MRSA的苯唑西林、头孢西丁MIC与PBP2a的相关性研究

金黄色葡萄球菌是人类重要致病菌.随着耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的分离率不断增加,快速、准确检测MRSA对选用合适的抗生素治疗具有重要意义[1].现已证实耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)的主要耐药机制是由于MRS含有的mecA基因表达了青霉素结合蛋白2a(PBP2a),因此,美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)推荐无论是检出mecA基因还是PBP2a均可报告MRS[2].本实验应用MRSA胶乳试剂盒(日本Deka-Seiken公司)和肉汤稀释法分别检测102株金黄色葡萄球菌的PBP2a、头孢西丁低抑菌浓度(MIC)和苯唑西林MIC,以了解其相关性,结果报道如下.

耐苯唑西林葡萄球菌的细菌分布和耐药性

目的:了解临床送检标本中耐苯唑西林葡萄球菌的耐药特性及细菌分布,为合理使用抗生素提供依据.方法:以常规方法及法国生物梅里埃API STAPH条分离鉴定葡萄球菌,以K-B法检测其药物敏感性,按NCCLS规定的标准进行.结果:细菌分布以痰标本中的耐苯唑西林葡萄球菌分离率高(69.2%).355株葡萄球菌除均对万古霉素敏感,耐苯唑西林金黄色葡萄球菌明显高于苯唑西林敏感金黄色葡萄球菌对庆大霉素、环丙沙星、氯霉素的耐药率(P＜0.01).结论:耐苯唑西林葡萄球菌为医院感染的主要致病菌之一,尤其是痰标本其耐苯唑西林葡萄球菌的分离率很高,耐苯唑西林葡萄球菌的耐药性比苯唑西林敏感葡萄球菌的耐药性更为严重,要特别注意其检测与监控.

天然多酚对MRSA耐受苯唑西林的抑制作用

我国苯唑西林敏感mecA阳性的金黄色葡萄球菌回顾性研究

目的 研究苯唑西林敏感mecA阳性的金黄色葡萄球菌在我国的流行、分布及分子生物学特点.方法 回顾性研究.采用琼脂稀释法对2010至2012年我国10个城市12所教学医院收集的1588株金黄色葡萄球菌进行20种抗生素药物敏感性检测.对苯唑西林敏感而头孢西丁耐药的金黄色葡萄球菌,进一步比较头孢西丁纸片扩散法、头孢西丁琼脂稀释法和苯唑西林琼脂稀释法的耐药结果.PCR法检测金黄色葡萄球菌特异基因nuc、femB及mecA,并进行分子分型,包括spa分型和SCCmec分型.使用SPSS18.0进行统计分析,以P≤0.05为差异有统计学意义.结果 根据头孢西丁和苯唑西林MIC水平,鉴定出60株苯唑西林敏感的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA).2010至2012年苯唑西林敏感MRSA在我国逐渐升高(P =0.05,95％ CI0.045～0.056,x2=6.099).这些菌株主要分布在我国9个城市,其中广州分离率高,占30.0％ (18/60),其余依次为北京(18.3％,11/60),武汉(15.0％,9/60)和杭州(13.3％,8/60).这60株菌常见于皮肤软组织感染标本(35％,21/60),其次为血标本(30％,18/60)和呼吸道标本(18.3％,11/60).药物敏感性分析显示,这些菌株对头孢西丁、红霉素、克林霉素和四环素耐药率分别为100％(60/60)、86.7％(52/60)、66.7％(40/60)和50％(30/60).根据分子分型结果显示,共有21种spa分型、5种SCCmec分型,spat437-SCCmecⅣ常见,占25.0％ (15/60),其次为spa t437-SCCmecV,占13.3％ (8/60).结论 2010至2012年苯唑西林敏感MRSA在我国9个城市均有检出,并且检出率呈升高趋势.这种菌株主要是spa 437-SCCmecⅣ型.应当用头孢西丁代替苯唑西林检测这种类型的MRSA.mecA阳性而苯唑西林敏感的金黄色葡萄球菌是否能够用β内酰胺类进行治疗,尚需要进一步研究.

头孢西丁琼脂筛选法检测耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌

耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)是导致医院感染和社区感染的重要病原菌之一.近年来,随着广谱抗菌药物的广泛应用, 耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌的分离率逐渐增高、耐药性逐渐增强.Diekema等[1]对分离自全球多个地区的凝固酶阴性葡萄球菌研究表明,该菌对苯唑西林的耐药率达70%以上.MRCNS对万古霉素耐药菌株的出现更使临床上对其感染的治疗成为十分棘手的问题[2].因此,快速、简便、准确检测MRCNS以指导临床合理用药对控制其感染显得尤为重要.2004年,美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)首次将头孢西丁纸片扩散法用于MRCNS的检测[3].本研究用不同培养周期和不同浓度的头孢西丁琼脂筛选平板检测了104株凝固酶阴性葡萄球菌并对该方法作了评价.

2005年我国多中心苯唑西林耐药的金黄色葡萄球菌分子流行病学研究

目的 多中心研究我国2005年苯唑西林耐药的金黄色葡萄球菌(MRSA)分子流行病学特征.方法 收集2005年1-12月14个城市17家教学医院连续分离的非重复MRSA 395株,通过多重PCR对MRSA进行葡萄球菌染色体mec(SCCmec)分型,脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行同源性分析.根据药敏结果、PFGE、SCCmec型别和分布地区选出53株进行多位点序列分型(MLST).采用PCR检测毒素基因.结果 395株MRSA中,SCCmec Ⅲ型243株、占61.5%,不能分型菌株96株、占24.3%,Ⅱ型56株、占14.2%;沈阳SCCmec Ⅱ型占60.7%(17/28),远高于其他地区(0～42.9%).PFGE共有24种分型,42种亚型,其中A型占50.1%,为12个城市13家医院所共有,R型占23.5%,存在于8个城市9家医院.MLST共有6种分型,其中序列分型(ST)239占75.5%,ST5占17.0%.395株MRSA中,pvl基因检出率为2.5%.结论 我国MRSA主要获得Ⅱ型、Ⅲ型SCCmec基因,SCCmec的分布有地区差异.一些地区发生MRSA的暴发,并且地区间发生流行克隆的传播.有些流行克隆可能来源于某些世界流行克隆株的传播.

凝固酶阴性葡萄球菌菌种鉴定与苯唑西林耐药凝固酶阴性葡萄球菌检测准确性

目的 评价凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)菌种鉴定与苯唑西林耐药凝固酶阴件葡萄球菌(MRCNS)检测的准确性.方法 139株临床分离CNS,经ID 32 STAPH鉴定到种,用头孢西丁(FOX)、苯唑西林(OXA)纸片扩散法检测MRCNS,以Slidex MRSA detection乳胶凝集法检测青霉素结合蛋白2a(PBP2a)作为参考方法.结果 139株CNS鉴定为8个种,依次为溶血葡萄球菌、表皮葡萄球菌、人葡萄球菌、木糖葡萄球菌、腐生葡萄球菌、耳葡萄球菌、模仿葡萄球菌、沃氏葡萄球菌.FOX纸片法总的敏感度和特异度为99.0%和86.0%;OXA纸片法总的敏感度和特异度为91.7%和74.4%.影响FOX纸片法敏感度的菌种为1株表皮葡萄球菌;影响其特异度的菌种包括木糖葡萄球菌、沃氏葡萄球菌、腐生葡萄球菌;而影响OXA纸片法敏感度的菌种包括溶血葡萄球菌、人葡萄球菌、模仿葡萄球菌、耳葡萄球菌;影响其特异度的菌种包括人葡萄球菌、模仿葡萄球菌、木糖葡萄球菌、耳葡萄球菌、腐生葡萄球菌、沃氏葡萄球菌.结论 FOX纸片法检测MRCNS准确性因菌种不同有所差异,尤其应关注木糖葡萄球菌、沃氏葡萄球菌、腐生葡萄球菌的影响.建议检测MRCNS时,尽可能将CNS鉴定到种,视菌种必要时用PBP2a或mecA基因予以确认.

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌mec Ⅰ基因的检测及多态性研究

目的 研究耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)临床分离株mec Ⅰ基因多态性.方法 随机挑取我院2005年1月至2006年8月间40株经PCR检测mecA阳性的金黄色葡萄球菌,采用PCR检测mec Ⅰ基因,对PCR产物进行测序.多重PCR检测葡萄球菌盒式染色体(Staphylococcal cassette chromosome mec,SCCmec),使用琼脂稀释法检测苯唑西林的MIC值.结果 40株MRSA中有35株mec Ⅰ基因阳性,阳性率为87.5%(35/40),所有35株mec Ⅰ基因阳性的菌株都存在mec Ⅰ 202位C→T点突变,导致68位的谷氨酰胺的密码子CAA变成终止密码子UAA.32株菌为mec Ⅰ 202单点突变,3株菌存在两位点突变,分别为3位插入A,41位A→C,142位C→T.35株mec Ⅰ阳性菌株中,有27株SCCmec为SCCmec Ⅲ、7株为SCCmec Ⅲ A及1株SCCmec Ⅱ,5株mec Ⅰ阴性的菌株中,3株为SCCmec Ⅳ,1株为SCCmec Ⅰ,另1株为未知型.31株mec Ⅰ 202单点突变菌株对苯唑西林(Oxacillin,OXA)的MIC值在256～512 μg/ml,1株mec Ⅰ202单点突变菌株的MIC值＜1 μg/ml,3株存在两个位点突变的菌株对苯唑西林的MIC值≥512 μg/ml,5株mecⅠ阴性的菌株对苯唑西林的MIC值在8～256 μg/ml之间.结论 本地区分离的MRSA临床分离株普遍存在mecⅠ202C→T,少数菌株mec Ⅰ 202和其他位点同时存在突变,mec Ⅰ 202位点突变是MRSA对苯唑西林高水平耐药的主要原因.

脑脊髓液中肺炎链球菌耐药性的检测

我们从脑脊液中分离到45株肺炎链球菌，采用苯唑西林纸片扩散法和琼脂稀释法测定了肺炎链球菌对青霉素等10种抗生素药物的耐药情况。报道如下。

对《从血液中分离一株松鼠葡萄球菌》一文的异议

编辑同志:阅读贵刊<从血液中分离一株松鼠葡萄球菌>[1]一文后,笔者觉得有一点是需要更正的.此文中松鼠葡萄球菌的药敏试验采用纸片扩散法,药敏结果为:万古霉素、氯霉素、庆大霉素、替考拉宁、阿莫西林/棒酸均敏感;青霉素、苯唑西林、环丙沙星、红霉素、复方新诺明、克林霉素、四环素均耐药,笔者觉得阿莫西林/棒酸敏感的结果明显不妥.

头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant staphylococcus aureus,MRSA)不仅对甲氧西林耐药,且具有多重耐药性.目前由于某些菌株在甲氧西林耐药表型上出现不均一性,影响了临床常用的表型检测方法如苯唑西林纸片扩散法、MIC法的准确性,且这类菌株正逐渐增加,并由医院感染向社区感染发展[1].mecA基因和青霉素结合蛋白PBP2a的检测是目前公认的MRSA检测鉴定的金标准,但这两项技术要求高、试剂昂贵,不适合普通临床实验室大量开展[2].有报道使用30μg头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌,可克服使用苯唑西林鉴定方法的局限性,具有较好的敏感性和特异性[3-5].本研究对该方法用于临床实验室快速筛选MRSA进行研究.

第94例——肺部多发空洞及片状阴影

患者女性,17岁,因咳嗽、咳痰、间断发热6个月于2006年8月入院.2006年1月下旬患者出现咳嗽及午后发热,体温高达38℃,无畏寒、寒战,同时咳少量绿色脓痰,有时痰中带血丝.多次查X线胸片及胸部CT显示肺炎、右上肺实变影内小空洞,先后给予苯唑西林、头孢噻肟、头孢哌酮/舒巴坦、甲硝唑、去甲万古霉素、左氧氟沙星、阿奇霉素等多种抗生素静脉滴注,后因不除外结核,曾4联抗结核(HREZ)治疗4个月余,患者仍间断发热,体重下降10余公斤,且肺内病变范围及空洞逐渐增大.

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌流行病学和耐药机制研究新进展

对甲氧西林、苯唑西林、头孢拉定耐药或Mec基因阳性的金黄色葡萄球菌(金葡萄)被定义为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicilie-resistant staohylococcus aureus,MRSA).1961年Jevons在英国首次发现MRSA,20世纪60年代中期MRSA扩展到欧洲许多国家及加拿大,20世纪70年代末急剧增多遍及世界,并引起爆发流行,导致死亡率上升,医疗费用增加,成为全球性问题.

大蒜素与不同抗菌药物联用对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的体外抗菌活性研究

目的：研究大蒜素与抗菌药物联用对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（M RS A ）的体外抗菌活性，为临床治疗提供参考依据。方法采用微量肉汤稀释法分别测定大蒜素与抗菌药物对30株M RS A的低抑菌浓度（M IC ），考察单用两药对M RS A的抗菌活性；以测得的单药M IC为依据，采用棋盘法设计，测定并计算大蒜素和抗菌药物联用对30株M RSA的部分抑菌浓度指数（FIC ），考察两药联合对M RSA的抗菌活性。结果单用大蒜素对30株MRSA的MIC为（0．30±0．09） mg／mL ，与苯唑西林、头孢唑林联用后使其MIC50由64μg／mL和32μg／mL下降到8μg／mL ，以协同或相加作用为主；与万古霉素联用后使其MIC50由2μg／mL下降到0．5μg／mL ，主要表现为相加作用。结论大蒜素对M RS A有一定抑制作用，与抗菌药物联合后能增强其抑菌效果，临床上可考虑使用大蒜素作为抗菌药物，特别是万古霉素的增敏剂用于治疗M RS A引起的严重感染。

耐甲氧西林葡萄球菌的检测评价

为控制金黄色葡萄球菌医院感染,提高耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的检出率,降低MRSA的漏检率,我们通过改良培养条件,对40例纸片法和仪器检出的对苯唑西林敏感的葡萄球菌菌株进行MRSA的检测,现将结果报告如下.

金黄色葡萄球菌的耐药特征

目的 了解临床分离金黄色葡萄球菌的耐药性及克林霉素诱导型耐药的发生率,评价头孢西丁和苯唑西林纸片扩散法检测MRSA的临床应用价值.方法 VITEK-2微生物分析系统及K-B法药敏试验对临床分离菌株进行鉴定和药物敏感性测定;胶乳凝集试验检测PBP2a;头孢西丁和苯唑西林纸片扩散法检测MRSA;双纸片扩散法检测诱导型克林霉素耐药;WHONET 5.4及SPSS11.3软件对结果进行统计分析.结果 青霉素和氨苄西林耐药率高,分别为98.9%和100.0%,未发现万古霉素耐药或中介菌株;93株金黄色葡萄球菌中,MRSA和MSSA分别为58株(62.4%)和35株(37.6%),MRSA对11种抗菌药物的耐药率高于MSSA;头孢西丁纸片扩散法的敏感性和特异性分别为98.3%和97.1%,苯唑西林纸片扩散法的敏感性和特异性分别为75.9%和94.3%;对红霉素耐药而克林霉素敏感的9株金黄色葡萄球菌中,5株(55.6%)为诱导型克林霉素耐药.结论 临床分离金黄色葡萄球菌耐药性已十分严重;头孢西丁纸片扩散法是检测MRSA简便、可靠的方法;临床微生物室应常规检测金黄色葡萄球菌红霉素对克林霉素的诱导耐药性.

凝固酶阴性葡萄球菌的青霉素结合蛋白产生和苯唑西林MIC相关性研究

目的分析凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)的青霉素结合蛋白2a(PBP2a)的产生和苯唑西林MIC相关性. 方法收集82株临床分离株,采用MRSA胶乳凝集法、MIC法分别检测CNS对苯唑西林的耐药性,比较各试验结果. 结果苯唑西林MIC≥0.5 mg/L或产生PBP2a的表皮葡萄球菌和溶血葡萄球菌均能正确地表示苯唑西林耐药;苯唑西林MIC≥0.5 mg/L解释标准对头葡萄球菌、腐生葡萄球菌、人葡萄球菌、模仿葡萄球菌等CNS评价苯唑西林为耐药,正确性很低,有80.0%未产生PBP2a的菌苯唑西林MIC≥0.5 mg/L,使这些菌被错误地报道苯唑西林耐药. 结论新的苯唑西林解释标准对产生PBP2a的CNS均能正确地评价,而对未产生PBP2a的CNS某些菌种缺乏特异性;MRSA胶乳凝集试剂盒可快速、准确地检测耐苯唑西林的CNS.

VITEK GPS106卡检测耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌

目的评价VITEK GPS106卡检测凝固酶阴性葡萄球菌(CONS)对苯唑西林耐药性的可靠性. 方法采用肉汤稀释法和VITEK GPS106卡分别对206株CONS进行苯唑西林敏感性测定,以肉汤稀释法为参考方法比较两法的结果. 结果肉汤稀释法测CONS苯唑西林耐药98株,敏感108株,98株耐药株中VITEK GPS106卡检测为耐药92株,敏感性为93.7%,108株敏感株中VITEK GPS106卡检测结果一致,特异性为100%,6株CONS肉汤稀释法为耐药而VITEK GPS106卡为敏感,分别为溶血葡萄球菌3株,腐生葡萄球菌2株,人葡萄球菌1株,其MIC在(0.13～0.25)μg/ml之间. 结论 VITEK GPS106卡检测CONS对苯唑西林的耐药性具有快速、准确性高等优点,可接受为临床实验室常规方法.

儿科凝固酶阴性葡萄球菌感染及其耐药性分析

目的 探讨引起小儿凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)感染主要菌株的流行病学状况和其相关的细菌耐药情况.方法 从2000年5月～2004年2月,对在我院住院治疗的小儿进行细菌学检查,同时对发现的相关菌株进行抗生素敏感性检测,对所获得的阳性结果作比较分析.结果 在所进行的8 220次细菌学检测中共发现1 320株阳性细菌,其中发现202株CNS,占总体检出率的15.3%(202/1 320),其中溶血葡萄球菌、表皮葡萄球菌、缓慢葡萄球菌、松鼠葡萄球菌、模仿葡萄球菌等为主要的前5位致病菌.这些阳性菌株中苯唑西林耐药CNS占86.63%,所有菌株对万古霉素保持敏感.结论 CNS感染已经成为儿科临床医疗工作中的重要问题之一,其中苯唑西林耐药CNS菌株呈多重耐药;针对CNS感染,需要在细菌学检查的基础上合理使用抗生素,万古霉素依然是后的治疗手段.

冬季儿童上呼吸道菌群分布调查

上呼吸道感染多发生在冬春季节，了解儿童上呼吸道菌群的分布状况，有助于阐明儿童上呼吸道感染的发病机理。我们于2000年1月份，对165名学龄前儿童进行了咽部菌群分布调查。 对象 全部165份标本取自北京市某幼儿园3～6岁健康儿童的咽部分泌物，其中男童77名，女童88名。取材当日无流感流行。 方法 用无菌棉棒取儿童咽后壁分泌物无菌封闭保存，1 h内送实验室接种于5%羊血琼脂平板及含50 mg/L万古霉素的兔血巧克力琼脂平板上，置8%CO2孵箱中，35℃过夜培养。细菌的分离与鉴定均按操作规程进行［1］，用VITEK试卡将细菌鉴定到种。将分离到的嗜血杆菌、卡他莫拉菌及葡萄球菌，用Nitrocefin纸片进行β-内酰胺酶测试，纸片变红为阳性。对分离的肺炎链球菌和金黄色葡萄球菌，用苯唑西林（1 μg）纸片进行耐药性检测，结果按NCCLS标准［2］进行判断。实验用Ⅹ、Ⅴ因子、OP、氧化酶、Nitrocefin、苯唑西林（1 μg）纸片，蛋白胨、脑心浸液（干粉）、DNA琼脂均购自OXOID公司（英国）。标准菌株流感嗜血杆菌ATCC 49766、肺炎链球菌ATCC 49619和金黄色葡萄球菌ATCC 25923为本实验室菌库保存。