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脂肪酸转位酶的研究进展
脂肪酸转位酶(FAT)/CD36是一种广泛表达于各种组织细胞膜表面的糖蛋白,能特异性结合长链脂肪酸、氧化低密度脂蛋白等多种配体,从而介导一系列重要的病理生理过程.本文主要介绍近年来FAT/CD36的基本特性、功能、调节方式以及其在胰岛素抵抗和动脉粥样硬化发生、发展中的作用等方面的研究进展.
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CD36与脂肪酸代谢和胰岛素抵抗
CD36是参与脂肪酸代谢的各种组织表面重要的脂肪酸转运体(FAT),介导这些组织对脂肪酸的摄取.鉴于脂肪酸的氧化代谢与胰岛素抵抗和2型糖尿病关系密切,许多研究开始关注FAT/CD36在胰岛素抵抗中的角色.骨骼肌和脂肪组织是人体参与脂防酸代谢的主要器官.其中骨骼肌主要通过细胞表面的CD36摄取及氧化脂肪酸以消耗循环中的游离脂肪酸而提供肌肉收缩的能量,而脂肪组织则通过它将摄取的脂肪酸酯化储存以备能量之需.因此,本文将重点叙述CD36在骨骼肌及脂肪组织中的作用,以探讨其与胰岛素抵抗的关系.
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血管内皮细胞EA.hy926对单核细胞U937清道夫受体表达的影响
[目的]研究单核细胞、内皮细胞的相互作用对单核细胞清道夫受体AI、CD36表达的影响,观察细胞因子在其中的介导作用.[方法]采用单核细胞U937、内皮细胞EA.hy926单独培养、隔离培养及混合培养的方法形成不同的培养条件,通过夹心酶联免疫吸附法检测培养液中巨噬细胞集落刺激因子的含量,使用流式细胞术检测单核细胞表面清道夫受体AI、CD36的表达程度.[结果]单核细胞单独培养条件下清道夫受体AI和CD36的表达量较低,在和内皮细胞隔离培养及混昆合培养后两者的表达量均显著性升高(P＜0.05),巨噬细胞集落刺激因子和血小板源性生长因子BB在单核细胞清道夫受体AI和CD36表达增高的调节中起着一定的介导作用,但不占主要地位.[结论]单核细胞与内皮细胞的相互作用可通过多种环节上调单核细胞清道夫受体AI和CD36的表达,从而参与动脉粥样硬化的发展.
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双重荧光实时PCR法鉴定SRBⅠ基因敲除小鼠
目的：建立一种双重荧光实时PCR鉴定B族Ⅰ型清道夫受体（SRBⅠ）基因敲除小鼠的方法。方法提取小鼠尾尖DNA，应用自行设计的鉴定野生型和敲除型SRBⅠ基因的引物和探针，经PCR扩增后，在FAM通道及CY5通道判断小鼠基因型。同时应用基因测序技术对结果进行验证，并构建质粒标准品分析该方法的灵敏度和重复性。结果仅在FAM通道出现典型S型扩增曲线的为SRBⅠ基因野生型小鼠，仅在CY5通道出现典型S型扩增曲线的为SRBⅠ基因敲除型小鼠，在两个通道都出现典型S型扩增曲线的为SRBⅠ基因杂合型小鼠。结果与DNA测序法吻合，检测野生型和突变型的灵敏度均达4×101拷贝/μL。结论新方法简单、快速、准确，适用于分型SRBⅠ基因敲除小鼠。
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CXCL16、CD36与颈动脉易损斑块并发脑梗死的关系
目的：探讨血清巨噬细胞趋化因子配体16（CXCL16）及CD36水平与颈动脉粥样硬化易损斑块并发大动脉粥样硬化（LAA）性脑梗死的关系。方法选取颈动脉粥样硬化易损斑块合并LAA性脑梗死的患者（脑梗组）50例、有颈动脉粥样硬化易损斑块者（斑块组）50例；同期健康体检者（对照组）50例。各组均接受颈动脉彩超检查。计算各组体质指数（BMI），同时检测各组三酰甘油（TG）、总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、空腹血糖（FBG），应用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定各组血清CXCL16及CD36水平。Logistic回归分析颈动脉粥样硬化易损斑块发生LAA性脑梗死的影响因素。结果斑块组和脑梗组BMI、TG、TC、LDL-C、FBG水平高于对照组，HDL-C水平低于对照组；脑梗组TG、TC、LDL-C、FBG水平高于斑块组，BMI、HDL-C水平低于斑块组（P＜0.05）。对照组、斑块组及脑梗组的CXCL16和CD36水平均呈依次升高趋势（P＜0.05）。多因素Logistic回归分析显示，高TG、LDL-C、FBG、CXCL16及CD36是颈动脉粥样硬化易损斑块合并LAA性脑梗死的危险因素。结论血清CXCL16、CD36水平可作为颈动脉易损斑块的生物标志物；联合检测血清CXCL16、CD36水平有助于预测LAA性脑梗死。
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CD36功能肽段阻抑矽肺纤维化的实验研究
目的 观察CD36功能肽段YRVRYLAKENITQDPEDH(93-110)对小鼠实验性矽肺纤维化的阻抑作用.方法 将小鼠按体重随机分为4组:牛理盐水组、SiO_2模型组,CD36功能肽段组(93-110)、CD36对照肽段组(208-225).采用暴露式气管内注入法染尘,分别于第7、第14、第21天处死动物,HE、VG染色进行肺组织病理学形态观察,采用碱裂解法测定肺组织中羟脯氨酸含量.结果 染尘7 d,病理检查表明,CD36功能肽段组小鼠肺组织肺泡炎症较SiO_2模型组和CD36对照肽段组轻.小鼠羟脯氨酸含晕在各组问的差异也没有统计学意义(P＞0.05).在染尘后14 d、21 d时,CD36功能肽段组小鼠肺组织纤维化程度明显轻于SiO_2模型组和CD36对照肽段组小鼠,羟脯氨酸含量明显低于SiO_2模型组和CD36对照肽段组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 CD36功能肽段对小鼠实验性矽肺纤维化具有明显的抑制作用.
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CD36功能肽段对小鼠实验性矽肺组织内Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响
目的 观察CD36功能肽段YRVRYLAKENITQDPEDH(93-110)对小鼠实验性矽肺纤维化是否有阻抑作用.方法 将小鼠按体重随机分为4组:生理盐水组、SiO2模型组、CD36功能肽段组[YRVRYLAKENITQDPEDH(93-110)]、CD36对照肽段组[TVDGVYKVFNGKDNISKV(208-225)].采用暴露式气管内注入法染尘,分别于7、14、21 d处死动物,测定小鼠肺脏器系数和采用免疫组织化学染色法测定肺组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达.结果 在染尘后14 d、21 d时,小鼠肺脏器系数和Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达明显低于SiO2模型组和CD36对照肽段组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 CD36功能肽段(93-110)对小鼠实验性矽肺纤维化具有明显的抑制作用.
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中药复方对高脂大鼠脂蛋白受体表达的影响
目的:探讨临床有效的调脂中药复方的作用机理.方法:给大鼠喂饲高脂饲料4周,造成高脂血症大鼠模,型;给药4周后检测各组大鼠血脂、肝细胞高密度脂蛋白(HDL)受体SR-BI基因及蛋白表达、肝细胞低密度脂蛋白(LDL)受体LDLR蛋白表达、肾脏组织中氧化低密度脂蛋白(ox-LDH)受体CD36蛋白表达,并与阿托伐他汀对照.结果:中药组能显著降低实验性高脂血症大鼠的TC、TG、LDL-C水平,与阿托伐他汀组比较无显著性差异(P>0.05);中药组能显著升高高脂血症大鼠的HDL-C水平,与阿托伐他汀组比较有显著差异(P<0.05);中药组及阿托伐他汀组均能下调高脂大鼠肝细胞SR-BI基因表达、上调高脂大鼠肝细胞LDLR蛋白表达、抑制高脂大鼠肾脏组织CD36蛋白表达.结论:中药复方能调节血脂,并在影响血脂代谢的脂蛋白受体基因、蛋白表达水平上,起到多层次、多环节、多靶点调节作用,对血脂异常及动脉粥样硬化(AS)的防治起到重要作用.
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芎芪合剂对缺血再灌注大鼠脑组织CD36及抗氧化相关指标的影响
目的:从氧化损伤角度,探讨芎芪合剂抗溶栓后脑缺血再灌注损伤的作用机理.方法:建立SD大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)及溶栓模型,模拟溶栓成功后的再灌注.运用病理TTC染色、组织生化检测和Northern blot杂交的方法,进行脑梗死面积测定、抗氧化损伤相关指标(清道夫受体CD36基因表达、SOD、MDA、GSH.PX、NOS、iNOS含量)测定.结果:(1)芎芪合剂能够使SD大鼠缺血再灌注侧脑组织梗死面积明显缩小.(2)芎芪合剂能抑制缺血再灌注引起的清道夫受体CD36 mRNA表达增高;芎芪合剂能够调节缺血再灌注后SOD、MDA、GSH-PX、NOS、iNOS的含量,并使之趋向于正常.结论:(1)芎芪合剂具有抗脑缺血再灌注损伤的作用;(2)芎芪合剂能够通过减轻氧化应激损伤的程度速到抗脑缺血再灌注损伤的作用.
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肺炎衣原体对SR-A1和CD36表达的影响及相关信号机制研究
目的:探讨肺炎衣原体(Cpn)对THP-1源性巨噬细胞A1型清道夫受体(SR-A1)和B类清道夫受体CD36表达的影响及c-jun氨基端激酶(JNK)信号通路在其中的调控作用.方法:THP-1单核细胞诱导分化为巨噬细胞后随机分为四组:对照组、Cpn组、Cpn+SP600125(JNK特异性抑制剂)组、SP600125组.运用油红O染色观察细胞浆内脂滴的变化,用酶荧光学法检测细胞内胆固醇酯含量的变化,分别用逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)和免疫印迹法(Western blot)检测各组SR-A1、CD36 mRNA和蛋白表达.结果:SP600125能呈浓度依赖性的抑制Cpn诱导的泡沫细胞形成和SR-A1表达上调,但对Cpn诱导的CD36的表达无明显影响.结论:Cpn可通过JNK信号通路上调SR-A1表达,而Cpn对CD36表达无明显影响.
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抵抗素上调脂肪酸转位酶表达对HepG2细胞脂质积聚的作用
目的 探讨抵抗素在棕榈酸诱导下对HepG2肝细胞脂质积聚的作用及其对脂肪酸转位酶(FAT/CD36)表达调控的影响.方法 50 ng/ml重组人抵抗素及0.5 mmol/L棕榈酸孵育HepG2肝细胞,之后用100 nmol/L胰岛素处理,采用实时定量RT-PCR检测胆固醇调节元件结合蛋白(SREBP)1 mRNA水平,流式细胞仪检测胞膜CD36表达,尼罗红(Nile Red)染色后激光共聚焦显微镜检测胞内脂质含量.结果 与对照组相比,抵抗素增加胞膜FAT/CD36含量(P<0.05),促进HepG2细胞SREBP1 mRNA表达(P<0.05),使胞内红色脂肪小滴增多(P<0.05).结论 在高浓度游离饱和脂肪酸环境中,抵抗素在基础及胰岛素刺激状态下通过上调HepG2 的CD36 表达,刺激SREBP1转录,导致HepG2肝细胞内脂质积聚.
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偏硅酸钠对高脂血症家兔外周血白细胞活性氧生成的影响
目的：观察偏硅酸钠（Na2SiO3）对高脂血症家兔外周血白细胞活性氧（ROS）生成的影响，为其抗动脉粥样硬化（AS）作用提供进一步支持。方法12只健康雄性新西兰大白兔随机分为正常对照组，高脂血症组，喂硅组，每组4只。分离各组家兔外周血白细胞后检测加或不加脂多糖（LPS）和N－甲酰－甲硫氨酰亮氨酰苯丙氨酸（fMLP）条件下的ROS。以RT－PCR的方法检测CD36，TLR4，TLR2及 gp91phox mRNA的表达。结果高脂血症组和喂硅组血浆胆固醇均显著高于正常对照组，但两组间无显著差异（ P＞0．05），高脂血症组白细胞 ROS的生成量比正常对照组增加（P＜0．01），喂硅组比高脂血症组ROS生成量减少（P＜0．01），高脂血症组单个核细胞及中性粒细胞CD36、TLR4、TLR2和gp91phox 的mRNA均比正常对照组显著增加（P＜0．01），喂硅组这四种基因的mRNA均显著下调（P＜0．01）。结论 Na2SiO3对LPS和 fMLP刺激的高脂血症家兔外周血白细胞产生ROS有抑制作用；饮用Na2SiO3可以下调高脂血症家兔外周血单个核细胞和中性粒细胞CD36、TLR4、TLR2及gp91phox mRNA水平，Na2SiO3的这种作用不通过降低血脂而实现。
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CD36基因多态性与动脉硬化心脏病的相关性
目的：探讨动脉硬化心脏病与 CD36单核苷酸多态性的关系。方法121例动脉硬化心脏病患者及体检的健康者217例进行研究；空腹12 h 后采集静脉血5 ml，检查甘油三酯、空腹血糖、血细胞、低密度脂蛋白、总胆固醇、高密度脂蛋白、血栓素 B2等主要生化指标，记录其体质量、升高、体质量指数、血压等一般指标，并详细问询其疾病史；采用聚合酶链反应－连接酶检测反应法（PCR－LDR 法）检测 CD36的 SNPs 基因型。结果对照组冠心病、高血压、糖尿病患者比例及血压、体质量指数、甘油三酯、血糖、总胆固醇、血栓素、低密度脂蛋白显著低于病例组（ P＜0．05），病例组患者血高密度脂蛋白水平显著低于对照组（P＜0．05）；rs1761667位点存 GG、AG、AA 3种基因型，两组基因频率差异具统计学意义（ P＜0．05）；分析分布频率发现，病例组 AG 基因型显著高于对照组（P＜0．05）；AG 基因型人群中病例组患者收缩压、舒张压、体质量指数、总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白显著高于对照组（P＜0．05），高密度脂蛋白水平显著低于对照组（P＜0．05）；AG 基因型均可明显增加动脉硬化心脏病的患病风险（P＜0．05）；甘油三酯、收缩压、糖尿病史、冠心病史、低密度脂蛋白与 rs1761667AG 基因型为影响动脉硬化心脏病的独立性危险因素（ P＜0．05）；CD36 SNPs 具有群体代表性，符合 Hardy－Weinberg 平衡定律（P＞0．05）。结论动脉硬化心脏病与 CD36 rs1761667的 AG 型存相关关系，是导致动脉硬化心脏病的遗传因素。
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CD36在氧化低密度脂蛋白降低鼠源细胞锰超氧化物歧化酶活性中的作用
目的 探讨CD36在氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)降低大鼠锰(Mn)超氧化物歧化酶(SOD)活性中的作用.方法 将鼠源RAW264.7巨噬细胞按照处理方式分为ox-LDL处理组和抗CD36拮抗组;ox-LDL处理组在培养液中加入100 mg/L ox-LDL,抗CD36拮抗组在培养液中先加入2 mg/L抗CD36 mAb预处理1 h,再加入100 mg/L ox-LDL.实验结束后比较两组细胞凋亡率和Mn-SOD活性.结果 ox-LDL处理组24、48 h的细胞凋亡率〔分别为(10.8±2.91)%与(29.88±4.47)%〕明显高于抗CD36拮抗组〔(5.83±1.18)%与(7.63±1.64)%〕(均P<0.05).两组0 h时Mn-SOD活性无显著差异(P>0.05);ox-LDL处理组24、48 h的Mn-SOD活性〔分别为(17.17±2.90)%与(16.73±2.87)%〕明显低于抗CD36拮抗组〔(29.34±4.72)%与(22.83±3.72)%〕(均P<0.05).结论 CD36在ox-LDL所介导的脂质转运和代谢过程中具有重要作用.
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转化生长因子β1对巨噬细胞清道夫受体A和B(CD36)功能的影响
目的:探讨转化生长因子β1(TGF-β1)对巨噬细胞清道夫受体A(SeR-A)和B(SeR-B,CD36)的影响,为阐明动脉粥样硬化(AS)的形成(尤其形成早期)提供依据并为防治AS提供理论支持.方法:人类单核细胞株(THP-1)源性巨噬细胞分成对照组和实验组.实验组加3.0 mg·L-1抗TGF-β1抗体(AntiTGF-β1 Ab),对照组加用3.0 mg·L-1IgG,利用巨噬细胞摄取和Northern blotting法,同步检测对乙酰化和氧化低密度脂蛋白(LDL)摄取(结合、摄入和分解)以及scR-A和CD36 mRNfA表达.结果:实验组125I-Ac-LDL的结合、摄入和分解量分别为(48.67±6.52)、(412.30±12.21)及(896.48±32.74)μg·g-1protein,与对照组[(8.23±1.24)、(45.69±6.92)及(112.18±20.15)μg·g-1protein]比较,差异均具有显著性(P<0.01),实验组125I-Ox-LDL的结合、摄入和分解量分别为(102.32±3.11)、(412.94±15.21)和(788.94±31.16)μg·g-1protein,与对照组[(78.56±2.81)、(123.94±12.11)及(345.38±27.17)μg·g-1protein]比较,差异均具有显著性(P<0.01).实验组ScR-A和CD36 mRNA的表达均较对照组增强.实验组与对照组ScR-A mRNA比值为1.7,CD36 mRNA比值为1.12.结论:TGF-61通过抑制ScR-A和CD36表达干预AS的形成及其发展过程,这种作用主要是通过ScR-A实现的.
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表达人CD36基因的293T细胞株的建立
目的 建立一种表达人类CD36基因的293T细胞株,用于CD36抗原的研究及CD36抗体检测.方法 采用RT-PCR技术,从人血小板中获取CD36基因的cDNA,克隆至表达载体pEGFP-C1中,对重组质粒测序鉴定后将质粒转染至293T细胞,该转基因的产物在293T细胞中的表达被观察超过1年.与CD36单克隆抗体及CD36阳性血清反应的流式细胞术试验评估这个细胞株的敏感性和特异性.结果 重组表达载体pEGFP-C1-CD36被成功构建,流式细胞术验证其转染效率达90％以上,实时荧光定量PCR和Western blot证明CD36基因在293T细胞中过表达.流式细胞试验结果为CD36单克隆抗体及CD36阳性血清为阳性,而其他所有的血清样本,包括CD36抗体阴性血清、含有HLA或HPA-3a抗体血清均为阴性.结论 建立的pEGFP-C1-CD36-293T细胞株能成功高效表达CD36抗原,并能特异快速、成功地检测CD36抗体,并且不受其他血型抗体的干扰,有一定的运用前景.
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肾上腺素对THP-1巨噬细胞TGF-β1、SR-A1和CD36表达的影响
目的:探讨肾上腺素对THP-1巨噬细胞TGF-β1、SR-A1和CD36表达的影响.方法:不同浓度肾上腺素处理THP-1巨噬细胞24 h,运用逆转录多聚酶链反应检测其TGF-β1、SR-A1和CD36的mRNA表达,酶联免疫吸附试验检测TGF-β1蛋白的表达,Western-blotting检测SR-A1蛋白的表达.结果:100mol/L及1μmol/L的肾上腺素作用THP-1巨噬细胞,引起TGF-β1 mR-NA和蛋白表达下调(p＜0.05),SR-A1 mRNA和蛋白表达上调(P＜0.05),1pmol/L～1μmol/L的肾上腺素处理后,各组CD36 mRNA水平无显著性变化(p＞0.05).结论:应激浓度的肾上腺素可能通过影响TGF-β1和SR-A1的表达而参与和/或促进As的发生发展.
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去甲肾上腺素对THP-1巨噬细胞ABCA1、SR-A Ⅰ和CD36表达的影响
目的:探讨去甲肾上腺素(noradrenalin,NA)对THP-1巨噬细胞ATP结合盒转运体AI(ATP binding cassette transporter A1,ABCA1)、A类清道夫受体(Scavenger receptor A Ⅰ,SR-A Ⅰ)和B型清道夫受体CD36(Cluster of Differentiation 36,CD36)表达的影响.方法:不同浓度NA处理THP-1巨噬细胞24小时,运用逆转录多聚酶链反应(reversc transcription polymerase chain reaction.RT-PCR)检测其ABCA1、SR-A Ⅰ和CD36的mRNA表达,western-blotting 检测ABCA1和SR-A Ⅰ蛋白的表达.结果:100nmol/L. 1 μ mol/L及10 μ mol/L的NA作用于THP-1巨噬细胞,引起ABCA1 mRNA和蛋白水平下调(P＜0.05),1 μ mol/L及10 μ mol/L 的NA则升高SR-A Ⅰ mRNA和蛋白的水平(p＜0.05),10 pmol/L～10μ mol/L的NA作用THP-1巨噬细胞24小时,各组CD36 mRNA表达与对照组比较其差异无统计学意义.结论:应激浓度的NA可能通过影咆ABCA1和SR-A Ⅰ的表达而参与和/或促进AS的发生发展.
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多发伤合并肺挫伤患者CD36和CD63水平及其与血管内皮损伤关系的研究
目的 探讨多发伤合并肺挫伤患者急性期和恢复期血小板CD36和CD63水平变化及其与内皮损伤的关系,并探讨其临床应用价值.方法 选择2008-06~2011-11收入我院急诊科的多发伤合并肺挫伤患者50例,包括男28例,女22例,年龄(32.3±11.5)岁.按创伤严重度评分(ISS)分为重伤组(ISS≥16分,29例)和轻伤组(ISS<16分,21例);按ARDS诊断标准,分为ARDS组(27例)和非ARDS组(23例);按预后分为生存组(36例)和死亡组(14例).同时取15例健康人作为对照组,其中男8例,女7例,年龄(33.5±10.6)岁.各组性别和年龄构成均具有可比性.患者到达急诊科后6 h内抽取外周静脉血2 mL.应用流式细胞仪检测血小板CD36和CD63双阳性率,同时采用ELISA技术检测外周静脉血血浆血管性血友病因子(vWF)的水平.结果 血小板CD36和CD63双阳性率、血浆vWF水平重伤组明显高于轻伤组(P<0.05),ARDS组明显高于非ARDS组,死亡组明显高于生存组(P<0.05).创伤后血小板CD36和CD63的水平与血管内皮损伤指标(vWF)有明显的相关性(P<0.05).结论 血小板CD36和CD63双阳性率在多发伤合并肺挫伤早期明显增高,和创伤严重程度相关,同时反映了患者肺损伤的程度,这对多发伤合并肺挫伤,特别是并发急性呼吸窘迫综合征(ARDS)的诊断和预后预测具有重要的临床价值.
关键词： 多发伤 肺挫伤 血管性血友病因子(vWF) CD36 CD63 -
2型糖尿病CD36基因表达与动脉粥样硬化关系的研究进展
2型糖尿病(T2DM)在全球范围内是一种常见和严重的代谢紊乱疾病.截止到2010年,在20～79岁人群中,约有2.85亿人患有糖尿病,患病率为6.6％,其中70％的患者居住在中、低收入国家.如果不能采取有效预防措施,2030年糖尿病患者将增至4.38亿,患病率提高到7.8％.这种患病总人数及患病率的增长将主要出现在发展中国家[1].T2DM病理变化为胰岛β细胞功能减退、胰岛素抵抗等引发的以糖、蛋白质、脂肪为主代谢紊乱及凝血系统、纤溶系统和血流动力学异常[2].而这些代谢异常导致脂质清除能力下降、血管内皮细胞脂蛋白脂酶活性降低、影响脂蛋白的氧化修饰和促进凝血,炎性反应,内皮细胞损伤,氧化应激损伤,引起动脉内膜增厚,进而形成动脉粥样硬化(AS)[3].脑梗死合并糖尿病是患者致残致死的主要原因,其病变基础为动脉粥样硬化,而内皮功能失调是动脉粥样硬化的始动因素和核心环节.糖尿病患者易出现颈动脉和颅内动脉的联合病变[4].
