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冬凌草甲素促进骨肉瘤细胞143B凋亡及其可能机制
目的 研究冬凌草甲素(oridonin,ORI)对人骨肉瘤细胞株增殖抑制和凋亡诱导作用的分子机制.方法 以结晶紫染色和Western blot检测ORI对143B细胞增殖的抑制作用,Annexin V-EGFP染色法和Western blot检测ORI对143B细胞凋亡的促进作用;RT-PCR和Western blot检测ORI对143B细胞内Wnt/β-catenin信号的影响;沉默或过表达β-catenin后,结晶紫染色分析ORI对143B细胞增殖的抑制作用的变化.结果 ORI能够抑制143B细胞株增殖,并诱导其凋亡(P＜0.05);呈浓度依赖性抑制143B细胞PCNA的表达,同时促进其Caspase3、Bad的表达;能够抑制143B细胞内Wnt/β-catenin信号的表达,沉默或过表达β-catenin后则可以相应地促进或抑制143B细胞的凋亡(P＜0.05).结论 ORI能够浓度依赖性抑制143B骨肉瘤细胞株增殖并诱导其凋亡,可能与ORI能够抑制其Wnt/β-catenin信号转导有关.
关键词： 冬凌草甲素 骨肉瘤 增殖 凋亡 Wnt/β-catenin -
SOX7对胃癌MKN45细胞株体外迁移侵袭的影响
目的 探讨转录调节因子SOX7对人胃癌MKN45细胞株体外迁移侵袭能力的影响.方法 以人胃癌MKN45细胞株作为研究对象,用脂质体介导转染pIRES2-EGFP-SOX7重组质粒并建立稳定过表达SOX7的MKN45细胞株,用Real-time PCR和Western blot验证SOX7过表达的情况,并检测转染前后MKN45细胞增殖和侵袭能力的变化,并用Western blot检测Wnt/β-catenin信号通路下游关键因子MMP-9的表达情况.结果 Real-time PCR和Western blot证实转染后的MKN45细胞SOX7表达明显上调,转染组较对照组增殖和侵袭能力明显下降,且Wnt/β-catenin信号通路下游关键因子MMP-9表达明显下调.结论 SOX7在体外可以有效抑制人胃癌MKN45细胞株的增殖和侵袭,其机制可能是通过负性调控Wnt/β-catenin信号通路引起的.
关键词： 胃癌 SOX7 MKN45 Wnt/β-catenin 侵袭转移 -
Apaf-1通过wnt/β-catenin信号通路调控肝癌的机制研究
目的 研究Apaf-1基因在wnt/β-catenin信号通路中的作用及在肝癌细胞中的调控表达机制.方法 通过TOP-flash实验验证Apaf-1基因在wnt/β-catenin信号通路中调控作用机制;采用实时定量PCR方法检测各种肝癌细胞株(HepG2、H HCC、HB611)及正常肝细胞株(LO2)中Apaf-1基因的表达量;构建Apaf-1 RNA干扰质粒,转染到HepG2中并检测转染效率,检测相关基因及蛋白表达.结果 TOPflash实验发现Apaf-1可以抑制wnt/β-catenin信号通路,并且这种抑制作用具有剂量依赖效应;在肝癌细胞株中,Apaf-1表达量较正常肝细胞表达量降低,且在HepG2细胞株中表达量低;在肝癌细胞株(HepG2)中RNA干扰Apaf-1基因,Apaf-1基因的的表达量显著降低,wnt信号通路下游基因及蛋白(β-catenin、Cyclin A、CDK2、wnt5a、STAT3、EGFR、APC)的表达量均显著性升高或降低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 Apaf-1基因通过wnt/β-catenin信号通路在肝癌细胞的生成过程中具有重要功能.
关键词： 肝肿瘤 信号传导 Apaf-1 Wnt/β-catenin -
鸦胆子油联合卡培他滨通过抑制Wnt/β-catenin信号通路诱导人结直肠癌细胞周期阻滞和增殖抑制
目的:探讨鸦胆子油(Brucea javanica oil,BJO)和卡培他滨(Capecitabine,Cap)合用对体外培养的人结直肠癌LOVO和HT29细胞周期和增殖及对Wnt/β-catenin信号通路的影响.方法:以CCK-8比色法,检测不同浓度的鸦胆子油(0.0625、0.125、0.25、0.50和1.00mg/ml)、卡培他滨(0.025、0.050、0.100、0.200、0.400μM)作用不同时间(2h、12h、24h和48h)以及单独、联合应用对LOVO和HT29细胞增殖能力影响;PI染色分析鸦胆子油、卡培他滨以及联合应用对细胞周期的影响;免疫印迹法检测结直肠癌细胞系(SW620、LOVO、LS174T、HT29和SW116)和人正常结直肠粘膜细胞系,以及鸦胆子油、卡培他滨单用及合用对细胞p-catenin和Wnt3a蛋白的表达影响;实时荧光定量PCR法检测结直肠癌细胞系(SW620、LOVO、LS174T、HT29和SW116)和人正常结直肠粘膜细胞系,鸦胆子油、卡培他滨单用及合用对细胞Wnt3a、β-catenin及其下游CyclinD1和c-Myc mRNA含量的影响.结果:结直肠癌细胞系(SW620、LOVO、LS174T、HT29和SW116)中β-catenin蛋白和mRNA含量均明显高于正常结直肠上皮细胞系;0.25、0.50和1.00 mg/ml鸦胆子油作用12h(分别为:93.1％,90.8％和90.5％),24h(分别为:76.7％,71.1％和72.7％)可明显抑制LOVO细胞生长,且呈现时间和剂量依赖性的变化,同时抑制HT29细胞,卡培他滨与鸦胆子油作用相同;0.125、0.25、0.50和1.00mg/ml的鸦胆子油联合0.4μM卡培他滨比单独卡培他滨作用结直肠癌细胞系LOVO和HT29的细胞增殖率明显较低,且具有剂量依赖性,分别为:对LOVO分别为70.9％、67.0％、61.3％和55.7％;对HT29分别为70.1％、58.1％、48.3％和40.4％;1.00 mg/ml鸦胆子油和0.4 μM卡培他滨合用于LOVO和HT29细胞48 h的增殖抑制率为55.7％和40.4％,明显低于单独使用0.4μM卡培他滨(72.5％和55.1％);DAPI染色证实,合用1.00mg/ml的鸦胆子油联合0.4μM卡培他滨比单独鸦胆子油和卡培他滨作用结直肠癌细胞系LO-VO和HT29增殖抑制作用更强;联合使用明显增加两种细胞G1/G0期细胞数量,同时增加G2/M细胞数量;再者,联合使用明显抑制细胞Wnt3a、β-catenin蛋白和mRNA及其下游CyclinD1和c-Myc mRNA含量表达.结论:鸦胆子油和卡培他滨合用可抑制结直肠癌细胞增殖,促进凋亡,该作用可能是通过抑制Wnt/β-catenin信号通路和细胞周期阻滞实现的.
关键词： 鸦胆子油 卡培他滨 结直肠癌 Wnt/β-catenin 细胞增殖 -
干扰IL-8表达对乳腺癌细胞侵袭、迁移能力的影响
目的 探究IL-8对乳腺癌MDA-MB-231细胞生物学特性的影响以及作用机制.方法 将siRNA IL-8转染至乳腺癌细胞中, 实验分为空白对照组、阴性对照组、siRNA1 IL-8组、siRNA2 IL-8组.噻唑蓝 (MTT) 实验观察干扰IL-8基因表达对细胞活力的影响, Transwell小室法检测细胞侵袭、迁移能力的变化, 采用荧光定量PCR (RT-PCR) 和酶联免疫吸附测定法 (ELISA) 检测转染后IL-8 mRNA和蛋白水平, 蛋白质印迹法 (Western blot) 法检测Wnt/β-catenin信号通路的变化.结果 与空白对照组相比, siRNA1 IL-8组、siRNA2 IL-8组乳腺癌细胞中IL-8 mRNA和蛋白表达量显著下降 (P＜0.05);siRNA2 IL-8组细胞中IL-8 mRNA和蛋白水平较siRNA1 IL-8组显著下调 (P＜0.05), 表明siRNA2 IL-8的干扰效果较强, 因此用于后续实验.干扰IL-8表达对抑制乳腺癌细胞的活力无显著影响, 抑制其侵袭、迁移能力 (P＜0.05), 细胞中β-catenin、MMP-2、MMP-9的蛋白水平显著降低 (P＜0.05) .结论 干扰IL-8表达可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路从而抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭、迁移能力.
关键词： IL-8 侵袭 乳腺癌 Wnt/β-catenin -
Wnt/β-catenin及NF-κB信号通路与椎间盘退变的研究进展
目的 综述Wnt/β-catenin及NF-κB信号通路在椎间盘退变过程中作用机制的研究进展. 方法 查阅Wnt/β-catenin及NF-κB信号通路在椎间盘退变过程中作用的相关文献,并进行分析总结. 结果 Wnt/β-catenin及NF-κB信号通路在椎间盘退变过程中均被激活,且存在相互作用,但是它们在椎间盘退变过程中的具体作用机制以及相互作用的中间介质尚不清楚. 结论 Wnt/β-catenin及NF-κB信号通路在椎间盘退变过程中的作用仍需深入研究.
关键词： Wnt/β-catenin NF-κB 椎间盘退变 信号通路 -
Wnt5a在肥胖合并肝细胞癌中表达的初步研究
目的 探讨肥胖合并肝细胞癌中Wnt5a和β-连环蛋白(β-catenin)的表达情况.方法 6周龄C57BL/6J小鼠分别给予普通饲料和高脂饲料喂养至14周龄(共8周),肥胖模型造模成功后采用尾静脉注射法将Hepa1-6肝癌细胞株(对照组注射生理盐水)分别接种于体质量正常小鼠和肥胖小鼠,18周龄时处死小鼠,眼眶取血分析相关血清学指标,麻醉下取肝组织后HE染色观察肝脏脂肪变性和肝细胞癌定植情况,免疫组化染色观察Wnt5a和β-catenin的表达情况.结果 18周龄时,高脂饲料喂养的肥胖小鼠肝脏细胞发生脂肪变性;接种肝癌细胞、体质量正常和肥胖小鼠肝组织中均查见肿瘤细胞团,在接种肝癌细胞的肥胖小鼠中可见肝组织灶状坏死.不同处理组小鼠血清总蛋白、天冬氨酸氨基转移酶、谷丙转氨酶、胆固醇和甲胎蛋白差异均有统计学意义(P＜0.05).免疫组化染色结果显示,Wnt5a相对表达量为正常肝组织＞肥胖小鼠肝组织＞接种肝癌细胞后的体质量正常小鼠肝组织＞接种肝癌细胞后的肥胖小鼠肝组织(P＜0.05);β-catenin的相对表达量为接种肝癌细胞后的肥胖小鼠肝组织＞肥胖小鼠肝组织和接种肝癌细胞后的体质量正常小鼠肝组织＞正常肝组织(P＜0.05).结论 在肥胖小鼠中Wnt5a的表达下调,β-catenin异常蓄积,可能与肝细胞癌的形成和进展密切相关.
关键词： 肥胖 肝细胞癌 Wnt5a Wnt/β-catenin -
Wnt/β-catenin信号通路在类风湿关节炎中的作用机制及研究进展
类风湿关节炎(RA)是一种以全身小关节为主要靶器官,以血管翳和滑膜炎为主要病理改变,引起多系统损害的自身免疫性疾病,常导致关节畸形甚至残疾,至今其发病机制尚不完全明确.近年来Wnt/β-catenin信号通路在RA发生发展过程中的作用逐渐被证实,对炎症、软骨代谢和骨平衡等方面起着重要的调控作用.这将为RA发病机制的深入研究提供新的思路,并为RA的防治及药物研究提供新靶点.
关键词： 类风湿关节炎 Wnt/β-catenin 综述 -
芦丁对大鼠脑缺血性再灌注损伤的保护作用
目的 探讨芦丁对脑缺血再灌注损伤的作用及机制.方法 30只SD大鼠随机分为3组.模型组和芦丁组采用线栓法构建大脑中动脉局灶缺血(1.5 h)再灌注损伤模型,芦丁组在缺血前15 min腹腔注射芦丁(10 mg/kg),模型组腹腔注射等量生理盐水.术后24 h处死大鼠,收集脑组织和血清,HE染色观察脑组织病理形态学变化,ELISA检测和RT-PCR检测脑组织促炎症细胞因子TNF-α,IL-1β和IL-8的表达变化,Western Blot检测脑组织中Wnt,β-catenin,cyclin D 1和survivin的表达变化.结果 芦丁可减轻脑缺血再灌注损伤大鼠的脑组织病理形态学变化,Wnt和β-catenin的表达和促炎症细胞因子TNF-α,IL1β和IL-8表达(P＜0.05).结论 芦丁可通过抑制Wnt/β-catenin信号途径介导的炎性反应而减轻脑缺血再灌注损伤.
关键词： 芦丁 脑缺血再灌注损伤 促炎症细胞因子 Wnt/β-catenin -
高血糖通过HBP途径增加 SD大鼠子宫内膜细胞内β-catenin稳定性
目的：探讨高血糖通过HBP途径增加子宫内膜细胞内β-catenin稳定性的相关机制。方法50只SD雌性大鼠随机分为正常对照组、禁食组、高糖高脂组、葡萄糖胺组和葡萄糖组。高糖高脂组给予高糖高脂饲料喂养，其他组普通饲料喂养。8周后将高糖高脂组和正常对照组大鼠处死；禁食组禁食24h后处死；葡萄糖胺组禁食24h后给予葡萄糖胺2．50g／kg灌胃，3h后处死；葡萄糖组禁食24 h后给予葡萄糖5 g／kg灌胃，3 h后处死。分别取各组大鼠子宫内膜组织，检测相关蛋白和基因表达水平。结果 HSHF组和NC组相比，各饲养周空腹血糖水平均明显升高（t值2．34～2．78，均P＜0．05）。 GLU组和FASTING组相比，血糖水平明显升高（t＝3．46，P＜0．05），而GLN组和FASTING组相比血糖水平无统计学差异（t＝0．84，P＞0．05）。 Western blot检测结果相对表达量分析显示， GLN组和GLU组子宫内膜组织内β-catenin、O-GlcNAc表达量均明显高于FASTING组（ t值3．44～5．08，均P＜0．05），而GLN组和GLU组之间β-catenin、O-GlcNAc表达量均无统计学差异（t值分别为0．75、0．66，均P＞0．05）。 RT-PCR检测HSHF组Ctnnb1表达水平与NC组相比无统计学差异（t ＝0．43，P＞0．05），而β-catenin特异性靶基因CyclinD1和Axin2表达水平HSHF组明显高于NC组（t值分别为4．48、5．26，均P＜0．05）。结论高血糖能够通过HBP途径，使β-catenin的O-GlcNAc化增加，从而增加其稳定性，使进入细胞核内的β-catenin增多，持续作用于下游靶基因引起细胞异常增殖分化。
关键词： 高血糖 内膜癌 Wnt/β-catenin O-GlcNAc -
Wnt/β-catenin信号因子在HepG2以及L02细胞中的表达
目的:比较Wnt/β-catenin信号分子在HepG2和L02细胞中的表达,探讨Wnt/β-catenin信号转导通路在肝癌发生中的作用机制,为肝癌的防治提供新的思路.方法:选取Wnt/β-catenin信号转导通路中上下游关键因子Wnt1、Wnt4、β-catenin、cyclin D1以及c-myc等,应用RT-PCR的方法观察他们在正常肝脏L02细胞和肝癌HepG2细胞中的转录水平.用免疫细胞化学染色方法和Western blot检测研究Wnt/β-catenin信号转导通路中关键的成员β-catenin在上述2个细胞株中的定位和定量表达.结果:在正常的L02肝细胞中,用RT-PCR的方法未检测到Wnt1、Wnt4、cyclin D1以及c-myc的mRNA转录,只有β-catenin的基因被转录表达.同时用免疫细胞化学染色观察到β-catenin在L02细胞膜处存在表达.而在HepG2肿瘤细胞中,不仅检测到β-catenin的基因转录,同时也检测到Wnt1、cyclin D1以及c-myc的mRNA转录,只有Wnt4未转录.用免疫细胞化学的方法观察β-catenin在肿瘤细胞中的表达明显增强,表现为胞膜着色减弱而胞质甚至是胞核的阳性染色.采用Western blot检测也验证了β-catenin蛋白在肿瘤细胞中的表达水平明显高于正常细胞.结论:Wnt/β-catenin信号转导通路在人的肝癌细胞HepG2中存在异常活性,Wnt1可能是导致信号通路激活的始动因素之一.
关键词： Wnt/β-catenin 信号转导通路 肝癌 HepG2 -
Wnt/β-catenin信号通路在实验性大鼠肝癌形成过程中的作用
目的: 探讨Wnt/β-catenin信号转导通路与肿瘤发生的关系,为肝癌的防治提供新的思路.方法: 选取Wnt/β-catenin信号转导通路中上下游关键因子wnt1、β-catenin、APC、cyclin D1以及c-myc 等,应用RT-PCR法观察它们在正常肝脏,不典型增生肝脏和肝癌组织中的转录水平.用免疫组化染色法研究β-catenin、APC和cyclin D1等3个因子有无表达.结果: 在正常肝脏中,用RT-PCR 未检测到wnt1、cyclin D1以及c-myc的mRNA转录,免疫组化染色也只观察到β-catenin在细胞膜处有比较弱的表达.诱癌14周后,在发生不典型增生的肝组织中,检测到β-catenin、APC和cyclin D1 3个基因的转录.通过免疫组化染色也观察到β-catenin蛋白在胞质中的积累,APC和cyclin D1在部分细胞中出现表达.诱癌16周后,在肝癌组织中,除wnt1 mRNA外,其他几个因子的mRNA都有转录,免疫组化也印证了上述各个发生转录的因子在蛋白水平都有不同程度的表达.结论: Wnt/β-catenin信号转导通路在大鼠的肝癌形成过程中被激活,其可能是实验性肝癌发生的原因之一.
关键词： Wnt/β-catenin 信号转导通路 肝癌发生 大鼠 -
水飞蓟宾通过Wnt/β-catenin通路抑制肾癌细胞干细胞特性
目的 研究黄酮类化合物水飞蓟宾对肾癌细胞干细胞特性的影响及其分子机制.方法 采用肾癌细胞系786-O和ACHN作为体外研究对象,使用不同浓度的水飞蓟宾处理肾癌细胞,应用平板克隆实验检测水飞蓟宾对肾癌细胞平板克隆形成能力影响;使用Tumorsphere实验评价水飞蓟宾处理后肾癌细胞干细胞成球能力变化;应用蛋白免疫印迹方法测定水飞蓟宾处理后肾癌细胞CD44、P63、GSK3β/p-GSK3β和p-catenin蛋白水平改变.结果 水飞蓟宾可显著下调肾癌细胞干细胞标志物CD44、P63蛋白的表达水平,且存在浓度依赖性和时间依赖性;此外,水飞蓟宾还可抑制肾癌细胞平板克隆形成以及肾癌干细胞肿瘤球形成能力;在分子机制上,水飞蓟宾可下调p-GSK3β和β-catenin蛋白的表达.结论 水飞蓟宾可能通过Wnt/β-catenin信号通路抑制肾癌细胞干细胞特性.
关键词： 水飞蓟宾 肾癌 干细胞 Wnt/β-catenin -
NOB1调控Wnt/β-catenin信号通路影响膀胱癌细胞凋亡的实验研究
目的 探讨酵母基因Noblp人类同源基因(NOB1)对膀胱癌细胞凋亡的影响及机制.方法 膀胱癌BIU-87细胞转染NOB1小干扰RNA(NOB1 siRNA)及对照siRNA,同时以不做转染的BIU-87细胞作为对照,qRT PCR和Western blot检测细胞中NOB1水平,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测细胞中Wnt/β-catenin关键蛋白β-连环蛋白(β-catenin)、细胞周期蛋白D1 (Cyclin D1)水平和凋亡相关蛋白活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)水平.用Wnt/β-catenin信号通路抑制剂处理转染NOB1 siRNA后的BIU-87细胞,流式细胞术检测细胞凋亡.结果 转染NOB1 siRNA后的细胞中NOB1 mRNA水平和蛋白水平均明显下降,细胞凋亡率升高,细胞中Cleaved Caspase-3水平也升高,β-catenin、cyclin D1水平下降,与不做转染的细胞相比差异具有统计学意义(P＜0.05).转染对照siRNA的细胞中NOB1、Cleaved Caspase-3、β-catenin、cyclinD1水平没有明显变化,细胞凋亡率也没有明显变化,与不做转染的细胞相比差异没有统计学意义(P＞0.05).转染NOB1siRNA的细胞经Wnt/β-catenin信号通路抑制剂处理后凋亡率升高,Cleaved Caspase-3水平也升高.结论 下调NOB1通过抑制Wnt/β-catenin信号通路促进膀胱癌细胞凋亡.
关键词： 膀胱癌 凋亡 NOB1 Wnt/β-catenin Caspase-3 -
β-catenin参与肿瘤干细胞形成和增殖转移的研究进展
Catenin是一类具有相似结构的胞浆内糖蛋白家族,根据分子量不同分为α、β、γ及p120ctn四个亚型,初是因其与跨膜黏附分子E-cad的胞质段连接而被发现和命名.β-catenin(β-连环素)是一种由位于染色体3p21-22的CTNNB1基因编码的具有介导细胞间黏附及信号转导等多重功能的重要分子,其通过与多种蛋白质结合调控细胞的增殖和分化,在胚胎发育和肿瘤发生中发挥关键作用.近年来干细胞是肿瘤研究领域的热点问题,作为Wnt信号转导通路枢纽分子β-catenin的异常表达与肿瘤的发生、发展有关,因此β-catenin在肿瘤干细胞中的作用也引起科研人员的密切关注.
关键词： Wnt/β-catenin 肿瘤干细胞 细胞增殖 -
氧化苦参碱对人乳腺癌MCF-7细胞的生长抑制作用及其机制研究
目的:了解中药苦参的有效成分氧化苦参碱对人乳腺癌细胞系MCF-7肿瘤细胞的增殖及其相关的调控机制的干预作用.方法:以乳腺癌细胞株(MCF-7)为研究对象,利用MTT法检测氧化苦参碱的体外杀伤活性;RT-PCR法、Western blot法、流式细胞技术、细胞免疫荧光计数检测基因、蛋白表达水平,对其相关调控基因的表达水平进行检测.结果:氧化苦参碱对体外培养的MCF-7细胞的生长有明显的抑制作用;可以诱导乳腺癌 MCF-7细胞凋亡,而且这种生长抑制及促进凋亡的作用可能是通过抑制Wnt/β-catenin信号转导通路的活性来实现.结论:氧化苦参碱可以通过抑制Wnt/β-catenin信号转导通路的活性来抑制人乳腺癌MCF-7细胞系的增殖,促进其凋亡.
关键词： 氧化苦参碱 MCF-7 增殖 凋亡 Wnt/β-catenin -
卵巢良恶性肿瘤中TCF4和E－cadherin的表达及临床意义
目的：探讨 TCF4和 E －cadherin 在卵巢癌中的表达意义。方法：采用免疫组化 SP 法检测19例卵巢良性囊腺瘤、19例交界性囊腺瘤、50例恶性肿瘤中 TCF4和 E －cadherin 的表达。结果：TCF4在卵巢癌组织、交界性肿瘤中表达明显高于良性囊腺瘤组织（P ＜0．05），阳性率分别为76％、63．2％、31．6％。E －cadherin在卵巢良性、交界性肿瘤、卵巢癌中阳性率分别为78．9％、52．6％、36．0％。E －cadherin 在卵巢交界性肿瘤及卵巢癌组织中表达明显低于良性肿瘤组织（P ＜0．05）。E －cadherin 及 TCF4表达与卵巢癌患者年龄无关（P＞0．05），TCF4表达与卵巢癌病理学分级、FIGO 分期有关（P ＜0．05）。结论：TCF4在卵巢癌中表达高于卵巢良性肿瘤和交界性肿瘤，同时与卵巢癌病理学分级、FIGO 分期成正相关。而 E －cadherin 在卵巢癌中表达低于卵巢良性肿瘤和交界性肿瘤，同时与卵巢癌病理学分级、FIGO 分期负相关。
关键词： 卵巢癌 Wnt/β-catenin TCF4 E -cadherin -
Wnt信号通路在压力调控骨髓间充质干细胞膜片成软骨响应中的作用
目的:研究经典(Wnt/β-catenin,Wnt)信号通路在压力调控骨髓间充质干细胞(bone marrow-derived mesenchymal stem cells,BMSCs)膜片成软骨响应中的作用.方法:体外分离、培养兔BMSCs,经鉴定后用含有抗坏血酸的培养基构建BMSCs细胞膜片,并将其随机分2组;对照组在常规条件下培养4 d,实验组施以120 KPa静态压力,1h/d、连续4d.然后通过Western Blot检测经典Wnt信号通路相关蛋白的表达水平;Real-time PCR检测Wnt信号通路相关基因和成软骨基因的表达水平.结果:兔BMSCs传代后生长状态稳定,呈梭形;成骨成脂分化诱导实验结果阳性;Western Blot检测显示,实验组β-catenin和p-GSK3β蛋白表达水平均明显高于对照组(P<0.05);Real-time PCR检测显示,实验组经典Wnt信号通路相关基因β-catenin、p-GSK3β mRNA以及成软骨相关基因Col-Ⅱ、Sox-9、Aggrecan mRNA的表达水平均明显高于对照组(P<0.05).结论:Wnt/β-catenin信号通路介导兔BMSCs膜片在一定的压力刺激下的成软骨响应过程.
关键词： 骨髓间充质干细胞膜片 压力 Wnt/β-catenin 软骨形成 -
HIPPO-YAP/TAZ信号通路与干细胞分化相关信号通路交叉作用的研究进展
调控干细胞的增殖与分化对维持人体组织的稳态至关重要.HIPPO信号通路的成分和功能在哺乳动物中高度保守,在物种的进化过程中极少发生突变,且其成分具有高度的同源性.其特性是在组织发育和再生过程中发挥调节细胞增殖和分化的作用.HIPPO-YAP/TAZ通路可以调控间充质干细胞的增殖及多向分化功能,且调控并非该通路独立完成的,而是部分依赖于与其他信号通路之间的级联反应.HIPPO信号通路与转化生长因子超家族TGF-β/Smads、经典Wnt/β-链蛋白(β-Catenin)及EGFR/丝裂原相关蛋白激酶(MAPK)等信号转导通路发生级联反应,进而调节间充质干细胞的增殖、组织生长及多向分化.本文回顾HIPPO信号通路的调控机制,对间充质干细胞生物学、组织再生过程中发挥的重要作用作一综述.
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抑制CXCR4基因调控Wnt/β-catenin通路在卵巢癌转移中的作用
目的 研究趋化因子受体4 (chemokine receptor 4,CXCR4)在卵巢癌转移中的作用及其机制.方法 采用Real-time PCR和Western blot法检测正常卵巢组织、卵巢癌组织和卵巢癌细胞株(CAOV3) CXCR4 mRNA和蛋白的表达以及CXCR4 shRNA转染后卵巢癌CAOV3中CXCR4 mRNA和蛋白的表达;MTT法检测CXCR4 shRNA对卵巢癌细胞增殖的影响;通过Transwell侵袭实验检测CXCR4基因沉默对卵巢癌细胞侵袭性的作用;Real-time PCR法检测CXCR4 shRNA转染后Wnt/β-catenin通路相关基因和EMT相关基因的mRNA表达.结果 CXCR4在卵巢癌组织和CAOV3细胞中的表达明显高于正常卵巢组织;转染CXCR4 shRNA可有效抑制CAOV3细胞中CXCR4mRNA和蛋白表达;CXCR4基因沉默可有效抑制细胞增殖、降低细胞侵袭性;同时明显抑制Wnt/β-catenin通路相关基因CTNNBI、C-MYC、MMP-9和CD44以及EMT相关基因SLUG和Vimentin的mRNA表达.结论 CXCR4通过调控Wnt/β-catenin通路影响卵巢癌的转移.
