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小檗碱对2型糖尿病大鼠巨噬细胞ox-LDL、CD36和PPARγ的影响
目的 探讨小檗碱对T2DM大鼠脂代谢、腹腔巨噬细胞(PM)及肺泡巨噬细胞(AM)氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)、CD36和过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)表达的影响.方法 SD大鼠分为正常对照组、高脂组、糖尿病组、小檗碱治疗组.实验结束后测定各组BG、Ins、血脂、PM及AM内ox-LDL含量、CD36与PPARγ的蛋白与mRNA表达水平.结果 与正常对照组比较,糖尿病组BG、Ins、TC、TG、LDL-C显著升高;PM及AM内ox-LDL含量、CD36与PPARγ的蛋白和mRNA表达显著升高.与糖尿病组比较,小檗碱治疗组BG、Ins及LDL-C水平降低,TC、TG显著下降,HDL-C升高,PM及AM内ox-LDL含量下降,CD36的蛋白和mRNA表达降低,PPARγ mRNA表达降低.结论 小檗碱降低T2DM大鼠血糖,改善胰岛素抵抗和脂代谢紊乱,其机制可能与降低巨噬细胞内ox-LDL,抑制CD36和PPARγ的表达有关.
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CD36与非酒精性脂肪性肝病
CD36是一种跨膜糖蛋白,属于清道夫受体家族.其在体内分布广泛,可与多种配体结合发挥生理及病理作用.CD36同时作为一种脂肪酸转运蛋白参与脂肪代谢,其在肝细胞及脂肪细胞表达的变化是非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)发生的关键环节.本文将就CD36与NAFLD的关系及其在NAFLD中表达调控研究的近期成果进行综述.
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同型半胱氨酸对人THP-1巨噬细胞CD36表达的影响
目的:探讨同型半胱氨酸(Hcy)对人THP-1巨噬细胞CD36表达的影响.方法:在应用佛波酯(PMA)诱导分化成功的人THP-1巨噬细胞中加入0、0.01、0.05、0.1、0.2 mmol/L的Hcy孵育24 h(为阴性对照组、0.01 mmol/L Hcy组、0.05 mmol/L Hcy组、0.1 mmol/L Hcy组和0.2 mmo]/L Hcy组);并与0.1 mmol/L Hcy分别培养0、3、6、12、24,48 h,同时以上述各个时点为参照设对照,用流式细胞仪检测THP-1巨噬细胞CD36分子的表达.结果:THP-1巨噬细胞与不同浓度(0、0.01、0.05、0.1、0.2 mmol/L)Hcy孵育24 h后,0.2 mmol/L Hcy组与阴性对照组比较,THP-1巨噬细胞CD36表达增加明显(P＜0.05),差异有统计学意义.THP-1巨噬细胞与0.1 mmol/L Hcy培养0、3、6、12、24、48 h,各时间点CD36表达均高于其相应的对照(P均＜0.05),差异均有统计学意义;48 h时与0 h时比较,THP-1巨噬细胞CD36表达增加明显(P＜0.05),差异有统计学意义.其他组问比较差异无统计学意义.结论.THP-1巨噬细胞与不同浓度Hcy(0、0.01、0.05、0.1、0.2 mmol/L)孵育24 h后,Hcy可使THP-1巨噬细胞CD36的表达增加,且呈剂量依赖关系;与0.1 mmol/L Hcy培养不同时间(0、3、6、12、24、48 h),也可使THP-1巨噬细胞CD36的表达增加,并呈时间依赖关系.高浓度Hcy可以上调巨噬细胞CD36分子的表达.
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钙敏感受体对巨噬细胞泡沫化过程的影响及机制研究
目的：研究钙敏感受体（CaR）在巨噬细胞中的表达情况及对巨噬细胞转化为泡沫细胞的影响。方法：通过免疫荧光和蛋白印迹（Western Blot）检测巨噬细胞中CaR的表达情况；氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）100 mg/L作用48 h，使巨噬细胞转化为泡沫细胞；实验分组为CaR激动剂组、CaR抑制剂组、空白对照组，分别作用泡沫细胞48 h：采用油红O染色检测阳性细胞数量；高效液相色谱观察细胞内胆固醇代谢情况；酶联免疫吸附法（ELISA）检测细胞上清液中炎性因子的分泌情况；Western blot检测细胞内CD36和胆固醇酰基转移酶（ACAT-1）蛋白的表达情况。结果： Western blot和免疫荧光结果显示在巨噬细胞中存在CaR的表达。油红O染色和高效液相色谱检测泡沫细胞的结果显示：与空白对照组比较，CaR激动剂组阳性细胞数量和胆固醇酯、游离胆固醇、总胆固醇的含量均明显下降（P<0.05），而CaR抑制剂组阳性细胞数量和胆固醇酯、游离胆固醇、总胆固醇的含量均明显升高（P<0.05）；ELISA 检测结果显示：与空白对照组比较，CaR激动剂组促炎因子肿瘤坏死因子-（TNF- a）、巨噬细胞游走抑制因子（MIF）含量明显降低（P<0.05），抗炎因子白细胞介素-10（IL-10）含量明显升高（P<0.05），而CaR抑制剂组促炎因子TNF- a、 MIF 含量明显升高（P<0.05），抗炎因子IL-10含量明显降低（P<0.05）；Western blot检测各组泡沫细胞结果发现：与空白对照组比较，CaR激动剂组CD36和ACAT-1蛋白表达明显下降，而CaR抑制剂组CD36和ACAT-1蛋白表达明显升高。结论：在巨噬细胞中存在CaR的表达，并且高表达的CaR可以抑制巨噬细胞泡沫化的形成。
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糖尿病心肌病的能量代谢紊乱
随着糖尿病发病率逐年上升,糖尿病心肌病也引起了人们越来越多的关注.然而,对于糖尿病导致的心肌损害,其分子机制现在仍未被阐明.糖尿病心肌病的发病受多种因素的影响,包括钙离子平衡失调、肾素-血管紧张素系统的激活、氧化应激的增加、心肌代谢底物改变以及线粒体损伤等.本文就糖尿病心肌病的能量代谢紊乱作一综述.
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阿托伐他汀对糖尿病金黄地鼠肝脏B类Ⅰ型清道夫受体表达的影响
目的 观察阿托伐他汀对糖尿病金黄地鼠肝脏B类I型清道夫受体(SR-BI)表达的影响.方法 选择金黄地鼠33只,随机选取6只作为对照组,另外27只建立糖尿病动物模型,造模成功23只(模型组),再随机分为糖尿病高脂对照组(DHC组,7只),糖尿病高脂十高剂量阿托伐他汀组(DHH组,8只),糖尿病高脂十低剂量阿托伐他汀组(DHL组,8只).观察各组肝脏组织形态学,采用RT-PCR和Western免疫印迹法检测肝脏组织SR-B ⅠmRNA和SR-BⅠ蛋白的表达情况.结果 DHC组肝脏肿大,脂肪变性,应用阿托伐他汀干预后的动物肝脏脂肪变性减轻.DHC组与对照组肝脏SR-BI mRNA和SR-BI蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05),DHH组和DHL组肝脏SR-BⅠ mRNA和SR BⅠ蛋白表达明显高于对照组和DHC组,且DHH组明显高于DHL组,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).结论 阿托伐他汀可以提高糖尿病合并高脂血症金黄地鼠肝脏SR-BⅠ mRNA 和SR-BⅠ蛋白的表达,并呈剂量依赖性.
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三苯氧胺抑制促动脉粥样硬化基因CD36在单核-巨噬细胞的表达
目的观察抗肿瘤药物三苯氧胺(tamoxifen,Tam)对促动脉粥样硬化基因CD36在单核-巨噬细胞表达的影响.方法分别以不同浓度Tam(1,5,10μmol/L)和它的活性代谢物羟-三苯氧胺(OH-Tam)作用于培养的THP-1单核细胞,24 h后观察CD36蛋白在细胞表面的表达;以氧化型低密度脂蛋白(100mg/L)刺激THP-1单核-巨噬细胞CD36表达,并给予Tam或OH-Tam处理,流式细胞术观察CD36的变化.结果Tam和OH-Tam可降低单核细胞CD36蛋白表达;同时对氧化型低密度脂蛋白引起的单核-巨噬细胞CD36表达上调具有抑制作用.结论Tam可能通过抑制CD36在单核-巨噬细胞的表面表达来发挥其抗动脉粥样硬化作用.
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孤儿核受体Nur77抑制小鼠巨噬细胞脂质沉积
目的 探讨孤儿核受体Nur77对巨噬细胞脂质沉积的影响及其机制.方法 建市稳定表达绿色荧光蛋白(GFP)和GFP-Nur77质粒cDNA的小鼠巨噬细胞RAW264.7单克隆细胞系,40 μg/ml氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激24 h后,用油红O染色定性观察细胞内脂质沉积,液相色谱-质谱联用法定量检测细胞内胆固醇酯,用荧光实时定量PCR(RT-PCR)检测CD36和腺苷三磷酸结合盒转运体A1(ABCA1)mRNA水平的变化,用流式细胞仪检测CD36蛋白表达,Western blot方法检测ABCA1蛋白表达.结果 Nur77能够显著减少ox-LDL诱导引起的巨噬细胞内脂质沉积.ox-LDL诱导前,GFP-RAW264.7组和GFP-Nur77-RAW264.7组细胞内总胆固醇含量分别为(38.66±0.13)μg/mg蛋白和(36.25±0.48)μg/mg蛋白,细胞内胆固醇酯含量为(18.85±0.03)μg/mg蛋白和(17.79±0.86)μg/mg蛋白.ox-LDL诱导24h后,GFP-RAW264.7组和GFP-Nur77-RAW264.7组细胞内总胆固醇含量分别为(68.98±1.68)μg/mg蛋白和(50.94±1.63)μg/mg蛋白,细胞内胆同醇酯含量为(35.92±2.28)μg/mg蛋白和(24.81±2.92)μg/mg蛋白.同时伴随CD36的mRNA及蛋白表达下降和ABCAI的mRNA及蛋白表达上调.结论 孤儿核受体Nur77通过减少脂质摄取和增加脂质排出而减轻巨噬细胞内脂质沉积,这可能是其抗动脉粥样硬化的重要机制之一.
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观察CD36缺陷影响脑出血患者血肿吸收及神经功能恢复情况
目的：观察CD36缺陷脑出血患者血肿吸收变化和相应神经功能的恢复情况，以明确脑出血过程中CD36的功能。方法选择2013年7月～2014年6月我院收治的脑出血患者199例，利用PCR-SSP技术进行CD36缺陷的筛查，收集患者临床及头颅CT资料，并对患者进行神经功能缺损（NIHHS）评分，评价脑出血后血肿吸收速度。结果 CD36缺陷型患者血肿吸收速度减慢，NIHSS评分明显增高。结论 CD36缺陷患者血肿吸收速度减慢，神经功能缺损评分加重。
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CD36参与动脉粥样硬化的研究进展
清道夫受体CD36参与脂质代谢、动脉壁炎性介质反应、巨噬细胞泡沫化及动脉粥样硬化(AS)斑块形成.巨噬细胞表面的CD36介导氧化低密度脂蛋白的入胞过程,导致巨噬细胞泡沫化,成为As发生发展的关键环节.CD36的表达调控机制已有新的认识,相关的药物研究已引起众多学者的关注.现主要就CD36参与动脉壁炎性介质反应、巨噬细胞泡沫化、AS斑块形成及其表达调控加以综述.
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CD36在小鼠非酒精性脂肪性肝病形成中的意义
目的：探讨分化群（CD）36在小鼠非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）形成中的意义。方法 SPF级8周龄健康雄性C57BL/6J小鼠20只，平均体重为（18.8±2.3）g，按照随机数字表法将小鼠随机分成NAFLD组和对照组，每组各10只。NAFLD组给予高脂饲料喂养10周，对照组给予正常饮食10周。处理结束后脱颈处死小鼠，留取心脏血和肝组织标本。观察两组小鼠血清ALT、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）水平，肝组织TC、TG水平，肝组织病理学改变，肝组织CD36蛋白表达及其信使核糖核酸（mRNA）含量。两组实验数据的比较采用t检验。结果 NAFLD组小鼠血清ALT水平为（49±6）U/L，对照组为（45±7）U/L，两组比较差异无统计学意义（t=1.70， P>0.05）。NAFLD组小鼠血清TC、TG水平分别为（4.42±0.09）、（0.45±0.04）mmol/L，对照组分别为（2.42±0.05）、（0.32±0.03）mmol/L，NAFLD组小鼠血清TC、TG水平明显高于对照组（t=21.90，8.22；P<0.05）。NAFLD组小鼠肝组织TC、TG水平分别为（1.18±0.09）、（1.75±0.08）mmol/L，对照组分别为（0.55±0.06）、（1.28±0.06）mmol/L，NAFLD组小鼠肝组织TC、TG水平明显高于对照组（t=18.42，14.86；P<0.05）。NAFLD组肝细胞明显脂肪变性、气球样变。对照组肝细胞形态、大小正常。NAFLD组小鼠肝组织CD36蛋白表达明显强于对照组。NAFLD组小鼠肝组织CD36 mRNA含量为2.75±0.26，对照组为1.00±0.08，NAFLD组小鼠肝组织CD36 mRNA含量明显高于对照组（t=21.16， P<0.05）。结论 CD36可能参与小鼠NAFLD形成，降低CD36表达可能成为防治NAFLD的新靶点。
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CD36与脑梗死危险因素关系的研究进展
脑栓塞的形成是脑梗死的主要类型,而动脉粥样硬化是脑梗死的主要病因.此外,大量研究认为,脂质代谢紊乱、糖尿病、心血管疾病、肥胖等是脑梗死发病的高危因素.近年来研究发现,CD36与上述脑梗死发病危险因素关系密切,我们就CD36与这些危险因素的关系综述如下.
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体外循环期间血小板活化状态检测的临床意义
为探讨心肺转流(CPB)体外循环期间血小板活化状态的临床意义，用流式细胞术检测40例先天性心脏病房、室间隔缺损患者在CPB下行心内修补术的血小板表面活化分子P-选择素和凝血酶敏感蛋白的变化，并与试管内试验结果相比较。结果显示，转流中和手术结束时血小板P-选择素和凝血酶敏感蛋白较术前明显增加 (P<0.05)，血小板总数较术前明显减少（P<0.05），而试管内试验结果与之不符。结果表明，体外循环期间由于血小板破坏增加，总数减少，血小板表面活化分子P-选择素和凝血酶敏感蛋白代偿性增加，但由于血小板总数减少，出血倾向仍然明显。
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CD36在棕榈酸诱导的星形胶质细胞凋亡中的作用
本文主要探讨分化抗原簇36 (cluster of differentiation, CD36)在棕榈酸(palmitic acid, PA)诱导的星形胶质细胞凋亡中的作用.采用MTT法检测细胞活性、TUNEL法检测细胞凋亡,发现PA可使星形胶质细胞活性显著下降,凋亡显著增加.用流式细胞术检测星形胶质细胞对BODIPY FL C16的摄取,结果表明CD36在星形胶质细胞摄取PA过程中发挥关键作用.采用钙离子荧光染料和实时荧光记录系统检测细胞内钙离子浓度变化,发现PA进入细胞后可通过IP3受体(inositol trisphosphate receptor, IP3R)引起星形胶质细胞内钙释放和内质网钙衰竭.采用CM-H2DCFDA荧光染色方法检测细胞内氧自由基(reactive oxygen species, ROS)水平,发现PA可引起星形胶质细胞ROS水平显著增加.CD36抑制剂N-油酰基硫代琥珀酰亚胺 (sulfo-N-succinimidyloleate, SSO)可以减少PA的摄取及其诱导的星形胶质细胞钙超载和ROS水平升高.IP3R抑制剂二苯基硼酸-2-氨基乙酯(2-aminoethyl diphenylborinate, APB)可以抑制PA引起的钙超载和ROS水平升高.SSO、APB和抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine, NAC)对PA引起的星形胶质细胞活性下降均具有明显的保护作用.综上所述,CD36介导PA进入星形胶质细胞,进而引起钙超载和氧化应激,导致细胞凋亡.CD36可能成为保护星形胶质细胞的新靶点.
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化合物IMB-1680体外抗动脉粥样硬化的活性研究
探讨化合物IMB-1680的体外抗动脉粥样硬化活性.利用己构建的高表达人CD36细胞株Sf9[hCD36]和CHO[hCD36]测定量效曲线,荧光显微照相法和流式细胞实验检测细胞对变性低密度脂蛋白(modified low density lipoprotein,mLDL)的摄取,巨噬细胞泡沫化实验检测细胞内脂质积聚.结果表明:IMB-1680在Sf9[hCD36]、CHO[hCD36]模型上IC50值分别为2.80及8.79 μmol·L-1; IMB-1680能显著抑制细胞摄取DiI-AcLDL,同时能显著减少巨噬细胞RAW264.7摄取脂质.本研究为开发新型抗动脉粥样硬化药物奠定了基础.
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CD36、PPAR-γ、炎症因子与糖尿病并发动脉粥样硬化的关系
糖尿病并发大血管病的发生率非常高,是糖尿病致死的主要原因.除了常见的动脉粥样硬化发病的危险因素外,如高血脂、高血压等,糖尿病动脉粥样硬化发生还有其特殊的原因.识别危险因素、探讨发病机制和寻找有效的干预措施成为糖尿病性心血管病变研究的迫切课题.现仅就CD36、过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPAR-γ)和某些相关炎症因子的生物学特性及其在糖尿病动脉粥样硬化发生、发展中的作用综述如下.
关键词： 糖尿病 动脉粥样硬化 过氧化物酶体增殖物激活受体-γ CD36 -
阿托伐他汀对THP-1巨噬细胞CD36表达的影响
目的 研究阿托伐他汀(atorvastatin)对THP-1巨噬细胞B类清道夫受体CD36表达的影响.方法 用5 μmol/L阿托伐他汀与THP-1巨噬细胞孵育不同时间;用不同浓度的阿托伐他汀与THP-1巨噬细胞共同孵育24 h,采用RT-PCR与Western blotting分别检测THP-1巨噬细胞CD36 mRNA与蛋白质的表达.结果 阿托伐他汀使THP-1巨噬细胞CD36 mRNA与蛋白质的表达下调(P＜0.05),且时间与剂量呈依赖关系.结论 阿托伐他汀能抑制THP-1巨噬细胞CD36的表达.
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高脂膳食对SR-A Ⅰ/Ⅱ基因缺失小鼠脂代谢的影响
目的 探讨A类Ⅰ型和Ⅱ型清道夫受体(scavenger receptor class A types Ⅰ and Ⅱ,SR-A Ⅰ/Ⅱ)基因缺失对高脂膳食小鼠脂质代谢的影响及其可能的作用机制.方法 以SR-A Ⅰ/Ⅱ基因敲除与野生型雄性小鼠为对象,分别喂饲普通膳食和高脂膳食12w,应用酶法或油红O染色法检测脂质代谢(包括血脂水平和肝脏脂质水平)的变化,采用RT-PCR法检测肝脏B类Ⅰ型清道夫受体(scavenger receptor class B type Ⅰ,SR-B Ⅰ)和CD36的表达.结果 SR-A Ⅰ/Ⅱ基因敲除鼠与野生型鼠相比,高脂膳食喂饲的第3、6、12w,其血清TG、TC、LDL、HDL均比野生型小鼠下降,肝细胞中脂滴的数量较多,体积较大,SR-B Ⅰ mRNA表达上调,CD36 mRNA的表达无差异.结论 高脂膳食诱导SR-A Ⅰ/Ⅱ基因缺失小鼠脂质代谢的变化可能与肝脏SR-B Ⅰ表达升高及外周脂质向肝脏的逆向转运有关.
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RNA干扰CD36表达对潜在转化生长因子-β1活化和矽肺纤维化的抑制
目的 观察大鼠矽肺模型中RNA干扰CD36基因表达对潜在转化生长因子-β1(L-TGF-β1)的活化及矽肺纤维化的抑制作用.方法 将Wistar大鼠分为生理盐水组、SiO2模型组(10 mg SiO2)、CD36 shRNA表达的重组慢病毒(SiO2+Lv-shCD36)组和对照慢病毒(SiO2+Lv-shCD36-NC)组,每组24只.染尘后7、21、28 d处死动物,貂肺上皮细胞增殖抑制实验检测肺泡灌洗液(BALF)中转化生长因子-β1(TGF-β1)的活性；HE和VG染色观察肺组织病理变化；碱裂解法测定肺羟脯氨酸含量.结果 染尘7d时,SiO2+Lv-shCD36组大鼠肺泡巨噬细胞CD36 mRNA的表达明显低于生理盐水组、SiO2模型组和SiO2+Lv-shCD36-NC组,差异有统计学意义(P＜0.05).SiO2+Lv-shCD36组大鼠BALF中TGF-β1活化量和活化率均明显低于模型组和SiO2+Lv-shCD36-NC组,差异有统计学意义(P＜0.05).染尘28 d时,SiO2+Lv-shCD36组大鼠肺组织可见细胞性矽结节,而模型组和SiO2+Lv-shCD36-NC组大鼠肺组织可见纤维细胞性矽结节.染尘21d和28 d时,SiO2+Lv-shCD36组大鼠肺羟脯氨酸含量明显低于SiO2模型组和SiO2+Lv-shCD36-NC组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 大鼠矽肺模型中通过RNA干扰CD36基因表达能够对L-TGF-β1的活化和矽肺纤维化具有一定的抑制作用.
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血小板反应素-1功能片段对非活化形式的转化生长因子-β1活化的抑制作用
目的 研究血小板反应素-1(trombospondin-1,TSP-1)功能片段对肺巨噬细胞分泌的非活化形式的转化生长因子(TGF)-β1(latent-TGF-β1,L-TGF-β1)活化的抑制作用.方法 对大鼠肺纤维化模型进行肺泡灌洗,取肺巨噬细胞,用TSP-1功能片段进行孵育.实验分为对照组、单纯博莱霉素组、TPSR2-3/TSP-1GS3、融合蛋白组、GST蛋白组、CSVTCG功能肽段组、GDVTEN对照肽段组和CD36抗体组.采用双重免疫荧光标记法观察TGF,-β1与CD36共定位;用酶联免疫吸附法(ELISA)法测定肺巨噬细胞培养上清液中总TGF-β1和活化TGF-β1的量.结果 TSP-1功能片段各组及CD36抗体组的TGF-β1与CD36共定位的阳性荧光颗粒明显少于单纯博莱霉素组及各对照组.TSR2-3/TSP-1GST融合蛋白组活化TGF-β1含量为(14.82±4.68)pg/ml、CSVTCG功能肽段组为(10.28±.3.65)pg/ml,明显低于单纯博莱霉素组和相应对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).TSR2-3/TSP-1GST融合蛋白组和CSVTCG功能肽段组的活化TGF-β1占总TGF-β1的百分比均明显低于单纯博莱霉素组及各对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05).各组总TGF-β1的量无明显差异.结论 TSP-1功能片段通过抑制L-TGF-β1/TSP-1蛋白复合物与CD36的结合进而阻抑L-TGF-β1的活化.
