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酶标仪在血液检验上的应用及评价
酶联免疫吸附试验(Enzyme-Linked immunosorbent assay, ELISA)是七十年代初在酶免疫组织化学的基础上发展起来的.目前在国内血站临床试验室中,酶联免疫吸附试验已成为主要的免疫测定技术,由于大部分ELISA后以比色测定,使酶标仪成为ELISA测定的重要工具.
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砷铈催化酶标仪比色法测定尿碘
目的:用酶标仪代替分光光度计比色提高尿碘检测速度及每次检测样品量.方法:用酶标反应板条代替比色杯,多道移液器加检测试剂,用酶标仪于405 nm+630 nm双波长比色测定.结果:方法的标准曲线线性范围碘质量浓度在0~300 μg/L,标准曲线的平均相关系数为-0.9992;精密度:测定尿碘质量浓度为55.6、134.1、201.7 μg/L时,其相对标准差(RSD)分别为4.6%、3.2%、1.4%(n=6);准确度:测定碘质量浓度为64.7、231 μg/L的尿碘国家标准物质,测定结果与标准物质给定值的相对偏差(RD)分别为2.1%和-1.7%(n=6).结论:该方法的标准曲线线性关系、精密度、准确度均能满足要求,大大地提高了工作效率,减少了试剂用量,每次检测的大样品数是行标法的12倍.
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酶标仪期间核查测量不确定度的分析
测量不确定度是表征合理地赋予被测量之值的分散性,与测量结果相联系的参数[1].一切测量结果都存在着不确定度.我们对酶标仪进行期间核查时,为了考虑存在的不确定度因素,我们做了测量不确定度的评定,现将结果表述如下:
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酶标仪上丙酮酸氧化酶法测定血清ALT
血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)测定是常用肝功能试验之一,近年来,国内医院已引进大批自动生化分析仪,多采用了速率法作ALT测定.
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ELISA法快速检测食品、饲料中AFB1
黄曲毒素B1〈AFB1〉具有强烈毒性和致癌性.食品、饮料中AFB1的测定已有报道[1,2].薄层层析法操作繁杂,干扰严重,甚至可能得出错误结果,且是半定量方法.为此需建立一个灵敏可靠的检测方法.酶联免疫吸附法(ALISA)特异性极强,灵敏度高.采用直接竞争酶联免疫吸附法检测AFB1进行探讨,取得良好效果.1 实验部分1.1 仪器与试剂1.1.1 仪器酶标仪(内置450nm滤光片)或AFB1测定仪;恒温培养箱(0℃-50℃);微量振荡器;天平;50μl微量进样器及配套吸头.
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间接免疫荧光法与酶联免疫法测定狂犬病病毒抗体的比较
用IIF测定狂犬病病毒抗体费时费力,结果的判断易受主观等因素的影响.为此,我们对ⅡF与ELISA测定狂犬病病毒抗体的结果以及ELISA测定中用肉眼和用酶标仪判断结果的情况进行了比较.
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酶标仪校准方法探讨
目的:建立一种酶标仪常规校准方法.方法:配制重铬酸钾溶液,用分光光度计450 nm波长5 mm比色杯比色结果与酶标仪主波长450 nm参考波长630 nm微孔板微孔内加样高度为5 mm的比色结果进行比较,计算酶标仪的吸收度示值误差、示值稳定性、吸收度重复性、通道差异及相关性.结果:酶标仪吸收度示值误差、示值稳定性、吸收度重复性及通道差异均符合标准,且相关性良好,相关系数为0.999 787.结论:该校准方法操作简单、结果可靠,可作为实验室常规校准酶标仪的方法.
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表没食子儿茶素没食子酸酯对结肠癌HCT-8和HT29细胞株的作用及对Notch1与Notch2的基因表达的影响
表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)是茶多酚中含量高、活性强的单体,具有抗癌作用[1]。本研究旨在观察EGCG对结肠癌细胞HCT-8和HT29细胞增殖的抑制作用及对Notch1与Notch2基因的影响,探讨其抑癌机制。一、材料与方法1.噻唑蓝(MTT)比色法检测EGCG对细胞增殖的抑制作用:将细胞接种于96孔板中,将孔中添加终质量浓度为0 mg/L(对照组),10、20、35 mg/L EGCG(实验组)的完全培养基,孵育24、72 h,加入CCK-8反应液,酶标仪读数后,计算抑制率。
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聚桂醇在体外对肝癌细胞的杀伤作用
聚桂醇是一种新型硬化剂,本研究旨在观察聚桂醇对肝癌细胞的杀伤作用,现报道如下.一、材料与方法1.材料:人肝癌细胞株HepG2;聚桂醇注射液(陕西天宇制药有限公司);四氮唑盐(Sigma-aldrich);680酶标仪( Bio-rad).2.实验方法:(1)细胞株生长杀伤实验[噻唑蓝(MTT)比色法]:取对数生长期HepG2细胞,制成细胞混悬液,接种于96孔板,每孔100μl(含3000个细胞).
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不同炮制方法对黄精多糖含量的影响
目的 探究湖南本土种植及加工的鸡头黄精、多花黄精采用不同炮制方法对黄精多糖含量的影响. 方法 超声提取法提取多糖,用 Sevage 法除去蛋白,采用苯酚-硫酸法测定多糖含量.结果 鸡头黄精经二蒸二晒、四蒸四晒、七蒸七晒、九蒸九晒炮制后,多糖含量分别为7.973%、3.584%、2.845%、2.194%;多花黄精经二蒸二晒、四蒸四晒、五蒸五晒、七蒸七晒炮制后,多糖含量分别为9.602%、3.185%、2.572%、2.043%;精密度良好(RSD=0.274%)、平均回收率99.29%、试验在60 min内稳定性良好(RSD=1.36%). 结论 炮制过程蒸晒次数越多,黄精多糖含量越少.
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江西虫草多糖含量的快速检测方法研究
目的:测定江西虫草的多糖含量,并使改良后苯酚-硫酸法测定糖达到高效、准确的目标.方法:采用苯酚-硫酸法测定总糖,改良的3,5-二硝基水杨酸法测定还原糖.结果:改良后的苯酚-硫酸法测定的参数条件如下:测定波长484 nm,反应体系中80 g/L苯酚的终浓度为8%,浓硫酸的终浓度为80%,显色温度25℃,显色时间25 min.利用改良苯酚-硫酸法测定江西虫草的多糖含量为5.04%,多糖平均回收率为98.7%,RSD为1.31%,测定方法的准确度较高.结论:利用全波长酶标仪及改良后的苯酚-硫酸法测定糖法能满足中药材来源多糖制备过程中检测高通量、快速、准确的要求.
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有氧运动缓解自发性高血压大鼠肠系膜动脉的钠尿肽敏感性
目的:探讨有氧运动对自发性高血压大鼠肠系膜动脉钠尿肽敏感性的影响。方法:将自发性高血压大鼠( SHR)和与其年龄-性别匹配的正常血压WKY大鼠分组如下:4周WKY、4周SHR、16周WKY、16周SHR、16周WKY运动组和16周SHR +运动组,每组10只。运动组进行游泳有氧运动训练,生物信号采集系统测定动脉血压,微血管张力系统测定肠系膜动脉舒张功能,放免分析法检测cGMP和ANP含量,酶标仪和Western blotting分别检测PDE5表达。结果:成年(16周) SHR动脉血压明显增加,有氧运动减弱动脉血压的增加;幼年(4周)或成年SHR肠系膜动脉对ANP的血管舒张反应均明显降低,血浆ANP、cGMP水平升高, PDE5蛋白和酶活性均上升;西地那非有效抑制SHR 的PDE5活性,减弱肠系膜动脉对ANP的血管舒张反应,有氧运动训练能部分恢复肠系膜动脉对ANP的血管舒张反应;有氧运动增强SHR组PDE5的活性。结论:有氧运动缓解自发性高血压大鼠肠系膜动脉钠尿肽敏感性。
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Urotensin II诱导HepG2细胞胰岛素抵抗模型的建立及机制探讨
目的:采用Urotensin II( UII)体外诱导法建立HepG2细胞胰岛素抵抗模型,并探讨其机制。方法:采用含不同UII浓度的DMEM培养基培养HepG2细胞,后半小时与1×10-7 mol/L insulin共孵育,葡萄糖-己糖激酶法检测不同时点培养基中葡萄糖含量,以HepG2细胞蛋白进行定量,确定胰岛素抵抗佳作用浓度及时间;多功能酶标仪检测UII诱导hepG2细胞内活性氧( ROS)变化;Western blot法检测胰岛素受体结合物IRS-1及Akt蛋白的表达。结果:hepG2细胞产生胰岛素抵抗的佳作用时间为24 h,佳UII浓度为1×10-7 mol/L。与空白对照相比,UII刺激hepG2细胞后ROS增高明显( P<0.05);且UII孵育组IRS-1及Akt蛋白的表达明显降低(P<0.05),提示UII可能通过增高hepG2细胞中ROS而使hepG2细胞产生胰岛素抵抗。结论:采用UII体外诱导的方法,UII浓度为1×10-7 mol/L,作用24 h后,可建立HepG2细胞胰岛素抵抗模型,且UII可能通过诱导HepG2细胞ROS的增高而引起胰岛素抵抗。
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酶标仪远程控制系统的设计
利用串行通讯技术及VB数据库编程技巧,实现酶标仪和计算机之间的数据通讯、分析和处理.系统可对酶标仪进行远程控制,并可把接收的数据自动导入到大型关系数据库(ORACLE)中.本文以单波长远程控制测量为例,介绍酶标仪远程控制系统的测量原理.
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酶标仪快速测定血必净注射液中总糖含量
目的 建立血必净注射液中总糖的含量测定方法.方法 通过HPGPC、GC-MS法对血必净注射液中糖类成分进行了定性分析,确定以葡萄糖比果糖为19:1的混标为对照品,苯酚-硫酸为显色剂,利用酶标仪在490 nm波长处测定样品溶液吸光度,计算总糖含量.结果 对照品溶液在19.3~96.5μg线性关系良好,回归方程为:Y=0.0081X+0.0131(R2=0.9995);三个比例的加样回收率为99.0%,98.2%,97.7%,RSD分别为2.1%,0.7%,1.3%;6份样品的重复性RSD为1.1%.结论 该方法准确可靠,可操作性强,可用于血必净注射液中总糖含量的检测.
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ELISA假阴性结果原因分析
免疫学检测方法有高度的特异性及敏感性,临床上常用作某些疾病的辅助诊断及很多基础学科的研究.ELISA一步法(即待测样本与酶标记物同时加入反应系统)方便、快捷、可定性,并能通过酶标仪进行定量分析,所以是当前应用广的免疫学检测方法之一.但在ELISA一步法的检测中会偶而出现这种现象:如在AFP测定时,ELISA定性为阴性,磁酶免定量浓度很高,同时将病人的血清稀释后再用ELISA定性则为AFP阳性.而在检测HBsAg等其他项目中同样会出现这种情况,说明待测物中抗原浓度过高时,ELISA结果中出现了假阴性.为什么会发生这样的现象呢?根据我们实际工作经验,具体分析如下.
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酶标仪参数及性能检测
目的:检测Bio-Rad 3550UV型酶标仪是否仍能应用于精密的酶联免疫吸附实验(ELISA)的检测.方法:对Bio-Rad 3550UV型酶标仪的一些重要参数(滤光片精度,检测结果可重复性,线性相关性以及通道间的差异等)进行检测,同时与新型酶标仪作比较.结果:Bio-Rad 3550UV酶标仪各项重要参数均符合检测要求.结论:Bio-Rad 3550UV酶标仪仍然能应用于精密的ELISA检测.
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酶标仪双波长与单波长选择的测试对比
目的探讨双波长与单波长测试的结果差异.方法分别用双波长和单波长对酶标板进行读数,对其精确度、外环境影响、线性关系进行对比.结果双波长测试比单波长有更高的精确度,能较有效克服一些外环境的干扰,有良好的线性关系.结论尽量使用双波长检测,并加强双波长和后分光技术的认识.
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柳州市无偿献血者血液指标检测结果及分析
为了解柳州市无偿献血人群的健康状况,以便更好地开展无偿献血活动,预防和减少输血性传播疾病的发生,我们对柳州市1997年至1999年中无偿献血者ALT、HBsAg、抗_HCV、抗_HIV和梅毒检测结果进行分析。结果报告如下。 1 材料和方法 1.1调查对象1997年1月至1999年12月到我单位无偿献血者7476名,分别来自柳州市各机关、厂矿等企事业单位以及学校和部队。 1.2试剂ALT试剂及梅毒试剂由上海荣盛生物技术公司提供;HBsAg、抗_HCV试剂由上海科华生物技术公司和北京万泰生物技术公司提供;抗_HIV试剂由厦门新创生物技术公司和华美生物技术公司提供。 1.3仪器BT_224半自动生化测定仪(意大利产);DENLEYW4(英国产);BIO-RAD550酶标仪(美国产)。 1.4检测方法ALT采用赖氏法测定;HBsAg、抗_HCV、抗_HIV采用ELISA法;梅毒检测采用TRUST法。实验严格按照试剂盒说明书操作。
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6470例HBV感染者血清学标记分析
随着人们对HBV分子生物学研究的深入,已开发了不少的检测方法。但目前临床上应用的乙肝"两对半"检测,仍是HBV感染诊断和病程判断的重要依据之一。本地区为HBV感染高发区,为了解被HBV感染后的血清学标记模式,我们对1999年度"两对半"的检测情况统计分析,现将结果报告如下。 1 材料与方法 1.1样品来源统计1999年1~12月在我科检测乙肝"两对半",凡1(HBsAg)、2(HBsAb)、3(HBeAg)、4(HBeAb)、5(HBcAb)和6(HBcAb-IgM)血清标志物1项或1项以上阳性者均为收集对象,共收集6470例。 1.2试剂与仪器应用上海科华生物实业有限公司生产的检测HBV试剂盒,严格按操作程序操作,结果在MultiskanMk3酶标仪上读取OD值并判定结果。