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过氧化体增殖物激活型受体γ对巨噬细胞脂质蓄积及CD36表达的影响
目的 观察过氧化体增殖物激活型受体γ激动剂和拮抗剂对THP-1巨噬细胞胆固醇蓄积及CD36表达的影响.方法 实验分对照组、氧化型低密度脂蛋白组、Ciglitazone处理组和GW9662处理组,后两组用50 mg/L氧化型低密度脂蛋白分别与过氧化体增殖物激活型受体γ激动剂Ciglitazone(10 μmol/L)及拮抗剂GW9662( 10μmol/L)共同孵育24 h,高效液相色谱分析法检测细胞总胆固醇蓄积情况,RT-PCR和Western blot分别检测THP-1巨噬细胞CD36 mRNA和蛋白的表达.结果 与对照组(76.28±10.36 mg/g)相比,氧化型低密度脂蛋白(121.63±13.32mg/g)能使细胞总胆固醇含量显著增加,而Ciglitazone能使氧化型低密度脂蛋白处理的细胞总胆固醇含量进一步增加(136.23±14.78 mg/g),GW9662能使氧化型低密度脂蛋白处理的细胞总胆固醇含量减少(98.52±11.45 mg/g).过氧化体增殖物激活型受体γ拮抗剂GW9662使巨噬细胞CD36 mRNA和蛋白的表达下调及胆固醇蓄积减少,过氧化体增殖物激活型受体γ激动剂Ciglitazone使巨噬细胞CD36 mRNA和蛋白的表达上调及胆固醇蓄积增多.结论 过氧化体增殖物激活型受体γ拮抗剂使THP-1巨噬细胞胆固醇蓄积减少及氧化型低密度脂蛋白诱导的CD36表达下调.
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中药虎杖和山楂提取物对载脂蛋白E基因敲除小鼠巨噬细胞PPARγ、ABCA1及CD36 mRNA表达的影响
目的 观察中药虎杖、山楂配伍对栽脂蛋白E基因敲除小鼠巨噬细胞源性泡沫细胞内过氧化体增殖物激活型受体γ、三磷酸腺苷结合盒转运子A1及cD36 mRNA表达的影响,从基因水平探讨虎杖和山楂配伍对动脉粥样硬化泡沫细胞形成的干预机制.方法 培养载脂蛋白E基因敲除小鼠腹腔巨噬细胞,分为空白组、虎杖苷组、山楂提取物组、虎杖苷+山楂提取物组、洛伐他汀组、罗格列酮组及模型组.除空白组外,其他各组均同时加入氧化型低密度脂蛋白及脂多糖.各组细胞在培养箱内共孵育(泡沫化)2天,以逆转录聚合酶链反应法检测0 h、24 h和48 h各组细胞内过氧化体增殖物激活型受体γ、三磷酸腺苷结合盒转运子A1及CD36的mRNA表达.结果与空白组比较,干预24 h和48 h后,模型组及各用药组三个指标的表达均显著增高(P<0.01);与模型组比较,干预24 h后,虎杖苷+山楂提取物组和罗格列酮组过氧化体增殖物激活型受体γ mRNA表达显著增高,虎杖苷组、虎杖苷+山楂提取物组和罗格列酮组三磷酸腺苷结合盒转运子A1 mRNA表达显著增高(P<0.05或P<0.01),各用药组CD36 mRNA表达无显著差异(P>0.05);干预48 h后,各用药组过氧化体增殖物激活型受体γ和三磷酸腺苷结合盒转运子A1 mRNA表达均显著增高,CD36 mRNA表达显著降低,且虎杖苷+山楂提取物组优于虎杖苷组、山楂提取物组及洛伐他汀组(P<0.05或P<0.01).结论 虎杖和山楂配伍可能具有与罗格列酮相似的过氧化体增殖物激活型受体γ激动作用,通过上调栽脂蛋白E基因敲除小鼠巨噬细胞过氧化体增殖物激活型受体γ和三磷酸腺苷结合盒转运子A1 mRNA表迭、下调CD36 mRNA表达的调控途径显著抑制巨噬细胞泡沫化过程,阻止动脉粥样硬化进程.
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高糖对血管平滑肌细胞CD36表达的诱导作用
目的 探讨高糖对人血管平滑肌细胞清道夫受体CD36表达的影响及对肌源性泡沫细胞产生的作用.方法 体外用不同浓度的葡萄糖(5、11、20及30 mmol/L)干预人脐血管平滑肌细胞1～7天,实时定量聚合酶链反应及Western blot检测血管平滑肌细胞CD36 mRNA和蛋白的表达,油红O染色测定血管平滑肌细胞内脂质含量.结果 正常状态下血管平滑肌细胞存在微弱的CD36表达.与5 mmol/L葡萄糖组比较,血管平滑肌细胞CD36 mRNA和蛋白水平的表达随着葡萄糖浓度的增加和干预时间的延长而增加(P＜0.05).同时,细胞内脂质含量随着CD36表达增加而逐渐增加.结论 高糖能促进血管平滑肌细胞CD36的表达,并促进血管平滑肌细胞内脂质聚集,有助于肌源性泡沫细胞形成.
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肺炎衣原体通过上调清道夫受体A1诱导THP-1源性泡沫细胞形成
目的 观察清道夫受体A1和CD36在肺炎衣原体诱导THP-1源性泡沫细胞形成中的作用.方法 给予不同浓度的肺炎衣原体(1 ×105～1×106IFU)感染THP-1源性巨噬细胞0～72 h.运用油红O染色观察细胞质内脂滴的变化,酶荧光学法检测细胞内胆固醇酯含量的变化.分别运用逆转录聚合酶链反应和Western-Blot检测清道夫受体A1和CD36的mRNA和蛋白表达.结果 高浓度的肺炎衣原体(5×105和1×106IFU)感染负荷低密度脂蛋白的THP-1源性巨噬细胞48 h后,细胞质内的脂滴明显增多,胆固醇酯占总胆固醇百分比明显增加(>50%).在负荷低密度脂蛋白的THP-1源性巨噬细胞上,肺炎衣原体感染呈浓度和时间依赖性地上调道夫受体A1mRNA和蛋白表达,但不影响CD36 mRNA和蛋白表达.结论 清道夫受体A1表达上调是肺炎衣原体诱导THP-1源性泡沫细胞形成的机制之一,这可能为进一步阐明肺炎衣原体感染促进动脉粥样硬化发生发展提供一个新的理论依据.
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脂欣康胶囊对血管平滑肌细胞源性泡沫细胞CD36表达的影响
目的 探讨脂欣康胶囊对动脉粥样硬化泡沫化细胞形成的可能调控机制,观察脂欣康胶囊及洛伐他汀干预大鼠血管平滑肌细胞源性泡沫细胞CD36 mRNA表达的变化.方法 用组织贴块培养法培养血管平滑肌细胞,以氧化型低密度脂蛋白使其泡沫化,并以脂欣康胶囊和洛伐他汀分别干预.采用流式细胞仪和原位杂交技术观察CD36 mRNA表达的变化.结果 与生理盐水组和空白对照组相比,脂欣康胶囊与洛伐他汀均能降低CD36 mRNA的表达(P＜0.01),且脂欣康组较洛伐他汀组下降更显著(P＜0.05).结论 脂欣康与洛伐他汀均能抑制CD36的表达,并且其作用优于洛伐他汀.其作用机制可能为脂欣康的益气活血、解毒化浊之功使平滑肌细胞内蕴藏的痰浊瘀毒得以疏布排泄于外.这可能是其抑制血管平滑肌细胞增殖和泡沫化细胞形成的机制之一.
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烟酸对高脂血症兔瘦素、过氧化体增殖物激活型受体γ和CD36表达的影响
目的 探讨烟酸对高脂血症兔血清瘦素及皮下脂肪组织瘦素、过氧化体增殖物激活型受体γ及CD36mRNA表达的影响.方法 12只健康雄性新西兰兔给予高胆固醇饮食饲养8周后,随机分为高脂组和烟酸组:高脂组继续饲以高胆固醇饲料6周;烟酸组在饲以高胆固醇饲料的基础上给予烟酸0.2 g/(kg·d),共6周.另选择普通饮食14周兔(n=6)作为对照组.实验结束后,取腹股沟处皮下脂肪组织称重并冻存,用酶联免疫吸附法测定血清及脂肪细胞培养基瘦素水平;半定量逆转录聚合酶链反应测定脂肪组织瘦素、过氧化体增殖物激活型受体γ及CD36 mRNA的表达.此外,在体外观察不同浓度的烟酸对高脂兔脂肪细胞瘦素、过氧化体增殖物激活型受体γ及CD36 mRNA的表达.结果 高脂组兔血清及脂肪组织瘦素水平明显高于正常对照组,烟酸治疗6周后可降低血清及脂肪组织瘦素水平.逆转录聚合酶链反应表明烟酸组较高脂组瘦素mRNA表达降低,瘦素mRNA与过氧化体增殖物激活型受体γ mRNA和CD36 mRNA的表达呈负相关.体外实验亦表明,烟酸呈剂量依赖性地降低脂肪细胞瘦素mRNA表达,并剂量依赖性地上调过氧化体增殖物激活型受体γ及CD36 mRNA的表达.结论 烟酸治疗能降低高脂血症兔血清及脂肪分泌瘦素水平,上调过氧化体增殖物激活型受体γ及CD36 mRNA的表达.
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阿托伐他汀对THP-1巨噬细胞脂质蓄积及CD36表达的影响
目的 观察阿托伐他汀对氧化型低密度脂蛋白诱导的THP-1巨噬细胞脂质蓄积及CD36表达的影响.方法 用50 mg/L氧化型低密度脂蛋白与不同浓度的阿托伐他汀(0、0.312、1.25和5 μmol/L)共同孵育THP-1巨噬细胞24 h,以空白组作对照,用液体闪烁计数法检测细胞[3H]胆固醇流入情况,油红O染色观察细胞内脂质蓄积情况,高效液相色谱分析法检测细胞内总胆固醇水平,逆转录聚合酶链反应与免疫印迹分析法分别检测THP-1巨噬细胞CD36 mRNA和蛋白的表达.结果 阿托伐他汀使THP-1巨噬细胞胆固醇流入减少,对照组胆固醇流入为35.90%±2.36%,0、0.312、1.25和5 μmol/L阿托伐他汀组胆固醇流入分别为47.10%±3.18%、41.20%±2.88%、35.10%±2.35%和28.30%±1.98%;阿托伐他汀能抑制THP-1巨噬细胞对氧化型低密度脂蛋白的摄取,油红O染色可见氧化型低密度脂蛋白+阿托伐他汀组细胞内脂滴较氧化型低密度脂蛋白组明显减少,且脂滴颗粒体积变小;高效液相色谱分析发现,对照组细胞总胆固醇含量为78.24±11.35 mg/g,0、0.312、1.25和5 μmol/L阿托伐他汀组细胞总胆固醇含量分别为123.13±15.92 mg/g、115.36±13.18 mg/g、107.52±12.05 mg/g和98.03±10.24 mg/g.阿托伐他汀使氧化型低密度脂蛋白诱导的THP-1巨噬细胞CD36 mRNA和蛋白的表达下调.结论 阿托伐他汀引起氧化型低密度脂蛋白诱导的THP-1巨噬细胞CD36表达下调,并使脂质蓄积减少.
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非诺贝特对兔脂肪细胞摄取及降解氧化型低密度脂蛋白及CD36表达的影响
为了解非诺贝特对高胆固醇血症兔脂肪细胞摄取及降解氧化型低密度脂蛋白的影响并探讨其可能机制,将10只新西兰大白兔给予高胆固醇饲料饲养8周后,随机分为高胆固醇组和非诺贝特治疗组,非诺贝特组在饲以高胆固醇饲料的基础上给予非诺贝特(每天30mg/kg),共4周.另设普通饮食对照组5只.实验结束后,取皮下脂肪组织行脂肪细胞培养,放射配基法测定脂肪细胞对氧化型低密度脂蛋白的摄取及降解,半定量逆转录-聚合酶链反应测定脂肪细胞CD36及过氧化体增殖物激活型受体γmRNA的表达.结果发现,3组兔脂肪细胞摄取及降解125Ⅰ-氧化型低密度脂蛋白均呈现一浓度依赖性饱和型曲线,高胆固醇组脂肪细胞摄取及降解125Ⅰ-氧化型低密度脂蛋白明显低于对照组;非诺贝特组脂肪细胞摄取及降解125Ⅰ-氧化型低密度脂蛋白高于高胆固醇组,但仍低于对照组,3组间比较差异有显著性(P<0.05).逆转录聚合酶链反应发现,高胆固醇组过氧化体增殖物激活型受体γ及CD36mRNA表达降低,非诺贝特组CD36mRNA表达与对照组相似.以上提示,非诺贝特能改善高胆固醇血症兔脂肪细胞摄取及降解125Ⅰ-氧化型低密度脂蛋白,并上调CD36mRNA的表达.
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高密度脂蛋白2和高密度脂蛋白3对THP-1巨噬细胞脂质蓄积及过氧化体增殖物激活型受体γ和CD36表达的影响
为探讨高密度脂蛋白2和高密度脂蛋白3对THP-1巨噬细胞过氧化体增殖物激活型受体γ和CD36表达及脂质蓄积的影响.取新鲜抗凝血浆,用超速离心术进行密度梯度离心,收集低密度脂蛋白、高密度脂蛋白2和3.将氧化型低密度脂蛋白分别与高密度脂蛋白2和3共孵育THP-1巨噬细胞,用油红O染色及高效液相分析法观测细胞内脂质蓄积程度;用逆转录聚合酶链反应检测CD36和过氧化体增殖物激活型受体γ mRNA的表达;用Western blotting检测CD36和过氧化体增殖物激活型受体γ蛋白的表达.结果发现,与单独用氧化型低密度脂蛋白和THP-1孵育相比,用高密度脂蛋白2、高密度脂蛋白3分别与氧化型低密度脂蛋白共孵育THP-1可使细胞内脂质蓄积明显减少,过氧化体增殖物激活型受体γ mRNA及蛋白表达上调,CD36 mRNA及蛋白表达下调.而高密度脂蛋白3比高密度脂蛋白2作用更明显.结果提示,高密度脂蛋白2和3对氧化型低密度脂蛋白诱导THP-1细胞脂质蓄积有显著抑制作用,而高密度脂蛋白3的作用更强.其机制与高密度脂蛋白可以增强过氧化体增殖物激活型受体γ mRNA和蛋白表达上调及过氧化体增殖物激活型受体γ磷酸化,进而抑制过氧化体增殖物激活型受体γ的应答基因CD36 mRNA及蛋白表达有关.
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CD36介导氧化型低密度脂蛋白诱导U937细胞泡沫化和凋亡
为探讨清道夫受体CD36在氧化型低密度脂蛋白诱导U937细胞泡沫化和凋亡中的作用,用氧化型低密度脂蛋白温育U937细胞,观察U937细胞泡沫化过程中CD36的表达时序和泡沫细胞的凋亡;用CD36单克隆抗体阻断U937细胞的吞噬作用,观察U937细胞吞噬蓄积胆固醇和细胞凋亡的改变.细胞胆固醇以修饰的酶荧光法测定;用流式细胞术检测异硫氰酸荧光素-抗CD36单克隆抗体特异标记的CD36和细胞的凋亡情况;用逆转录聚合酶链反应检测CD36mRNA的表达.结果发现,80mg/L氧化型低密度脂蛋白与U937细胞温育24h可增加细胞内总胆固醇,48h时可形成典型的泡沫细胞;CD36表达呈现时序性改变,6h即可检出CD36表达增高,24h达到高值,48h表达略有降低,CD36mRNA的转录与CD36的表达一致.用200 mg/L 氧化型低密度脂蛋白与U937细胞温育24 h 可见U937细胞出现凋亡,48h后凋亡峰明显,预先用CD36单克隆抗体阻断可使氧化型低密度脂蛋白致U937细胞凋亡明显减少.实验结果提示,CD36介导U937细胞吞噬蓄积氧化型低密度脂蛋白形成泡沫细胞,并终出现凋亡;内吞蓄积的氧化型低密度脂蛋白对CD36无负反馈调节.
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CD36的结构、功能调节及其在动脉粥样硬化中的作用
CD36是一种多功能跨膜糖蛋白,介导细胞对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)的摄取,诱导单核细胞转化为泡沫细胞,并通过炎症反应、氧化应激、血小板活化、巨噬细胞捕获促进动脉粥样硬化形成.抑制CD36的表达或干扰其相关信号通路可以显著缓解动脉粥样硬化的严重程度.另外,舌、鼻腔、小肠和大脑的CD36高表达可促进机体对脂质摄入和吸收,增加代谢性疾病的疾病危险因素.血清可溶性CD36是循环微粒的组分,且可能是心血管疾病的预测因子.
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可溶性环氧化物水解酶抑制剂t-AUCB对巨噬细胞脂质代谢的影响
目的 观察可溶性环氧化物水解酶抑制剂t-AUCB对小鼠巨噬细胞脂质摄取及降解的影响,并探明其可能机制.方法 培养小鼠巨噬细胞RAW264.7,分别用不同浓度t-AUCB(1、10、50及100 μmol/L)干预24 h,或在100 μmol/L t-AUCB干预前1h加入PPARγ拮抗剂GW9662 5 μmol/L,采用t-AUCB 0 μmol/L干预组作为空白对照.采用125 Ⅰ -ox-LDL放射配基法测定小鼠巨噬细胞对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)的摄取及降解,实时荧光定量PCR和Western blot分别测定小鼠巨噬细胞CD36 mRNA和蛋白表达.结果 t-AUCB呈剂量依赖性地增加巨噬细胞125Ⅰ -ox-LDL摄取量和降解量,0、1、10、50和100 μmol/L t-AUCB干预时,摄取量分别为414.96±46.71μg/g、519.54±47.7μg/g、629.04±37.97 μg/g、720.66±48.58 μg/g和881.57±68.44μg/g,降解量分别为16180.23±967.28 μg/g、17369.62±478.34 μg/g、21794.85±689.36μg/g、27883.03±712.25 μg/g和30194.61±635.71μg/g,与空白对照组比较差异显著(P＜0.05),加入GW9662后100 μmol/L组摄取量降至467.80±51.98μg/g,降解量降至16326.19±735.95 μg/g,与单独加入t-AUCB组比较差异具有显著性(P ＜0.05)；t-AUCB可呈剂量依赖性的增加小鼠巨噬细胞CD36 mRNA和蛋白的表达,而加入GW9662后明显抑制上述作用.结论 t-AUCB可通过上调PPARγ-CD36信号通路分子表达增加小鼠巨噬细胞摄取和降解ox-LDL.
关键词： 巨噬细胞 可溶性环氧化物水解酶抑制剂 氧化型低密度脂蛋白 CD36 -
PPARγ反义寡核苷酸对THP-1巨噬细胞CD36表达的影响
目的 观察过氧化体增殖物激活型受体γ(PPARγ)反义寡核苷酸对THP-1巨噬细胞CD36表达及细胞胆固醇流入的影响,探讨PPARγ的作用及机制.方法 用50mg/L氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)分别与不同浓度PPARγ的反义寡核苷酸(400 nmol/L)、错义寡核苷酸(400nmol/L)或15μmol/L PPARγ激动剂ciglitazone共同孵育THP-1巨噬细胞24h后,采用逆转录—聚合酶链反应和Western印迹分析分别检测CD36的表达,采用液体闪烁计数法检测[3H]胆固醇流入.结果 与ox-LDL组比较,PPARγ反义寡核苷酸下调巨噬细胞CD36的表达,且细胞胆固醇流入率下降(ox-LDL组为28.1％、反义寡核苷酸组为22.5％).而ciglitazone则使巨噬细胞CD36的表达上调,胆固醇流入率明显增加(36.8％).结论 抑制PPARγ表达,可抑制THP-1巨噬细胞CD36的表达,并减少细胞胆固醇流入.
关键词： 过氧化体增殖物激活型受体γ CD36 反义寡核苷酸 动脉粥样硬化 -
颈动脉粥样硬化患者外周血中CD36表达水平及与Toll样受体4信号的相关性
目的 观察颈动脉粥样硬化(AS)患者外周血中CD36水平,并探讨其与人单核细胞Toll样受体4(TLR4)信号的相关性.方法 选取该院治疗的颈AS患者40例为AS组,以同期来该院体检的40例健康者为对照组.收集两组患者外周血后采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot检测CD36水平和TLR4信号激活的相关因子.采用匹伐他汀抑制AS组患者单核细胞中的CD36水平后,检测AS组患者单核细胞中相关因子的表达.结果 与对照组比较,AS组患者外周血中CD36的mRNA及蛋白水平显著提高,差异有统计学意义(t =41.503和27.112,P=0.000).AS组患者外周血中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)为(50.2±3.1)pg/ml,显著高于对照组[(33.5±2.8)pg/ml];AS组患者外周血中白介素-6(IL-6)为(54.1±2.4)pg/ml,显著高于对照组[(32.8±2.1)pg/ml],差异有统计学意义(t=42.242,P=0.000);AS组患者外周血中核转录因子(NF-κ B)mRNA水平显著高于对照人群,差异有统计学意义(=34.411,P=0.000).CD36 mRNA水平与患者血清TNF-α、IL-6及NF-κB mRNA呈正相关,差异有统计学意义(r=0.641、0.579和0.659,P＜0.05).采用匹伐他汀抑制AS组患者体内CD36表达后,AS组患者外周血中TNF-α和IL-6蛋白及NF-κB mRNA水平显著低于治疗前,差异有统计学意义(t =17.277、10.022和15.360,P=0.000).结论 AS患者外周血中CD36高表达,并与TLR4信号相关转录因子及细胞因子水平相关,提示CD36可能通过影响TLR4信号参与AS的发生、发展.
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CD36在宫颈癌组织中的表达及临床意义
目的 通过检测宫颈癌组织中cD36表达情况,探讨cD36在宫颈癌进展中的作用.方法 应用Western blotting检测宫颈癌细胞株中cD36的表达,同时采用免疫组织化学技术检测102例宫颈癌组织及46例癌旁正常组织中cD36的表达,分析cD36表达与宫颈癌患者临床病理因素的关系.结果 3株宫颈癌细胞(c33a、HcE1、Hela)cD36/GAPDH灰度比值分别为(4.6±1.3)、(43.3±2.6)、(45.8±3.4)％,cD36在Hela、HcE1细胞中呈高表达,差异有统计学意义(P<0.05);宫颈癌中cD36阳性率高达72.5％,而癌旁正常组织中cD36阳性表达率为21.7％,差异有统计学意义(P<0.05);宫颈癌中cD36表达与患者年龄、临床分期、T分期等无相关(P>0.05),而与分化程度、淋巴结转移相关(P<0.05).结论 cD36可能在宫颈癌的进展中发挥重要作用,有望成为宫颈癌防治的新靶点.
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氧化低密度脂蛋白对树突状细胞表面CD36表达的影响
目的 探讨氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)对树突状细胞表面CD36表达的影响.方法 梯度离心法分离人外周血单核细胞,经含重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和重组人白介素4的DC完全培养液中培养,使其分化为DC.DC分别与不同浓度％-LDL(分别为10 μg/ml、50 μg/ml)共同孵育48h后,镜下观察DC形态变化,同时采用流式细胞术检测IDCs表型(CD1α、CD83)和CD36的表达,以及用ELISA法检测细胞上清液中IL-10、IL-12含量.结果 与对照组相比,ox-LDL 50μg/ml组DCs表型CD1α、CD83以及CD36的表达明显上调(p＜0.01),ox-LDL 50 μg/ml组细胞上清液中IL-10、IL-12含量明显分别明显升高和降低(p＜0.01).结论 DCs表面CD36的表达与ox-LDL诱导的DCs成熟以及炎症因子的释放密切相关,CD36可能在DCs分化成熟以及抗原递呈过程中发挥重要作用.
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炎症反应通过上调CD36表达促进小鼠肾脏损伤
目的:探讨慢性炎症对小鼠肾脏CD36表达的影响及其在小鼠肾脏损伤中的作用.方法:将8周龄雄性C57BL/6J小鼠和CD36基因敲除(CD36KO)小鼠随机分为C57BL/6J生理盐水注射组、C57BL/6J酪蛋白注射组和CD36KO酪蛋白注射组,每组8只.高脂喂养处理14周后,收集小鼠血清、24 h尿液和肾组织样本.ELISA试剂盒检测血清中肿瘤坏死因子 α(TNF-α)含量,全自动生化仪测定血、尿肾功能指标,HE染色和Masson染色分析肾脏病理改变,real-time PCR和Western blot检测肾脏组织中CD36及炎症/趋化因子(MCP-1、IL-6和TNF-α)mRNA和蛋白的表达,试剂盒测定组织内过氧化氢含量,免疫组化染色测定肾组织Nrf2和TGF-β1的蛋白表达.结果:与生理盐水注射组相比,酪蛋白注射能增强C57BL/6J小鼠血清TNF-α含量和肾组织中TNF-α的蛋白表达(P<0.05),提示酪蛋白注射能成功诱导小鼠全身和肾脏局部的慢性炎症.同时酪蛋白注射显著促进了小鼠肾组织的CD36和TGF-β1蛋白表达,引起肾小球硬化、蛋白尿和血清肌酐含量显著增加,组织过氧化氢含量明显增加,Nrf2含量和抗氧化能力明显降低(P<0.05).而酪蛋白处理的CD36基因敲除小鼠肾组织病理学改变不明显,血、尿肾功能指标和尿量较酪蛋白处理的C57BL/6J小鼠明显降低,且肾组织过氧化氢含量低于酪蛋白处理的C57BL/6J小鼠(P<0.05).结论:炎症应激通过促进小鼠肾组织CD36表达,促进氧化应激,导致小鼠肾损伤.
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糖尿病大鼠巨噬细胞CD36基因表达水平
目的:研究糖尿病大鼠巨噬细胞CD36基因表达水平.方法:观察6周STZ-糖尿病大鼠血清胆固醇、甘油三酯含量及肺泡巨噬细胞和腹腔巨噬细胞内总胆固醇、游离胆固醇、胆固醇酯含量,并应用RT-PCR技术检测肺泡巨噬细胞和腹腔巨噬细胞CD36基因表达水平.结果:糖尿病大鼠血清胆固醇、甘油三酯含量明显高于正常对照组,巨噬细胞内总胆固醇、游离胆固醇、胆固醇酯含量与正常对照组无明显差异,CD36基因表达水平显著高于正常对照组.结论:糖尿病大鼠巨噬细胞CD36基因表达水平升高,可能参与糖尿病动脉粥样硬化的发生发展.
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脂质超负荷心肌胰岛素抵抗及其防治策略
胰岛素抵抗 (insulin resistance, IR)是2型糖尿病 (type 2 diabetes mellitus, T2DM) 基本也是重要的病理机制,常出现在T2DM之前,并贯穿于整个病程始终.糖尿病心肌病是T2DM的常见并发症,也是引起心力衰竭,导致60-75%T2DM患者死亡或残废的主要原因[1].
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氧化低密度脂蛋白通过 CD36介导的氧化应激诱导巨噬细胞自噬
目的：研究氧化低密度脂蛋白（ oxidized low－density lipoprotein，ox－LDL）对巨噬细胞自噬的诱导作用，并探讨可能的分子机制。方法：体外培养RAW264．7巨噬细胞，给予抗CD36单克隆抗体（2 mg／L）、二亚苯基碘鎓（diphenyleneiodonium，DPI；5μmol／L）、3－甲基腺嘌呤（3－methyladenine，3－MA；3 mmol／L）或雷帕霉素（1μmol／L）预处理1 h，再加入ox－LDL（100 mg／L）继续培养12 h。采用MTT法检测细胞活力，采用相应试剂盒测定培养液乳酸脱氢酶（ lactic dehydrogenase，LDH）、细胞内烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（ nicotinamide adenine dinucleotide phos－phate，NADPH）氧化酶、超氧化物歧化酶（ superoxide dismutase，SOD）活性以及活性氧簇（ reactive oxygen species， ROS）和丙二醛（ malondialdehyde，MDA）水平，以评价细胞膜完整性和氧化应激反应。采用免疫印迹技术检测自噬标志分子beclin－1和微管相关蛋白1轻链3－II（ microtubule－associated protein 1 light chain 3－II，LC3－II）表达变化。结果：ox－LDL诱导巨噬细胞自噬反应，表现为beclin－1和LC3－II上调；与自噬抑制剂3－MA相似，抗CD36单抗可显著抑制ox－LDL所诱导的LC3－II和beclin－1表达。抗CD36单抗明显抑制ox－LDL所诱导的氧化应激，包括抑制NAD－PH氧化酶活性和ROS、MDA水平以及升高SOD活性，其作用与NADPH氧化酶抑制剂DPI相似。另外，DPI显著抑制ox－LDL所诱导的beclin－1和LC3－II表达，且ox－LDL所诱导的细胞活力降低和LDH漏出可被3－MA促进并可被自噬诱导剂雷帕霉素拮抗。结论：ox－LDL可诱导巨噬细胞自噬，其机制可能与CD36介导ox－LDL摄取进而触发的氧化应激有关，且一定程度的自噬可减轻ox－LDL所诱导的巨噬细胞损伤。
