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HIV初筛实验室ELISA试验的注意事项
目前实验室作为HIV初筛检测主要是HIV病毒抗体检测.由于它的灵敏度和特异性高,而且方法相对简单、成熟,更重要的是HIV抗体在病毒感染后,除早期短暂的窗口期外的整个生命期间长期稳定地存在并可被检测到.在HIV初筛实验室,ELISA是常用的抗体筛查方法.ELISA是一种免疫测定,通常采用双抗原夹心法.其原理为预包被高纯度重组HIV(1+2型)抗原,可与样品中抗HIV抗体反应,同时加入HRP标记HIV(1+2型)抗原,然后用TMB底物作用显色.通过酶标仪检测吸光度(OD值)从而判定样品中HIV抗体的存在与否.
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艾滋病实验室工作探讨
ELISA是指酶联免疫吸附试验,检测HIV抗体时可使用血液、唾液、尿液样品,HIV抗原或抗体包被于固相载体,加入待检样品和酶标记的HIV抗原或抗体,加底物显色,用酶标仪测定结果,试验的阴性和阳性对照必须符合试剂盒规定,经过6年的HIV抗体检测工作,总结体会如下.
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抗菌织品抑菌效果检测及其方法研究
建立检测抗菌织品抑菌效果的方法.采用酶标仪检测液体培养基的吸光度值,计算细菌生长抑制率,评价抗菌纺织品抑菌效果.结果,20份抗菌织品对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑菌率为3%~99%;1、5和7号抗菌纺织品对金黄色葡萄球菌抑菌率达到80%以上.所有20种抗菌纺织品对大肠杆菌均无明显抑菌作用.结论:用酶标仪检测细菌浓度是抗菌纺织品抑菌效果检测的一种有效方法.
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血站物品表面HBsAg、HIV、HCV、梅毒污染调查
为了解血站物品表面经血传染病原体污染情况,于2005年我们对血站使用的全自动加样仪样台、酶标仪键盘、血液混合仪、试管架、高频热合机、离心机孔、称血仪、发血工作台面、离心机杯、血库冰箱、采血车等,用浸有无菌生理盐水的棉拭子涂抹采样10 cm2,将采样后的棉拭头剪入盛有2 ml无菌生理盐水的试管中.经振荡后,检测HBsAg、抗-HIV、抗-HCV、梅毒抗体.检测方法是将标本经离心(3000 r/min)3 min,取上清液1 ml,再离心(15000 r/min)10 min,取沉淀液用ELISA法检测.
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酶标仪在艾滋病血液检验上的应用探讨
目的:探究在血液检验中酶标仪的具体应用.方法:在临床化学检验规范操作流程的标准上,进行相应工作程序的设置,完成采血、检测、结果打印、超微量化学检验的全部过程,对酶标仪在血液检验中的具体应用效果进行分析.结果:以艾滋病为例,对三份血清进行批内、批间20次的重复检测,酶标仪批内精密度及批间精密度均显著高于血液分析仪(P<0.05);以艾滋病血清作为试验标本,结果表明,线性范围临界值为160卡门单位,当艾滋病活性达到上述标准后可通过等渗盐水将其稀释,并完成检测;在三份已确认的艾滋病单位中加入艾滋病,混合后按照艾滋病方法进行检测,结果表明酶标仪的标本平均回收率为98.2%,显著高于血液分析仪(P<0.05);在一份艾滋病血清标本进行NaOH的添加,浓度为0.4mmol/L,在显色后的不同时间进行比色,结果表明,10~90min之间显色较为稳定,显色10min后比色情况较好.结论:应用酶标仪对艾滋病的血液检验进行测定,具有准确、微量、简便、稳定、快速等优势,检验效果理想、效率高、成本低、消耗少.
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三七总皂苷联合奥扎格雷钠对血栓素A2合成酶的抑制作用及相互影响
目的:探讨单独使用三七总皂苷、奥扎格雷钠及两者合用(5∶1,2:1,1∶1)后对大鼠血清中血栓素A2(TXA2)含量的影响.方法:分别对各组大鼠尾静脉注射三七总皂苷、奥扎格雷钠及两者合用药液后于不同时间点大鼠眼眶取血,加入大鼠TXA2酶联免疫分析试剂盒,采用酶标仪测定大鼠血清中TXA2含量.结果:注射三七总皂苷、奥扎格雷钠组及合用各组大鼠血清中TXA2含量均有所下降(P<0.05),且合用组(5∶1)和(2∶1)效果优于合用组(1∶1);另外奥扎格雷钠组在4h时TXA2的含量已恢复到与正常组一样的水平.结论:三七总皂苷对TXA2酶有抑制作用,三七总皂苷与奥扎格雷钠不同的配比亦对TXA2酶有抑制作用,两者联用后可持续平稳的发挥抑制作用,提高疗效,降低用药风险.
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承德地区785例过敏性鼻炎患者吸入性过敏原检测结果与分析
目的 分析过敏性鼻炎患者血清吸入性过敏原总IgE和血清特异性IgE浓度,为临床预防和诊治提供科学依据.方法 采用过敏原特异性抗体IgE检测试剂盒和酶标仪,对吸入性过敏原进行检测.结果 785例过敏性鼻炎患者血清过敏原总IgE皆为阳性(100%),血清特异性IgE阳性率以户尘螨为高(94.27%),其次为:春季花粉组合(60.64%)、夏秋季花粉组合(53.50%)、短豚草(35.29%)、霉菌组合(30.45%)、狗毛皮屑(6.75%).结论 承德地区过敏性鼻炎患者应加强对户尘螨、春季花粉组合、夏秋季花粉组合等吸入性过敏原的防护,居室环境保持清洁、大限度减少与过敏原的接触.
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乙肝表面抗原低吸光度值检测结果复查的意义
乙肝表面抗原(HbsAg)的检测临床上应用广泛的是酶联免疫吸附(ELISA)双抗体夹心法,检查结果均用酶标仪判读,结果以样本吸光度值与阴性对照吸光度值(后者不足0.05按0.05计)之比(S/N)《2.10时定义为阴性,S/N≥2.10为阳性[1].在实际操作中经常会出现一些低吸光度值的检测结果,按试剂说明书的删除值可判定为阳性结果.
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酶标仪性能评价与鉴定的基本方法及其初步应用
近年来,酶标仪在临床实验室中的应用越来越普及[1],而国内外有关其性能评价与鉴定方法的报道尚不多见;为了保证酶标仪检测结果的准确性和可靠性,我们对不同厂家及型号的仪器经过系统论证,初步建立了一套酶标仪性能评价指标与鉴定的方法,同时应用该法对美国Bio-Rad 550型酶标仪进行了评价,结果满意,现将评价方法和应用结果报告如下:
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酶联免疫吸附试验检测乙型肝炎病毒血清标志物五项的结果模式分析
随着免疫技术的不断进步,检测乙型肝炎病毒标志物的方法越来越多,化学发光法( chemiluminescent microparticle immunoassay,CMIA)在临床检测中的地位越来越突出.酶联免疫吸附试验( enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)由于灵敏度和特异性较高,测定下限进口试剂可达0.2 ng/ml,国产试剂目前也能达到0.5 ng/ml[1].并且酶联免疫吸附试验操作简单、方便、快速,适合批量操作,试验的成本低,只需要一台酶标仪、一台洗板机,一把可调节的定量加样枪,基本上就能够满足试验的要求,因此已经被临床和患者接受.
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抑制KAI1诱导的自噬对胰腺癌MiaPaCa-2细胞增殖及凋亡的影响
细胞自噬是一种重要的促细胞生存途径,同时也是一种不同于凋亡和坏死的死亡方式.KAI1是缺氧目的基因,体内缺氧时亦可诱导细胞自噬[1].我们前期报道了KAI1诱导MiaPaCa-2自噬,并增加细胞的存活[2],本研究进一步探讨抑制KAI1诱导的自噬对该细胞增殖及凋亡的影响.一、材料与方法1.CCK-8检测细胞增殖:应用KAI1抑制剂3-MA预处理MiaPaCa-2细胞1h,以未处理组作为对照,应用100 MOI的Ad5-KAI1及Ad5 -null分别感染细胞,具体步骤参考我们前期报道[3].取转染细胞接种96孔板,培养0.5、1、2、3、4、5d后每孔分别加人10μl的CCK-8( Dojindo Molecular Technologies公司,日本)继续培养1h,在酶标仪(Themo,Germany)测定450 nm吸光值(A450).每组设3个复孔,实验重复3次,取均值.
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酶标仪测定戊二醛溶液含量
目的 探讨以酶标仪一次完成多样品测定的戊二醛溶液含量快速分析方法.方法 取戊二醛对照溶液及样品溶液测定光密度值,通过与已知浓度戊二醛比较,计算样品含量.结果 戊二醛含量在0.75%~2.50%,浓度与光密度存在线性关系;重复性试验:相对平均误差<2%,相对标准偏差≤2.51%;干扰试验,抗氧剂亚硝酸钠可使检验结果出现负误差,0.1%亚硝酸钠可使检验结果相对下降1.5%.结论 酶标仪群测使用中戊二醛含量方法简单,方便快捷,准确性符合院感监测要求,添加剂对检测的干扰可接受,具有很强实用性.
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U型微板法反定型试验的探讨
在以往的反定型试验中,通常采用平板法或试管法,其操作繁琐,加样量不准,肉眼判读结果缺乏一定的客观性且资料不易保存.现改用U型微板法由STR加样、酶标仪扫描、电脑判读打印全自动系统操作试验.
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CA19-9在胰腺癌诊断中的价值
近年来,随着单克隆抗体及ELISA技术的发展,CA19-9作为一种胰腺癌肿瘤标志物越来越受到重视。它对胰腺癌的定性诊断、病情监测、术后效果及早期诊断都有较大的临床意义。我们采用ELISA法检测80例正常人、52例胰腺炎患者、48例胰腺癌患者血清的CA19-9含量,现将结果报告如下。1 材料与方法1.1 试剂 由意大利SORIN生物技术公司提供。1.2 仪器 由PASTEUR公司生产的酶标仪。1.3 标本 取自正常人80例,男性42例,女性38例,年龄30~80岁。胰腺炎患者52例,男性30例,女性22例,年龄16~78岁。胰腺癌48例,男性28例,女性20例,年龄50~80岁。早空腹抽血,分离血清,-20 ℃冰箱保存待测。1.4 原理 病人血清和标准物分别与定量的抗人CA19-9抗体和酶标抗CA19-9反应,形成抗原抗体复合物,此时标记抗CA19-9的结合量与标本中的CA19-9浓度成正比。通过底物显色,酶标仪检测。根据光密度值换算成CA19-9含量。1.5 操作 见试剂盒说明书。1.6 结果 酶标仪检测,经计算机处理得到各孔的CA19-9含量。
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单双波长在生物活性测定中的比较研究
目的:通过比较研究,确定酶标仪单双波长哪个更适于生物制品活性测定实验.方法:样品通过多次实验单双波长扫描,比较得到的实验结果,进行统计分析.结果:选用双波长可以排除其他因素对结果的影响,实验结果的标准差和离散系数均较低.结论:单双波长法更适于生物活性测定实验,提高结果的准确度.
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酶标仪在加样仪中比对、性能确认的运用
目的 建立全自动加样仪仪器的比对、性能确认的可靠、简易方法.方法 利用酶标仪比色方法对全自动加样仪进行仪器的比对、性能确认,以期对全自动加样仪状态进行定期或时时监控,以避免加样过程的漏加而引起非试剂因素的漏检.结果 不同的全自动加样仪不同加样量的吸光度均值经过调液体曲线校正后,加样仪1与加样仪2加样结果较为接近.结论 避免酶联检测中因仪器因素所引发的漏检,提高设备运行效率,减少非预期的风险.
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尿中硫氰酸盐的酶标仪快速测定法
目的 建立尿中硫氰酸盐的酶标仪快速测定法.方法 尿样在微酸条件下与氯胺T、吡啶反应,其反应产物与巴比妥酸反应显红色,采用酶标仪测定,并对结果进行肌酐校正.结果 硫氰酸盐在40~800 μg/L范围内该方法线性关系良好(r=0.999 8),检出限为1.1 μg/L,平均回收率为88.9%~101.2%,RSD为5.8%~7.2%.结论 该方法简便、快速、灵敏度高,适用于职业人员尿中硫氰酸盐的测定.
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医院环境中HBsAg污染情况分析
为了解HBsAg对医院环境的污染情况,随机抽查了门诊及病房的电话听筒50份,门把手50份,病房床头柜38份,实验操作台30份,病历夹31份,浸泡器械10份,手(包括病人、陪护)36份,共计245份.用生理盐水将无菌棉签蘸湿后在物体表面反复涂抹5遍,放于盛有0.5 mL生理盐水的试管中,振荡1 min后,用ELISA法检测.使用上海科华HBsAg试剂盒,DG3022酶标仪测定,以样品OD值/阴性对照平均OD值≥2.1判定为阳性.
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酶标仪单、双波长比色测定OD值在卫检实验中的应用探讨
以HIV-Ab初筛为例,简要探讨了酶标仪单、双波长测定OD值在卫生检疫实验中的应用比较,指出应尽可能使用双波长比色,以便发现一些弱阳性的早期感染者,提高疫情疫病的检出率.
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天津经济技术开发区食品行业、公共场所行业人员体检HBsAg及HBeAg携带情况调查分析
1 检测对象与方法1.1 检测对象 天津经济技术开发区食品、餐饮行业、公共场所的从业人员.1.2 检测方法 无菌抽取静脉血5 ml~10 ml,分离血清待测.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HBsAg及HBeAg.方法及步骤严格按照试剂盒要求进行.试剂由天津市卫生防病中心推荐,结果判定严格按说明书规定.仪器:Spectra Classic酶标仪;Columbus Ⅱ型洗板机.