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西达本胺对胃癌细胞株SGC-7901的体外抗增殖作用
目的 研究组蛋白去乙酰化酶(HDACs)抑制剂西达本胺对胃癌细胞株体外抗增殖作用及其可能机制.方法 用西达本胺终浓度为0、16、32、64、128、256μmol/L(分别为B、A1、A2、A3、A4、A5组)处理SGC-7901细胞24、48、72 h.采用MTT法及流式细胞术分别检测细胞增殖及细胞凋亡,反转录PCR(RT-PCR)检测沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)及HDAC11 mRNA表达,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测表皮生长因子受体(EGFR) mRNA表达,Western blot检测Notch1蛋白的表达.结果 与B组相比,西达本胺呈浓度依赖性地抑制SCC-7901细胞增殖(P＜0.05),提高SGC-7901细胞凋亡率(P＜0.05),阻断SIRT1、HDAC11、EGFR mRNA以及Notch1蛋白表达(P＜0.05).结论 西达本胺可抑制SGC-7901细胞增殖,促进细胞凋亡；其作用机制可能是降低SIRT1、HDAC11基因的表达或与Notch及EGFR信号通路相关.
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沉默信息调节因子2相关酶1在贲门癌中表达的意义及相互关系
目的 沉默信息调节因子2相关酶l( silent mating type information regulation 2 homolog 1,SIRT 1)是活性依赖烟酰胺腺嘌呤二核苷酸( nicotinamide adenine dinucleotide,NAD)的去乙酰化酶,可能参与某些肿瘤的形成及进展,并对多种肿瘤相关基因的蛋白活性及基因沉默的调控中起重要作用.文中研究SIRT1及上皮钙黏蛋白(epithelial cad-herin,E-cadherin)和错配修复蛋白1(Mutl homoolog 1,MLH1)在贲门癌中表达的临床病理学意义及相互关系. 方法 应用组织芯片技术和免疫组化EnVision二步法检测176例贲门癌患者癌组织中SIRT1、E-cadherin、MLH 1蛋白的表达.结果 SIRT1表达阳性率与淋巴结转移数目及TNM分期呈正相关.E-cadherin和MLH 1表达与淋巴结转移数目、TNM分期呈负相关.90例有随访资料病例中,SIRT1阳性患者3年生存率及平均生存时间显著低于SIRT1阴性患者.E-cadherin强阳性表达患者3年生存率及平均生存时间显著高于弱阳性表达患者,MLH 1阳性表达患者的3年生存率及平均生存时间高于MHLI阴性患者,差异均有统计学意义. 结论 贲门癌中SIRT 1阳性表达与肿瘤恶性程度正相关.E-cadherin表达程度及MLH 1阳性表达与肿瘤恶性程度负相关,SIRT 1可能通过E-cadherin、MLH 1等抑癌基因的沉默作用促进贲门癌的形成,影响其恶性生物学行为.
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蛛网膜下腔注射 SRT1720对慢性坐骨神经结扎大鼠脊髓SIRT1表达和NF-κB去乙酰化调节的影响
目的：探讨蛛网膜下腔注射SRT1720对慢性坐骨神经结扎（CCI）大鼠脊髓沉默信息调节因子2相关酶1（SIRT1）表达和活性的影响，以及对NF-κB p65去乙酰化的调节作用。方法将120只雄性SD大鼠采用随机数表法分成5组，每组24只，即假手术组（S）组、坐骨神经结扎组（CCI组）、二甲亚砜（DMSO）组、坐骨神经结扎+低剂量SRT1720治疗组（CCI+LD组）和坐骨神经结扎+高剂量SRT1720治疗组（CCI+HD组）。其中CCI、DMSO、CCI+LD和CCI+HD组大鼠提前8d蛛网膜下腔预置给药导管后建立CCI模型。DMSO组从手术日起，每天通过蛛网膜下腔预置细管给予10μl DMSO，而CCI+LD组和CCI+HD组每天分别给予SRT172010μg和20μg（溶于10μl DMSO）。在CCI前1d、CCI后1、3和7d各组分别处死大鼠6只，取L4~5段手术侧脊髓组织，采用荧光法测定沉默信息调节因子2相关酶1（SIRT1）活性，Western blot法测定SIRT1、NF-κB、乙酰化- NF-κB p65（Lys310）水平，并计算各组NF-κB的乙酰化水平（乙酰化- NF-κB p65/NF-κB）。结果与S组比较，CCI和DMSO组在CCI后各时点SIRT1水平和酶活性均显著下降（均P＜0.01），相反，NF-κB、乙酰化- NF-κB p65水平和NF-κB乙酰化水平均显著升高（均P＜0.01）；而与 CCI组比较，CCI+LD和CCI+HD组在CCI后3d、7d SIRT1水平和酶活性均较高（均 P＜0.01），NF-κB、乙酰化- NF-κB p65（Lys310）水平则较低。其中SRT1720高剂量组在CCI后7d，SIRT1水平和酶活性显著高于低剂量组（P＜0.01），而NF-κB的乙酰化水平则更低（P＜0.01）。结论 SRT1720蛛网膜下腔给药可改善CCI导致的脊髓SIRT1水平和酶活性的降低，抑制NF-κB p65的过高表达和乙酰化。
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SRT1720对高糖诱导的小鼠系膜细胞凋亡的影响
目的 观察Sirt1激活剂SRT1720对高糖诱导的小鼠肾小球系膜细胞凋亡的作用.方法 体外培养小鼠肾小球系膜细胞,随机分为正常糖组、正常糖+甘露醇组、高糖组及高糖+SRT1720组.采用原位末端转移酶标记技术(TUNEL)及流式细胞术检测细胞凋亡;流式细胞术检测活性氧簇(ROS)产生;Western blot检测caspase-3、cleaved caspase-3、Bax、Bcl-2、p38 MAPK、p-p38 MAPK、Sirt1、p53、乙酰化p53及细胞色素C的表达;实时定量PCR检测Bax和Bcl-2 mRNA的表达.结果 与正常糖对照组相比,高糖组系膜细胞ROS产生和细胞凋亡明显增加,cleaved caspase-3、p-p38 MAPK和乙酰化p53表达增高、Bax/Bcl-2比率明显升高、Sirt1表达下降以及细胞色素C易位.SRT1720干预能够明显抑制高糖诱导的系膜细胞凋亡和ROS产生;下调cleaved caspase-3、乙酰化p53和p-p38 MAPK的表达;上调Sirt1的表达;减少Bax/Bcl-2比率和细胞色素C 易位.结论 SRT1720能够抑制高糖诱导的系膜细胞凋亡,可能是通过减少ROS产生、保护线粒体功能、抑制p53乙酰化以及p38MAPK信号通路激活而实现的.
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丁苯酞注射液对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的神经保护作用
目的：探讨丁苯酞（NBP）注射液对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的神经保护作用及可能机制。方法将雄性 Sprague-Dawley（SD）大鼠75只随机分为假手术组（Sham 组）、脑缺血组（IR 组）、NBP 高剂量后处理组（高剂量组）、NBP 中剂量后处理组（中剂量组）和 NBP 低剂量后处理组（低剂量组），每组15只。采用改良线栓法制备大鼠大脑中动脉局灶性脑缺血再灌注（MACO）模型。缺血2 h 后再灌注24 h，行神经功能缺损评分及脑梗死体积测定。原位末端标记法（TUNEL）检测脑梗死灶周围组织神经细胞凋亡；免疫组织化学染色法检测沉默信息调节因子2相关酶1（SIRT1）、过氧化物酶体增殖活化受体γ共激活因子-1α（PGC-1α）阳性细胞；实时荧光定量 PCR法检测 SIRT1、PGC-1αmRNA 的表达。结果Sham 组未见神经功能缺损症状及脑梗死体积。与 Sham 组比较，IR组、3个剂量的 NBP 后处理组凋亡细胞数增多，SIRT1、PGC-1α阳性细胞数及 mRNA 的表达增多（P 均＜0．05）。与 IR 组比较，3个剂量的 NBP 后处理组神经功能评分降低，脑梗死体积、凋亡细胞数减少，SIRT1、PGC-1α阳性细胞数及 mRNA 的表达增多（P 均＜0．05）。不同剂量 NBP 后处理组间比较，高剂量组神经功能评分低，脑梗死体积、凋亡细胞数少，SIRT1、PGC-1α阳性细胞数及 mRNA 表达多（P ＜0．05）。结论NBP 能减轻大鼠脑缺血再灌注损伤，发挥脑保护作用，其机制可能与 SIRT1、PGC-1α表达上调有关。
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慢性心力衰竭患者血清SIRT1水平变化及其对预后评估的价值
目的 探讨沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)预测慢性心力衰竭(CHF)患者预后的价值.方法 选择CHF患者136例(CHF组)、体检健康者50例(对照组),入组24 h内采集肘静脉血,采用ELISA法检测血清SIRT1、N末端B型钠尿肽原(NT-proBNP);采用Vivid7彩色多普勒超声诊断仪,以美国超声心动图学会推荐的标准测量左心室舒张末期内径(LVEDD),以改良Simpson法测量左心室射血分数(LVEF).对所有CHF患者进行为期2年随访,记录随访期内死亡情况.采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清SIRT1预测CHF患者预后的价值.结果 与对照组比较,CHF组血清SIRT1水平明显降低,且血清SIRT1水平随CHF患者NYHA心功能分级升高而逐渐降低(P均<0.05).Spearman相关分析显示,血清SIRT1水平与血清NT-proBNP水平及LVEDD呈负相关关系,与LVEF呈正相关关系(P均<0.05).随访2年,CHF患者因心血管原因死亡45例.死亡者血清SIRT1水平明显低于存活者(P<0.05).ROC曲线分析显示,血清SIRT1预测CHF患者死亡的曲线下面积为0.740(95％CI:0.696～0.784,P<0.05),其cut off值为947.1 pg/mL,此时其预测患者死亡的敏感性、特异性分别为84.7％、80.4％.结论 CHF患者血清SIRT1水平明显降低,且心功能分级越差其水平越低;血清SIRT1水平有助于预测CHF患者预后.
关键词： 慢性心力衰竭 预后 沉默信息调节因子2相关酶1 N末端B型钠尿肽原 -
不同浓度氧暴露对早产儿外周血单个核细胞SIRT1通路的影响
目的 观察不同浓度及不同时间氧暴露对低体质量早产儿外周血单个核细胞(PBMCs)内沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)通路相关蛋白表达的影响,探讨氧暴露导致氧化应激损伤的机制.方法 选取低体质量早产儿80例,入院时诊断为新生儿呼吸窘迫综合征且需要立即氧疗.根据吸氧浓度分为对照组、低浓度吸氧组、中浓度吸氧组、高浓度吸氧组各20例.对照组吸氧浓度FiO=21%或以FiO2>21%吸氧,但总吸氧时间<24 h;低浓度吸氧组FiO2>21%,吸氧时间>24 h,或因病情需要FiO2>30%的吸氧时间<24 h;中浓度吸氧组FiO2为30%~<40%,吸氧时间>24 h,或因病情需要FiO2>40%的吸氧时间<24 h;高浓度吸氧组为FiO2≥40%且吸氧时间>24 h.分别于生后0、7、14、28 d时,均经桡动脉采血2 mL,分离PBMCs.采用激光共聚焦显微镜技术检测PBMCs中活性氧簇(ROS)水平并进行SIRT1定位检测.采用Western blot法检测PBMCs内胞核SIRT1蛋白及PBMCs内SUMO特异性蛋白酶1(SENP1)、乙酰化p53蛋白表达.结果 随着吸氧浓度的增加,生后住院时间的延长,与对照组相比,PBMCs内的ROS含量逐渐增加(P<0.05),SIRT1转位率逐渐增加(P<0.05),胞核SIRT1蛋白水平明显降低,PBMCs内SENP1蛋白水平增加(P<0.05),乙酰化p53蛋白水平增加(P<0.05).结论 高浓度的氧暴露及长时间的氧疗时间可导致低体质量早产儿PBMCs中产生大量的ROS,其机制可能与PBMCs中SENP1蛋白表达增加、SIRT1核转位、乙酰化p53增高导致的氧化应激损伤有关.
关键词： 吸氧 氧化应激 活性氧 沉默信息调节因子2相关酶1 SUMO特异性蛋白酶1 乙酰化p53蛋白 早产儿 -
沉默信息调节因子2相关酶1抗动脉粥样硬化作用机制的研究进展
内皮损伤、脂质浸润、炎症反应、氧化应激、血管平滑肌激活及糖脂代谢异常在动脉粥样硬化的发生发展过程中起重要作用.沉默信息调节因子2相关酶1(sirt1)是依赖烟碱胺腺嘌呤二核苷酸的第三类组蛋白去乙酰化酶.众多临床和基础研究表明,sirt1可通过改善血管内皮功能、减轻炎症反应、减少泡沫细胞生成、调节糖和脂质代谢、抗氧化应激、促进巨噬细胞自噬等多种机制抑制动脉粥样硬化的发生发展,在抗动脉粥样硬化中起关键作用.
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沉默信息调节因子2相关酶1在甲状腺乳头状癌组织中的表达及其意义
目的 探讨沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)在人类甲状腺乳头状癌组织中的表达及其意义.方法 利用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)、Western blot法检测40例甲状腺乳头状癌组织及相应的40例癌旁正常组织中SIRT1的mRNA、蛋白表达水平并进行统计学分析.结果 SIRT1 mRNA及蛋白表达在甲状腺乳头状癌组织中的表达量(分别为2.27±0.12、0.843±0.101)显著高于癌旁正常甲状腺组织(0.32±0.06、0.045±0.009,P＜0.01).SIRT1 mRNA及蛋白表达在甲状腺乳头状癌淋巴结转移组(分别为3.52±0.17、1.327±0.042)高于无淋巴结转移组(1.25±0.09、0.447±0.024),差异有统计学意义(P＜0.05).SIRT1 mRNA及蛋白表达与患者的性别(男2.37±0.19、0.903±0.112,女2.22±0.11、0.811±0.088)、年龄(＜45岁组2.11±0.14、0.805±0.107,≥45岁组2.54±0.16、0.906±0.117)、肿瘤大小(＜3 cm组2.21±0.15、0.810±0.043,≥3 cm组2.36±0.18、0.891±0.110)、包膜侵犯(有侵犯组2.26±0.24、0.840±0.077,无侵犯组2.27±0.13、0.845±0.089)及TNM分期(Ⅱ～Ⅱ期2.08±0.13、0.810±0.041,Ⅲ～Ⅳ期2.71±0.21、0.920±0.083)均无明显相关(P＞0.05).结论 SIRT1 mRNA及其蛋白的异常表达可能与甲状腺乳头状癌的发生发展和淋巴结转移有关.
关键词： 沉默信息调节因子2相关酶1 甲状腺乳头状癌 转移 -
Sirt1在呼吸系统疾病中的研究进展
沉默信息调节因子2相关酶1 (silent information regulator 2 homolog 1,Sirt1)在生物体中广泛表达,属于第Ⅲ类组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase,HDAC).它可通过氧化应激、炎症、内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)等机制影响细胞的凋亡和衰老,广泛参与多种疾病的发生与发展.
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丁苯酞对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马CA1区神经细胞凋亡、SIRT1及PGC-1α表达的影响
目的 观察丁苯酞(NBP)注射液对局灶性脑缺血再灌注大鼠缺血侧海马CA1区神经细胞凋亡、沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)及过氧化体增殖物激活型受体γ共激活因子1α(PGC-1α)表达的影响,探讨NBP的脑保护机制.方法 雄性SD大鼠160只,随机分为假手术组、脑缺血组、NBP高剂量后处理组(高剂量组)、NBP中剂量后处理组(中剂量组)、NBP低剂量后处理组(低剂量组),采用改良的Zea Longa线栓法制作局灶性脑缺血再灌注大鼠模型,后四组大鼠分为缺血2h再灌注6h、12h、24h、48 h、72h5个时间点,应用TUNEL法检测神经细胞凋亡;免疫组织化学染色法和实时荧光定量PCR检测SIRT1、PGC-1α的表达.结果 与脑缺血组比较,NBP后处理组各时间点凋亡细胞数减少,SIRT1、PGC-1α阳性细胞数增多(P＜0.05).与低、中剂量组比较,高剂量组凋亡细胞数显著减少,SIRT1、PGC-1α阳性细胞数显著增多(P＜0.05);与低剂量组比较,中剂量组SIRT1阳性细胞数除再灌注6h外,其余时间点均增高(P＜0.05),PGC-1α阳性细胞数除再灌注6h、72 h外,其余时间点均增高(P＜0.05).与脑缺血组比较,高剂量组各时间点SIRT1和PGC-1α mRNA的表达增多(P＜0.05).结论 NBP抑制细胞凋亡,减轻大鼠脑缺血再灌注损伤,发挥脑保护作用,其机制可能与上调SIRT1和PGC-1α的表达有关.
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沉默信息调节因子2相关酶1及脂肪酸合成酶在非酒精性脂肪肝大鼠模型中的表达及意义
目的 观察高脂、高糖喂养对大鼠非酒精性脂肪肝(NAFLD)的影响,探讨其沉默信息调节因子2相关酶1 (Sirt1)及脂肪酸合成酶(FAS)的表达变化,进而揭示可能引起NAFLD发病的分子途径.方法 Wistar雄性大鼠分为正常组和模型组,分别饲以基础饲料和高脂、高糖饲料.13周后处死,肝脏行苏木精-伊红(HE)染色和油红O染色,检测血清及肝匀浆总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)含量,应用实时逆转录聚合酶链反应(Real-time RT-PCR)和Western blot检测大鼠肝组织FAS、Sirt1的mRNA和蛋白表达水平.结果 模型组大鼠体重、能量利用率、血清及肝脏TC和TG明显高于正常组.HE染色和油红O染色观察到模型组大鼠肝细胞脂肪明显变性.模型组肝脏Sirt1 mRNA水平与正常组比较,差异无统计学意义,但蛋白水平明显低于正常组;模型组肝脏中FAS mRNA和蛋白水平明显低于正常组.结论 高脂、高糖喂养能使大鼠形成NAFLD,增加血清及肝脏的脂肪浓度.Sirt1表达降低提示其与NAFLD的发生有关,而FAS表达降低与以往部分研究结果截然不同,还需要更深层次的研究.
关键词： 非酒精性脂肪肝 沉默信息调节因子2相关酶1 脂肪酸合成酶 -
miRNA-138调控卵巢上皮癌细胞对顺铂敏感性的机制研究
目的 探讨miRNA-138和沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)的差异表达对卵巢上皮癌顺铂化疗敏感性的影响.方法 选取2014年1月-2017年1月在牡丹江医学院红旗医院妇科就诊卵巢上皮癌患者80例.根据患者对顺铂化疗的敏感性分为顺铂敏感组和顺铂耐药组.实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot检测卵巢上皮癌组织中miRNA-138和SIRT1的表达水平;培养SKOV3细胞,分别转染miRNA-138的类似物(miRNA-138 mimic)和抑制物(miRNA-138 inhibitor)后,qRT-PCR检测SIRT1 miRNA的表达变化,并采用MTT法检测细胞对顺铂的敏感性;SIRT1 miRNA 3'-UTR野生型(wt)和突变型(mut)萤光素酶报告质粒与miRNA-138 mimic共转染,双荧光素酶报告系统分析荧光素酶活性.结果 铂敏感组miRNA-138表达水平高于顺铂耐药组,而SIRT1表达水平低于顺铂耐药组,差异有统计学意义(P <0.05);过表达miRNA-138可降低SIRT1的表达,提高SKOV3细胞对顺铂的敏感性,而抑制miRNA-138可提高SIRT1的表达,降低SKOV3细胞对顺铂的敏感性,差异有统计学意义(P <0.05);miRNA-138 mimic与SIRT1 miRNA 3'-UTR野生型质粒共转染,荧光素酶活性降低(P <0.05),而与SIRT1 miRNA 3'-UTR突变型质粒共转染,荧光素酶活性无变化(P >0.05).结论 miRNA-138可能通过SIRT1调控卵巢上皮癌细胞对顺铂的敏感性,可作为卵巢上皮癌顺铂化疗耐药治疗的靶点.
关键词： 卵巢上皮癌 miRNA-138 沉默信息调节因子2相关酶1 顺铂 敏感性 -
莱菔硫烷通过Nrf-2、Sirt-1改善氧化应激诱导的血管钙化
目的 探讨莱菔硫烷(sulforaphane,SFN)在氧化应激所致血管钙化中的作用与机制.方法 采用β-甘油磷酸处理大鼠血管平滑肌细胞(RASMCs)构建尿毒症血管钙化模型.RASMCs分为正常对照组、1μmol/L SFN组、5μmol/L SFN组、钙化组、钙化+1μmol/L SFN组、钙化+5 μmol/L SFN组,分别培养72 h.MTT检测细胞的生存情况,Von Kossa观察细胞钙化情况,微板法测定细胞中钙离子含量,实时荧光定量PCR检测细胞中纤维细胞生长因子23(FGF-23)mRNA的表达,Western印迹检测骨调蛋白(OPN)、核心结合因子o1(Runx-2)及核转录因子NF-E2相关因子2(Nrf-2)、沉默信息调节因子2相关酶1(Sirt-1)的蛋白表达.激光共聚焦显微镜观察细胞线粒体的损伤,同时活性氧测定检测细胞内活性氧自由基(ROS)的含量.结果 (1)SFN对正常细胞的存活率没有影响,但低浓度和高浓度均能增加钙化组细胞存活率(均P＜ 0.05);(2)与钙化组比较,钙化+1μmol/L SFN组、钙化+5 μmol/L SFN组细胞内钙盐沉积、钙离子含量及FGF23 mRNA的表达均减少(均P＜0.05);(3)与钙化组比较,钙化+1 μmol/L SFN组、钙化+5 μmol/L SFN组细胞内ROS的产生及线粒体的损伤减少,OPN、Runx-2的表达减弱,Nrf-2、Sirt-1、Cleaved Caspase-3的蛋白表达增加(均P＜0.05).结论 SFN能通过Nrf-2、Sirt-1改善氧化应激引起的ROS沉积及线粒体功能紊乱,减轻血管钙化.
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沉默信息调节因子2相关酶1激动剂增强载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化斑块的稳定性
目的:探讨沉默信息调节因子2相关酶(SIRT)1对载脂蛋白E基因敲除(ApoE√-)小鼠动脉粥样硬化斑块稳定性的影响及其可能机制.方法:雄性ApoE+小鼠随机分为高脂对照组、SIRT1激动剂组、SIRT1激动剂+抑制剂组.高脂饮食16周后,分别予NS、SRT1720、SRT1720和尼克酰胺腹腔注射6周.油红O和苏木精-伊红染色比较3组间动脉粥样硬化斑块大小;油红、Masson染色和免疫组化分别比较3组斑块中脂质、胶原纤维、巨噬细胞和平滑肌细胞成分面积各占斑块总面积的百分比;比较3组胸主动脉粥样硬化斑块易损指数大小.激光显微切割腹主动脉冰冻切片,实时荧光定量PCR法检测SIRT1 mRNA表达.结果:与高脂对照组比,SIRT1激动剂组SIRT1 mRNA表达明显升高(P＜0.05),动脉粥样硬化斑块面积明显减少(P＜0.05),斑块中脂质和巨噬细胞含量明显减少(P＜0.05),斑块中胶原纤维和平滑肌细胞含量明显增加(P＜0.05),斑块易损指数也明显减少(P＜0.05);SIRT1激动剂+抑制剂组各指标差异均无统计学意义.结论:上调SIRT1能使ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化斑块缩小,并能增强动脉粥样硬化斑块的稳定性.
关键词： 沉默信息调节因子2相关酶1 载脂蛋白E基因敲除 小鼠 动脉粥样硬化 斑块稳定性 -
SIRT1/NF-κB通路在人参皂苷Rb1对高糖处理的H9C2细胞凋亡与炎症反应作用的研究
目的 探讨沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)/核因子-κB(NF-κB)通路在人参皂苷Rb1对高糖处理的H9C2细胞的凋亡与炎症反应中的作用.方法 采用不同浓度的人参皂苷Rb1处理高糖环境(33μmol/L)下的H9C2细胞,CCK-8法检测细胞活性,ELISA检测细胞上清液TNF-α、IL-6的含量,确定人参皂苷Rb1对高糖环境下H9C2细胞的佳处理浓度.用SIRT1的siRNA转染沉默SIRT1基因,并通过蛋白免疫印迹法检测细胞的Bax、Bcl-2、cleaved caspase-3、SIRT1、NF-κB等蛋白含量,ELISA检测细胞上清液TNF-α、IL-6的含量来探索人参皂苷Rb1是否通过SIRT1/NF-κB通路减轻H9C2细胞凋亡与炎症反应.结果 CCK8法示33μmol/L糖浓度下H9C2细胞活性即出现下降(P<0.05),33μmol/L糖浓度中人参皂苷Rb1在50μmol/L时细胞活性高(P<0.05),ELISA法示TNF-α 与IL-6在50μmol/L的人参皂苷Rb1处理时与其他浓度相比均低(P均<0.05).Rb1处理组与高糖组NF-κB的乙酰化水平比较差异有统计学意义(P<0.05).SIRT1的siRNA转染后的人参皂苷Rb1处理组与单纯转染SIRT1的siRNA高糖组相比,Bax/Bcl-2与Acetyl-NF-κB/NF-κB表达量差异均无统计学意义(P均<0.05),TNF-α 与IL-6的含量比较差异均无统计学意义(P均<0.05).结论 人参皂苷Rb1可通过SIRT1/NF-κB通路对高糖处理的H9C2细胞的凋亡与炎症反应产生保护作用.
关键词： 糖尿病心肌病 人参皂苷Rb1 沉默信息调节因子2相关酶1 细胞凋亡 炎症反应 -
Sirt1过表达间充质干细胞对小鼠前列腺癌移植瘤生长的影响
目的 探讨沉默信息调节因子2相关酶1(silent mating type information regulation 2 homolog 1,Sirt1)过表达的间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)对小鼠前列腺癌移植瘤生长的影响及其可能的机制.方法 通过Sirt1腺病毒载体转染MSCs,构建过表达Sirt1的MSCs,Western blot检测Sirt1的表达.将前列腺癌RM-1细胞分别连同过表达Sirt1的MSCs(RM-1 +MSCs-Sirt1组)、经绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)修饰的MSCs(RM-1 +MSCs-GFP组)或未修饰的MSCs(RM-1 +MSCs组)移植到C57BL/6小鼠腋窝皮下,建立小鼠前列腺癌皮下移植瘤模型,以未经处理的MSCs为空白对照组,RM-1细胞单独移植为对照组(RM-1组).观察小鼠肿瘤生长情况,第10天处死小鼠,称取瘤重.获取肿瘤组织,流式细胞术检测自然杀伤细胞(natural killer cell,NK)百分数.结果 成功建立了过表达Sirt1的MSCs细胞株,实验结束时,所有小鼠均存活.空白对照组小鼠实验全程未见成瘤,其余各组小鼠成瘤率为100％.实验结束时,RM-1 +MSCs组、RM-1 +MSCs-GFP组和RM-1 +MSCs-Sirt1组小鼠皮下肿瘤重量分别为(1.51±0.06)g、(1.58±0.05)g和(0.71±0.04)g,与RM-1组的(1.10±0.05)g比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).RM-1+MSCs-Sirt1组移植瘤组织中NK细胞数量显著高于RM-1 +MSCs-GFP组、RM-1 +MSCs组和空白对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 过表达Sirt1的MSCs可抑制小鼠前列腺癌皮下移植瘤生长,机制可能是过表达Sirt1的MSCs可募集更多的NK细胞,从而增强对肿瘤细胞的免疫杀伤作用.
关键词： 前列腺肿瘤 移植瘤模型 间充质干细胞 沉默信息调节因子2相关酶1 自然杀伤细胞 -
甲状腺结节组织中HIC1和SIRT1表达量对结节良恶性的评估价值
目的:研究甲状腺结节组织中HIC1和SIRT1表达量对结节良恶性的评估价值.方法:收集2012年5月～2015年12月期间在上海交通大学医学院附属同仁医院手术切除的70例甲状腺癌组织标本作为病理组、对应的70例癌旁组织标本作为对照组,采用免疫组化检测HIC1和SIRT1的蛋白表达量,采用荧光定量PCR检测HIC1、SIRT1以及OXTR、CDH1、RASSF1A、TIMP3、MMP13、S100A4、CCNG2、MK的mRNA表达量.结果:病理组甲状腺癌组织中HIC1的表达量显著低于对照组、而SIRT1的表达量显著高于对照组;与TNM I-II期、导管浸润阴性、淋巴结转移阴性的甲状腺癌组织比较,TNM III-IV期、导管浸润阳性、淋巴结转移阳性甲状腺癌组织中HIC1的表达量显著降低、而SIRT1的表达量显著升高;HIC1阳性表达的甲状腺癌组织中,OXTR、CDH1、RASSF1A、TIMP3的表达量显著高于HIC1阴性表达的甲状腺癌组织;SIRT1阳性表达的甲状腺癌组织中,MMP13、S100A4、CCNG2、MK的表达量显著高于SIRT1阴性表达的甲状腺癌组织.结论:甲状腺结节组织中HIC1表达缺失、SIRT1表达增加与甲状腺癌的发生和发展有关,甲基化和去乙酰化可能是HIC1、SIRT1调节细胞增殖、侵袭、血管新生的表观遗传学机制.
关键词： 甲状腺癌 肿瘤高甲基化基因1 沉默信息调节因子2相关酶1 甲基化 去乙酰化 -
短期禁食减轻小鼠肝脏缺血再灌注损伤的作用及其机制
目的 观察短期禁食对小鼠肝脏缺血再灌注损伤的作用,并探索其作用机制. 方法 将8周龄野生型C57BL/6雄性小鼠按照数字随机法分为75％肝缺血再灌注(IR)损伤组(IR组)、短期禁食+75％肝IR损伤组(STS组)、sirtinol+短期禁食+75％肝IR损伤组(SIR组),并分别设立假手术组(IR-Sham组、STS-Sham组和SIR-Sham组).检查各组小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平、肝组织形态学改变情况,及肝组织沉默信息调节因子2相关酶1 (Siru)、微管相关蛋白1轻链3B (LC3B)、P62蛋白表达情况与LC3B荧光染色情况.多组数据比较采用方差分析法,两组间数据比较用t检验. 结果 与IR组相比,STS组小鼠ALT[(3 152.7±735.6) U/L与(8 414.2±1 052.2)U/L,t=10.00,P＜0.011和AST[(3 577.0±714.0) U/L与(10 845.8±1 145.7) U/L,t=13.19,P＜0.01]水平均显著降低;肝组织病理学损伤明显减轻(Suzuki评分为1.50±0.55与3.50±0.55,t=6.33,P＜0.01);而SIR组ALT[(7002.7±1 485.2)U/L]和AST[(8 980.7±1 739.1) U/L]水平再次升高,与STS组相比,差异均有统计学意义[t=5.69,P＜0.01 (ALT);t=7.04,P＜0.01 (AST)],病理学损伤也较STS组明显加重(Suzuki评分为3.33±0.52与1.50±0.55,t=5.97,P＜ 0.01).STS组及STS-Sham组肝组织中Sirt1基因及蛋白表达水平分别较IR组及IR-Sham组明显提高,LC3B蛋白表达水平明显提高,P62蛋白表达水平明显下降,LC3B染色阳性细胞比率明显升高(22.83％±5.19％与10.16％±3.06％,t=5.15,P＜0.01;22.17％±4.83％与10.83％±1.94％,t=5.33,P＜0.01);而在SIR组及SIR-Sham组肝组织中,Sirt1表达水平较STS组及STS-Sham组显著下降,LC3B蛋白表达水平显著下降,P62蛋白表达水平显著提高,LC3B染色阳性细胞比率明显下降(11.83％±9.24％与22.83％±5.19％,t=2.54,P=0.029;14.67％±4.68％与22.17％±4.83％,t=2.73,P=0.021). 结论 短期禁食可有效减轻肝脏IR损伤.其对肝脏的保护作用可能与增加Sirt1表达及诱导、促进肝组织细胞自噬、减少肝细胞死亡有关.
关键词： 缺血 再灌注损伤 短期禁食 沉默信息调节因子2相关酶1 自噬 -
沉默信息调节因子2相关酶1在慢性阻塞性肺疾病患者血清中的表达水平及临床意义
目的 探讨沉默信息调节因子2相关酶1 (SIRT1)在慢性阻塞性肺疾病(简称慢阻肺)患者血清中的表达水平及临床意义.方法 选取本院慢阻肺急性加重期患者40例、慢阻肺稳定期患者30例作为研究组,另选体检健康者20例作为对照组.对所有受试者进行肺功能检查.应用酶联免疫吸附法和蛋白免疫印迹检测血清SIRT1、核因子-κB (NF-κB)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)水平.结果 与对照组相比,慢阻肺稳定期组和慢阻肺急性加重组患者第1秒用力呼气容积占预计值百分比(FEV1％pred)及第1秒用力呼吸容积占用力肺活量百分比(FEV1/FVC)均显著降低(均P＜0.05).与慢阻肺稳定期组相比,慢阻肺急性加重组患者FEV1％pred及FEV1/FVC均显著降低(P＜0.05).与对照组相比,慢阻肺稳定期组和慢阻肺急性加重组患者血清SIRT1水平均显著降低,而NF-κB和MMP-9水平均显著增加(P＜0.05).与慢阻肺稳定期组患者相比,慢阻肺急性加重组患者血清SIRT1水平显著下降,而NF-κB和MMP-9水平均显著增加(均P＜0.05).经Pearson直线相关法分析,血清SIRT1水平与慢阻肺患者FEV1％pred (P＜0.05)、FEV1/FVC (P＜0.05)等肺功能指标呈显著正相关.血清SIRT1水平与NF-κB(P＜0.05)、MMP-9 (P＜0.05)蛋白表达水平呈显著负相关.结论 慢阻肺患者血清SIRT1水平降低与肺功能下降相关,有可能作为慢阻肺的潜在生物标志物.
关键词： 沉默信息调节因子2相关酶1 慢性阻塞性肺疾病 肺功能 血清
