对照组加入了钛微粒共培养；实验1组加入 Sema7A 过表达质粒，实验2组加入Sema7AsiRNA进行干扰。采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况；Q-PCR检测骨涎蛋白、骨钙素、Ⅰ型胶原蛋白的mRNA表达情况；Western-blot检测骨涎蛋白、骨钙素、Ⅰ型胶原蛋白的蛋白表达情况；茜素红钙结节染色检测成骨细胞的矿化程度。结果与结论：结果提示标准对照组、实验1组检测到骨涎蛋白、骨钙素、Ⅰ型胶原蛋白表达明显减少而实验2组骨涎蛋白、骨钙素、Ⅰ型胶原蛋白则比标准对照组表达增加(P <0.05)。流式细胞仪结果提示实验1组成骨细胞凋亡率明显高于其他组(P <0.05)，而实验2组则比标准对照组凋亡率降低(P <0.05)。茜素红染色检测结果显示实验1组未见明显的矿化结节，实验2组有矿化结节形成。结果表明通过基因干扰技术抑制Sema7A活性可以对钛颗粒抑制鼠MC3T3-E1成骨细胞分化的过程进行干扰，进而为临床上用生物技术治疗磨损微粒诱导的骨溶解问题提供了一条可行的思路。
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镁黄长石浸提液诱导多潜能干细胞的成骨分化
背景：镁黄长石属于硅酸盐生物活性陶瓷，在生物体内具有降解作用，降解溶出的离子产物能够诱导细胞成骨分化，是组织工程骨支架材料的良好选择。目的：通过研究不同浓度的镁黄长石浸提液对诱导性多潜能干细胞增殖和成骨分化的影响，确定镁黄长石浸提液促进诱导性多潜能干细胞成骨分化的佳浓度。方法：将诱导性多潜能干细胞培养于不同浓度的镁黄长石浸提液中，用MTT法检测细胞的增殖情况；在第7，14，21天时，分别收集培养上清液，检测其中碱性磷酸酶、骨钙素、Ⅰ型胶原蛋白含量。结果与结论：镁黄长石浸提液促进诱导性多潜能干细胞增殖的作用具有时间依赖性，第3天时，诱导性多潜能干细胞增殖明显，第5天与第3天相比差异无显著性意义，至第7天时则明显减弱。同时，1/4浓度浸提液组促进诱导性多潜能干细胞增殖作用强。作为细胞成骨分化标志的碱性磷酸酶和骨钙素含量随时间增加而增加，1/4浸提液浓度组含量高。作为细胞成骨分化早中期标志的Ⅰ型胶原蛋白在第7天时各组均未检出，第14，21天时，同样是1/4浓度浸提液组含量高，这些说明镁黄长石浸提液中的Ca、Mg、Si离子参与了诱导性多潜能干细胞的成骨分化，其中1/4浓度浸提液(Ca离子2.37 mmol/L、Mg离子1.12 mmol/L、Si离子1.05 mmol/L)促进诱导性多潜能干细胞体外成骨分化的效果好。
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牙胚细胞体外培养过程中成牙基因的表达
背景：多项实验表明牙胚组织在不同的时间点有不同的基因发挥作用，共同促进牙胚发育。
目的：观察牙本质基质蛋白1、成釉蛋白、Ⅰ型胶原蛋白和同源异型盒基因1在大鼠牙胚细胞体外培养的不同时间的表达。
方法：对体外培养后第1，3，6天的牙胚细胞提取RNA，反转录后采用实时定量PCR的方法检测牙本质基质蛋白1、成釉蛋白、Ⅰ型胶原蛋白和同源异型盒基因1mRNA相对表达水平的变化。
结果与结论：牙胚细胞中牙本质基质蛋白1、成釉蛋白和Ⅰ型胶原蛋白mRNA的表达随培养时间的延长而增加，在培养3 d时达到峰值(P<0.05)，而同源异型盒基因1 mRNA的表达随培养时间的延长而下降(P<0.05)。
